新生牛肝细胞生长因子的活性研究：Ⅰ.新生牛肝细胞生长因…

以原代培养的人胎肝细胞、大鼠肝细胞等靶细胞，研究了不同纯化阶段的新生牛肝细胞生长因子对靶细胞ＤＮＡ合成活性的影响。结果表明ｃＨＧＦ对体外培养的人胎肝细胞、大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成有明显的促进作用，对大鼠肾细胞、人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的ＤＮＡ合成亦有一定的促进作用，对Ｓ１８０小鼠腹水癌细胞的ＤＮＡ合成无促进作用。     

人肝细胞生长因子在CHO细胞的表达和生物学活性

将人肝细胞生长因子（ＨＧＦ）ｃＤＮＡ（２．２ｋｂ）经ＤＮＡ连接酶插入到ｐＥＥ１４质粒的多克隆位点上，构建了ｐＥＥ１４／人ＨＧＦ（１１．４５ｋｂ）真核细胞表达质粒。用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将ｐＥＥ１４／ＨＧＦ质粒转导至ＣＨＯ细胞表达，表达ｐＥＥ１４／人ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞的培养上清液能促进原代培养大鼠细胞的ＤＮＡ合成，ＣＨＯ细胞表达和合成的人ＨＧＦ的水平高于２９３和ＮＳＯ细胞。     

人肝细胞生长因子在CHO细胞的表达和生物学活性

将人肝细胞生长因子（ＨＧＦ）ｃＤＮＡ（２．２ｋｂ）经ＤＮＡ连接酶插入到ｐＥＥ１４质粒的多克隆位点上，构建了ＰＥＥ１４／人ＨＧＦ（１１．４５ｋｂ）真核细胞表达质粒。用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将ｐＥＥ１４／ＨＧＦ质粒转导至ＣＨＯ细胞表达，表达ＰＥＥ１４人／人ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞的培养液能促进原代培养大鼠细胞的ＤＮＡ合成。ＣＨＯ细胞表达和合成的人ＨＧＦ的水平高于２９３和ＮＳＯ细胞。     

新生牛肝细胞生长因子的活性研究──Ⅱ．新生牛肝细胞生长因子对大鼠急性肝损伤的保护作用

研究了新生牛肝细胞生长因子（ｃＨＧＦ）对ＣＣｌ４引起的大鼠急性肝损伤的保护作用。结果表明，ｃＨＧＦ可降低ＣＣｌ４引起的急性肝衰竭大鼠的死亡率，抑制血清谷丙转氨酶（ＧＰＴ）和胆红素（Ｂｉｌ）的升高。从肝组织切片观察到ｃＨＧＦ可明显减轻ＣＣｌ＿４引起的肝细胞结构的损伤，证实ＨＧＦ是一种有效的保肝活性因子。     

人肝细胞生长因子在CHO细胞中的表达

以ｐＲＣ／ＣＭＶ作为真核细胞表达性载体，用限制性内切酶ＢａｍＨＩ／ＸｂａⅠ将ＨＧＦｃＤＮＡ全序列定向重组到ｐＲＣ／ＣＭＶ的多克隆位点上。筛选得到的重组质粒以磷酸钙ＤＮＡ共沉淀的方法转染ＣＨＯ细胞，经８００ｍｇ／Ｌ的Ｇ４１８筛选，获得阳性细胞克隆。用ＨＣＣ－７９０２细胞及原代培养的成年大鼠肝细胞对转染阳性细胞培养基收集上清进行活性测定。３Ｈ－ＴｄＲ掺入等分析证明，它能有效地抑制体外培养的人肝癌细胞的生长，并可明显刺激鼠肝细胞ＤＮＡ的合成。结果表明，重组人ＨＧＦ基因在ＣＨＯ细胞中成功地获得表达，为基因工程大量制备和纯化ＨＧＦ奠定了基础     

新生小牛肝的肝细胞生长因子的提取和纯化

新生小牛肝经组织匀浆、加热和离心制得粗制的肝细胞生长因子（ＨＧＦ），然后经过超滤、ＤＥＡＥ－ＤＥ５２纤维层析、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２凝胶过滤，ＭｏｎｏＱ离子交换层析和高效液相色谱进行分离提纯，用＾３Ｈ－标记的胸腺嘧啶核苷的掺入法在人肝瘤ＳＭＭＣ－７２２１细胞株上检测提纯的新生小牛肝细胞生长因子的生物学活性，得到一分子量为（１２－１４）×１０＾３的有促进肝细胞有丝分裂的有效成分。显面易见此ＨＧＦ的分子     

重组人肝细胞生长因子的纯化及鉴定

目的对重组人肝细胞生长因子（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｏｒ, ｒｈＨＧＦ）进行初步纯化及鉴定。方法 培养上清液经过离心、超滤,在ＦＰＬＣ系统上经肝素亲和层析分离纯化,用ＥＬＩＳＡ法检测、收集ｒｈＨＧＦ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电 泳鉴定纯度和相对分子质量,大鼠原代肝细胞培养法检测ｒｈＨＧＦ的生物学活性。结果ｒｈＨＧＦ主要在０．９～１．３ ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ 范围内被洗脱,由约６２ ０００和３４ ０００两个亚基组成,明显促进大鼠肝细胞ＤＮＡ合成。结论　经肝素亲和层析分离,从 表达山ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞培养上清液中纯化出有活性的ｒｈＨＧＦ。     

几种生长因子在人表皮细胞无血清培养中的作用

采用无血清培养系统，以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定表皮生长因子（ＥＧＦ）、牛垂体提取物（ＢＰＥ）和乙醇胺（Ｅｔｈａ）对人表皮细胞ＤＮＡ合成的影响。结果显示，ＥＧＦ和ＢＰＥ在本实验所建立的无血清培养基中对培养表皮细胞ＤＮＡ合成有明显的促进作用（Ｐ＜０．０１）；Ｅｔｈａ对培养表皮细胞ＤＮＡ合成也有促进作用（Ｐ＜０．０５），ＥＧＦ和Ｅｔｈａ在本培养体系中具有协同作用（Ｐ＜０．０５）。讨论了生长因子的作用机理及在烧伤创面的应用前景     

柴胡皂甙对FSC激活及合成细胞外基质的实验研究

观察柴胡有效成分柴胡皂甙对原代培养贮脂细胞（ＦＳＣ）激活及合成细胞外基质（ＥＣＭ）的作用。结果：治疗组库普弗细胞条件培养基（ＴＫＣｎｃｍ）、治疗ＣＣｌ４损伤库普弗细胞条件培养基（ＴＫＣｔｃｍ）、ＴＫＣｎｃｍ加肝细胞条件培养基（ＰＣｎｃｍ）组ＦＳＣ内结蛋白阳性反应明显减弱,对细胞表型转化的形态学特征有一定改善,各治疗组ＦＳＣ的ＤＮＡ合成及３Ｈ－脯氨酸掺入量均呈不同程度降低,ＦＳＣ内Ⅰ型胶原含量明显减少。说明柴胡皂甙对肝细胞具有保护作用,直接抑制ＦＳＣ内ＤＮＡ的合成,还可抑制ＦＳＣ的激活,从而抑制ＦＳＣ合成ＥＣＭ的能力。     

牛肝细胞再生刺激因子的制备及其生物学特性

从新生牛肝脏提取肝细胞再生刺激因子（ｃＨＳＳ），并对其理化及生物学特性进行研究。ｃＨＳＳ对原代大鼠肝细胞具有刺激活性，使ＤＮＡ合成明显增加，其活性经９５℃加热１５分钟无明显下降，但对蛋白酶敏感。动物试验结果表明，ｃＨＳＳ能显著降低Ｄ－ＧＡＬ致肝损伤大鼠血清ＡＬＴ水平，对损伤肝细胞具有保护及修复作用，能明显提高ＣＣＬ４致急性肝功能衰竭小鼠的生存率。     

Ⅱ.新生牛肝细胞生长因子对大鼠急性肝损伤的保护作用

研究了新生牛肝细胞生长因子对ＣＣｌ４引起的大鼠急性肝损伤的保护作用。结果表明，ｃＨＧＦ可降低ＣＣｌ４引起的急性肝衰竭大鼠的死亡率，抑制血清谷丙转氨酶和胆红素的升高。从肝组织切片观察到ＣＨＧＦ可明显减轻ＣＣｌ４引起的肝细胞结构的损伤，证实ＨＧＦ是一种有效的保肝活性因子。     

汉防己甲素对血小板衍生生长因子促细胞增殖效应的阻断作用

目的研究血小板衍生生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）对人成纤维细胞（ＨＬＦ）、大鼠肝贮脂细胞（Ｉｔｏ细胞）增殖活性和胶原合成的影响及汉防己甲素（Ｔｅｔ）对ＰＤＧＦ促细胞增殖效应的阻断作用。方法采用胶原酶灌流、密度梯度离心方法分离大鼠肝Ｉｔｏ细胞，并以Ｈ－ＴｄＲ、Ｈ－Ｌ－脯氨酸掺入法观察细胞增殖效应。结果在１％血清存在下，ＰＤＧＦ对ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞具有显著的促进ＤＮＡ合成和细胞增殖的作用，并随ＰＤＧＦ浓度的升高而作用增强；对无血清培养的ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞并无明显的促进增殖作用，但与胰岛素样生长因子（ＩＧＦ）等联合应用时，则可促进细胞的增殖，并证实ＰＤＧＦ具有促进ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞胶原合成的作用。Ｔｅｔ在不抑制细胞ＤＮＡ合成的剂量范围内，即可拮抗ＰＤＧＦ的促细胞增殖及胶原合成作用。结论ＰＤＧＦ对肝纤维化相关细胞ＨＬＦ、Ｉｔｏ细胞增殖活性及胶原合成具有促进作用，Ｔｅｔ对ＰＤＧＦ促细胞增殖效应具有阻断作用。     

pcDNA3-hbFGF转染角朊细胞对真皮成纤维细胞增殖的生物学效应

目的：观察含外源性人碱性成纤维细胞生长因子（ｈｂＦＧＦ）基因的角朊细胞（ＨＫ）,对真皮成纤维细胞（ＨＤＦｉｂ）增殖的影响;探讨转ｈｂＦＧＦ基因ＨＫ对创面愈合的生物学效应及作用机理,为这种转基因ＨＫ细胞用于创面基因治疗的可行性提供实验依据。方法：收集含真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈｂＦＧＦ的ＨＫ细胞培养上清,加入培养的ＨＤＦｉｂ细胞内;ＭＴＴ法测定细胞的增殖率、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定细胞ＤＮＡ合成率     

低氧对体外培养的肺血管周细胞免疫表型的影响

用细胞培养,免疫细胞化学染色、图像分析及流式细胞术观察低氧和猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＦＣＣＭ）对体外培养的新生大鼠肺血管周细胞（ＰＣ）α－ＳＭ－ａｃｔｉｎ,ＣＤ３４、Ｓ－１００和ＰＣＮＡ的表达及细胞周期的影响。结果发现,低氧和ＨＥＣＣＭ可促进ＰＣ表达α－ＳＭ－ａｃｔｉｎ和ＰＣＮＡ,而抑制ＣＤ３４和Ｓ－１００的合成,促进ＰＣ由静止期（Ｇ０／Ｇ１）进入ＤＮＡ合成期（Ｓ期）及有丝分裂期（Ｇ２＋     

新生牛促肝细胞生长因子的理化性质及生物学特性

目的：确证新生牛促肝细胞生长因子（ Ｈ Ｇ Ｆ）的理化性质及生物学特性。方法：采用高效液相 色谱法（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ）、 Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ）、紫外扫描、同位素３ Ｈ 胸苷掺入法（３ Ｈ Ｔｄ Ｒ）测定 Ｈ Ｇ Ｆ的理化性质及生物学特性。结果： Ｈ Ｇ Ｆ主要为小分子肽，具有刺激损伤肝细胞 Ｄ Ｎ Ａ 合成，促进肝细胞再生的功能。结论： Ｈ Ｇ Ｆ 具有良好的肝脏保护与治疗作用。     

人胎肝内两种不同的促细胞分裂因子

成熟的肝脏是代谢极旺盛的器官，但其肝细胞则处于静息期（Ｇｏ期），即细胞几乎不发生分裂增殖，然而，人胎肝正处于旺盛生长状态，其肝细胞能合成ＤＮＡ和进行有丝分裂，并迅速增殖或再生，与肝生长调控有关的因子很多，目前研究较清楚，在肝细胞分裂增殖中起主要作用的有两种因子，即肝刺激因子（ＨＳＳ）和肝细胞生长因子（ＨＧＦ）。我们认为人胎肝内同时存在这两种因子，且为两种不同的促细胞分裂剂。     

昆虫细胞表达重组人胰岛素样生长因子1的研究

目的 利用杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ载体在昆虫细胞中表达重组人胰岛素样生长因子１（ｒｈＩＧＦ－１）。方法 含有胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）ｅＤＮＡ的重组ＡｃＭＮＰＶ感染昆虫细胞株Ｓｆ不及Ｓｆ２１后,采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测被重组病毒感染的昆虫细胞表达产生的ｒｈＩＧＦ－１,以野生型ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细胞及空白细胞的细胞培养液、细胞裂解物作对照。结果 （１）重组ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细     

肝细胞生长刺激因子生物学活性研究

应用人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞系和大鼠 肝原代培养细胞，利用［＾３Ｈ］ＴｄＲ掺入的方法观察从人胎肝中提取的肝细胞生长刺激物质对肝源性细胞ＤＮＡ合成的影响。     

肝细胞生长因子/离散因子与前列腺癌的关系

肝细胞生长因子 离散因子 (ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃ ｔｏｒ/ｓｃａｔｔｅｒｆａｃｔｏｒ,ＨＧＦ/ＳＦ)是一种基质细胞源性生长因子 ,能刺激原代培养的前列腺细胞生长。ＨＧＦ ＳＦ受体 :Ｃ ＭＥＴ属于酪氨酸激酶蛋白 (ＰＴＫ)家族 ,在上皮细胞中表达丰富。近年来Ｃ ＭＥＴ -ＨＧＦ/ＳＦ过度表达被认为与前列腺癌的转移、侵袭相关。1　肝细胞生长因子 离散因子及其受体肝细胞生长因子 离散因子最早是在行肝大部切除术或患急性肝衰竭的病人血清中发现的。其作用不同于已知的多肽促有丝分裂剂 ,是一种新的、有效的生长因子[1 …     

肝炎等三种肝病中癌基因c－myc、c－erbB－2和胰岛素样生成因子Ⅱ及表皮生长因子受体的表达

对慢性肝炎、亚急性重症肝炎、肝硬变及肝细胞肝癌共３７９例标本，进行了癌基因ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２和胰岛素样生成因子Ⅱ（ＩＧＦⅡ）及表皮生成因子（ＥＧＴ）受体的测定。结果，ＥＧＦ受体主要定位于良、恶性肝组织中的血窦内皮细胞，可能不参与肝癌发生；ｃ－ｍｙｃ表达选择性不强，也见于２１％结构正常肝中，可能与成熟肝细胞的增殖有关；ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性率最高，广泛分布于肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及小管状化生（ＤＭ）之肝细胞及癌细胞，提示ｃ－ｅｒｂＢ－２不仅参与肝癌发生，可能还与肝细胞ＤＭ有关；ＩＧＦⅡ表达仅见于慢性肝脏病变，在细胞类型上有严格的选择性，集中于癌细胞、ＳＰＬＣ和ＳＣＤ肝细胞，提示ＩＧＦⅡ基因的活化及高表达与ＳＰＬＣ明显增生及ＳＣＤ有关，是肝癌发生过程中的关键环节。还观察到ＳＰＬＣ和ＳＣＤ肝细胞中ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达与乙型肝炎病毒Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）密切相关，提示ＨＢＶＸ基因表达可能与这两种肝癌相关基因活化有关。