小鼠Pkd2基因条件性敲除打靶载体的构建

[目的]构建小鼠Pkd2条件性基因敲除打靶载体,为建立Pkd2基因条件性敲除小鼠模型奠定基础.[方法]以正常小鼠(129×1/SvJ)基因组DNA为模板,扩增小鼠Pkd2基因一段包括第9号外显子的长为9.3kb的序列,通过引入LoxP和Neo基因等步骤,建立条件性敲除Pkd2第9号外显子的条件性基因打靶载体.[结果]经多个限制性核酸酶酶切鉴定和测序证实,所构建的Pkd2基因条件性敲除打靶载体符合设计要求.[结论]成功构建小鼠条件性Pkd2基因敲除打靶载体,为建立Pkd2基因条件性敲除小鼠模型奠定基础.     

CYP1B1基因敲除对成年小鼠肝脏脂肪代谢的影响及可能机制

目的探讨CYP1B1对高脂膳食诱导的成年小鼠脂肪代谢的作用。方法 CYP1B1基因敲除(KO)和野生型(WT)雄性成年C57/BL小鼠(6 w龄)各16只,给予低脂(LFD,30%)、高脂肪(HFD,60%)饲料共6 w。小鼠处死后取血清、附睾脂肪和肝脏组织检测相应的生化和分子生物学指标。结果 6 w高脂膳食后,KO小鼠能量摄入总量稍高于WT小鼠,但其体重增量和附睾脂肪组织重量均显著低于WT小鼠;WT小鼠脂肪细胞直径明显大于KO小鼠,且血糖、血清及肝脏组织中甘油三酯(TG)水平亦明显高于KO小鼠;肝脏组织RT-PCR结果显示,CYP1B1基因敲除后,启动脂肪形成的核因子及脂肪合成相关基因如CD36、SREBP1c、SCD1等表达下降,而调控脂肪氧化分解的基因如CPT-1α,UCP-2表达显著上升;蛋白印迹结果显示,CYP1B1基因敲除增强腺苷-磷酸激酶(AMPK)的磷酸化。结论 CYP1B1基因敲除对成年小鼠营养性肥胖的保护作用可能与AMPK磷酸化增强并调控肝脏中脂肪代谢相关基因的表达有关。     

MARCO基因敲除小鼠模型鉴定

目的通过基因分型、基因测序与蛋白免疫印迹法鉴定MARCO基因敲除小鼠模型。方法将经成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术获得16种碱基敲除的MARCO~(-/-)亲代C57BL/6小鼠(雌、雄鼠各8只)与MARCO~(+/+)的亲代C57BL/6雌性小鼠(8只)合笼繁殖,获得子一代MARCO~(+/-)小鼠;再以MARCO~(+/-)小鼠自交得到MARCO~(-/-)足够数量的纯合小鼠。采用基因测序对小鼠基因型进行鉴定,采用蛋白免疫印迹法检测MARCO蛋白相对表达水平。结果经过1年的合笼繁殖,共繁殖5代,有5种敲除不同碱基数(-11、-25、-36、-46、-61 bp)的MARCO~(-/-)基因型稳定遗传;MARCO~(-/-)、MARCO~(+/-)、MARCO~(+/+)基因型比例约为1∶2∶1,符合孟德尔遗传定律。以MARCO(-11 bp)为例,共获得子五代(F5代)MARCO~(-/-)小鼠42只,MARCO~(+/-)小鼠92只,MARCO~(+/+)小鼠48只;上述3种基因型F5代小鼠出生后第4、6和8周的体质量分别比较,差异无统计学意义(P0.05)。与MARCO~(+/+)小鼠和MARCO~(-/-)(-36 bp)、MARCO~(-/-)(-61 bp)小鼠比较,MARCO~(-/-)(-11 bp)和MARCO~(-/-)(-46 bp)小鼠的MARCO蛋白相对表达水平均下调(P0.05),选择该2种小鼠模型作为MARCO基因敲除小鼠模型。结论成功鉴定MARCO基因敲除小鼠模型,为深入研究MARCO基因在小鼠矽肺纤维化中的作用及调控机制奠定基础。     

VSMC-Cx43-/-条件性基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定

目的应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统构建血管平滑肌缝隙连接蛋白Cx43条件性基因敲除小鼠(VSMC-Cx43^-/-)模型。方法采用受精卵同源重组的方式,对Gja1基因进行flox修饰。通过体外转录的方式,获得Cas9 mRNA和gRNA;通过In-Fusion cloning的方法构建同源重组载体,该载体包含3.0 kb 5’同源臂、1.9 kb的flox区域和3.0 kb 3’同源臂。将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,获得F0代小鼠。PCR扩增及测序鉴定阳性的F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配获得3只阳性F1代小鼠(Cx43^flox/+)。将获得的flox杂合子Cx43^flox/+小鼠自交,获得flox纯合子Cx43^flox/flox小鼠。然后用Cx43^flox/flox小鼠和Myh11-CreERT2小鼠交配,最终获得flox纯合且Cre阳性的实验组小鼠(该小鼠简写为:VSMC-Cx43^-/-)和flox纯合且Cre阴性的对照组小鼠(Cx43^flox/flox)。用PCR进行基因型鉴定,用Western blot技术检测Cx43在大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功。结果基因型鉴定、免疫荧光和Western blot检测结果表明VSMC-Cx43^-/-基因敲除小鼠模型构建成功,小鼠一般性状无改变,小鼠大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中Cx43蛋白表达均下降。因此,可作为长期稳定模型研究血管平滑肌Cx43的功能。结论应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统成功构建了VSMC-Cx43^-/-基因敲除小鼠模型,为深入研究Cx43在血管疾病中的作用提供工具。     

CYP1B1对肥胖小鼠脂肪组织血管新生因子影响

目的 探讨血管新生因子血管生成素Ⅰ和Ⅱ在保护幼年细胞色素P4501 B1(CYP1 B1)基因敲除小鼠营养性肥胖中作用.方法 CYP1 B1基因敲除和野生型雄性C57/BL小鼠(3周龄)各16只,给予低脂膳食(10％脂肪)、高脂膳食(60％脂肪)饲料11周;小鼠处死后取附睾脂肪组织检测血管密度及血管新生因子基因和蛋白表达.结果 野生高脂组小鼠脂肪组织血管密度下降,基因敲除小鼠脂肪组织血管分布不受影响;高脂膳食诱导下,野生型和基因敲除小鼠血小板-内皮细胞粘附分子CD31 mRNA表达下调(P＜0.05),野生型小鼠CD31蛋白表达下调(P＜0.05);与野生低脂组比较,高脂诱导后野生型和基因敲除小鼠血管生成素Ⅰ表达量分别为0.35和0.50(P ＜0.05),瘦素表达量则分别为2.48和1.42(P＜0.05);敲除高脂组瘦素表达量较野生高脂组下降(P＜0.05).结论 CYP1B1基因敲除对血管新生相关因子的调控可能在其营养性肥胖中起一定保护作用.     

UCH—L1基因敲除小鼠的饲养、繁殖及鉴定

目的饲养、繁殖和鉴定泛素羧基末端水解酶L1（UCH．L1）基因敲除小鼠,获得UCH—L1基因敲除纯合子小鼠,为深入研究UCH．L1的生物学功能奠定基础。方法从美国购进的UCH．L1基因敲除小鼠经适应性饲养1周后,将1只雌性杂合子和1只雄性杂合子小鼠合笼饲养并繁殖,剪取子代小鼠尾尖部0．5cm组织,提取基因组DNA,PCR方法鉴定其基因型。雄性杂合子与雌性杂合子交配生产后代中,野生型和UCH—L1基因敲除纯合子小鼠用于后续的生物学功能研究：杂合子小鼠用于繁殖。观察UCH—L1基因敲除纯合子小鼠的表型变化,并利用免疫印迹法验证UCH—L1基因敲除的效果。结果小鼠成功繁殖后,利用杂合子交配共生产370只小鼠,其中UCH．L1＋/-占34．1％、UCHL1＋/-占50．5％、UCH．L1-/-占15．4％,成功获得UCH-L1基因敲除纯合子小鼠,并建立了饲养、繁殖和鉴定方法。结论采用雌性和雄性UCH—L1基因敲除杂合子小鼠交配．不仅可以获得UCH—L1基因敲除纯合子小鼠,而且有利于长期饲养与繁殖。     

甲状旁腺激素在肥胖形成中的作用

目的探讨甲状旁腺激素(PTH)基因敲除对小鼠体重、体脂的影响。方法 C57/BL6小鼠30只,按基因型随机分成PTH-/-为基因敲除纯合子小鼠;PTH+/-为基因敲除杂合子小鼠和PTH+/+为野生型小鼠共3组,每组10只,雌雄各半。观察其体重及日均摄食量情况。18w龄处死。用电子天平测小鼠脏器重量、并计算脏器系数,用全自动生化分析仪检测血糖、血脂等血液学指标。结果雌雄间各基因型小鼠体重生长在各时间点均无显著性差异(P>0.05);日均摄食量无脏器重量和系数及血糖、血脂水平也均无显著性差异(P>0.05)。结论 PTH基因敲除小鼠的体重、脏器重量和系数及血糖、血脂指标均无明显改变,提示PTH可能并不参与体重和体脂变化过程。     

辐射诱发胸腺淋巴瘤与Ikaros及p16基因多态性

目的 探讨Ikaros及p16基因多态性与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的相关性.方法 采用Promega公司基因组DNA纯化试剂盒提取胸腺淋巴瘤细胞基因组DNA.采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-PEEP)方法检测Ikaros基因rs28185870位点(C/T)、rs28185923位点(C/T)及p16基因rs3695947位点(A/G)单核苷酸多态性(SNPs).结果 C57BL/6J及BALB/c小鼠rs28185870位点基因型分别为T/T、C/C;rs28185923位点基因型分别为C/C、T/T;rs3695947位点基因型分别为A/A、G/G.结论 辐射敏感性不同的C57BL/6J、BALB/c小鼠的rs28185870、rs28185923及rs3695947位点基因型不同,推测Ikaros及p16基因多态性与辐射诱发胸腺淋巴瘤相关.     

饮食诱导肥胖小鼠瘦素及瘦素受体基因启动子甲基化探讨

【目的】探讨肥胖状态下小鼠瘦素及瘦素受体基因启动子区CpG位点的甲基化改变。【方法】使用30只3~4周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机分为2组,每组15只,分别给予高脂饲料(脂肪含量34.9%,供能比为60%)和正常饲料(脂肪含量4.3%,供能比为10%)喂养3个月。喂养周期结束后,禁食、麻醉状态下心脏取血、脑组织和性腺周围脂肪组织。小鼠血浆中瘦素含量测定采用酶联免疫分析法;脂肪组织瘦素及下丘脑瘦素受体mRNA表达测定采用实时荧光定量PCR进行。最后应用亚硫酸盐修饰直接测序法(BSP)和半巢式PCR检测小鼠脂肪组织中瘦素基因启动子区(310 bp,-324到-29)16个CpG位点及脑组织中瘦素受体基因启动子区(294 bp,-633到-345)20个CpG位点的甲基化状态。【结果】高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆瘦素含量[(5.95±3.34)μg/L]显著高于正常饲料组小鼠[(1.46±1.13)μg/L](t=4.888,P0.001)。脂肪组织瘦素mRNA表达量在肥胖小鼠(0.039±0.02)显著高于对照组(0.008±0.01)(F=12.945,P0.05);下丘脑瘦素受体mRNA表达在两组小鼠之间未见明显差异。脂肪组织中瘦素基因启动子区各CpG位点甲基化水平在60%~95%之间,而脑组织中瘦素受体基因启动子区各CpG位点呈现出高度去甲基化状态;在肥胖与正常小鼠之间,这两个基因启动子区CpG位点甲基化率均未见显著差异。【结论】瘦素基因及瘦素受体基因启动子区CpG位点甲基化可能与饮食诱导肥胖小鼠瘦素抵抗无关;肥胖状态下瘦素抵抗发生的机制仍有待于进一步研究。     

附睾4-5段CD147缺失对精子成熟的作用研究

目的研究小鼠附睾上皮表达的CD147对精子成熟的影响。方法利用小鼠附睾4-5段主细胞特异表达的Lcn5-Cre小鼠和CD147flox/flox繁育, 获得24只CD147在附睾4-5段特异敲除的小鼠(CD147 cKO-Lcn5)和21只CD147flox/flox对照小鼠。通过计算机辅助精子活力检测(computer-aided sperm analysis, CASA)、A23187诱导精子的顶体反应以及体外受精(invitro fertilization, IVF)等方法评估CD147对小鼠精子功能的影响。结果小鼠附睾头部4-5段敲除CD147后, 精子活力和顶体反应的差异均无统计学意义(均P>0.05)。IVF实验结果显示, CD147 cKO-Lcn5小鼠2-细胞率(74.03%±2.93%)相较于CD147flox/flox小鼠(90.59%±2.39%)显著降低(P=0.012)。结论附睾头部4-5段敲除CD147后对精子活力和顶体反应无显著影响, IVF后2-细胞率显著被抑制。     

鞘氨醇激酶(SphK1)基因敲除小鼠的饲养繁育及基因鉴定

目的通过对鞘氨醇激酶(Sph K1)基因敲除小鼠的繁殖和鉴定,以提供Sph K1缺失对各种疾病的影响的相关理想动物模型。方法将从美国国立健康研究院(National Institute of Health,NIH)处引进的Sph K1敲除杂合子小鼠进行交配,获得子代小鼠后,提取小鼠尾部的DNA,用琼脂糖电泳等方法检测及验证子代小鼠基因型。结果获得纯合子子代小鼠。结论 Sph K1基因敲除小鼠的鉴定获得成功。     

过氧化物酶体生物发生因子5(PEX5)缺失导致小鼠精子发生失败和不育

目的：过氧化物酶体生物发生因子5(PEX5)对雄性小鼠精子发生及生育功能的影响。方法：利用CRISPR/Cas9及LoxP/Cre技术构建睾丸特异性Pex5基因敲除(Pex5 cKO)小鼠模型,通过苏木精-伊红染色(HE)、免疫蛋白印迹(Western blot)和免疫荧光(IF)染色分析评估雄性小鼠的生殖器官及精子发生的情况。结果：Pex5 cKO雄性小鼠正常成熟交配窝仔数为0,与野生型(WT)雄性小鼠窝仔数(6.32±0.26)相比差异有统计学意义(t=21.46,P<0.0001),且HE染色结果发现,Pex5 cKO小鼠附睾中无精子发生。结论：PEX5在小鼠精子发生过程中发挥重要作用。     

碱性裂解液提取DNA法在环氧化酶亚型基因敲除小鼠基因型鉴定中的应用

目的：应用碱性裂解液法提取的DNA鉴定环氧化酶（COX）亚型基因敲除小鼠,为鉴定纯合子小鼠提供一种方便快捷、低成本、可靠的实验方法。方法：取子代小鼠耳缘组织于EP管中,用碱性裂解液提取基因组DNA,PCR扩增COX-1和COX-2基因片段,通过琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型作出鉴定。结果：碱性裂解液法提取的DNA能应用于子代小鼠的不同基因型的鉴定,即野生型（COX-1＋/＋;COX-2＋/＋）、杂合子（COX-1＋/-;COX-2＋/-）和纯合子（COX-1-/-;COX-2-/-）。结论：建立了碱性裂解液提取DNA法,并将该法成功应用于环氧化酶亚型基因敲除小鼠基因型鉴定中。     

饲料中丙酸和丁酸对肥胖小鼠脂肪代谢的影响

目的 探讨外源性短链脂肪酸对高脂诱导的肥胖小鼠脂肪代谢的影响。方法 将40只3~4周龄C57BL/6J雄性小鼠分成4组,分别给予正常饲料、高脂饲料以及分别添加丙酸和丁酸的高脂饲料喂养4个月。喂养过程结束后,心脏采血,取性腺周围脂肪、肩胛骨下脂肪和肝脏。检测血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)等浓度,观察脂肪和肝脏组织细胞形态变化,同时检测甘油三酯脂肪酶(atgl)、激素敏感脂肪酶(hsl)、二酯酰甘油酰基转移酶2(dgat2)、肉碱脂酰转移酶(cpt)及解偶联蛋白1(ucp1)等基因mRNA表达水平。结果 与正常饲料喂养组相比,高脂饲料组小鼠体重、血浆TG和TCH水平、肝脏脂肪聚集均显著增加(P<0.05);而高脂饲料中添加丙酸和丁酸则抑制了小鼠体重的增加和肝脏脂滴聚集,同时降低了血浆TG和TCH水平(P<0.05)。脂肪代谢相关基因表达检测显示,与正常饲料组小鼠相比,高脂饲料组小鼠性腺周围脂肪组织和肝脏中atgl、hsl、cpt1c基因mRNA的表达量均显著性降低,而dgat2基因mRNA的表达量明显升高(P<0.05);而高脂饲料中添加丙酸和丁酸提升了性腺周围脂肪组织和肝脏中agtl、hsl、cpt1c基因mRNA的表达,而抑制了dgat2的表达(P<0.05)。肩胛骨下脂肪中上述基因的表达几乎未受到饲料丙酸和丁酸添加的影响(P>0.05)。结论 丙酸和丁酸可能通过促进脂肪分解和氧化对高脂饲料诱导肥胖小鼠的体重增加发挥抑制作用。     

CRISPR系统特异性敲除目的基因在肝病小鼠模型中的应用

目的 利用腺相关病毒(AAV)转导和CRISPR技术建立肝脏相关疾病小鼠模型.方法 AAV-绿色荧光蛋白(GFP)表达系统(AAV-GFP)和CRISPR靶向基因敲除质粒系统(px330-sgGFP-Cas9),三组FVB/NJ小鼠采用尾静脉高压水动力注射技术分别注射生理盐水(对照组)、AAV-GFP(AAV-GFP组)、AAV-GFP+px330-sgGFP-Cas9(sgGFP组),采用小动物活体成像仪检测小鼠肝脏GFP表达情况.结果 生理盐水对照组小鼠肝脏不表达GFP;AAV-GFP组小鼠肝脏72 h后开始表达GFP,2周后GFP表达稳定;sgGFP组在第9、12天均表达GFP蛋白,但2周后GFP蛋白明显减弱.结论 本研究所构建的AAV-GFP表达系统能够在小鼠肝脏中稳定表达GFP.所构建的CRISPR质粒系统可以特异性敲除小鼠肝脏所携带的目的基因,建立合适的肝脏疾病研究模型.     

CTLA4基因多态性与不明原因习惯性流产发生风险关系

目的:探究细胞毒性T淋巴细胞相关性抗原-4(CTLA4)与不明原因习惯性流产(UHA)发生风险关系。方法:选取本院治疗的98例UHA患者,另选107例正常妊娠者为对照组,提取血液DNA,聚合酶链式反应-限制性片段多态性法检测CTLA-4基因rs5742909、rs4553808、rs231775位点基因分型,酶联免疫吸附法检测血清Th1型、Th2型细胞因子表达;分析CTLA4基因型与UHA发生风险、各位点基因型与炎症因子水平关系。结果:与对照组相比,UHA组血清干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-2(IL-2)水平均升高,IL-4、IL-6、IL-10水平均降低(P<0.05)。两组CTLA4基因rs5742909、rs4553808、rs231775位点实际基因频率与理论值无差异(P>0.05),符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律;s5742909位点T等位基因频率、rs231775位点G等位基因频率均高于对照组(P<0.05)。rs5742909、rs231775不同基因型者血清IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10水平有差异(P<0.05)。logistic多因素回归分析显示rs5742909 T等位基因携带者发生UHA相对危险度为C等位基因的1.984倍,rs231775 T等位基因携带者发生UHA相对危险度为C等位基因的1.837倍。结论:CTLA4基因rs5742909、rs231775位点多态性与UHA发生相关,rs5742909位点C→T突变、rs231775位点A→G突变可增加UHA的发病风险。     

Plin1基因敲除对肥胖小鼠脂质代谢的影响及机制

目的 研究Plin1基因敲除对高脂饮食诱导肥胖小鼠脂质代谢的影响并探究其可能的作用机制。方法 普通C57BL/6J小鼠12只，随机分为普通组和高脂组，每组6只，Plin1基因敲除小鼠12只，随机分为敲除普通组和敲除高脂组，每组6只。喂养12 w后称量各组小鼠体重，取出白色和棕色脂肪组织称重并用HE染色观察不同脂肪组织的形态变化；试剂盒检测小鼠血清脂质相关指标；WB法检测脂质代谢相关蛋白的表达。结果 与普通组相比，高脂组小鼠体重和脂肪组织重量显著增加（P <0.05）,TG、TC、LDL-C、Glycerin和FFA水平均显著升高（P <0.05），平均脂肪细胞面积变大（P <0.05），脂肪组织中SREBP1蛋白表达明显增加（P <0.05）,p-HSL和ATGL的蛋白表达量显著下降（P <0.05）；与高脂组相比，敲除普通组和敲除高脂组小鼠体重显著减轻，其脂肪重量和系数也明显下降（P <0.05），血清中TG、TC水平降低，HDL-C水平升高（P <0.05）,WAT细胞体积缩小，BAT细胞空泡增多，脂肪组织中SREBP1蛋白表达下降（P &...     

脂联素基因敲除小鼠血管钙化的研究

目的 观察脂联素基因敲除小鼠主动脉组织病理学和组织化学的特性. 方法 SPF级6周龄雄性脂联素基因敲除小鼠纯合子(Adiponectin-/-)30只随机分为5组,第1、2、3组分别给予普通膳食喂养10、20、30周,第4组每2周经颈静脉注射空白腺病毒载体(即β-半乳糖甘酶腺病毒载体)并予普通膳食喂养30周,第5组每2周经颈静脉注射重组脂联素腺病毒载体并予普通膳食喂养30周;另随机选取SPF、级6周龄雄性野生型小鼠(WT)6只为正常对照组,给予普通膳食喂养30周.采用酶法测定血糖浓度,放射免疫法测定血浆胰岛素和脂联素水平.分离小鼠胸主动脉置4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,行茜素红钙化染色.分离主动脉弓到髂骨分支的动脉,用比色法测定10%甲酸抽提的钙含量.超声破碎胸主动脉,用Bradford法测总蛋白含量,离心后取上清液采用对硝基苯酚法测定ALP活性. 结果经普通膳食喂养的各组脂联素基因敲除小鼠与野生型小鼠在体重、血糖、血胰岛素水平方面无明显区别.与野生型小鼠、喂养10及20周的脂联素基因敲除小鼠相比,喂养30周的脂联素基因敲除小鼠出现了轻度的动脉钙化,其动脉的钙含量及ALP活性升高.通过对脂联素基因敲除小鼠进行外源性脂联素的补充,抑制了动脉钙化的出现及ALP活性升高. 结论在普通膳食喂养30周后,脂联素基因敲除小鼠出现轻度的动脉钙化,其机制可能与动脉中升高的ALP活性有关;外源性脂联素的补充可抑制脂联素基因敲除小鼠动脉钙化的发生,提示脂联素为动脉钙化的保护因子.     

miR-338-3p和miR-518b在绒毛膜羊膜炎患者胎盘组织的表达及IL-6基因多态性

目的探讨miR-338-3p、miR-518b在绒毛膜羊膜炎患者胎盘组织中的表达及白细胞介素-6(IL-6)基因多态性。方法选择襄阳市中心医院2017年12月-2019年12月收治的胎膜早破并绒毛膜羊膜炎产妇50例为研究组,选择同期医院收治的胎膜早破未合并绒毛膜羊膜炎产妇50例为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测两组患者胎盘组织中miR-338-3p、miR-518b相对表达水平;采用SNaPshot技术对IL-6基因rs1800796位点单核苷酸多态性(SNP)进行检测。结果研究组胎膜组织中miR-338-3p、miR-518b在mRNA相对表达水平高于对照组(均P<0.001);随着绒毛膜羊膜炎炎症严重程度的增加miR-338-3p、miR-518b在mRNA相对表达水平逐渐升高(P<0.05);两组患者基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡;研究组基因型、等位基因频率与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);以CC基因型为参照,经Logistic回归分析校正混杂因素后,IL-6基因rs1800796位点携带GC+GG基因型者绒毛膜羊膜炎发病风险为CC基因型的2.154倍(P<0.05);IL-6基因rs1800796不同基因型miR-518b mRNA相对表达水平差异具有统计学意义(P<0.05),miR-338-3p无此趋势。结论miR-338-3p和miR-518b参与了胎膜早破产妇发生绒毛膜羊膜炎的病理过程,其中miR-518b可能通过调节IL-6基因rs1800796位点的方式参与此过程,其机制有待进一步探究。     

二硫化碳染毒对ApoE基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠脂肪酸代谢的影响

目的 研究二硫化碳(CS2)染毒对ApoE基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠脂肪酸代谢的影响.方法 将24只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为CS2染毒正常饮食组、CS2未染毒正常饮食组、CS2染毒高脂饮食组、CS2未染毒高脂饮食组;24只C57BU6J雄性小鼠也按同样的方式分成4组;每组6只.将染毒组以浓度为1 g/m3的CS2进行静式吸入染毒,5 h/d,5 d/周,共2周.收集小鼠全血,采用酸催化甲酯化方法对脂肪酸进行衍生化,并用气质联用(GC-MS)方法比较染毒前后脂肪酸含量.结果 C57BL/6J小鼠染毒高脂饮食组花生酸含量明显低于C57BL/6J小鼠未染毒高脂饮食组,ApoE基因敲除小鼠染毒正常饮食组花生四烯酸含量明显低于ApoE基因敲除小鼠未染毒正常饮食组,ApoE基因敲除小鼠染毒高脂饮食组γ-亚麻酸含量明显高于ApoE基因敲除小鼠未染毒高脂饮食组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CS2染毒可以引起小鼠脂肪酸代谢紊乱,CS2可能对动脉粥样硬化等心血管疾病有影响.