人骨钙素检测化学发光法的建立及性能评价

目的 建立一种灵敏的定量检测人骨钙素的方法。方法 采用磁微粒化学发光法定量检测人血清中的骨钙素含量,反应模式为双抗夹心法,生物素化捕获抗体,辣根过氧化物酶标记检测抗体与血清(校准品)及包被有链霉亲合素的磁微粒构成完整的分析系统。并对本方法进行条件优化、性能评估以及相关性分析。结果 建立的人骨钙素磁微粒化学发光法线性范围为0.46～280.25 ng/mL,空白限为0.23 ng/mL,重复性和期间精密度(CV)分别小于8%和10%,回收试验回收率在103%～108%之间;血红蛋白、总胆红素和三酰甘油对骨钙素检测无干扰作用;在120例临床血清样本中,该方法检测骨钙素结果和罗氏电化学发光法结果相关系数(r)为0.992。结论 建立的定量检测人骨钙素的磁微粒化学发光法精密度好、线性范围宽、灵敏度高,达到临床测定的需求。     

血清肌红蛋白光激化学发光免疫测定法的建立

目的采用光激化学发光免疫测定技术（LICI）建立定量检测肌红蛋白（Mb）的方法。方法使用针对Mb不同表位的2株单克隆抗体，一株包被发光微粒，另一株进行生物素化，与包被有链霉亲合素的感光微粒共同构成检测试剂，优化检测条件并评价检测性能。结果该方法的灵敏度为1．36ng／ml，在33．8～1521．0ng／ml的范围内线性良好。批内和日间变异系数分别为3．05％～4．41％和5．80％～6．56％。在血红蛋白浓度〈2．6g／L，总胆红素浓度〈342μmol／L、三酰甘油浓度〈11．3mmol／L时的干扰率无临床意义。与Roche Elecsys电化学发光法有较好的相关性（r=0．9971）。结论血清MbLICI的建立有助于进一步对检测试剂盒的研制。     

血清肌红蛋白光激化学发光免疫测定法的建立

目的采用光激化学发光免疫测定技术(LIC I)建立定量检测肌红蛋白(Mb)的方法。方法使用针对Mb不同表位的2株单克隆抗体,一株包被发光微粒,另一株进行生物素化,与包被有链霉亲合素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果该方法的灵敏度为1.36 ng/m l,在33.8~1 521.0ng/m l的范围内线性良好。批内和日间变异系数分别为3.05%~4.41%和5.80%~6.56%。在血红蛋白浓度<2.6 g/L,总胆红素浓度<342μmol/L、三酰甘油浓度<11.3 mmol/L时的干扰率无临床意义。与Roche E lecsys电化学发光法有较好的相关性(r=0.997 1)。结论血清Mb LIC I的建立有助于进一步对检测试剂盒的研制。     

光激化学发光免疫分析法检测孕妇血清W物质

摘要：目的：建立定量检测孕妇血清W物质的光激化学发光免疫分析（LICIA）法并进行方法学评价。 方法：包被有W物质（T₂S类似物）的感光微粒与兔抗W物质抗体连接,与生物素化羊抗兔IgG及包被有链霉亲合素的发光微粒构成检测体系;对LICIA法反应条件进行探索并进行方法学评价。 结果: LICIA法的检测灵敏度为5 pg/mL,线性范围为5~10 000 pg/mL;批内、批间变异系数（CV）均<10%;回收率为89.2%~108.1%;T₃S＜10 ng/mL、T₄S＜100 ng/mL、Hb＜5.0 g/L、T-Bil＜500 mol/L、TG＜3 mmol/L对LICIA法检测W物质无显著干扰;LICIA法稳定性较好;与放射免疫分析（RIA）法比较,LICIA法检测W物质差异无统计学意义（t=1.012,P＞0.05）。检测孕早期孕妇血清W物质的参考值上限为847 pg/mL。 结论：LICIA法检测W物质灵敏且简便易行,可用于孕妇血清W物质的检测。     

β-人绒毛膜促性腺激素光激化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）浓度的光激化学发光免疫分析方法。方法采用2株针对不同抗原表位的抗β-HCG抗体,其中一株抗体用来包被发光微粒,另一株抗体标记生物素,以双抗体夹心法检测人血清中的β-HCG浓度,并与Beckman-Coulter公司试剂（化学发光法）进行比较。结果发光微粒浓度为100μg/mL、生物素标记抗体浓度为7μg/mL时,检测范围为0~1 000 mIU/mL,灵敏度为0.16 mIU/mL,平均回收率为100.3%,批内变异系数（CV）为0.80%~3.99%,批间CV为2.25%,与TSH、FSH和LH的交叉反应率低,稳定性较好,与化学发光法的符合率好（r=0.99）。结论光激化学发光免疫分析方法测定β-HCG具有较高灵敏度、精密度和准确性,与化学发光法的符合率较好,适用于临床测定。     

髓过氧化物酶双抗体夹心光激化学发光检测法的建立

目的建立一种定量检测血浆中髓过氧化物酶(MPO)浓度的双抗体夹心光激化学发光检测法(LiCA),用于心血管疾病的辅助诊断。方法采用棋盘格滴定法,从针对MPO抗原的12株单克隆抗体(McAb)中筛选出最佳双抗体组合(1株McAb包被发光微粒,另1株McAb进行生物素化),进而探索2种抗体最适反应浓度及MPO LiCA的最适反应条件,评价该法的重复性、敏感性、抗干扰性及回收率,并与经典的CardioMPOTM酶联免疫吸附试验(ELISA)进行平行比较分析。结果筛选到2株最适McAb,并与链霉亲和素包被的感光微粒连接,建立用于MPO定量测定的LiCA。该法敏感性为1.76 ng/mL,批内变异系数(CV)和天间CV分别为2.73%、3.76%,平均回收率为102.5%±8.6%,与CardioMPOTMELISA具有良好的相关性(r=0.961,P<0.01),正常参考范围为13.16～128.79 ng/mL。结论成功建立了一种用于MPO定量检测的LiCA,该法具有高的敏感性和好的稳定性,试剂有效期长,并且操作流程简便,耗时短,在心血管疾病的辅助诊断中具有很好的应用前景。     

化学发光酶免疫分析法定量检测人血清层粘连蛋白

摘要：目的：建立检测人血清层粘连蛋白（LN）的化学发光酶免疫分析法(CEIA)。 方法：用3 μg/mL抗人LN单抗包被微孔板制成固相抗体,辣根过氧化物酶标记抗人LN单抗浓度为1∶2 000,建立检测人血清LN浓度的CEIA法。评价该法的线性范围、灵敏度、稳定性等性能指标;并与ELISA法检测LN进行比对;初步检测100例健康献血员血清LN水平。 结果：该法线性范围为22~1 635 ng/mL,灵敏度为12.2 ng/mL,批内、批间变异系数均＜10%,检测高、中、低值LN血清的回收率分别为00.9%、95.2%和105.0%;试剂在4 ℃和37 ℃条件下至少稳定7 d;健全性良好;与ELISA法检测LN结果差异无统计学意义（t=0.299,P>0.05）;100例健康献血员LN水平为（44.9±16.3） ng/mL。 结论：成功建立定量检测LN的CEIA法,该法性能较好,可用于临床检测。     

心脏型脂肪酸结合蛋白在急性心肌梗死早期诊断中的临床应用价值

目的 探讨心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）在急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）早期诊断中的意义.方法 收集AMI 患者32例,另选择健康体检人员50例作为对照.AMI 患者入院后0～2 h、2～4 h、4～6 h检测血清H-FABP、cTnI、CK-MB,体检人员仅采血检测血清H-FABP.结果 入院后0～2 h、2～4 h、4～6 h,患者血清H-FABP的检测灵敏性、特异性均高于cTnI和CK-MB,差异有统计学意义（P＜0.05）.50例体检人员血清H-FABP平均浓度为（4.81±1.37）ng/mL;入院后0～2 h、2～4 h、4～6 h,患者血清H-FABP的平均浓度分别为（52.78±2.40）ng/mL、（85.49±1.88）ng/mL及（91.21±1.46）ng/mL.结论 将H-FABP检测用于AMI的早期诊断具有较高的临床应用价值.     

液相色谱串联质谱法分析血清中脂溶性维生素的性能评价及临床应用

目的 建立液相色谱串联质谱法定量分析血清中脂溶性维生素的方法,并进行性能分析评价以及初步临床应用。方法 采用液相色谱串联质谱法定量检测血清中脂溶性维生素含量,并检测2022年11月至2023年11月在苏州大学附属第一医院产科门诊产检的1 113例孕妇血清中的脂溶性维生素。参照《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》进行血清中脂溶性维生素高效液相色谱串联质谱检测方法的方法学验证。结果 液相色谱串联质谱法定量检测血清中脂溶性维生素,包括维生素A、维生素E、维生素D2、维生素D3、维生素K1,线性范围分别为40～4 000 ng/mL、0.5～50μg/mL、2～200 ng/mL、5～250 ng/mL、0.1～10 ng/mL,检出限分别为2.50 ng/mL、0.10 ng/mL、0.40 ng/mL、1.00 ng/mL、0.02 ng/mL,定量下限分别为10.00 ng/mL、0.50 ng/mL、1.00 ng/mL、5.00 ng/mL、0.10 ng/mL,批内变异系数(CV)和批间CV均小于15%,回收率分别为91.25%～107.18%、90.00%～105.51%...     

尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白化学发光检测方法的建立及性能评价

目的建立定量检测尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的化学发光法并评价。方法以辣根过氧化物酶标记NGAL单抗、磁微粒包被NGAL单抗,基于化学发光平台,采用双抗体夹心法模式,建立尿液NGAL定量检测方法,并评价空白限、线性范围、精密度、干扰、回收率和方法学等指标。结果空白限为0.1 ng/mL,线性范围为10～1 500 ng/mL,分析内和分析间精密度(CV)均小于8%,血红蛋白100 mg/dL、三酰甘油3 000 mg/dL、胆红素50 mg/dL、抗坏血酸10 mg/dL、肌酐1 000 mg/dL、尿素12.5 g/dL干扰率小于10%;回收率为90.9%～103.1%;第95位百分位数法确定本方法参考区间为0～111.08 ng/mL;与Abbott NGAL检测试剂进行方法学对比,相关系数(r)为0.990 5,总符合率为96.1%。结论本研究建立的尿液NGAL定量检测方法性能良好,具有一定的临床应用价值。     

人可溶性补体受体1型双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

摘要：目的：建立定量检测人血清可溶性补体受体1型（sCR1）双抗体ELISA夹心法。 方法：用鼠抗人CD35单克隆抗体(mAb)包被反应板,以兔抗人sCR1抗体（PcAb）为夹心抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG为检测抗体,纯化后的人sCR1蛋白为标准品,建立定量检测人血清sCR1双抗体夹心ELISA法,并检测50例体检健康者和32例肝硬化患者血清样本中sCR1水平。 结果：建立的双抗体夹心ELISA法检测人血清sCR1的线性范围为15.6～250 ng/mL。低、高浓度批内变异系数（CV）分别为9.3％、7.1％;批间CV分别为11.2％和9.82％;回收率分别为89.5％和92.5％。50例健康人和32例肝硬化患者血清sCR1水平分别为（33.82±5.88） ng/mL和（152.99±9.51） ng/mL,两者比较有统计学差异（t=70.18, P＜0.001）。 结论：成功建立了检测人血清sCR1的双抗体夹心ELISA法,重复性和准确性较好。初步发现肝硬化患者血清sCR1水平显著升高。     

金标法检测肌钙蛋白-Ⅰ在门诊、急诊诊断急性心肌梗死中的应用

目的探讨金标法测定肌钙蛋白I（cTnI）对门诊、急诊急性心肌梗死（AMI）患者的诊断价值。方法对临床确诊患者75例,门诊急诊有相应临床症状而未确诊25例患者,用金标法测定患者血清中cTnI,严格按试剂说明书判断定性和半定量结果。结果检测的25例临床确诊患者中,阳性22例,占88%（半定量结果为：0.2～4.0 ng/ml）,阴性3例,占12%（半定量结果〈0.2 ng/ml）。检测的75例门诊有相应临床症状而未确诊患者中,cTnI阳性13例临床确诊均为AMI,占17.3%（半定量结果为：0.5～4.0 ng/ml）;阴性62例,最后经临床确诊均为非AMI,占82.7%（半定量结果〈0.2 ng/ml）。结论金标法测定肌钙蛋白I对急性心肌梗死的诊断具有更高的灵敏度和特异性,特别是对门、急诊,具有相应临床症状的患者,是一种较好的快速筛查手段。     

新型肝损伤血清标志物Pep5定量检测方法的建立及临床应用

目的建立定量检测血清多肽Pep5的酶联免疫吸附方法(ELISA),用于判定肝损伤进程的研究。方法以待测血清样本稀释液包被酶联板,5%脱脂奶粉封闭,辣根过氧化物酶标记的抗Pep5单克隆抗体作为标记抗体,建立定量检测人血清多肽Pep5的ELISA,并用于临床检测690例肝损伤及健康血清样本。结果灵敏度为1.25ng/mL;线性范围(0～24ng/mL)内相关系数为0.998 7;与乙酰胆碱酯酶、层黏连蛋白、透明质酸、三型前胶原交叉反应率小于1.00%;添加回收率在99.09%～107.08%;批内、批间变异系数(CV)分别为5.62%～7.32%、6.21%～6.45%。与其他肝损伤指标乙酰胆碱酯酶试剂盒进行对比试验,表明两种检测方法有一定的相关性(r=0.68)。临床检测结果表明血清多肽Pep5水平随着肝损伤程度加重而升高,与正常血清差异有统计学意义(P0.01)。结论多肽Pep5可用于肝损伤进程定量血清学检测,检测方法简便、可靠,为后续深入研究多肽Pep5的功能及相关诊断试剂盒的研制和开发提供了科学依据。     

心型脂肪酸结合蛋白在急性心肌梗死患者早期诊断中的应用价值

目的: 探讨血清心型脂肪酸结合蛋白（heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP）在急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）早期诊断中的应用价值。方法: 应用乳胶凝集法检测105例因胸痛疑似AMI就诊患者的血清H-FABP,同时测定患者血清中肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase isoenzyme MB,CK-MB）、肌红蛋白（myoglobin, MYO）和心肌钙蛋白I（cardiac troponinc I,cTnI）。根据最终的临床诊断将患者分为AMI组和非AMI组（对照组）,并对2组检测结果的阳性率、诊断效率等进行分析比较。结果: 105例疑似AMI患者中,最终诊断为AMI患者45例,其余60例排除AMI诊断作为对照组。AMI组的H-FABP、cTnI、MYO、CK-MB平均水平及阳性率分别为（49.32±10.29） ng/mL、84.4%,（1.62±0.76） ng/mL、44.4%,（156.14±54.23） ng/mL、82.2%,（13.01±6.08） ng/mL、42.2%,均高于对照组（P<0.05）;AMI组中H-FABP阳性率与MYO阳性率间无统计学差异（P>0.05）,但明显高于cTnI及CK-MB的阳性率（P<0.05）。H-FABP与CK-MB诊断AMI的特异度相似（P>0.05）,但低于cTnI（P<0.05）,高于MYO（P<0.05）。H-FABP与cTnI的阳性预测值相似（P>0.05）,均高于MYO、CK-MB（P<0.05）。在阴性预测值方面,H-FABP与MYO相似（P>0.05）,明显高于cTnI和CK-MB（P<0.05）。4项指标检测结果进行组合分析,H-FABP+ cTnI、H-FABP+ CK-MB、H-FABP+ MYO、H-FABP+ cTnI+MYO、H-FABP+ cTnI+CK-MB、H-FABP+ cTnI+MYO+CK-MB诊断AMI的灵敏度均为100.0%,特异度分别为82.0%、72.0%、61.2%、59.3%、68.1%和56.5%。结论: H-FABP在AMI早期诊断中具有较好的灵敏度和特异度,与cTnI联合检测,可显著提高AMI早期诊断效能。     

定量检测抗甲状腺球蛋白抗体的磁微粒吖啶酯化学发光免疫检测方法的建立与初步应用

目的 制备一种定量检测血清中抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)的磁微粒吖啶酯化学发光免疫检测试剂盒,并评价该试剂盒的检测性能。方法 分别制备鼠抗IgG抗体-吖啶酯发光试剂和人甲状腺球蛋白抗原-磁微粒偶联物,优化并建立定量检测TgAb水平的磁微粒吖啶酯化学发光免疫检测方法,组装成试剂盒后进行检测性能评估。结果 该试剂盒对血清TgAb检测灵敏度为0.8 IU/mL,线性范围在5～2 000 IU/mL;与血清中潜在交叉反应物均无明显交叉反应;高、中、低浓度的抗人TgAb国家标准品在批内、批间相对偏差为1.15%～6.70%;批内、批间变异系数为1.50%～3.84%;与临床用试剂盒检测比对相关系数为0.968 0。健康人群的参考区间初步判定为≤111.65 IU/mL。结论 磁微粒吖啶酯化学发光免疫检测试剂盒可用于临床血清中TgAb水平的准确、特异性检测,为甲状腺异常的快速诊断提供了一种新的实验室检查手段。     

联合检测血清 D-二聚体、cTnI 及 Myo 在急性心肌梗死中的诊断价值

目的：联合检测血清 D-二聚体、肌钙蛋白 I（cTnI）及肌红蛋白（Myo）在急性心肌梗死（AMI）中的诊断意义。方法将 AMI 患者130例作为观察组,120例健康人作为对照组,采用日立7602生化仪检测其血清 D-二聚体水平,cTnI、Myo 水平均采用化学发光法进行检测,采用 SPSS17．0统计软件进行数据分析。结果 AMI 发病2 h 后血清 D-二聚体、cTnI 及 Myo 浓度分别为（1．71±0．14）mg/L、（1．18±0．28）ng/mL、（90．53±2．36）ng/mL,对照组 D-二聚体、cTnI 及 Myo 浓度分别为（0．25±0．12） mg/L、（0．10±0．02）ng/mL、（23．61±4．15）ng/mL,AMI 组 D-二聚体、cTnI 及 Myo 水平明显均高于对照组,两组比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。联合检测血清 D-二聚体、cTnI 及 Myo 水平,对 AMI 诊断的灵敏度和特异性分别高达94．65％和98．51％。结论联合检测血清 D-二聚体、TnI 及 Myo 对 AMI 的诊断和治疗具有重要意义。     

乳腺癌患者血清HER-2/neu 蛋白化学发光免疫定量分析方法的建立

目的建立吖啶酯化学发光免疫分析定量检测乳腺癌患者血清HER-2/neu蛋白的方法。方法用吖啶酯和生物素分别标记2株不同的HER-2/neu蛋白单克隆抗体,并用链霉亲合素包被微粒,通过链霉亲合素-生物素系统分离固相和液相,采用双抗体夹心法对建立方法的性能指标进行鉴定评估。结果建立的方法线性范围5~300 ng/m L,最低检测限为0.58ng/m L,批内变异系数≤3.0%,总变异系数≤8.8%,与西门子公司HER-2/neu蛋白测定试剂盒(化学发光法)的检测结果比对,相关系数(r)=0.991 9,总符合率98.9%。结论建立的方法能够满足乳腺癌的临床诊疗要求,值得在临床推广应用。     

肌钙蛋白I在心脏瓣膜病患者术前与术后浓度变化及其临床意义

目的 探讨血清肌钙蛋白I (cTnI)在心脏瓣膜病患者术前、后浓度变化及其对判定心肌损伤程度和预后的临床意义.方法 通过对近2年来心胸外科76例心脏瓣膜病患者(合并冠心病者除外)手术前(入院时及术前1 d)与术后(心脏复跳后2 h、复跳后12 h、术后第7天)血清cTnI的浓度测定,分析其心肌损伤程度、修复及预后.cTnI >0.5 ng/mL为阳性.结果 76例心脏瓣膜病患者中,82.89%的患者入院时血清cTnI>0.5 ng/mL,其中76.32%的患者血清cTnI≥5 ng/mL;78.95%的患者术前1 d血清cTnI>0.5 ng/mL,其中60.53%的患者血清cTnI≥5 ng/mL;所有患者心脏复跳后2 h其血清cTnI≥5 ng/mL;96.05%的患者心脏复跳后12 h血清cTnI>0.5 ng/mL,其中85.53%的患者血清cTnI浓度高于正常高值10倍;74例患者中(有2例因低心排血量综合征死于术后24 h),90.54%的患者术后第7天血清cTnI>0.5 ng/mL,其中79.73%的患者血清cTnI≥5 ng/mL.结论 cTnI是高度特异、高度灵敏的反映心肌细胞损伤和坏死的标志物,其存在着长时间的诊断窗口,为临床判断患者心肌细胞损伤的修复提供可靠依据.     

牛奶过敏单组分特异性IgG4抗体光激化学发光定量检测方法的建立和评价

目的建立并评价基于光激化学发光分析(LICA)平台的牛奶过敏单组分(Bos d 5)特异性IgG_4抗体(sIgG_4)定量检测方法(sIgG_4-LICA)。方法以生物素标记的Bos d 5抗原、待检血清、抗人IgG_4抗体包被的发光微球和链霉亲合素包被的感光微球组成分析体系,基于LICA平台,采用间接法模式,建立Bos d 5 sIgG_4抗体定量检测方法(sIgG_4-LICA),并对其进行条件优化和性能评价。结果 sIgG_4-LICA方法的批内精密度、日间精密度和批间精密度分别为1.78%～3.13%、6.65%～8.41%和7.94%～12.30%,功能灵敏度为4.71 ng/mL,线性范围为28.13～1 800 ng/mL,线性回归方程为Y=0.98X-1.31(r~2=0.997),最大稀释度为1∶64,血红蛋白、三酰甘油、总胆红素、抗坏血酸及生物素的干扰率为-6.38%～8.60%。结论本研究建立的Bos d 5 sIgG_4抗体定量检测方法性能良好,可满足临床监测sIgG_4抗体的需要。     

人血清层粘连蛋白直接化学发光免疫分析法的建立及评价

目的建立检测人血清层粘连蛋白(LN)的直接化学发光免疫分析法(CLIA),并对检测性能进行方法学评价。方法采用包被有抗人LN单抗的微米级磁珠和吖啶酯标记抗人LN单抗分别作为固相试剂和发光试剂,建立并优化定量检测人血清LN水平的CLIA法,评价该方法的线性范围、灵敏度、精密度和特异性等性能指标,并与市场上同方法学的LN检测试剂盒进行相关性比对分析。结果该方法线性范围为5.00~1 000.00ng/mL,检测灵敏度小于5.00ng/mL,血清平均回收率为97.60%,批内变异系数(CV)小于5.00%,批间CV小于8.00%,特异性、稳定性良好,与市场上同方法学的LN检测试剂盒具有较好相关性。结论建立的人血清LN直接化学发光免疫分析法能够满足临床检测需求。