17-β雌二醇对人表皮黑素细胞非经典Wnt通路作用的初步探讨

目的探讨非经典的Wnt通路对雌激素刺激后黑素生成相关基因的作用。方法原代培养人表皮黑素细胞,用含不同浓度17-β雌二醇的培养基培养黑素细胞,采用CCK-8法测定黑素细胞增殖率、多巴比色法测定酪氨酸酶活性、NaOH溶解法测定黑素含量。根据结果选择合适的雌激素浓度作用于黑素细胞,实时荧光定量PCR检测作用后非经典通路相关因子mRNA的表达,蛋白印迹法检测作用前后非经典通路相关因子蛋白的表达。使用单因素的方差分析法分析各组之间的差异。结果雌激素浓度为10~(-13)~10~(-5)mol/L时黑素细胞增殖率较对照上升(P0.01)。雌激素刺激后酪氨酸酶活性和黑素含量均较对照组升高(P0.01)。10~(-9)mol/L雌激素作用后,WIF-1基因mRNA表达升高(P0.01),JNK、MITF基因mRNA表达均降低(P0.01),WNT5A,TYR基因mRNA的表达与对照组相比无统计学意义(P0.05)。10-9mol/L雌激素作用后,WNT5A,WIF-1,TYR基因蛋白表达升高,MITF,JNK基因蛋白表达量降低。结论非经典通路相关基因参与了雌激素对黑素细胞黑素生成的调节作用。     

白细胞介素-23对人表皮黑素细胞生物活性的影响

目的观察白细胞介素(IL)-23对黑素细胞增殖、凋亡及酪氨酸酶活性的影响,为白癜风发病机制的研究奠定基础。方法建立模拟正常生理状态的黑素细胞体外培养体系,用不同浓度IL-23作用于黑素细胞后,采用CCK-8法检测不同浓度IL-23对黑素细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测其对黑素细胞凋亡的影响;L-DOPA法检测其对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响。结果 IL-23随着浓度的增加抑制黑素细胞的增殖,与空白对照组相比差异有统计学意义(P0.05);用浓度为100 ng/m L的IL-23培养黑素细胞,48 h后细胞凋亡率分别为23.0%,空白对照组为5.1%;100 ng/m L和200 ng/m L IL-23组抑制酪氨酸酶的活性,与空白对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论一定浓度的IL-23对体外培养的黑素细胞起抑制增殖,并促进细胞凋亡,抑制酪氨酸酶活性的作用,其可能参与白癜风的发生发展,但其作用机制还需进一步实验和探讨。     

女贞子对培养的黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的影响

目的 研究女贞子单体酪醇和齐墩果酸对人黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法 采用MTT法测定细胞增殖情况,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,半定量RT-PCR检测药物对黑素细胞酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达的影响。结果 加入酪醇72h后,各组黑素细胞的酪氨酸酶活性和合成黑素能力明显增强,且呈浓度依赖性;酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达量分别比空白对照增加39.10%和99.26%;齐墩果酸也能明显激活酪氨酸酶(P<0.01),促进黑素合成(P<0.05),并使黑素细胞酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1mRNA表达量分别比加入无水乙醇的对照增加31.88%和17.73%。结论 酪醇和齐墩果酸可能通过上调酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA的表达而增强正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性:两者可能是女贞子中影响黑素细胞生物学活性的主要成分。     

迷迭香酸对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素生成的影响。方法取对数生长期的人表皮黑素细胞,分别加入不同浓度的迷迭香酸进行实验。MTT法测定体外培养的人黑素细胞活力,NaOH裂解法测定黑素含量,体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性。结果与对照组相比,10～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞活力无明显影响,而100μmol/L迷迭香酸抑制黑素细胞活力(P0.01);10～80μmol/L迷迭香酸呈浓度依赖性促进黑素细胞黑素合成;10～80μmol/L迷迭香酸对蘑菇酪氨酸酶活性无明显影响(P0.05);20～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞酪氨酸酶活性有促进作用(P0.01)。结论迷迭香酸具有促进人表皮黑素细胞黑素生成的作用。     

Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺对小鼠B16细胞黑素生成的抑制作用

目的探讨Z-十八碳-9-烯-丙磺酰胺(propane-2-sulfonic acid octadec-9-enyl-amide,N15)对黑素生成的影响及机制。方法以N15为受试物,小鼠B16黑素瘤细胞为研究对象。不同浓度N15(10~140μmol/L)处理B16细胞72h,MTS检测细胞增殖情况;酶标法测定B16细胞内黑素含量和酪氨酸酶活性,免疫印迹法检测酪氨酸酶的蛋白表达。结果 10~100μmol/L浓度的N15对B16细胞的增殖没有影响; 50μmol/L和100μmol/L浓度的N15对B16细胞内黑素生成的抑制率分别为18. 69%和26. 66%,对酪氨酸酶活性的抑制率分别为11. 62%和45. 16%,对酪氨酸酶蛋白表达的抑制率分别为16. 34%和34. 34%,与α-MSH组相比差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论 N15能有效抑制小鼠黑素瘤细胞B16黑素的生成,其机制可能与其抑制酪氨酸酶的活性有关。N15是一种高效的黑素合成抑制剂,可作为美白化妆品的添加剂。     

芍药苷对黑素细胞生物活性的影响

目的:检测芍药苷对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法:建立正常人表皮黑素细胞培养体系,加入不同浓度(5~640μg/mL)芍药苷并作用一定时间后,采用MTT法、体外氧化DOPA反应法、NaOH法等分别测定黑素细胞增殖活性、酪氨酸酶活性及黑素含量的变化。结果:40~160μg/mL芍药苷呈剂量依赖性抑制黑素细胞增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);5-20μg/mL芍药苷对酪氨酸酶活性呈剂量依赖性促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);10-20μg/mL芍药苷对黑素细胞黑素合成起促进作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:芍药苷在较高浓度范围内(40~160μg/mL)对体外培养正常人表皮黑素细胞增殖有剂量依赖性抑制作用;在较低浓度范围内(10-20μg/mL)对其黑素合成有促进作用。     

芦荟素抑制人表皮黑素细胞酪氨酸酶的最佳浓度选择

目的:研究抑制人表皮黑素细胞酪氨酸酶的芦荟素最佳浓度。方法:选择不同浓度的中药单体芦荟素(分别为0.010、0.001、0.100、1.000和10.000mmol/L),作用于体外培养的人表皮黑素细胞,测定黑素细胞增殖率、酪氨酸酶活性和黑素含量。结果:10.000mmol/L芦荟素组导致黑素细胞死亡;与正常对照组相比,芦荟素浓度大于0.100mmol/L的黑素细胞增殖率明显下降(P<0.05);所有实验组黑素细胞的酪氨酸酶活性和黑素含量都显著降低(P<0.001)。结论:低浓度的芦荟素(0.001～0.010mmol/L)在不影响黑素细胞增殖的情况下可以显著抑制酪氨酸酶活性和黑素的合成。     

他卡西醇对人表皮黑素细胞增殖、黏附、迁移及c-kit表达的影响

【摘要】 目的 探讨他卡西醇对体外培养的人表皮黑素细胞增殖、黏附、迁移及c-kit mRNA相对表达的影响。 方法 用不同浓度的他卡西醇干预体外培养的人表皮黑素细胞,采用四唑氮氢氧化物（XTT）法分别检测培养24、48、72 h后黑素细胞的增殖活性;用纤维连接蛋白（FN）包被细胞培养板检测培养72 h后黑素细胞的黏附率;用Transwell微孔膜法检测培养24 h后黑素细胞在FN上的迁移情况;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测培养72 h后黑素细胞c-kit mRNA相对表达量。 采用重复测量方差分析及完全随机设计方差分析进行统计学检验。 结果 重复测量方差分析结果显示,10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L他卡西醇促进黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（F = 9.47,P < 0.01）,上述浓度他卡西醇在培养24、48、72 h后促进黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（F = 14.44,P < 0.01）,药物浓度和培养时间之间存在交互作用（F = 2.47,P < 0.01）,其中10-8 mol/L他卡西醇与黑素细胞共同培养72 h黑素细胞增殖活性最高。10-8 ～ 10-7 mol/L他卡西醇可显著促进黑素细胞在FN上的黏附（均P < 0.01）;10-9 ～ 10-8 mol/L他卡西醇在培养24 h能显著促进黑素细胞迁移（均P < 0.01）;RT-PCR显示10-9 ～ 10-7 mol/L他卡西醇在培养72 h均能显著增加黑素细胞c-kit mRNA的相对表达量（均P < 0.01）。 结论 他卡西醇可促进培养的人表皮黑素细胞增殖及在FN上的黏附、迁移作用,并可上调黑素细胞c-kit mRNA的表达。 【关键词】 他卡西醇; 黑素细胞; 细胞增殖; 细胞运动; 原癌基因蛋白质c-kit     

白介素-10,白介素-17对人表皮黑素细胞生物活性的影响

目的观察不同浓度白介素-10,白介素-17对黑素细胞生物活性的影响。方法建立模拟正常生理状态的黑素细胞体外培养体系,用不同浓度白介素-10,白介素-17作用于黑素细胞后,采用CCK-8法测定白介素-10,白介素-17对黑素细胞增殖活性的影响、L-DOPA法测定对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响、流式细胞仪检测黑素细胞凋亡率。结果 1 50μg/ml IL-10组对黑素细胞的增殖率随着培养时间的延长而升高,当培养48h和72h后与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P0.01)。但随着IL-10浓度的升高,其增殖率随着培养时间的延长反而有下降趋势,200μg/ml IL-10组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);2 IL-17随着培养时间的延长呈剂量依赖性抑制黑素细胞的增殖,50μg/ml IL-17组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);100μg/ml IL-17组和200μg/ml IL-17组培养黑素细胞48h和72h后与空白对照组相比有极显著的统计学差异(P0.01);3在培养48h后,50μg/ml IL-10组黑素细胞酪氨酸酶活性升高,较空白对照组有统计学差异(P0.05)。50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml IL-17组抑制黑素细胞酪氨酸酶的活性,与空白对照组相比有统计学差异(P0.05);4用浓度为100μg/ml的IL-10,IL-17培养黑素细胞,48小时后细胞凋亡率分别为5.2%、32.1%,空白对照组为5.1%。结论 1适当浓度的IL-10可促进黑素细胞的增殖,提高酪氨酸酶的活性;2 IL-17对黑素细胞有损伤作用,但其作用机制还需进一步的试验和探讨。     

甲氧沙林对培养人表皮黑素细胞黑素合成的影响及信号转导的研究

目的：观察甲氧沙林(8-甲氧补骨脂素，8-MOP)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素合成和酪氨酸酶活性的影响，并初步探讨8-MOP诱导表皮黑素细胞分化的信号转导途径。方法：采用4种浓度(10～500μmol／L）的8-MOP作用于体外培养的人表皮黑素细胞，观察不同浓度、不同时间8-MOP对黑素细胞的形态、增殖、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响，并用放射免疫法测定8-MOP对细胞内环磷腺苷酸(cAMP)含量的影响。结果：100μmol／L 8-MOP作用黑素细胞120h能显著促进酪氨酸酶的活性，提高黑素细胞的黑素含量，8-MOP抑制黑素细胞增殖和提高细胞内cAMP的水平呈浓度依赖性。结论：8-MOP在体外能直接刺激表皮黑素细胞的黑素合成，上述变化可能通过cAMP依赖的蛋白激酶(PK)A信号通路发挥作用。     

丹皮酚在体外对人黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的探讨丹皮酚对人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法培养人表皮黑素细胞及人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,475nm比色法测定黑素含量。结果50,100和200μmol/L丹皮酚对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性抑制作用,100及200μmol/L丹皮酚与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论丹皮酚对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。     

甲氧沙林对人毛囊黑素细胞增殖、活化和黑素合成作用的研究

目的 研究甲氧沙林对人毛囊黑素细胞活化、增殖和黑素合成的影响.方法 体外培养正常人毛囊黑素细胞,观察不同浓度甲氧沙林(10～500μmol/L)对毛囊黑素细胞形态、增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响.结果 50μmol/L甲氧沙林处理细胞7d后,毛囊黑素细胞树突明显增多延长,胞浆内出现较多棕褐色颗粒,酪氨酸酶活性和黑素含量增加显着高于对照组(P<0.01).结论 甲氧沙林能诱导毛囊黑素细胞树突增多延长,酪氨酸酶活性和黑素含量增加.     

山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞的作用

目的比较山柰素与熊果苷对体外培养人正常黑素细胞增殖、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响,为探索色素沉着性皮肤病的发病机制以及筛选新的治疗药物提供理论依据。方法以不同浓度(1～100μmol/L)山柰素与熊果苷干预体外培养的人正常黑素细胞,比较两者对黑素细胞的黑素含量、细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响。结果对于黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的抑制作用,山柰素在各个浓度均优于熊果苷,差异有统计学意义(P<0.05),山柰素对细胞增殖抑制率无明显影响,而熊果苷在各浓度对细胞增殖抑制作用显著,且随其浓度增加,抑制率逐渐增强。结论山柰素对黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的抑制作用强于熊果苷,并对黑素细胞的增殖及形态无明显的负面影响,是一种有良好应用前景的酪氨酸酶抑制剂。     

玻璃酸钠对黑素细胞生物学活性的影响

目的 观察玻璃酸钠对黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响。方法 噻唑蓝法和酪氨酸酶活性测定法分别检测不同浓度玻璃酸钠对正常人黑素细胞生长和黑素合成能力的影响。结果 玻璃酸钠质量浓度为0、0.008、0.016、0.313、0.625、1.250、2.500、5.000、7.500、10.000 g/L时,黑素细胞增殖活性（A490）分别为0.14 ± 0.02、0.37 ± 0.08、0.45 ± 0.11、0.49 ± 0.07、0.55 ± 0.12、0.52 ± 0.11、0.49 ± 0.07、0.39 ± 0.05、0.19 ± 0.03、0.01 ± 0.01,玻璃酸钠质量浓度在0. 08 ~ 5 g/L范围内时,对黑素细胞的增殖有明显促进作用,达10 g/L时会抑制黑素细胞的增长。玻璃酸钠质量浓度在0.2 ~ 5 g/L时可明显促进酪氨酸酶活性,到10 g/L时酪氨酸酶活性反而下降。在接种黑素细胞同时加入玻璃酸钠的黑素细胞增殖作用明显快于接种后8 h再加入玻璃酸钠组。结论 玻璃酸钠在浓度0.2 ~ 5 g/L时既能促进黑素细胞的增殖,又能明显提高黑素细胞的酪氨酸酶活性。     

槲皮素对鼠黑素细胞株B10BR细胞的抗氧化保护效应及对其生物学活性的影响

目的 探讨槲皮素保护鼠永生化黑素细胞（B10BR）对抗氧化应激的有效性及其对B10BR细胞生物学活性影响。方法 MTT法测定B10BR细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,倒置显微镜下观察细胞形态改变,并检测槲皮素对酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。结果 经33.33 μmol/L槲皮素预处理24 h后细胞活性增高至（94.22 ± 3.36）%,此外黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素含量可分别增高至（107.15 ± 10.96）%和（111.85 ± 9.49）%,与过氧化氢处理组相比,差异均有统计学意义（P < 0.01）。流式细胞仪检测结果表明,槲皮素可抑制过氧化氢诱导的黑素细胞凋亡。结论 槲皮素抑制过氧化氢诱导黑素细胞凋亡的保护效应为其治疗白癜风提供一定的依据。     

热处理对体外培养正常人黑素细胞活性的影响

目的 探讨热处理对体外培养的正常人黑素细胞的增殖活性、黑素合成及其酪氨酸酶活性的影响。方法 无菌操作获取正常人包皮环切术后的包皮,按照皮肤表皮细胞培养法获取黑素细胞,利用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系,采用Masson-Fontana染色法对培养细胞进行鉴定,确定细胞种系,噻唑蓝（MTT）比色法测定不同温度条件（39、41、42、43、45 ℃）处理对黑素细胞活力的影响并选择最佳的温度条件,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,比色法测定黑素含量,并将实验组与对照组结果进行比较。结果 体外培养的正常人黑素细胞在5个不同的温度条件作用后,以42 ℃作用后的细胞增殖活性最佳。酪氨酸酶活性和黑素含量测定结果显示,42 ℃每天1 h连续干预3 d后,体外培养的正常人黑素细胞的酪氨酸酶活性增长率为36.4%,黑素合成增长率为78%,均明显高于对照组（P值均 < 0.01）。结论 热处理可以增强体外培养的人黑素细胞的增殖活性,促进其黑素合成,并且可提高其酪氨酸酶的活性。     

葛根素促进黑素细胞黑素合成及其机制的初步探讨

目的 探讨葛根素对正常人黑素细胞黑素合成的影响和可能机制。 方法 用噻唑蓝（MTT）法、NaOH裂解法观察葛根素对黑素细胞增殖及黑素合成作用,RT-PCR及Western印迹法检测葛根素对黑素细胞小眼畸形相关转录因子（MITF）、酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TRP-1）基因转录和蛋白表达水平的影响。 结果 1 ~ 40 μmol/L浓度范围内葛根素对体外培养的黑素细胞增殖影响与正常对照组相比,差异无统计学意义（P > 0.05）。与正常对照组相比,40 μmol/L葛根素可显著促进黑素细胞的黑素合成（P < 0.05）,并可显著增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达（P < 0.05）。40 μmol/L葛根素使MITF、TYR、TRP-1的蛋白表达量分别比正常对照组增加8.69%,10.28%和10.58%（P < 0.05）;并使MITF、TYR、TRP-1的mRNA表达量分别比正常对照组增加2.48倍,1.91倍和1.63倍（P < 0.05）。 结论 葛根素能增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达水平,促进黑素合成。     

内皮缩血管肽1和促肾上腺皮质激素对体外培养的正常人黑素细胞增殖的影响

目的 了解内皮缩血管肽1及促肾上腺皮质激素(ACTH)对体外培养的正常人黑素细胞增殖的影响.方法 采用体外黑素细胞培养技术、四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)研究不同浓度内皮缩血管肽1、ACTH对黑素细胞增殖的影响.结果 从0.1~1000nmol/L浓度的内皮缩血管肽1均可不同程度地促进正常人黑素细胞的增殖,低浓度0.1nmol/L内皮缩血管肽1具有很好的促增殖作用.10^-13~10^-9mol/L的ACTH也可不同程度地促进正常人黑素细胞的增殖,与对照组相比,P值均<0.05,其中又以高浓度10^-9mol/LACTH促增殖能力最强,10^-12mol/L、10^-11mol/L、10^-10mol/L 3个浓度间差异无统计学意义.结论 内皮缩血管肽1及ACTH具有促进体外培养的正常人黑素细胞增殖的作用,较低浓度内皮缩血管肽1即具有很好的促增殖作用,正常人生理水平(10^-12~10^-11mol/L)及更高浓度ACTH均有较强的促增殖作用.     

川芎嗪对正常人黑素细胞黑素合成的抑制作用

目的　了解川芎嗪对黑素细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。方法　采用黑素细胞体外纯培养技术 ,在药物处理后的细胞中掺入3H TdR测定细胞增殖情况 ,用氧化DOPA反应测定酪氨酸酶活性 ,NaOH法测量黑素生成量。结果　随着药物浓度增加 ,黑素细胞增殖降低 ,但浓度过高 ( >5 0 0 μg/ml)则显示其毒性作用。细胞酪氨酸酶活性及黑素生成量同药物浓度成反比。结论　川芎嗪在较低的相对安全浓度下 ( 5 0～ 40 0 μg/ml)即可有效抑制黑素细胞增殖 ,降低酪氨酸酶活性 ,从而减少黑素合成。     

FK506对培养的人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨FK506对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法体外人A375黑素瘤细胞培养,MTT法测定FK506对黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH法测定FK506对黑素合成的影响。结果浓度为101~102nmol/L的FK506对黑素瘤细胞增殖无影响,103~104nmol/L的FK506对黑素瘤细胞增殖有抑制作用,但是101~104nmol/L的FK506对黑素瘤细胞的黑素合成均有促进作用,其中以101~103nmol/L的FK506对黑素合成的促进作用最为显著。结论FK506能够直接促进培养的黑素瘤细胞的黑素合成。