纳米金固定酶标抗体的免疫传感器

目的：研制乙肝免疫传感器，用于临床检验。方法：以金电极为基底，优化实验条件，通过纳米金静电竞争吸附硫堇分子和乙肝过氧化酶酶标抗体。采用循环伏安法和线性扫描伏安法考察了传感器的性质。结果：对乙肝抗原进行了定量分析．线性范围为1：30，1：200；线性相关系数R为0．994。结论：用纳米金方法固定乙肝抗体制备的免疫传感器能应用于临床检验。     

HA-CHIT纳米复合物修饰电极的研制及检测磺胺甲噁唑的方法研究

目的以羟基磷灰石-壳聚糖(HA-CHIT)纳米复合物修饰玻碳电极,磺胺甲噁唑抗体为探针,探讨一种新型的电化学免疫传感器检测磺胺甲噁唑(SMX)。方法用滴涂法将HA-CHIT纳米复合物修饰在玻碳电极表面制成特异的电化学免疫传感器。用循环伏安法对修饰电极的性能进行表征。在电极上固定SMX抗体作为探针,依据免疫竞争法,样品SMX与辣根过氧化物酶标记SMX竞争电极上的抗SMX多克隆抗体,采用差分脉冲伏安法对SMX进行检测。结果免疫反应时间为20 min、孵育温度37℃、检测底液pH5.5时,电流响应最灵敏。线性范围为1.0×10-7～5.0×10-4mg/ml,线性方程为△I=9 695.2c+0.6511,相关系数为0.9909;最低检出限为8.54×10-8mg/ml;相对标准偏差(RSD)<5%。结论基于HA-CHIT纳米复合物修饰玻碳电极制得的电化学免疫传感器具有线性范围宽、检出限低、快速灵敏等优势,可实现对磺胺甲噁唑的快速测定,具有良好的应用前景。     

基于多壁碳纳米管和纳米金修饰的MPO丝网印刷免疫传感器的研究

目的:通过两种纳米材料技术对丝网印刷电极(SPE)的层层修饰和优化,将髓过氧化物酶抗体固载到电极表面,从而研制一种新型快速检测MPO的生物传感器电极纸片。方法:在丝网印刷电极上层层修饰上多壁碳纳米管(MWNTs)与纳米金(Nano-Au),利用纳米金固载髓过氧化物酶抗体(anti-MPO),最后用BSA封闭纳米金上非特异位点,构建了一种用于MPO检测的新型电流型免疫传感器。采用循环伏安法(CV)对修饰过程进行表征。探讨了ph、孵育温度和孵育时间对该免疫传感器性能的影响。结果:新型双纳米传感器在最适条件下对MPO响应良好,其线性为0～80ng/ml,线性相关系数为0.99753,检出限为0.12ng/ml。结论:该方法制备的电流型免疫传感器具有稳定性好、灵敏度高、特异性好、结果准确可靠和可再生等优点,可以用于临床检测的应用。     

NaBH4还原对Love波免疫传感器再生能力的影响

目的提高检测B型葡萄球菌肠毒素的Love波免疫传感器的再生能力,以优化Love波免疫传感器的设计。方法传感器由压电石英基片、叉指换能器和SiO2声波导层构成。采用戊二醛共价交联法构建抗体分子探针传感界面。为提高传感器的再生能力,选用NaBH4还原连接于戊二醛和抗体分子之间的Schiff’s base结构,通过实验确定NaBH4还原步骤和最佳浓度,并用原子力显微镜(AFM)对改良后的戊二醛法固定抗体以及捕获SEB后的表面进行成像表征。结果采用优化后的固定化方案制备的免疫传感器对10-6g.mL-1SEB有明显响应,并可以重复使用3次,NaBH4的最佳浓度为100 mmol.L-1。结论先共价交联抗体分子,再用浓度为100 mmol.L-1的NaBH4还原共价双键为稳定的单键能明显改善Love传感器对SEB的响应能力和再生能力。     

压电免疫球蛋白微阵列免疫传感器抗体固定方法的研究

目的构建一种新型压电免疫球蛋白微阵列免疫传感器,探索SPA法在金电极表面进行抗体固定的最佳条件。方法以AT切型、基频10MHz的金膜石英晶体作为换能器,将抗人免疫球蛋白单克隆抗体固定在石英晶体电极表面,根据SPA能通过分子间作用力与Au原子形成稳定的SPA-Au复合物的原理,对抗体进行固定,对SPA固定抗体的最佳温度及时间条件、抗体浓度、pH值等影响因素进行实验研究。结果包被SPA宜于采用低温、长时间的包被方式,进行抗体固定的抗体溶液最佳浓度5mg/ml,pH值7.2。结论采用SPA法在石英晶体表面进行抗体固定操作简单、省时,是压电免疫传感器抗体固定的有效方法。     

基于可溶性虫卵抗原的血吸虫抗体检测免疫传感器

目的:将免疫法特异性和电化学法灵敏性相结合,建立一种高灵敏基于可溶性虫卵抗原的电化学免疫传感器,用于血吸虫抗体的检测。方法:巯基乙胺通过吸附作用在金电极表面形成的自组装单分子层(SAM),依次滴加2.5%戊二醛和血吸虫抗原(可溶性虫卵抗原,soluble egg antigen,SEA),用以捕获抗SEA抗体(兔多抗或人多抗),然后再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗形成免疫复合物。用循环伏安法检测还原峰的电流值。结果:在底物为添加了2μl 30%的双氧水及1.0 mmol/L对苯二酚的0.1 mol/L pH7.2的PBS缓冲液中,还原峰的电流值与抗SEA兔血清稀释度在10-3与10-6范围内成正比,相关系数为0.956。与抗SEA人血清稀释比在10-1与10-4范围内成正比,相关系数为0.988。在1∶40稀释度条件下,血吸虫病人与正常人血清的抗SEA还原峰的电流值相差7.4μA。结论:该方法可以用于血吸虫抗体的初步检测。     

基于纳米金固定大肠杆菌O157:H7酶免疫传感器的研究

目的:建立一种快速检测大肠杆菌O157:H7的新型酶免疫传感器。方法:用静电吸附作用和抗原抗体特异性反应将大肠杆菌O157:H7单克隆鼠抗固定在辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG/纳米金修饰的玻碳电极表面,制备用于检测大肠杆菌O157:H7的酶免疫传感器。通过循环伏安法和恒电位法测定大肠杆菌O157:H7被固定在电极表面引起的电信号改变进行定量分析。结果:在含0.1 mol/L PBS(pH7.4),1 mmol/L二甲氨基甲基二茂铁,0.2 mmol/L H2O2,30℃的底液中该酶免疫传感器的检出限为1×102cfu/ml,检测线性范围为1×103~1×105cfu/ml,相关系数为r=0.997。结论:该传感器制备方法简单,具有灵敏度高、检测时间短、操作简单等优点,在临床医学和环境监测中具有较好的应用价值。     

压电免疫传感器两种抗体固定方法的比较研究

目的比较压电免疫传感器两种抗体固定方法的优劣,选择压电免疫传感器抗体敏感膜固定的最佳方法. 方法分别采用巯基化方法和蛋白A(SPA)固定法将抗人胰岛素单克隆抗体固定在压电免疫传感器金膜电极表面,比较不同抗体工作浓度、不同浓度标准溶液反应条件下抗体固定量、一致性以及传感器响应能力如频率变化、反应时间、检测线性范围以及反应非特异性等. 结果两种固定方法制备的压电免疫传感器其检测灵敏度、反应时间相当,但巯基化固定方法抗体固定量大、一致性好、检测线性范围较宽、非特异反应低. 结论抗体巯基化法制备的压电免疫传感器具有检测范围宽、非特异反应低等优点,是免疫传感器抗体敏感膜制备的理想方法.     

用于乙肝表面抗原及其抗体同步检测压电免疫传感器阵列的研制

目的：研制同步检测HBsAg和anti—HBs的压电免疫传感器阵列。方法：采用戊二醛交联法，将乙肝表面抗体及其抗原固定于石英晶体表面，同步检测HBsAg和anti—HBs。结果：该阵列对HBsAg和anti—HBs能进行定性定量分析，可以明显区分阴阳性对照血清，以阳性频移值为信号，阴性频移值为噪声，其信噪比均大于2；其线性范围分别为1～25μg／ml和0．032～1．6mg／ml。结论：该阵列具有临床推广应用价值。     

新型压电石英晶体免疫传感器抗体固定方法的建立

目的探讨并建立一种高效免疫微阵列传感器抗体固定的方法.方法分别采用普通蛋白A(SPA)法与经巯基取代SPA(自组装SPA)法固定石英晶体微阵列上抗体,并用石英晶体微天平(QCM)分别检测其不同浓度抗体、抗原条件下发生抗原抗体反应,并对其抗体包被量、反应频率漂移、非特异性反应等多项指标进行统计学分析.结果与传统SPA法相比,自组装SPA具有抗体固定量大、反应速度快、频率下降明显、非特异性反应低等优点.结论自组装SPA法具有比普通SPA法包被一致性更高的优点,可以作为新一代免疫传感器的抗体固定方法.     

甘肃省大学生乙肝疫苗补种效果观察

目的：评价甘肃省大学生乙型病毒性肝炎(乙肝)疫苗(Hepatitis B Vaccine,HepB)补种效果。方法在项目支持下为甘肃省在校大学生按照“0,1,6”的免疫程序,使用重组 HepB(中国仓鼠卵巢细胞,CHO 细胞)免费补种全程乙肝疫苗,第1剂使用20μg,其他剂次使用10μg。免疫后1年,快速评估 HepB 接种率,并进行抗乙肝病毒表面抗原抗体[Antibody to Hepatitis B Virus(HBV)Surface Antigen(HBsAg),Anti-HBs]检测。结果通过项目的实施,大学生 HepB 全程接种率从项目前的14.72%提升到94.16%,大学生 Anti-HBs 阳性率为88.65%,其中女生 Anti-HBs 阳性率为94.52%,明显大于男生阳性率84.82%(χ2=4.132,P <0.05)。Anti-HBs 抗体几何平均浓度(Geometric Mean Concentration,GMC)为215.68 mIU/ml(95%CI 200.8~230.56 mIU/ml)。以高应答者和正常应答者为主,分别占调查总数的41.08%和31.35%。结论通过在校园组织开展 HepB 补种活动,按照免疫程序首剂使用20μg,第2和第3剂使用10μg 免费补种乙肝疫苗,可显著提高在校大学生 HepB 接种率和血清Anti-HBs 水平。     

长沙市乙肝感染产妇所生儿童免疫监测分析

目的 了解长沙市乙肝感染产妇所生儿童的免疫状态,为制定措施提供科学依据。方法 对长沙市2017年4月1日-2018年9月30日出生的常住乙肝感染产妇所生儿童进行母婴阻断,并按0、1、6月龄完成乙肝疫苗接种后1～6月儿童进行乙肝系列五项检测。结果 长沙市乙肝感染产妇所生儿童6 498人,完成乙肝免疫球蛋白及乙肝疫苗第1针为6 492人,注射率为99.9%;共检测儿童1 533人,乙肝母婴传播率为1.44%,乙肝表面抗体阳转率为80.8%,在城区与农村区域将两者作比较,差异具有统计学意义(χ²=7.022、32.497,P＜0.05)。结论 长沙市预防乙肝母婴传播工作取得了显著成效,应建立常规报告乙肝暴露儿监测信息机制,使部分母婴阻断成功而未产生乙肝表面抗体的儿童,得到及时再免疫而避免感染,进一步降低地区乙肝感染率。     

乙型肝炎母婴传播阻断成功儿童乙型肝炎病毒突破性感染的特征

目的了解乙型肝炎(乙肝)母婴传播阻断成功儿童乙肝病毒(HBV)突破性感染及其影响因素。方法选取江苏省淮安市淮安区2009年9月-2011年1月乙肝表面抗原(HBsAg)阳性母亲所生儿童,且乙肝母婴传播阻断成功。阻断成功定义为儿童按国家免疫程序在完成出生时乙肝疫苗(HepB)和乙肝免疫球蛋白以及1、6月龄HepB接种后7-12月龄HBsAg阴性,HBV突破性感染定义为阻断成功儿童在12月龄后HBsAg阳性或24月龄后乙肝核心抗体(HBcAb)阳性。至2019年9月进行5次随访并检测HBV血清标志物,分析HBV突破性感染及其影响因素。结果本研究共纳入儿童390名,其中12名29-117月龄儿童发生HBV突破性感染,发生率为3.08%(12/390),均为乙肝核心抗体(HBcAb)阳性和HBsAg阴性。乙肝疫苗(HepB)初次免疫无、低、正常、高应答儿童HBV突破性感染率分别为25.00%、6.67%、2.61%、0.95%;母亲HBeAg阳性、阴性的儿童分别为9.76%、0.00%;母亲高、低HBV病毒载量的儿童分别为11.96%、0.34%。儿童HBV突破性感染发生密度为0.36/100人年;多因素Cox回归分析显示,HepB初次免疫低或无应答、母亲高病毒载量是儿童HBV突破性感染的危险因素(HR=5.91,95%CI:1.87-18.71;HR=45.81,95%CI:5.88-356.96)。结论乙肝母婴传播阻断成功儿童的HBV突破性感染发生率较低;母亲HBeAg阳性、母亲高HBV病毒载量、HepB初次免疫低或无应答的儿童更易发生突破性感染。     

葡萄酒中槲皮素和山奈酚的高效液相色谱化学发光测定法

目的建立葡萄酒中槲皮素和山奈酚的高效液相色谱化学发光测定法。方法基于在NaOH碱性介质中铁氰化钾可以直接氧化槲皮素和山奈酚产生化学发光原理,用高效液相色谱分离柱后化学发光法测定葡萄酒中槲皮素和山奈酚含量。结果槲皮素和山奈酚浓度分别在2.0×10-6～1.6×10-2g/m(lr=0.9990)和3.2×10-6～2.0×10-4g/m(lr=0.9998)范围内与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限(S/N=3)分别为1.4×10-9g/ml和3.4×10-7g/ml,回收率分别为99.31%和99.06%。RSD分别为2.07%,1.29%。结论该法具有简便、快速、准确等优点,适合葡萄酒中槲皮素和山奈酚的测定。     

Occupational risk of blood-borne viruses in healthcare workers: a 5-year surveillance program.

OBJECTIVE: This study presents the results of a 5-year surveillance program involving the prospective follow-up of healthcare workers (HCWs) in the Veneto region of Italy exposed to blood-borne viruses. DESIGN: All HCWs who reported an occupational exposure to blood-borne infection joined the surveillance program. Both HCWs and patients were tested for viral markers (hepatitis B surface antigen [HBsAg], antibody to hepatitis B surface antigen [anti-HBs], antibody to hepatitis B core antigen [anti-HBc], antibody to hepatitis C virus [anti-HCV], HCV RNA, and antibody to human immunodeficiency virus [HIV]) and had these markers plus transaminases assayed at 3, 6, and 12 months and then yearly thereafter. Moreover, a program of hepatitis B virus (HBV) prophylaxis was offered to those whose anti-HBs levels were less than 10 IU/mL. PARTICIPANTS: Two hundred forty-five HCWs (156 women and 89 men) with a mean age of 37 (+/- 10) years who reported occupational exposure during the 5-year period. RESULTS: At the time of exposure, 1 HCW was positive for HBsAg (0.4%) and 2 were positive for HCV RNA (0.8%). Among the patients involved, 28 (11.4%) were positive for HBsAg, 68 (27.8%) were positive for HCV RNA, 6 (2.4%) were positive for HIV, and 147 (60.0%) were negative for all viral markers (4 patients were positive for both HCV and HIV). During the follow-up period after exposure (mean, 2.7 [+/- 1.6] years), there was no increase in transaminases or seroconversions to any of the viral markers. CONCLUSION: Our accurate postexposure follow-up revealed a lack of transmission of HBV, HCV, and HIV.     

Hepatitis B in Wisconsin male prisoners: considerations for serologic screening and vaccination.

To develop a protocol for prevention of hepatitis B virus (HBV) transmission in Wisconsin prisons, we interviewed 619 male prisoners at incarceration to obtain information on hepatitis B risk factors. We defined previous infections by the presence of hepatitis B surface antigen (HBsAg), antibody to hepatitis B surface antigen (anti-HBs), or antibody to hepatitis B core antigen (anti-HBc). Logistic regression was used to develop a model of relative risk (RR) of HBV infection. Use of illicit intravenous (IV) drugs was the most important risk factor because of a high prevalence of IV drug use and an RR which ranged from 2.93-7.47. Other important risk factors were: prior hepatitis or jaundice (RR = 6.28), race (RR = 2.54 for Blacks, RR = 3.28 for Latinos), transfusion (RR = 3.00), and age. Previous imprisonment was not an independent risk factor for HBV, hence selective serologic screening and vaccination of prisoners are justified rather than mass screening and vaccination. Based upon prevalence of hepatitis B markers in subgroups, it is necessary to screen prisoners with prior hepatitis or jaundice, prior transfusion, and users of IV drugs. The identification of HBsAg carriers by such screening could prevent infection of "household" contacts. Users of IV drugs who are susceptible to HBV infection should be vaccinated. The remaining prisoners constitute a low-risk group for HBV infection and do not require serologic screening or vaccination.     

艾滋病合并感染现况及对CD4的影响研究

目的:研究艾滋病感染者和艾滋病人(HIV/AIDS)合并感染乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、梅毒(TP)的流行现况及对艾滋病抗病毒治疗的影响。方法:选取HIV/AIDS的病例采用ELISA法,分别对标本进行乙肝表面抗原、丙肝抗体、梅毒抗体检测,艾滋病抗病毒治疗后患者的CD4+T淋巴细胞的观察。结果:719例HIV/AIDS合并感染乙肝的有80例(11.13%),丙肝46例(6.40%),梅毒114例(15.86%)。接受艾滋病抗病毒治疗的326例患者中,单纯HIV感染的有232例,其中T淋巴细胞CD4<300/mm3者110例,占47.41%;合并多重感染的HIV患者有94例,其中T淋巴细胞CD4<300/mm3的有49例,占52.13%;两组比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论:HIV合并感染TP、HCV和HBV率较高,易对T淋巴细胞CD4产生不同程度的影响。     

输血传播肝炎的流行病学研究

本文用ELISA法对224例住院输血病例进行了半年乙肝病毒感染指标的随访研究,并对发生病毒性肝炎的患者进行了病原学分型诊断。结果输血后肝炎的发病率是3.13%(7例),其中乙型肝炎占28.57%(2例),非甲非乙型肝炎占71.43%(5例)。输血后HBV感染率为9.38%(21例),其中有6例在输血后5~6个月时出现抗-HBs。输血后肝炎病例绝大多数(6例)起病缓慢,且发展成慢性肝炎,仅1例在随访期间痊愈。本文作者提出应该用更敏感的方法代替RPHA,对献血员进行HBV感染指标的检测。     

上海市松江区中小学生乙型肝炎血清流行病学调查

目的 了解上海市松江区中小学生乙肝病毒（HBV）感染现状,为中小学生乙型肝炎的预防控制提供参考依据。方法 于2015年3-5月,采用随机整群抽样方法在上海市松江区抽取2 280名中小学生进行问卷调查,并采集血样进行乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒表面抗体（HBsAb）、乙肝病毒核心抗体（HBcAb）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）和乙肝病毒e抗体（HBeAb）检测。结果 上海市松江区2 280名中小学生乙肝疫苗接种率为99.87%,HBsAg、HBsAb、HBcAb、HBeAg和HBeAb阳性率分别为0.57%、26.67%、9.39%、0.22%和0.18%。不同特征中小学生比较,男生HBcAb阳性率（7.53%）低于女生（11.34%）;年龄6~10岁中小学生HBsAg阳性率（34.55%）均高于11~15岁学生（26.04%）和16~20岁学生（21.86%）;小学生HBsAb阳性率（31.45%）均高于初中生（23.26%）和高中生（22.01%）;高中生HBcAb阳性率（11.54%）均高于小学生（9.23%）和初中生（6.34%）;本地户籍中小学生HBsAg、HBsAb和HBeAg阳性率（0.33%、19.89%和0）均低于外地户籍学生（1.03%、39.77%和0.64%）,HBcAb阳性率（10.38%）高于外地户籍学生（7.46%）,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 上海市松江区中小学生乙肝接种率较高,HBsAg阳性率已降至<1%。     

Pre-vaccine plasma levels of soluble inflammatory indices negatively predict responses to HAV,HBV, and tetanus vaccines in HCV and HIV infection

BackgroundChronic hepatitis C virus (HCV) and HIV infections are associated with impaired responses to neo-antigens contained in hepatitis A virus (HAV)/hepatitis B virus (HBV) vaccines, yet responsible mechanisms are unclear.MethodsACTG 5232 and CFAR0910 were clinical trials where pre-vaccine levels of plasma IP10, IL-6, sCD163 and sCD14 were measured in viremic HCV- (n = 15) or HIV-infected participants (n = 24) and uninfected controls (n = 10). Accelerated dosing HAV/HBV vaccine and tetanus booster were administered and antibody response was measured at 0, 1, 3, 8, and 24 weeks.ResultsPre-vaccine plasma IP10, IL-6, and sCD14 levels were elevated in both HCV and HIV-infected participants, while sCD163 was also elevated in HCV-infected participants. Pre-immunization tetanus antibody levels were lower in HIV-infected than in uninfected participants, while vaccine induced antibody responses were intact in HCV and HIV-infected participants. After HAV/HBV vaccination, HCV and HIV-infected participants had lower and less durable HAV and HBV antibody responses than uninfected controls.Among HCV-infected participants, pre-vaccine plasma IP10, IL-6, sCD14, and sCD163 levels inversely correlated with HAV, HBV and tetanus antibody responses after vaccine. Low HAV/HBV vaccine responses in HIV-infected participants prohibited assessment of immune correlates.ConclusionsDuring HCV and HIV infection markers of systemic inflammation reflect immune dysfunction as demonstrated by poor response to HAV/HBV neo-antigen vaccine.