组织工程软骨修复兔半月板损伤

背景半月板游离缘为无血运区,损伤不易自然愈合,需要在一定的条件促进下产生纤维组织愈合.目的采用组织工程软骨与纤维蛋白黏合剂治疗半月板无血运区的损伤,并进行的效果比较.设计随机分组,空白对照实验.单位深圳市第二人民医院动物实验室.对象①选择生后3～5 d青紫兰兔10只用于纤维软骨细胞的提取.②选择健康成年青紫兰兔36只,随机分为3组,空白对照组、纤维蛋白黏合剂治疗组和组织工程软骨组,每组12只.方法实验于2003-09/2004-03深圳市第二人民医院动物实验室完成.将10只生后3～5 d幼兔处死后提取纤维软骨细胞进行培养,制成软骨细胞含量约为12×108 L-1的组织工程软骨.将36只成年兔造成半月板(0.7×0 3)cm全层裂伤的无血运区损伤模型.空白对照组裂伤不用任何填塞处理,纤维蛋白黏合剂治疗组用纤维蛋白黏合剂注入裂口,组织工程软骨组用组织工程软骨注入裂口.3组动物分别于术后2,6,12周各处死4只,每次每组取8个半月板,行大体形态观察和组织学检查.主要观察指标兔半月板损伤模型标本大体形态观察和组织学检查.结果36只兔均进入结果分析.①兔半月板损伤模型标本大体观察结果空白对照组半月板损伤裂口均未愈合,未见组织填充;纤维蛋白黏合剂组及组织工程软骨组的全部半月板伤口均已被组织填充.②兔半月板损伤模型标本组织学检查结果空白对照组术后2～12周裂口边缘无软骨细胞增殖;纤维蛋白黏合剂组术后12周,缺损边缘有较多的成纤维细胞样细胞,与邻近组织连接较紧密,形成瘢痕组织愈合;组织工程软骨组术后12周,缺损处可见软骨陷窝及软骨囊,软骨细胞成团状.结论组织工程软骨在受体内可成活,可形成纤维软骨样愈合,形成软骨细胞特有的生物学标志,但修复的组织与邻近正常半月板组织及正常软骨的胶原排列有明显差异.     

多孔型丝素蛋白/羟基磷灰石复合骨髓间充质干细胞修复兔半月板无血运区软骨损伤

背景:随着组织工程的兴起,半月板无血运区损伤的修复可能性显著地提高,但单一的支架材料均不能符合理想支架的要求,有一定的局限性。目的:观察丝素蛋白/羟基磷灰石复合骨髓间充质干细胞修复兔半月板无血运区软骨损伤的效果。方法:体外分离培养兔骨髓间充质干细胞,并定向诱导成纤维软骨细胞,与丝素蛋白/羟基磷灰石复合培养。42只构建半月板无血运区软骨损伤模型成功的大白兔随机抽签法均分为3组,复合材料组植入骨髓间充质干细胞-丝素蛋白/羟基磷灰石复合物;单纯材料组植入丝素蛋白/羟基磷灰石;对照组不行任何干预。结果与结论:复合材料组大体观察损伤被修复组织填充,8~12周效果逐渐改善,与正常半月板组织相似,优于其他两组;组织学检查显示8周时出现软骨囊和排列紊乱的胶原纤维,12周时完全修复了半月板损伤区,表现为纤维软骨样组织愈合;单纯材料组部分修复了半月板损伤区,呈瘢痕愈合,对照组未见软骨修复。MRI检查显示复合材料组修复效果较好;说明丝素蛋白/羟基磷灰石复合骨髓间充质干细胞可有效地修复半月板无血运区缺损。丝素蛋白/羟基磷灰石材料作为半月板软骨组织工程支架材料的良好生物相容性。     

医用EC耳脑胶粘合修复半月板裂伤

目的：建立半月板裂伤动物模型，采用EC耳脑胶粘合裂伤的半月板，观察半月板裂伤的愈合情况，探讨EC耳脑胶在半月板裂伤治疗上的可行性。方法：实验于2004-01／07在锦州市中心医院动物实验中心及病理科、锦州医学院电镜室完成。健康成年新西兰兔20只，同体对照设计，将每只兔两侧膝关节外侧半月板制造裂伤，右膝外侧半月板为实验组，左膝外侧半月板为对照组，实验组用EC耳脑胶粘合裂伤，对照组裂伤不作任何处理。术后3，6，12，24周分批随机抽取动物5只，麻醉状态下处死，对裂伤半月板进行肉眼观察，光镜和电镜组织学观察。结果：①两组兔半月板肉眼观察：实验组3，6，12，24周各期半月板均无变形、变性。24周时修复组织与正常半月板组织相似，裂伤愈合。对照组3，6，12，24周各期半月板形态无明显变化。各期肉眼所见半月板裂伤仍有哆开。②两组兔半月板光镜组织学观察结果：实验组3周时镜下半月板裂伤粘合处修复组织主要为肉芽组织。6周时镜下半月板裂隙已被纤维结蒂组织及纤维软骨组织连接。24周时镜下半月板裂伤断端已被成熟的纤维软骨组织连结，愈合良好。对照组3，6，12，24周各期半月板裂伤光镜下均未见完全愈合，裂口分离。③两组兔半月板电镜组织学观察结果：同期电镜下观察也有同样结果。实验组3周时镜下半月板裂伤粘合处可见多种细胞成份，其中纤维软骨细胞少，胞核有变性。24周时镜下半月板裂伤处纤维软骨组织紧密连结。排列整齐、粗大的胶原纤维通过断端，裂伤缘消失。对照组3，6，12，24周各期半月板裂伤均未见完全愈合。两组兔24周时半月板裂伤愈合情况比较，差别有显著性意义（P〈0．01）。结论：用EC耳脑胶粘合兔半月板的裂伤可使之愈合。此结果为临床半月板裂伤修复提供一基础研究依据。     

重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原复合材料修复兔半月板无血运区软骨损伤

背景：单独应用重组碱性成纤维细胞生长因子对无血运区半月板损伤的愈合无明显影响,考虑主要与其在体内易被吸收和降解等有关。近年来Ⅰ型胶原作为生物性载体的应用逐渐增多。目的：观察重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原复合材料修复兔半月板软骨损伤的效果。方法：选用健康新西兰大白兔36只,首先在兔半月板上造成统一的无血运区损伤模型。随机分为空白对照组、重组碱性成纤维细胞生长因子组和重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原组。术后2,6,12周分批处死实验动物,进行大体形态观察和组织学检查。结果与结论：重组碱性成纤维细胞生长因子组对无血运区损伤愈合无明显影响,但对半月板边缘滑膜中成纤维细胞有明显的促增殖作用;重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原组表现为纤维软骨样组织愈合,但其愈合组织与正常半月板组织仍有差异。结果表明应用重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原复合型材料治疗半月板无血运区的损伤是一种有效的治疗方法。     

重组碱性成纤维细胞生长因子/I型胶原复合材料修复兔半月板无血运区软骨损伤

背景:单独应用重组碱性成纤维细胞生长因子对无血运区半月板损伤的愈合无明显影响,考虑主要与其在体内易被吸收和降解等有关.近年来Ⅰ型胶原作为生物性载体的应用逐渐增多.目的:观察重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原复合材料修复兔半月板软骨损伤的效果.方法:选用健康新西兰大白兔36只,首先在兔半月板上造成统一的无血运区损伤模型.随机分为空白对照组、重组碱性成纤维细胞生长因子组和重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原组.术后2,6,12周分批处死实验动物,进行大体形态观察和组织学检查.结果与结论:重组碱性成纤维细胞生长因子组对无血运区损伤愈合无明显影响,但对半月板边缘滑膜中成纤维细胞有明显的促增殖作用;重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原组表现为纤维软骨样组织愈合,但其愈合组织与正常半月板组织仍有差异.结果表明应用重组碱性成纤维细胞生长因子/Ⅰ型胶原复合型材料治疗半月板无血运区的损伤是一种有效的治疗方法.     

Ⅰ型胶原-TGF-β1-纤维蛋白胶复合材料对兔半月板损伤修复作用的实验研究

目的探讨Ⅰ型胶原-转化生长因子-β1(Transform growth factor,TGF-β1)-纤维蛋白胶复合材料修复兔半月板无血运区损伤的临床效果。方法选取健康新西兰大白兔60只,在半月板损伤造模的基础上随机分为损伤对照组(A组)、TGF-β1组(B组)、Ⅰ型胶原-纤维蛋白胶组(C组)和Ⅰ型胶原-TGF-β1-纤维蛋白胶组(D组)。A组不做处理,C组与D组于关节腔内分别一次性注入Ⅰ型胶原-生物蛋白胶复合物、Ⅰ型胶原-TGF-β1-纤维蛋白胶复合材料至填充物与半月板表面相平为止;B组于关节腔内连续注射3周TGF-β1。术后2周、4周、12周分批处死动物,进行形态学观察和组织学检查。结果形态学观察发现,损伤后各组新西兰大白兔的半月板组织形态变小,颜色微黄,质地较硬,脆性增加。组织学检查发现,B组对半月板无血运区损伤的愈合无明显影响,仅对半月板边缘滑膜中的成纤维细胞有明显的促进作用;C组半月板伤口较术前小,表面稍凹陷,愈合组织与邻近半月板组织结合紧密;D组半月板表现为纤维软骨样愈合,但愈合部分与正常半月板仍有差异。A组、B组、C组,在4周、12周时与D组愈合情况比较差异有统计学意义(P0.05)。结论采用Ⅰ型胶原-TGF-β1-生物蛋白胶复合材料对半月板无血运区损伤治疗是非缝合技术治疗半月板损伤的一种可靠手段。     

医用EC耳脑胶粘合修复半月板裂伤

目的:建立半月板裂伤动物模型,采用EC耳脑胶粘合裂伤的半月板,观察半月板裂伤的愈合情况,探讨EC耳脑胶在半月板裂伤治疗上的可行性。方法:实验于2004-01/07在锦州市中心医院动物实验中心及病理科、锦州医学院电镜室完成。健康成年新西兰兔20只,同体对照设计,将每只兔两侧膝关节外侧半月板制造裂伤,右膝外侧半月板为实验组,左膝外侧半月板为对照组,实验组用EC耳脑胶粘合裂伤,对照组裂伤不作任何处理。术后3,6,12,24周分批随机抽取动物5只,麻醉状态下处死,对裂伤半月板进行肉眼观察,光镜和电镜组织学观察。结果:①两组兔半月板肉眼观察:实验组3,6,12,24周各期半月板均无变形、变性。24周时修复组织与正常半月板组织相似,裂伤愈合。对照组3,6,12,24周各期半月板形态无明显变化。各期肉眼所见半月板裂伤仍有哆开。②两组兔半月板光镜组织学观察结果:实验组3周时镜下半月板裂伤粘合处修复组织主要为肉芽组织。6周时镜下半月板裂隙已被纤维结蒂组织及纤维软骨组织连接。24周时镜下半月板裂伤断端已被成熟的纤维软骨组织连结,愈合良好。对照组3,6,12,24周各期半月板裂伤光镜下均未见完全愈合,裂口分离。③两组兔半月板电镜组织学观察结果:同期电镜下观察也有同样结果。实验组3周时镜下半月板裂伤粘合处可见多种细胞成份,其中纤维软骨细胞少,胞核有变性。24周时镜下半月板裂伤处纤维软骨组织紧密连结,排列整齐、粗大的胶原纤维通过断端,裂伤缘消失。对照组3,6,12,24周各期半月板裂伤均未见完全愈合。两组兔24周时半月板裂伤愈合情况比较,差别有显著性意义(P<0.01)。结论:用EC耳脑胶粘合兔半月板的裂伤可使之愈合。此结果为临床半月板裂伤修复提供一基础研究依据。     

应用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞混合移植修复兔膝关节实验性软骨缺损区

背景：应用异体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的研究较多,但其可引起免疫反应.由于胚胎细胞具有较低的抗原性和较强的增殖能力,期望其能为组织工程研究与应用开辟新的载体材料.目的：采用兔胚胎软骨细胞培养移植修复关节软骨缺损,并对其组织形态学进行观察.设计：随机分组观察对比实验.单位：广西医科大学组织胚胎学试验室.材料：孕4周新西兰大白兔1只;成年新西兰大白兔24只,雌雄不限,体质量2～2.5 kg .方法：实验于2000-12/2002-06在广西医科大学组织胚胎学试验室完成.在成兔股骨内侧髁作关节软骨缺损模型,实验组采用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞相混后,植入兔膝关节实验性软骨缺损区,对照组不做任何处理或单纯用生物蛋白胶移植修补,分别于术后4,8,12周观察关节软骨缺损修复的情况,并按改良Pineda方法对其进行组织学评分,标准为细胞形态、基质染色、表面平整、软骨厚度、宿主结合5项,0分表示正常,分值越高表示改变越严重.主要观察指标：①兔膝关节标本大体观察结果.②兔膝关节标本组织学观察结果.③关节软骨组织学半定量计分结果.④关节软骨缺损修复区进行疗效评价结果.结果：24只兔均进入结果分析.①兔膝关节标本大体观察结果：胚胎软骨细胞＋纤维蛋白封闭剂组缺损区颜色接近正常软骨,质韧弹性好,与周围软骨界限消失;纤维蛋白封闭剂组与未处理组始终未愈合,但创面略小,有白色纤维组织充填.②兔膝关节标本组织学观察结果：胚胎软骨细胞＋纤维蛋白封闭剂组优势组织为透明样软骨,深方为骨组织,表面略凸或平整,基质着色正常,与周围软骨完全结合分界不清,组织中未发现淋巴细胞浸润;纤维蛋白封闭剂组与未处理组为纤维组织,部分有残留明显的凹陷性瘢痕,与周围组织接合或部分接合.③关节软骨组织学半定量计分结果：按改良自Pineda方法,12周胚胎软骨细胞＋纤维蛋白封闭剂组评分显著低于纤维蛋白封闭剂组和未处理组[（0.50&;#177;0.76）,（7.88&;#177;1.13）,（8.13&;#177;1.36）分,P＜0.05],而单纯用纤维蛋白封闭剂修补组在4周与未处理组比较有显著性差异（P＜0.05）,在8,12周则无差异.④关节软骨缺损修复区进行疗效评价结果：12周时胚胎软骨细胞＋纤维蛋白封闭剂组完全修复8膝,纤维蛋白封闭剂组不完全修复1膝,未修复7膝,未处理组未修复8膝.结论：胚胎软骨细胞移植组所产生的修复组织接近正常软骨组织,明显优于纤维蛋白封闭剂组和未处理组,该方法作为关节软骨缺损修复是可行的.     

应用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞混合移植修复兔膝关节实验性软骨缺损区

背景应用异体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的研究较多,但其可引起免疫反应.由于胚胎细胞具有较低的抗原性和较强的增殖能力,期望其能为组织工程研究与应用开辟新的载体材料.目的采用兔胚胎软骨细胞培养移植修复关节软骨缺损,并对其组织形态学进行观察.设计随机分组观察对比实验.单位广西医科大学组织胚胎学试验室.材料孕4周新西兰大白兔1只;成年新西兰大白兔24只,雌雄不限,体质量2～2.5 kg .方法实验于2000-12/2002-06在广西医科大学组织胚胎学试验室完成.在成兔股骨内侧髁作关节软骨缺损模型,实验组采用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞相混后,植入兔膝关节实验性软骨缺损区,对照组不做任何处理或单纯用生物蛋白胶移植修补,分别于术后4,8,12周观察关节软骨缺损修复的情况,并按改良Pineda方法对其进行组织学评分,标准为细胞形态、基质染色、表面平整、软骨厚度、宿主结合5项,0分表示正常,分值越高表示改变越严重.主要观察指标①兔膝关节标本大体观察结果.②兔膝关节标本组织学观察结果.③关节软骨组织学半定量计分结果.④关节软骨缺损修复区进行疗效评价结果.结果24只兔均进入结果分析.①兔膝关节标本大体观察结果胚胎软骨细胞+纤维蛋白封闭剂组缺损区颜色接近正常软骨,质韧弹性好,与周围软骨界限消失;纤维蛋白封闭剂组与未处理组始终未愈合,但创面略小,有白色纤维组织充填.②兔膝关节标本组织学观察结果胚胎软骨细胞+纤维蛋白封闭剂组优势组织为透明样软骨,深方为骨组织,表面略凸或平整,基质着色正常,与周围软骨完全结合分界不清,组织中未发现淋巴细胞浸润;纤维蛋白封闭剂组与未处理组为纤维组织,部分有残留明显的凹陷性瘢痕,与周围组织接合或部分接合.③关节软骨组织学半定量计分结果按改良自Pineda方法,12周胚胎软骨细胞+纤维蛋白封闭剂组评分显著低于纤维蛋白封闭剂组和未处理组[(0.50±0.76),(7.88±1.13),(8.13±1.36)分,P＜0.05],而单纯用纤维蛋白封闭剂修补组在4周与未处理组比较有显著性差异(P＜0.05),在8,12周则无差异.④关节软骨缺损修复区进行疗效评价结果12周时胚胎软骨细胞+纤维蛋白封闭剂组完全修复8膝,纤维蛋白封闭剂组不完全修复1膝,未修复7膝,未处理组未修复8膝.结论胚胎软骨细胞移植组所产生的修复组织接近正常软骨组织,明显优于纤维蛋白封闭剂组和未处理组,该方法作为关节软骨缺损修复是可行的.     

纤维蛋白凝胶基质材料用于组织工程修复兔关节软骨缺损——与Ⅰ型胶原凝胶和混合凝胶性能特征的比较

目的：观察纤维蛋白凝胶、Ⅰ型胶原凝胶、混合凝胶3种不同生物型细胞外基质用于组织工程修复兔关节软骨缺损形态学及性能特征比较。方法：实验于2002-01／2003—12在哈尔滨医科大学附属二院实验中心进行。6月龄日本大耳白兔48只。①人工软骨制备：传代培养兔骨髓基质干细胞，与纤维蛋白原凝胶、Ⅰ型胶原凝胶、纤维蛋白-Ⅰ型胶原混合凝胶混合制成3种人工软骨。②模型制备与动物分组：兔麻醉后取膝关节外侧切口，显露髌股关节面，作直径4．5mm，深3mm转孔获得关节软骨缺损模型。48只兔分为4组，每组12只。纤维蛋白凝胶组，缺损区充填骨髓基质细胞纤维蛋白凝胶；Ⅰ型胶原凝胶组，充填骨髓基质细胞Ⅰ型胶原凝胶；混合凝胶组，充填骨髓基质细胞纤维蛋白-Ⅰ型胶原混合凝胶；空白对照组。不充填材料。术后各组动物膝关节不予外固定，自由活动。③标本观察：分别于4，8，12周每组取3只（6侧膝关节）麻醉后处死，行膝关节大体观察，选择损伤区股骨干切片作苯胺蓝、苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色采用光学显微镜观察，并按改良的Seller评分（0分为正常关节，分数越高表示关节退行性变越严重）进行量化评分。结果：①各组兔膝关节4周及12周时大体形态学观察：4周时：纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组为淡粉色半透明的软骨样结构，Ⅰ型胶原凝胶组、空白对照组多数缺损区仍呈暗红色，表面不规则。12周时：纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组修复组织与周围软骨平滑过渡高度一致、光泽度较正常软骨略差；Ⅰ型胶原凝胶组、空白对照组修复区多数不平整，中央凹陷且存在龟裂。②各组兔股骨组织切片观察结果：纤维蛋白原凝胶、混合凝胶组各时间点组织化学染色均显著优于Ⅰ型胶原凝胶组和空白对照组；纤维蛋白原凝胶、混合凝胶组无显著差异。③组织切片的Seller评分结果：纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组在8，12周均显著低于Ⅰ型胶原凝胶组与空白对照组[8周：（19．7，20．5）分比（27．0，25．1）分，P〈0．05；12周：（7．4，9．1）分比（18．2，20．0）分，P〈0．05]。结论：纤维蛋白凝胶作为支架材料修复缺损软骨，材料成分接近透明软骨，优于Ⅰ型胶原，与纤维蛋白Ⅰ型胶原混合物无显著差异，可作为理想的细胞外基质用于组织工程修复关节软骨缺损。     

同种异体软骨细胞直接体内构建组织工程软骨的实验研究

目的：研究兔同种异体软骨细胞直接在体内构建组织工程化软骨的可行性。方法：获取1个月龄兔耳郭软骨，分离消化后将软骨细胞种于PDLLA上形成复合物，6h后植于兔皮下，分别于6，12，18周取材行大体和组织学观察以及苏木精一伊红染色、甲苯胺蓝染色和Masson’s三色染色。结果：体内培养6周后，软骨细胞／PDLLA复合物中有基质分泌，软骨细胞不成熟，12周时，软骨细胞接近成熟并形成凹陷，18周时，新生软骨基本接近正常软骨。结论：利用同种异体软骨细胞直接构建组织工程化软骨的方法可以在动物体内形成新的软骨。     

海螵蛸富血小板血浆液复合物修复兔软骨损伤的可行性

背景:富血小板血浆是自体血小板的浓集物,富含大量生长因子,可以促进组织中细胞和基质的再生,促进组织修复,但其容易流动,不能有效固定于损伤部位。目的:以海螵蛸生物支架固定富血小板血浆,观察海螵蛸富血小板血浆复合物修复兔软骨损伤的效果。方法:将21只大耳白兔随机均分为3组,在兔右膝关节负重髁软骨面制作类似Hulth骨软骨损伤模型,实验组于骨损伤处植入海螵蛸支架-自体富血小板血浆复合物,对照组于骨缺损处植入明胶海绵-富血小板血浆复合物,空白对照组不植入任何材料。术后12周取材,进行大体观察与组织学观察。结果与结论:术后12周,实验组软骨缺损区域明显缩小,组织学观察缺损区域出现类软骨细胞,排列整齐,成柱状分布,非常接近正常软骨组织;对照组软骨缺损区域有轻度缩小,组织学观察骨基质表面可见类软骨细胞基质组织,但排列较为紊乱;空白对照组软骨缺损区域有轻度缩小,组织学观察到只有骨细胞及骨基质,血管组织存在,未见到软骨及类软骨组织。实验组缺损直径及深度均低于其他两组(P<0.05)。结果表明海螵蛸支架-富血小板血浆复合物可促进软骨缺损愈合。     

糖尿病兔全层关节软骨缺损骨膜移植的修复

目的：评价自体骨膜移植修复糖尿病兔全层关节软骨缺损的生物特性和效果，探讨其可行性。方法：将36只兔随机分为糖尿病兔骨膜移植组，健康家兔骨膜移植组和对照组。每组12只，前两组分别给予相应处理，对照组单纯制造缺损不作任何修复。于术后4，8，12周处死取材，分别进行大体、光镜、电镜观察，并对观察指标进行量化，数据行统计学分析。结果：大体观察糖尿病兔和健康兔骨膜移植组在第12周时均能以类透明软骨组织修复缺损，而对照组为纤维肉芽组织。光镜观察指标显示两种手术方法均能以软骨的方式修复缺损。甲苯胺蓝染色提示软骨细胞有活性，可分泌正常软骨基质，同源软骨细胞在软骨陷窝中存活，但糖尿病兔组基质染色较健康兔组浅。电镜观察表明，修复两组均有软骨细胞生成，有正常软骨陷窝，细胞器发达并能行使正常功能。对照组修复组织符合纤维肉芽组织的特征。结论：骨膜移植也能以类透明软骨修复糖尿病兔全层关节软骨缺损，软骨细胞生物学特性类似于正常关节软骨细胞。     

血管内皮细胞生长因子与半月板白区修复中新生血管的长入

背景：血管内皮细胞生长因子的研究集中于对皮肤坏死、肌腱的修复作用,对半月板的影响研究甚少。目的：观察血管内皮细胞生长因子能否促进血管向损伤半月板的白区生长及半月板白区愈合。方法：将新西兰大白兔24只随机选择左后肢或右后肢作为实验组,另一条后肢作为对照组,均建立半月板后角损伤模型,实验组关节内注射血管内皮细胞生长因子。术后1,3,6,12周切除半月板,制作切片进行大体和组织学观察。结果与结论：术后1周,实验组较对照组血管增生,成纤维细胞丰富,并且有透明软骨细胞出现。术后3周,实验组的软骨层明显较对照组厚。术后12周,实验组软骨层出现成骨基质和成骨细胞。结果提示术后早期,血管内皮细胞生长因子促进了血管的发生,从而促进损伤区的修复;但晚期随血管的长入,促进了软骨内化骨,损伤了已修复的软骨层。     

低温冻存同种异体软骨细胞在喉功能重建中的应用

目的：通过对深低温冻存的软骨细胞作为种子细胞构建组织工程化软骨修复喉软骨缺损的能力研究，寻找一种活性软骨细胞的保存方法。方法：取3周龄新西兰兔关节软骨，经深低温冻存，复苏冻存不同时间的软骨细胞，体外培养，培养细胞呈单层细胞铺满培养瓶底后收集细胞，制成细胞悬液，接种于聚羟基乙酸(polyglycolicacid，PGA)三维支架材料上，复合物体外培养1周，接种于同种异体兔甲状软骨缺损处，术后2，4，8周取材，行大体及组织学观察。结果：经深低温冻存的软骨细胞与新鲜软骨细胞修复区愈合良好，无瘢痕及坏死现象，组织学观察均有软骨生成及基质分泌；冻存不同时间的软骨细胞组之间无明显差异。结论：经深低温冻存的软骨细胞保持了分裂增殖及合成基质的能力，可用于组织工程修复软骨缺损，冻存时间对其功能无明显的影响。     

新型支架材料羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸复合自体骨髓间充质干细胞修复关节软骨全层缺损

目的：观察自体骨髓间充质干细胞复合新型支架材料羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸修复兔膝关节软骨全层缺损。 方法：实验于2005-03／08在兰州大学骨科研究所完成。①抽取兔骨髓液经过密度梯度离心得到单个核细胞，在经过体外分离培养获得骨髓间充质干细胞，将骨髓间充质干细胞吸附于羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸复合材料上，再移植于兔膝关节全层软骨缺损模型处。②36只健康青紫兰兔被随机分成3组，每组各12只。细胞材料复合物组：将骨髓间充质干细胞与羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸复合物植入双侧股骨髁间窝软骨缺损处；单纯复合材料组：单纯植入羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸；空白对照组：不做任何植入。③分别于术后4，8，12周各处死4只兔子，取材进行大体、组织学及免疫组织化学染色观察。大体及组织学观察结果参照O’driscoll的评分标准进行评分。 结果：36只兔全部进入结果分析。①培养细胞的生物学特性观察：原代培养骨髓细胞7～10d后，多数细胞旋涡状排列。传代6h后细胞开始贴壁，5-7d铺满瓶壁。细胞形态均一呈梭形。②各组兔术后大体观察、股骨组织学检查：细胞材料复合物组术后12周大体评分明显低于单纯复合材料组和空白对照组（修复组织表面结构：0．45&;#177;0．25，1．15&;#177;0．25，2．47&;#177;0．39，P〈0．05；缺损填充深度：0．35&;#177;0．15。1．27&;#177;0．27，2．63&;#177;0．27，P〈0．05；与周围软骨结合情况：0．58&;#177;0．08，1．10&;#177;0．24。1．87&;#177;0．64，P〈0．05）。细胞材料复合物组12周关节软骨表面光滑，光镜下可见已形成正常软骨厚度的软骨层及完整的软骨下骨，与对照组有明显差异。修复组织Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性，强度与周围正常软骨无差别。软骨缺损处为透明软骨修复。组织学评分各项（缺损填充深度、与周围软骨结合情况、修复组织表面结构、细胞形态、潮线形成、甲苯胺兰染色）评分均显著低于单纯复合材料组和空白对照组。③各组兔修复组织吸光度值形态分析：修复方法在基质分泌方面优势顺序为：细胞材料复合物组〉单纯复合材料组〉空白对照组。 结论：自体骨髓间充质干细胞复合羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸材料以类透明样软骨组织完整修复缺损，是一种修复软骨缺损的行之有效的方法，羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸可以做为组织工程软骨支架材料。     

纤维蛋白凝胶基质材料用于组织工程修复兔关节软骨缺损与Ⅰ型胶原凝胶和混合凝胶性能特征的比较

目的:观察纤维蛋白凝胶、Ⅰ型胶原凝胶、混合凝胶3种不同生物型细胞外基质用于组织工程修复兔关节软骨缺损形态学及性能特征比较。方法:实验于2002-01/2003-12在哈尔滨医科大学附属二院实验中心进行。6月龄日本大耳白兔48只。①人工软骨制备:传代培养兔骨髓基质干细胞,与纤维蛋白原凝胶、Ⅰ型胶原凝胶、纤维蛋白-Ⅰ型胶原混合凝胶混合制成3种人工软骨。②模型制备与动物分组:兔麻醉后取膝关节外侧切口,显露髌股关节面,作直径4.5mm,深3mm转孔获得关节软骨缺损模型。48只兔分为4组,每组12只。纤维蛋白凝胶组,缺损区充填骨髓基质细胞纤维蛋白凝胶;Ⅰ型胶原凝胶组,充填骨髓基质细胞Ⅰ型胶原凝胶;混合凝胶组,充填骨髓基质细胞纤维蛋白-Ⅰ型胶原混合凝胶;空白对照组,不充填材料。术后各组动物膝关节不予外固定,自由活动。③标本观察:分别于4,8,12周每组取3只(6侧膝关节)麻醉后处死,行膝关节大体观察,选择损伤区股骨干切片作苯胺蓝、苏木精-伊红染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色采用光学显微镜观察,并按改良的Seller评分(0分为正常关节,分数越高表示关节退行性变越严重)进行量化评分。结果:①各组兔膝关节4周及12周时大体形态学观察:4周时:纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组为淡粉色半透明的软骨样结构,Ⅰ型胶原凝胶组、空白对照组多数缺损区仍呈暗红色,表面不规则。12周时:纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组修复组织与周围软骨平滑过渡高度一致、光泽度较正常软骨略差;Ⅰ型胶原凝胶组、空白对照组修复区多数不平整,中央凹陷且存在龟裂。②各组兔股骨组织切片观察结果:纤维蛋白原凝胶、混合凝胶组各时间点组织化学染色均显著优于Ⅰ型胶原凝胶组和空白对照组;纤维蛋白原凝胶、混合凝胶组无显著差异。③组织切片的Seller评分结果:纤维蛋白凝胶组、混合凝胶组在8,12周均显著低于Ⅰ型胶原凝胶组与空白对照组犤8周:(19.7,20.5)分比(27.0,25.1)分,P<0.05;12周:(7.4,9.1)分比(18.2,20.0)分,P<0.05犦。结论:纤维蛋白凝胶作为支架材料修复缺损软骨,材料成分接近透明软骨,优于Ⅰ型胶原,与纤维蛋白Ⅰ型胶原混合物无显著差异,可作为理想的细胞外基质用于组织工程修复关节软骨缺损。     

血管内皮细胞生长因子与半月板白区修复中新生血管的长入

背景:血管内皮细胞生长因子的研究集中于对皮肤坏死、肌腱的修复作用,对半月板的影响研究甚少.目的:观察血管内皮细胞生长因子能否促进血管向损伤半月板的白区生长及半月板白区愈合.方法:将新西兰大白兔24只随机选择左后肢或右后肢作为实验组,另一条后肢作为对照组,均建立半月板后角损伤模型,实验组关节内注射血管内皮细胞生长因子.术后1,3,6,12周切除半月板,制作切片进行大体和组织学观察.结果与结论:术后1周,实验组较对照组血管增生,成纤维细胞丰富,并且有透明软骨细胞出现.术后3周,实验组的软骨层明显较对照组厚.术后12周,实验组软骨层出现成骨基质和成骨细胞.结果提示术后早期,血管内皮细胞生长因子促进了血管的发生,从而促进损伤区的修复;但晚期随血管的长入,促进了软骨内化骨,损伤了已修复的软骨层.     

自体骨软骨镶嵌移植复合因子凝胶修复兔软骨缺损的实验研究

目的探讨自体骨软骨镶嵌移植复合因子凝胶修复家兔软骨缺损的效果和可行性。方法将36只健康家兔膝关节造成实验性缺损，随机将动物分成自体骨软骨镶嵌移植联合凝胶生长因子复合体组、自体骨软骨镶嵌移植组、骨膜移植组和空白对照组。4、8、12周后对修复组织进行形态学观察及组织学检查。结果术后12周，实验组的缺损由透明软骨样组织充填，软骨及软骨下骨组织基本修复，修复的软骨组织在组织形态学上优于对照组。结论自体骨软骨镶嵌移植复合纤维蛋白凝胶、TGF—B和IGF—I修复家兔膝关节软骨缺损，具有移植软骨固定可靠、软骨细胞存活率高等优点。     

同种异体脱钙松质骨基质材料复合自体骨髓间充质干细胞修复全层关节软骨缺损

背景：到目前为止，还没有一种十分有效的方法治疗关节软骨缺损。许多治疗方法都只能缓解临床症状，而不能有效促进软骨的再生，也不能恢复软骨表面的承重功能。目的：观察脱钙骨基质复合骨髓间充质干细胞修复兔膝关节全层软骨缺损的疗效。设计、时间及地点：随机对照动物实验，分别于2005—01／03在兰州大学第二医院骨科研究所和2008-05／08在桂林医学院中心实验室完成。材料：取新西兰兔四肢骨干骺端及椎体松质骨，脱钙制备脱钙松质骨基质材料；体外分离培养同种新西兰兔骨髓间充质干细胞种植于脱钙骨基质支架上体外培养。36只新西兰兔随机分成骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨填充组（简称复合组）、同种异体脱钙骨填充组及空白对照组，每组12只。方法：在髁间窝髌面上用直径4mm的钻头钻孔深约3mm造成膝关节全层软骨缺损模型。复合组双侧股骨髁间窝软骨缺损处植入脱钙骨基质吸附体外分离培养的自体骨髓间充质干细胞复合物；同种异体脱钙骨填充组单纯植入脱钙骨基质；空白对照组不作任何植入。主要观察指标：分别于植入后4，8，12周取材进行组织学及免疫组化染色观察，根据关节软骨组织学计分标准进行评分。结果：36只新西兰兔均进入结果分析。复合组所修复组织为透明软骨样修复：而同种异体脱钙骨填充组和空白对照组为纤维性修复。植入后12周复合组大体评分及组织学评分明显低于同种异体脱钙骨填充组和空白对照组（P〈0．05）；同种异体脱钙骨填充组低于空白对照组（P〈0．05）。结论：运用软骨组织工程的原理，以脱钙骨基质为支架材料的自体骨髓间充质干细胞移植是一种修复软骨缺损的行之有效的方法。