MR靶向对比剂前体——VEGF165-适配体与VEGF165体外结合实验研究

目的应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测MR靶向对比剂前体——血管内皮生长因子165-适配体(VEGF165-aptamer)与VEGF165的体外结合能力,以了解其对VEGF的靶向性。方法实验组采用亲和素96孔酶标板,包被生物素化VEGF165-aptamer,设置递减的浓度梯度(共9组)和空白对照组,采用组间方差分析。结果实验组包被生物素化VEGF165-aptamer浓度在50～0.78pmol/μL时,实验组与空白组及实验各相邻组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组包被浓度为0.39、0.195pmol/μL时,两组与空白组间及两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论采用ELISA检测技术验证了VEGF165-aptamer与VEGF165间的体外结合能力,其有效最低小包被浓度为0.78pmol/μL,VEGF165-aptamer对VEGF165有良好的靶向性。     

MR靶向对比剂前体——VEGF165-适配体与VEGF165体外结合实验研究

目的应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测MR靶向对比剂前体——血管内皮生长因子165-适配体(VEGF165-aptamer)与VEGF165的体外结合能力,以了解其对VEGF的靶向性。方法实验组采用亲和素96孔酶标板,包被生物素化VEGF165-aptamer,设置递减的浓度梯度(共9组)和空白对照组,采用组间方差分析。结果实验组包被生物素化VEGF165-aptamer浓度在50～0.78pmol/μL时,实验组与空白组及实验各相邻组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组包被浓度为0.39、0.195pmol/μL时,两组与空白组间及两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论采用ELISA检测技术验证了VEGF165-aptamer与VEGF165间的体外结合能力,其有效最低小包被浓度为0.78pmol/μL,VEGF165-aptamer对VEGF165有良好的靶向性。     

CD40突变体靶向MR分子成像探针制备及体外卵巢癌成像的实验研究

目的 探讨超微超顺磁氧化铁(USPIO)粒子负载的,CD40突变体抗体分子探针的构建方法和其生物、理化性状,以及在体外对卵巢癌的靶向作用.方法 采用化学交联法将单克隆抗体交联于二巯基丁二酸(DMSA)修饰的USPIO,形成具有免疫活性的分子探针,进行磁学性能鉴定.USPIO标记的抗人CD40突变体单克隆抗体5H6(5H6-USPIO)作为实验组,USPIO标记的抗人CD40单克隆抗体5C11(5C11-USPIO)及USPIO为对照组.通过流式细胞术、共聚焦显微镜及普鲁士蓝染色分析其体外生物学特性,采用3.0T MR对探针与高表达CD40突变体卵巢癌(HO8910)进行体外细胞成像.信号变化数据组间比较采用单因素方差分析和LSD检验.采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测探针对HO8910细胞的增殖影响.结果 携带USPIO的抗CD40突变体分子探针被成功构建并分离纯化.合成的探针同USPIO相比具有相似的磁学特性和良好的稳定性.流式细胞术、共聚焦显微镜及普鲁士蓝染色证实抗体分子探针能够特异性识别HO8910细胞表面的CD40突变体,对细胞HO8910的增殖无影响.体外MRI显示探针同HO8910细胞结合后T2、T2*值明显缩短,T2图像较对照组明显变暗.5H6-USPIO组的T2、T2*弛豫时间分别为(40.05±1.62)、(3.08±0.11)ms,短于5C11-USPIO[分别为(85.38±4.74)和(11.82±1.00)ms]和USPIO组[分别为(91.62±3.35)和(13.60±1.92)ms],差异均有统计学意义(F值分别为196.29、60.73,P值均＜0.01),而5C11-USPIO、USPIO两组T2、T2*弛豫时间差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 化学交联法可制备出CD40突变体单克隆抗体超顺磁氧化铁粒子探针,该探针具有良好磁学特性及较高生物活性,能够特异性识别卵巢癌细胞HO8910.     

F4/80 MR分子靶向成像用于结肠癌巨噬细胞的活体检测

目的应用巨噬细胞特异性表面抗原F4/80靶向对比剂F4/80-USPIO显示结肠癌动物模型中的肿瘤相关巨噬细胞。方法构建结肠癌皮下移植瘤动物模型。通过免疫组化染色实验,显示F4/80在结肠癌组织内的表达率。测定USPIO及F4/80-USPIO的基本理化特性,比较两者的T_2弛豫率。对荷瘤小鼠行MRI扫描,测量注射F4/80-USPIO前、后肿瘤的T_2信号强度值变化。结果 F4/80-USPIO的粒径约49.81nm,弛豫率为0.0384mM~(-1)s~(-1),高于USPIO;免疫组化染色实验显示结肠癌组织内有大片区域F4/80受体阳性表达;小鼠结肠癌皮下移植瘤模型MR活体成像示F4/80-USPIO降低了瘤灶的T_2信号。结论结肠癌动物模型中的肿瘤相关巨噬细胞可特异性摄取F4/80-USPIO,F4/80-USPIO可作为结肠癌T_2阴性对比剂。     

C60-IONP-GE11纳米粒对乳腺癌细胞的体外成像及光动力学研究

【摘要】目的：构建多功能MRI 对比剂C60-IONP-GE11,研究其体外细胞磁共振靶向成像效果及光动力学治疗效果。方法：免疫荧光染色验证EGFR高表达肿瘤细胞株;体外磁共振成像观察靶向组对比剂C60-IONP-GE11和非靶向组对比剂C60-IONP-RP的成像效果,普鲁氏蓝染色观察对比剂分布情况;CCK8法检测C60-IONP-GE11的细胞毒性;光动力学实验设置单纯激光组、C60-IONP-GE11无激光组、非靶向对比剂+激光组和实验组靶向对比剂C60-IONP-GE11+激光组4个处理组,相应处理后CCK8测其细胞存活率,活性氧检测实验观察不同组ROS产生水平,ImageJ半定量分析ROS荧光水平。结果：免疫荧光实验结果证实MD-MBA-231细胞膜上大量表达EGFR;C60-IONP-GE11体外MRI靶向实验可见T2WI呈负性强化,且T2WI信号随着靶向对比剂浓度增加而降低,线性回归方程为Y=145.898-30.269*X,R2=0.862;普鲁士蓝染色发现C60-IONP-GE11实验组可使MD-MBA-231细胞膜区明显蓝染,而非靶向对照组不能;体外毒性实验发现C60-IONP-GE11无明显细胞毒性;C60-IONP-GE11体外光动力学杀伤乳腺癌细胞,细胞存活率仅为（22.79±4.84）%,并可见细胞内大量活性氧生成,活性氧水平随C60-IONP-GE11浓度增加而增多。结论：C60-IONP-GE11多功能MR对比剂具有体外靶向乳腺癌细胞MR成像功能,几乎无毒,外加激光可靶向杀伤肿瘤细胞,同时具有MRI成像及PDT治疗作用。     

USPIO-PEG-sLeX 分子探针在裸鼠鼻咽癌移植瘤模型 MRI 的初步研究

目的：通过超顺磁性氧化铁(USPIO)螯合唾液酸化酶 X(sLeX )形成靶向内皮细胞黏附分子-1(ELAM-1)的特异性磁共振成像的分子探针(USPIO-PEG-sLeX ),并探讨其在鼻咽癌移植瘤的应用价值。方法利用物理沉积方法合成 USPIO 纳米颗粒,通过 PEG 修饰形成 USPIO-PEG-sLeX 。裸鼠鼻咽癌移植瘤模型分为实验组和对照组,分别经尾静脉注入 USPIO-PEG-sLeX 和USPIO-PEG 前后进行 MR T2 mapping 成像,比较分析注射对比剂前后移植瘤的 T2值变化。结果USPIO-PEG-sLeX 具有良好表征。对照组和实验组的鼻咽癌移植瘤的平扫 T2值差异无统计学意义(P >0.05),增强扫描后2组的 T2值下降,2组的 T2值差异有统计学意义(P <0.05);实验组的强化率更低,2组的强化率差异有统计学意义(P <0.05)。实验组中瘤体与肌肉的强化率差异有统计学意义(P <0.05)。结论USPIO-PEG-sLeX 纳米磁性颗粒有望作为鼻咽癌 ELAM-1表达的靶向对比剂,在非创伤动态监测 ELAM-1的表达方面具有良好的潜在应用前景。     

超微超顺磁性氧化铁和钆对比剂增强兔动脉硬化斑块之比较

目的：比较超微超顺磁性氧化铁（USPIO）和钆对比剂在磁共振图像上增强动脉粥样硬化斑块的异同。方法：20只新西兰大白兔高脂喂养8周,存活18只,分为对照组和实验组,每组各9只。使用磁共振在心电门控下对两组兔主动脉斑块进行检测,再给对照组注射钆对比剂,实验组注射USPIO对比剂,并分别于注射后即时、24、36和48 h进行扫描。扫描序列为二维时间飞跃法、快速自旋回波T1WI、脂肪抑制的快速自旋回波序列T1WI和快速自旋回波序列T2WI。比较各组兔主动脉硬化斑块内增强前后以及增强后不同时期的脂肪抑制T1WI和T2WI,对比噪声比（CNR）值变化差异。将两组动物处死后取出胸主动脉进行大体普鲁士蓝染色和切片显微镜观察。结果：对照组主动脉硬化斑块注射钆对比剂后T1WI显著强化,CNR值明显上升,24 h后回归注射前状态;T2WICNR值轻度下降,24 h后回归正常。实验组硬化斑块注射USPIO后T1WI显著强化,CNR值明显上升,24 h后有所下降,但明显高于注射前,48 h和72 h后CNR值持续上升;T2WI注射后信号显著降低,24 h后CNR值有所上升,但仍然低于注射前,48 h和72 h CNR值持续下降。实验组兔胸主动脉和切片普鲁士蓝染色阳性,对照组显示阴性。结论：相对于钆对比剂,超顺磁性、超长时间的血浆半衰期以及能够被巨噬细胞特异性吞噬的特性,使得常规剂量的USPIO可以同时引起强化组织信号在T1WI及T2WI上显而易见的变化,并且能够保持长时间的持续强化。     

Gd-DTPA标记单克隆抗体对荷人肝癌裸鼠的MR成像研究

目的评价特异性MR对比剂Gd-DTPA-单克隆抗体HAb18对肿瘤的强化效果.材料与方法制备Gd-DTPA标记的单克隆抗体,并测定每分子抗体所结合的Gd 3数目及其免疫活性.12只荷人肝癌裸鼠分为两组,分别给予Gd-DTPA-McAb和Gd-DTPA后进行MR扫描,测量SE T1WI平扫及增强后10 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h图像内肿瘤的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算肿瘤强化率及对比度噪声比.结果 Gd-DTPA-单克隆抗体组在注射MR对比剂后的早期,肿瘤表现为缓慢轻度的强化,在注射对比剂24 h后,肿瘤强化达25%,与其他各时间点有统计学差异.Gd-DTPA对照组内,肿瘤表现为快进快出的强化特点.结论使用Gd-DTPA-单克隆抗体进行靶向显像具有特异性作用,有助于肿瘤的定性诊断.     

靶向CT对比剂在结核急性感染动物模型中的初步观察

目的 探讨抗85B和ESAT-6鼠单克隆抗体靶向CT对比剂对小鼠急性感染肺结核动物模型显示的可行性.方法 采用已纯化的抗85B和ESAT-6鼠单克隆抗体与碘原子耦联制备靶向CT对比剂,计算对比剂溶液中抗体含量和结合127Ⅰ含量,稀释后配制成5μg I/ml备用.将20只小鼠急性感染肺结核动物模型通过随机数字表法随机分为4组,每组5只并编号,分别记为靶向对比剂85B组和ESAT-6组、普通对比剂组和对照组.普通对比剂组与85B组注射含碘浓度相同的碘海醇稀释液；对照组注射pH 7.4的磷酸盐缓冲液(PBS).分别于注射对比剂前、后不同时间(即刻,6、12、24 h)行微CT(Micro-CT)扫描,观察小鼠肺内病变的显示情况,判断指标为病变CT值,绘制CT强化-时间曲线,并计算强化率.两样本均数比较用t检验,多个样本均数比较用方差分析.结果 实验所制备的2.52 ml抗85B对比剂溶液中含有210～ 255μg抗体、10.5 ～ 16.6μg 127Ⅰ;2.93 ml抗ESAT-6对比剂溶液中含有抗体147μg、结合127Ⅰ约20.58 μg.靶向对比剂组小鼠肺内病变的CT值随时间延长而逐渐升高,在注射对比剂后12 h(t12)病变强化明显,在注射对比剂24 h(t24)后肺内病变仍有强化,且与普通对比剂组小鼠肺内病变的CT值相比[85B组t12=(-125.04±13.58)HU,t24=(-117.37±12.28)HU和ESAT-6组t12=(-122.14±19.01)HU,t24=(-114.23±17.08)HU],差异均有统计学意义(2组24 ht值分别为4.05和6.39,P值均＜0.05).对照组小鼠肺内病变在注射PBS前后,均未见强化.结论 制备的抗85B和ESAT-6结核特异抗体靶向CT对比剂在小鼠肺结核动物模型中具有一定靶向性,为结核相关靶向对比剂的研究奠定了实验基础.     

重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),并观察Ad-VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(bMSCs)后VEGF165的表达情况. 方法 将PCR获取的VEGF165目的 基因插入到pAATrackCMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-VEGF165,经Pme I酶切线性化后,采用电穿孔法转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中,挑选同源重组菌落.提取质粒并用Pac I酶切鉴定.线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞,包装成重组腺病毒颗粒.并扩增收集重组腺病毒,测定病毒滴度.体外培养大鼠骨髓基质细胞,Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞,转染后在荧光显微镜下观察.转染的骨髓基质细胞采用RT-PCR和ELISA法检测VFGF165的表达水平. 结果 经酶切鉴定,基因测序及绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒,并扩增出109pfu/ml的高滴度重组腺病毒.Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞后,RT PCR证明转染的骨髓基质细胞内有VEGF165mRNA表达.ELISA检测发现转染组上清液中VEGF165蛋白分泌量明显高于对照组(P＜0.01). 结论 pAdEasy-VEGF165转染对骨髓基质细胞的增殖能力无明显影响,而且骨髓基质细胞能够表达并分泌VFGF165为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础.     

Gastrointestinal toxicity of 5-FU and 5-FUDR: radiographic findings.

The authors describe two patients who suffered gastrointestinal toxicity after receiving chemotherapy for unresectable lesions in the liver that metastasized from colonic carcinoma. One patient had severe ileitis caused by intravenous administration of 5-fluorouracil; the other had severe duodenitis caused by infusion of 5-floxuridine into the hepatic artery by an implanted pump. The type of toxicity that occurred was directly related to the route of administration of these chemotherapeutic agents. Cessation of the chemotherapy led to a dramatic clinical response in these patients.     

抗角蛋白单克隆抗体5 G 5对角质形成细胞增殖影响的实验研究

 目的 研究抗角蛋白单克隆抗体5G5治疗银屑病的作用机制。方法 腹腔注射乙烯雌酚有引起小鼠阴道上皮细胞增殖的作用,小鼠尾部表皮天然缺乏颗粒层,这两种特征与银屑病病理类似。不同组别的小鼠,以单抗5G5注射,观察其对角质形成细胞增殖的调节作用。结果 单抗5G5有较好的降低嗜银蛋白含量和小鼠阴道上皮细胞有丝分裂,以及促使角质形成细胞分化的作用。结论 抗角蛋白单克隆抗体5G5治疗银屑病的作用机制与调节角质形成细胞增殖有关。