~(60)Co-γ射线照射对小鼠SVZ神经干细胞增殖的影响

目的:探讨60Co-γ射线照射对成体小鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法:28只昆明小鼠随机分成4组,每组7只,分别以0 Gy、5 Gy(小剂量)、15 Gy(中剂量)、30 Gy(大剂量)剂量进行照射,于照射后1周观察侧脑室室管膜下区(SVZ)的5-溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)阳性细胞形态和数目。结果:照射后1周,各照射组SVZ的BrdU阳性细胞形态与对照组无差别,呈圆形、椭圆形以及梭形等;15 Gy、30 Gy照射组SVZ的BrdU阳性细胞数明显降低(P<0.01),5 Gy照射组SVZ的BrdU阳性细胞数无差别(P>0.05)。结论:大中剂量60Co-γ照射会抑制SVZ神经干细胞的增殖分裂能力。     

去大脑皮质血管对成年大鼠侧脑室室管膜下层神经干细胞增殖的影响

目的:研究去大脑皮质血管对成年大鼠侧脑室室管膜下区(subependymal ventricular zone,SVZ)干细胞增殖的影响。方法:成年大鼠随机分为正常组和模型组,通过免疫组织化学的方法检测去大脑皮质血管后成年大鼠侧脑室前角、中央部、下角室管膜下BrdU标记细胞。结果:去皮质血管后大鼠侧脑室各部SVZ的BrdU阳性细胞的数目明显增多,去大脑皮质血管15d、30d大鼠侧脑室各部外侧壁和前角上壁SVZ的BrdU阳性细胞核计数均明显多于正常组。结论:去大脑皮质血管损伤可诱导大鼠脑内侧脑室室管膜下细胞的增殖。     

Ⅰ型糖尿病脑病大鼠学习记忆及侧脑室室管膜下区神经发生的变化

目的观察Ⅰ型糖尿病脑病对学习记忆及侧脑室室管膜下区神经发生的影响。方法建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型及胰岛素治疗糖尿病模型,用免疫组织化学方法计数侧脑室室管膜下区BrdU阳性细胞数,并用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力。结果糖尿病大鼠SVZ的BrdU细胞数以及学习记忆能力明显下降(P<0.01);用胰岛素治疗,可使上述指标明显上升(P<0.01),并接近正常水平。结论胰岛素治疗对糖尿病大鼠神经干细胞增殖及学习记忆能力均有相似的促进作用。     

局灶性脑缺血后老年大鼠室管膜下区和颗粒下层细胞增殖与分化的实验研究

目的观察老年大鼠局灶性脑缺血后室管膜下区（SVZ）和颗粒下层（SGZ）神经干细胞的增殖与分化.方法取老年大鼠制作大脑中动脉梗塞模型.用5-溴脱氧尿核苷（BrdU）脉冲标记结合免疫组织化学单标记技术,观察正常组、假手术组、脑缺血后3、7、14、21、28 d组SVZ和SGZ区BrdU阳性细胞的变化;用BrdU累积标记结合免疫组织化学双标技术,观察脑缺血14 d后SVZ和SGZ区BrdU/NeuN和BrdU/GFAP双标阳性细胞的数量.结果在正常组、假手术组及各脑缺血组大鼠的双侧SVZ和SGZ均可观察到BrdU阳性细胞.与正常组和假手术组相比,脑缺血后SVZ和SGZ区BrdU阳性细胞明显增加.缺血组SVZ区BrdU阳性细胞在脑缺血后7 d时达到高峰,28 d时仍高于正常水平;SGZ区BrdU阳性细胞在脑缺血后14 d时达到高峰,28 d时仍高于正常水平.通过BrdU累积标记和免疫组织化学双标发现：脑缺血14 d后,老年大鼠SVZ区有部分细胞显示BrdU/NeuN（0.98%）或BrdU/GFAP（12.56%）双标阳性,而SGZ区未见双标细胞.结论局灶性脑缺血可激活老年大鼠室管膜下区和颗粒下层的神经干细胞明显增殖,并且室管膜下区有部分增殖细胞可分化为神经元或神经胶质.     

SAMP8小鼠穹窿下器内神经干细胞的定位分布

目的:观察溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)及巢蛋白(Nestin)阳性细胞在SAMP8小鼠穹窿下器的分布。方法:成年SAMP8小鼠20只,随机分为四组,一组按每只50㎎/㎏(0.3ml)的剂量腹腔注射BrdU,另外三组不作处理。经灌注后,分别采用免疫组织化学方法进行检测。结果:免疫组织化学染色,可见少量BrdU阳性细胞,胞核呈棕褐色或棕黑色;Nestin免疫阳性细胞在室管膜下区密集分布;SOX2免疫阳性细胞散在分布,在室管膜区和大血管周围分布密集。SOX2/Nestin免疫荧光双标染色:可见少量SOX2/Nestin双阳性细胞。结论:穹窿下器内SOX2及Nestin阳性细胞密集,并可见少量BrdU阳性细胞及SOX2/Nestin双阳性细胞,提示SAMP8小鼠穹窿下器存在神经干细胞/祖细胞,可能具有神经元发生功能。     

依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内Nestin表达的影响

目的观察Nestin在永久性脑缺血大鼠脑内的变化及依达拉奉干预的影响。方法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)SD大鼠模型,应用抗Nestin和抗Nestin/GFAP抗体进行免疫组化单标和免疫荧光双标染色。结果缺血后脑组织有大量Nestin阳性表达,阳性细胞主要分布于缺血侧侧脑室的室管膜下区(SVZ)、梗死灶周围大脑皮质和纹状体。细胞呈星状多突起,形似星形胶质细胞,且脑缺血后的大部分Nestin阳性细胞与星形胶质细胞标记物GFAP有共表达。缺血侧SVZ的Nestin阳性细胞数和免疫阳性表达强度于脑缺血后3 d达到高峰;梗死灶周围大脑皮质和纹状体区阳性细胞数和阳性表达强度分别于缺血后3 d和1周达到高峰;部分细胞聚集于梗死灶边缘,形成一个明显的梗死灶边缘带。经依达拉奉干预后,Nestin阳性细胞计数和表达强度与盐水组比较均升高(P<0.05),尤其在缺血治疗后3 d和1周(P<0.01)。结论脑缺血后,SVZ以及梗塞灶周围大脑皮质和纹状体区域大鼠Nestin阳性细胞数量增多、表达增强;经依达拉奉干预治疗后,Nestin阳性细胞的表达进一步增强,提示依达拉奉治疗可能促进脑缺血后神经干细胞的增生和分化,促进损伤组织的修复,发挥神经保护作用。     

人参皂苷诱导骨髓间充质干细胞促进创伤性颅脑损伤的神经再生

背景：以往研究表明骨髓间充质干细胞治疗神经疾病方面已经取得了一定成效,能明显促进神经功能改建,但关于基因及药物调控的相关研究目前尚未取得突破性进展。 目的：探讨人参皂苷诱导骨髓间充质干细胞分化对创伤性颅脑损伤后神经再生的影响。 方法：采用液压冲击法建立大鼠颅脑创伤模型,随机分为颅脑损伤组、骨髓间充质干细胞组、人参皂苷诱导分化的骨髓间充质干细胞组。移植后2周采用Western blot检测创伤脑组织神经生长因子及脑源性神经营养因子表达水平,免疫组织化学法检测BrdU标记的阳性细胞数量;移植后1,3 d及1,2周进行动物神经学缺损评分。 结果与结论：人参皂苷诱导分化的骨髓间充质干细胞组大鼠脑创伤组织神经生长因子及脑源性神经营养因子蛋白表达水平明显高于骨髓间充质干细胞组和颅脑损伤组(P < 0.05);人参皂苷诱导分化的骨髓间充质干细胞组BrdU标记的阳性细胞数量明显多于骨髓间充质干细胞组和颅脑损伤组(P < 0.05);移植后3 d及1,2周,人参皂苷诱导分化的骨髓间充质干细胞组大鼠神经功能障碍评分低于骨髓间充质干细胞组和颅脑损伤组(P < 0.05)。结果表明经人参皂苷诱导分化后的骨髓间充质干细胞移植可以促进创伤性颅脑损伤大鼠的神经再生,较单独应用骨髓间充质干细胞移植效果显著。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

成年大鼠脑梗死后自体神经干细胞的原位增殖

制作大鼠脑梗死模型，采用免疫组化染色方法，观察脑梗死后1、3、7、14和28d时，梗死侧神经干细胞增殖及其表达标记物BrdU和nestin的动态变化。与对照组相比，伤侧皮层、海马及室下区的BrdU和nestin阳性细胞数于伤后1d开始增多，7d达高峰，28d后接近正常水平。结果表明：脑梗死可激发成年大鼠自体神经干细胞原位增殖；自体神经干细胞对脑梗死损伤有一定的反应能力，可能对脑梗死后机体自我修复有潜在的治疗作用。     

穹窿海马伞切割后大鼠海马伞内神经干细胞的观察研究

目的观察穹窿海马伞切割侧和非切割侧大鼠海马伞内神经干细胞的表达情况。方法切割SD大鼠右侧穹窿海马伞,于术后2d经腹腔注射BrdU,连续5d,术后7d取脑冰冻切片,进行BrdU/Nestin免疫荧光双标检测。结果穹窿海马伞切割侧海马伞内的BrdU阳性细胞数和Nestin阳性细胞数均明显多于非切割侧,且出现较多的BrdU/Nestin双标的阳性细胞,而非切割侧未见BrdU/Nestin双标的阳性细胞。结论穹窿海马伞切割后,切割侧海马伞内出现较多增殖的神经干细胞,我们推测海马伞的损伤,导致海马伞内局部微环境发生变化,产生某些信号物质,刺激脑内其他部位的神经干细胞增殖并迁移到海马伞内。     

成年和老年大鼠局灶性脑缺血后脑室下区细胞的增殖分化

目的：比较老年和成年大鼠局灶性脑缺血后脑室下区（SVZ）神经干细胞的增殖与分化。方法：制作大脑中动脉梗死模型,用免疫组化法检测SVZ的5-溴脱氧尿核苷（BrdU）、神经元核抗原（NeuN）及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞数的变化。结果：SVZ的BrdU阳性细胞在正常组和假手术组成年大鼠明显多于老年大鼠。实验组成年和老年大鼠均在缺血后增加,28d时仍高于正常水平,但成年大鼠各时间点均明显高于老年大鼠。在新生细胞中部分细胞是Brdu／NeuN或BrdU／GFAP双标细胞,但老年大鼠Brdu／NeuN双标细胞明显少于成年大鼠。结论：大鼠脑缺血激活SVZ神经干细胞增殖能力,成年大鼠明显强于老年大鼠,且新生细胞分化为神经元的比例也明显高于老年大鼠。     

Effect of ginsenoside Rg3 on mouse neural stem cell differentiation In vitro北大核心

BACKGROUND: Application of neural stem cells (NSCs) is of great current interest in neuroscience, but NSCs origin is very limited. And they always differentiate into a large percentage of glial cells and small percentage of neurons in natural differentiation process, so researchers should take effective measures to promote NSCs differentiation into certain offsprings. Previous studies have shown that ginseng saponin ingredients, such as Rb1 and Rg1, have certain influence on NSCs differentiation, but it is unclear whether Rg3 plays a role on NSCs differentiation. OBJECTIVE: To preliminarily investigate the effect of ginsenoside Rg3 on mouse NSCs differentiation into neurons and astrocytes in vitro. METHODS: The fetal cortices of embryonic 14 days (E14) C57BL/6 mice were isolated for culturing primary NSCs. Then passaged NSCs were identified by their purity with NSCs specific antibodies, Nestin and Sox2, by immunofluorescence staining. NSCs were induced for 3 days in the differentiation medium containing ginsenoside Rg3 of different concentrations (blank control, 50 and 250 nmol/L). After that, immunofluorescence staining was used to identify differentiated neurons with neuronal specific antibody, Tuj1, and differentiated astrocytes with astrocyte specific antibody, GFAP. Then, we calculated and statistically analyzed Tuj1+/DAPI and GFAP+/DAPI percentages in the three different groups. Besides, real-time PCR assay was used to test Tuj1 and GFAP mRNA expression in the three groups after 3 days of differentiation. RESULTS AND CONCLUSION: Primary and passaged NSCs were successfully cultured and almost of cells were positive for both Nestin and Sox2, so these high-purity NSCs could be used in the following experiments. Immunofluorescence staining and statistical analysis results showed that compared with the blank control and 250 nmol/L groups, 50 nmol/L group had an obviously increased neuronal percentage after 3 days differentiation (P < 0.01), while the blank control and 250 nmol/L groups had no significant difference (P > 0.05); compared with the blank control group, 50 and 250 nmol/L groups had significantly increased astrocyte percentages (P < 0.05), whereas there was no obvious difference between 50 and 250 nmol/L groups (P > 0.05). The results of real-time PCR assay were similar with the above immunofluorescence results. In conclusion, 50 nmol/L ginsenoside Rg3 can enhance mouse NSCs differentiation into neurons and astrocytes, while 250 nmol/L ginsenoside Rg3 can only promote mouse NSCs differentiation into astrocytes. © 2018, Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research. All rights reserved.     

人参皂苷Rg1干预小鼠巨大肩袖损伤后的肌肉退变

背景:肩袖肌退变(肌肉萎缩、纤维化和脂肪浸润)是肩袖撕裂后出现的常见问题,严重影响肩关节功能和手术预后。人参皂苷Rg1具有抗氧化、抗细胞凋亡、降血脂等生物效应,然而人参皂苷Rg1对肩袖损伤后肌肉退变的影响未见报道。目的:探讨人参皂苷Rg1对巨大肩袖损伤小鼠肌肉退变的影响。方法:将60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组,每组15只。假手术组小鼠切开右肩皮肤后缝合,其余3组小鼠均行右侧肩关节肩袖损伤造模,模拟巨大肩袖撕裂手术切断冈上肌肌腱和肩胛上神经压迫。术后假手术组和模型组腹腔注射生理盐水0.5 mL;人参皂苷Rg1低、高剂量组予以腹腔注射人参皂苷Rg130,60 mg/kg,1次/d,共注射6周。末次注射后次日予以步态分析评估小鼠肢体功能,安乐死后取术侧冈上肌测量肌肉萎缩率、肌肉收缩力,肌肉组织进行油红O染色、Masson染色,RT-PCR检测萎缩、纤维化、脂肪浸润相关基因的表达。结果与结论:①与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组爪印面积、步长显著增加(P<0.05);②与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组肌纤维横截面积、冈上肌收缩力显著增加(P<0.05),湿肌质量减少比率、脂肪浸润面积比率、胶原纤维面积比率显著下降(P<0.05);③与模型组相比,人参皂苷Rg1低、高剂量组肌肉组织中萎缩、纤维化和脂肪浸润相关基因的表达显著下降(P<0.05);④人参皂苷Rg1低、高剂量组爪印面积、冈上肌收缩力、肌纤维横截面积无统计学差异(P>0.05),人参皂苷Rg1高剂量组其他指标均优于低剂量组(P<0.05);⑤结果说明,人参皂苷Rg1能显著减轻小鼠巨大肩袖撕裂后肩袖肌萎缩、纤维化和脂肪浸润,并有利于肌肉力量及肢体功能的改善。     

人参皂苷Rg1对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响

背景：人参是具有抗炎、抗应激、调节免疫等广泛药理学活性的中草药,其主要药理活性成分是人参皂苷,而Rg1是含量较多的活性成分。 目的：探讨人参皂苷Rg1对白细胞介素1β诱导的人骨关节炎模型中软骨细胞Ⅱ型胶原及环氧合酶2 mRNA表达的影响。 方法：取因骨关节炎接受全膝关节置换患者的膝关节软骨进行体外培养,取第2代体外培养的软骨细胞,CCK-8检测0.001,0.01,0.1,1,10,100 mg/L人参皂苷Rg1对软骨细胞增殖率的影响。再将第2代体外培养的关节软骨细胞,随机分为空白组、对照组和实验组,分别加入DMEM培养液、10 μg/L白细胞介素1β,10 μg/L白细胞介素1β+0.1,1,10,100 mg/L人参皂苷Rg1,培养24 h后反转录PCR检测各组细胞中Ⅱ型胶原和环氧合酶2 mRNA的表达。 结果与结论：与对照组相比,人参皂苷Rg1质量浓度为0.001,0.01,0.1,1 mg/L时促进软骨细胞的增殖作用不明显,差异无显著性意义(P > 0.05);当人参皂苷Rg1质量浓度为10,100 mg/L时,促进软骨细胞的增殖作用明显(P < 0.05)。与空白组相比,对照组的软骨细胞Ⅱ型胶原的mRNA表达明显下降,而环氧合酶2 mRNA表达明显升高(P < 0.05);与对照组相比,联合加入人参皂苷Rg1质量浓度为0.1和1 mg/L时,人软骨细胞中Ⅱ型胶原和环氧合酶2 mRNA表达没有明显变化(P > 0.05);而联合加入人参皂苷Rg1质量浓度为10和100 mg/L时,人软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达增加,而环氧合酶2 mRNA表达降低(P < 0.05)。说明一定浓度的人参皂苷Rg1可以拮抗白细胞介素1β引起的人软骨细胞中Ⅱ型胶原的mRNA表达的降低和环氧合酶2 mRNA表达的升高。     

人参皂苷Rg1对缺氧复氧BMSCs增殖和凋亡的影响

目的　探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1)对缺氧复氧BMSCs增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。 方法　实验分为BMSCs正常对照组、BMSCs缺氧复氧组(Model组)、人参皂苷Rg1 1×10-7、1×10-6 、1×10-5 mol/L处理组、尼莫地平2.5×10-7 mol/L处理组（阳性对照组）。各组分别于缺氧复氧12h前加入完全培养基（正常对照组、Model组）、人参皂苷Rg1（人参皂苷Rg1各处理组）、尼莫地平（阳性对照组）。建立缺氧复氧BMSCs模型。采用TUNEL法检测各组的细胞凋亡率,免疫荧光和免疫印迹技术定性定量检测各组增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Bcl-2、Bax的表达情况。 结果 TUNEL结果显示,BMSCs正常对照组未见明显凋亡细胞,Model组可见明显的凋亡细胞,与Model组比较,其余各处理组凋亡细胞数量均减少,以人参皂苷Rg1（1×10-5mol/L）组最为明显。免疫荧光和免疫印迹结果显示,BMSCs正常对照组可见少量的PCNA 、bcl-2、bax表达;Model组的PCNA 、bcl-2的表达减少,但bax的表达显著增高,bcl-2/bax比值降低;与Model组比较,人参皂苷Rg1各组PCNA 、bcl-2表达均呈不同程度的增高,而bax表达呈现相反的趋势,bcl-2/bax比值增高,以Rg1 (1×10-5 mol/L)组最为明显。 结论 人参皂苷Rg1预处理对缺氧复氧BMSCs具有保护作用,其机制可能与下调bax的表达,上调PCNA 、bcl-2的表达,抑制BMSCs凋亡和促进BMSCs增殖有关。     

人参皂甙Rg3在体外对白血病K562细胞增殖和诱导分化的影响**

背景：文献报道人参皂甙Rg3具有抗肿瘤作用,但对白血病作用研究很少。 目的：观察人参皂甙Rg3对白血病K562细胞的作用,并探讨其相关机制。 方法：以白血病K562细胞为靶细胞,实验分为对照组和人参皂甙Rg3组,人参皂甙Rg3组分别添加10,20,40,80,       100 mg/L Rg3。 结果与结论：MTT检测结果显示,不同浓度人参皂甙Rg3组K562细胞生长抑制率均显著高于对照组(P < 0.05~0.01)。NBT结果显示,人参皂甙Rg3组培养1,2,3 d K562细胞还原率均高于对照组(P < 0.01);人参皂甙Rg3组部分K562细胞体积变小,核仁消失,同时阳性细胞增多,细胞向成熟分化;流式细胞仪检测显示人参皂甙Rg3组培养2 d细胞周期G2期增高了3.84倍。提示人参皂甙Rg3在体外可抑制K562细胞增殖活性,其机制可能与人参皂甙Rg3将K562细胞周期阻滞在G2期,使细胞不能进行正常的有丝分裂,从而抑制细胞增殖有关。      

叶酸通过调节p53/p21(waf1/cip1)信号途径促进小鼠神经干细胞增殖和分化

目的:研究叶酸对体外培养小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响及作用机制。方法:采用无血清悬浮培养方法分离培养新生小鼠脑NSCs,通过MTT法检测叶酸对NSCs增殖的影响;撤除生长因子后,用含10%胎牛血清的培养基诱导分化培养6 d后,采用Tuj1(神经元标记物)和GFAP(胶质细胞标记物)免疫荧光双标记法检测叶酸对NSCs分化的影响;并应用流式细胞术、RT-PCR法检测给予叶酸对NSCs细胞周期、p53和p21(waf1/cip1)mRNA水平的影响。结果:与对照组相比,MTT法测定结果显示,叶酸组NSCs增殖能力明显增强;分化后免疫荧光双标法测定显示,叶酸组Tuj1阳性细胞的比率明显增加,且差异具有显著性(P<0.01);流式细胞仪测定结果显示,叶酸组NSCs在G0/G1期细胞数量明显减少(P<0.01),而G2/M期细胞数量明显增多(P<0.01);RT-PCR结果显示,叶酸组NSCs中p53和p21 mRNA表达量明显降低。结论:叶酸能促进NSCs增殖及向神经元分化;叶酸对NSCs增殖和分化的影响与调节NSCs细胞周期及p53/p21(waf1/cip1)信号转导途径相关。     

成人关节软骨细胞增殖与人参皂甙Rg1的促进作用

背景：人参总皂甙的主要有效成分为人参皂甙Rg1,有促进细胞增殖、抗衰老、抗细胞凋亡、抗炎及抗自由基等作用,但以往实验对象多为鼠、兔等动物的关节软骨细胞。 目的：体外培养成人软骨细胞,观察人参皂甙Rg1对体外培养的成人关节软骨细胞增殖的促进作用。 方法：实验分2组,Rg1组使用含质量浓度为40 mg/L人参皂甙Rg1的DMEM培养液培养,对照组使用未加人参皂甙的DMEM培养液培养,每日应用倒置相差显微镜观察细胞生长情况至第7天,并进行细胞计数。同时培养至第6天检测软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达。 结果与结论：对照组自培养第2天起细胞进入对数增殖期,到第7天细胞数约为接种时的8倍。Rg1组自培养第2天起细胞增殖能力较对照组增强(P < 0.05),到第7天细胞数约为接种时的18倍(P < 0.05)。免疫组织化学SABC法检测结果显示,Rg1组与对照组细胞胞浆均可见Ⅱ型胶原表达,两组差异无显著性意义(P > 0.05)。说明人参皂甙Rg1可促进成人软骨细胞的增殖。     

人参皂苷Rb1对β-淀粉样蛋白25-35诱导神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化的影响

背景：前期研究发现,人参皂苷Rb1和β-淀粉样蛋白25-35可调节神经干细胞分化过程中Tau蛋白的磷酸化水平。蛋白磷酸酯酶2A与Tau蛋白过度磷酸化密切相关。 目的：观察β-淀粉样蛋白25-35和人参皂苷Rb1对神经干细胞分化过程中Tau蛋白磷酸化水平和蛋白磷酸酯酶2A活性的影响。 方法：分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,诱导第3代神经干细胞分化1周后分组：①空白组：不加其他处理因素继续培养36 h。②β-淀粉样蛋白组：培养24 h后,加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12 h。③预处理组：先加入人参皂苷Rb1预处理24 h,再加入β-淀粉样蛋白25-35继续培养12 h。分别采用免疫荧光细胞化学法和western-blot法检测各组细胞Tau[pS396]、Tau[pS262]表达以及蛋白磷酸酯酶2A活性。 结果与结论：正常神经干细胞分化过程中有Tau[pS396]和Tau[pS262]的表达;β-淀粉样蛋白组细胞的Tau[pS396] 和Tau[pS262]表达上调,蛋白磷酸酯酶2A活性无明显变化;预处理组Tau[pS396]和Tau[pS262]表达下调且蛋白磷酸酯酶2A活性显著增强。提示正常神经干细胞分化过程中Tau蛋白表达一定程度的磷酸化水平,人参皂苷Rb1可通过提高蛋白磷酸酯酶2A活性来减轻β-淀粉样蛋白25-35诱导的神经干细胞分化过程中Tau蛋白过度磷酸化。     

人参皂苷Rg1对创伤后应激障碍大鼠行为学变化和海马神经元自噬的影响

目的:研究人参皂苷Rg1对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠行为学变化和海马神经元自噬的影响。方法:将SD大鼠随机分为5组:对照组;模型组;人参皂苷Rg1低、高剂量(20和40 mg/kg)组;阳性药(氟西汀)组。采用连续单一应激和足底电击相结合方法制备PTSD模型,人参皂苷Rg1低、高剂量组和阳性药组分别连续灌胃给药21 d,对照组及模型组每日等体积生理盐水灌胃。造模前后各组大鼠分别作旷场试验和僵立行为测定,Nissl染色法观察海马神经元形态结构变化,免疫荧光双标记法观察海马beclin 1和LC3阳性神经元,Western blot法检测海马beclin 1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白水平以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率。结果:与对照组相比,模型组大鼠在旷场箱内活动次数减少,木僵率提高,海马神经元排列疏松,出现空泡样结构,伴有不同程度的细胞固缩,beclin 1和LC3阳性神经元明显增多,beclin 1蛋白水平增高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率增大。人参皂苷Rg1低、高剂量组大鼠在旷场箱内活动次数增加,木僵率下降,海马神经元空泡样结构减少,细胞数量增多,beclin 1和LC3阳性神经元减少,beclin1蛋白水平下降,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率减少。其中,人参皂苷Rg1高剂量组较Rg1低剂量组上述改变更为明显。结论:PTSD模型大鼠存在明显的海马神经元自噬增强和行为学异常表现。人参皂苷Rg1对PTSD症状有明显改善作用,其机制可能与抑制海马神经元异常自噬活动有关。     

人参皂苷Rg1对癫痫大鼠海马神经元损伤和小胶质细胞活化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对癫痫大鼠海马神经元损伤和小胶质细胞活化的影响及其作用机制。方法 SD大鼠分为对照组(control组)、癫痫模型组(model组)、人参皂苷Rg1低剂量组(Rg1-L组)和人参皂苷剂量组(Rg1-H组),采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制备癫痫大鼠模型;记录各组大鼠行为学发作情况;ELISA检测各组大鼠海马组织的氧化应激水平;qRT-PCR检测各组海马组织中炎症因子的表达;HE染色观察各组大鼠海马神经元结构和病理形态变化;免疫荧光组织化学染色检测各组大鼠小胶质细胞中iNOS、Arg-1蛋白表达。结果 model组大鼠症状达到Ⅲ级及Ⅲ级以上较control组显著增加,人参皂苷Rg1使大鼠的癫痫症状得到改善;与control组相比,model组大鼠海马组织中MDA(P<0.001)、TNF-αm RNA(P<0.001)、IL-1βmRNA(P<0.001)的表达水平上调,SOD(P<0.001)、IL-10 m RNA(P<0.001)的表达水平下调,而人参皂苷Rg1使大鼠海马组织中MDA(P<0.05)、TNF-αm RNA(P<0.05)、IL-1βmRNA(P<0.05)的表达水平下调,SOD(P<0.05)、IL-10 mRNA(P<0.05)的表达水平上调;model组大鼠海马神经元形态不完整,细胞间间隙增大和排列紊乱,人参皂苷Rg1组大鼠海马神经元形态明显改变,可见细胞排列较规则,大部分细胞形态正常;model组大鼠海马神经元凋亡率显著上升(P<0.001),人参皂苷Rg1组使大鼠海马神经元凋亡率下降(P<0.05);与control组相比,model组大鼠小胶质细胞数量显著增加(P<0.001),iNOS蛋白的表达显著升高(P<0.001),Arg-1蛋白表达显著降低(P<0.001),与model组相比,人参皂苷Rg1组大鼠小胶质细胞数量减少(P<0.05),iNOS蛋白的表达降低(P<0.05),Arg-1蛋白表达升高(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1降低癫痫大鼠海马组织中iNOS蛋白的表达,增加Arg-1蛋白的表达,抑制小胶质细胞的激活,减轻氧化应激和炎症因子的表达,降低癫痫大鼠发作的等级。