抑肽酶预处理对凝血酶诱导的星形细胞凋亡的影响

目的观察不同剂量抑肽酶预处理对凝血酶诱导的星形细胞损伤和凋亡影响.方法体外原代培养星形细胞后,随机数字表法分为6组:C(等量培养基对照组),A0(抑肽酶0 U/ml预处理),A100(抑肽酶100 U/ml预处理),A300(抑肽酶300 U/ml预处理),A500(抑肽酶500 U/ml预处理),A700(抑肽酶700 U/ml预处理),制备凝血酶体外作用模型,采用流式细胞仪和AO-EB染色法对凝血酶100 U/ml浓度下不同浓度的抑肽酶预处理后细胞凋亡情况进行检测.结果 A0和A100及A100和A300间均有非常显著的差异(P<0.01),A300和A500间有显著性差异(P<0.05),A500和A700间则没有显著性差异.AO-EB染色部分细胞也呈现典型的凋亡表现,结果和流式细胞仪结果相吻合.结论抑肽酶对凝血酶诱导的星形细胞凋亡有明显的抑制作用.     

异莲心碱对大鼠CYP3A酶活性的影响

目的:探讨异莲心碱对CYP3A酶活性的影响,以了解异莲心碱与CYP3A酶底物合用药时可能产生的相互作用。方法:①建立体外肝微粒体混合酶代谢体系;②以睾酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A酶代谢活性的方法,考察体外代谢体系的最佳孵育条件;③将不同浓度异莲心碱分别与睾酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无异莲心碱存在下睾酮的减少量,以评估异莲心碱对CYP3A酶代谢的影响。结果:在肝微粒体孵育体系中,睾酮体外代谢的最佳孵育条件为底物浓度200μmol/L,代谢时间210 min。异莲心碱对CYP3A酶抑制作用较弱,IC50>1 000μmol/L。结论:异莲心碱对CYP3A酶无显著影响,可以与其底物联合用药。     

丙肝病毒NS3-4A基因的重组杆状病毒穿梭载体的构建

目的通过克隆丙肝病毒非结构蛋白NS3-4A基因,构建表达HCV-NS3-4A基因的重组杆状病毒穿梭载体。方法设计合成HCV NS3-4A基因全长的特异性引物,应用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）扩增非结构蛋白区NS3-4A基因片段,经限制性内切酶EcoR I和Hind III双酶切后克隆到pFastbacDual上,并转化到大肠杆菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果扩增得到的基因片段长度为2.2kb,该片段成功克隆在杆状病毒穿梭载体pFastBacDual上,经测序证实为HCV NS3-4A基因,这表明HCV-NS3A基因重组杆状病毒穿梭载体构建成功。结论成功构建了表达HCV NS3-4A基因的杆状病毒穿梭载体,这将为下一步HCV杆状病毒载体疫苗的制备打下基础。     

两种内固定治疗方案用于老年股骨粗隆间并粗隆下骨折疗效比较

目的：探讨解剖型锁定钢板与动力髋螺钉（DHS）内固定方案治疗老年股骨粗隆间并粗隆下骨折临床疗效及安全性差异。方法研究对象方便选取该院2010年4月—2015年4月收治的老年股骨粗隆间并粗隆下骨折患者共80例,以随机区组法分为A组（40例）和B组（40例）,分别采用DHS和解剖型锁定钢板内固定方案治疗;比较两组患者多项指标。结果 A组手术时间为（103.10±7.35）min,术后卧床时间为（18.46±1.35）d;B组手术时间为（99.41±6.90） min,术后卧床时间为（21.08±1.42）d。两组患者手术时间和术中失血量比较差异无统计学意义（P>0.05）;B组患者术后卧床时间显著长于A组（P<0.05）;B组患者术后髋关节Harris评分优良率显著优于A组（P<0.05）;B组患者术后并发症发生率显著低于A组（P<0.05）。结论相较于DHS内固定方案,解剖型锁定钢板内固定方案治疗老年股骨粗隆间并粗隆下骨折可有效提高骨折愈合效果,促进髋关节功能恢复,并有助于降低术后并发症发生风险。     

6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制致人鼻咽癌细胞CNE-2L2与层粘连蛋白粘附减弱及片状伪足减少

目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对CNE-2L2细胞与层粘连蛋白的粘附及细胞表面片状伪足的影响。方法Western印迹检测6A8α-甘露糖苷酶的表达。置细胞于层粘连蛋白(laminin)包被的培养板孔中,37℃孵育1h后,用结晶紫染色细胞,用0.1mol/L枸橼酸钠/50%乙醇溶解结合到细胞中的染料。测定540nm处的吸光度值(AT),按R=AT/A100×100%计算粘附率(A100为100%粘附值)。扫描电镜观察细胞表面的片状伪足。结果6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的2个克隆细胞株(AS1和AS2)对层粘连蛋白的相对粘附率分别为0.447±0.096与0.533±0.065,而6A8α-甘露糖苷酶表达正常的对照细胞(W、M和S)的相对粘附率分别为0.78±0.035、0.7±0.05和0.80±0.04。两者的差别有生物学意义(P<0.01)。6A8α-甘露糖苷酶表达正常的细胞表面片状伪足丰富,6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的细胞表面的片状伪足基本上消失。结论6A8α-甘露糖苷酶表达抑制可导致人鼻咽癌细胞CNE-2L2与层粘连蛋白粘附减弱及片状伪足减少。     

消化内镜诊治消化性胃溃疡80例的临床研究

目的 分析消化内镜诊治消化性胃溃疡患者的临床效果.方法 回顾性分析2018年3月至2019年3月本院收治的80例消化性胃溃疡患者的临床资料,按照治疗方法不同分为A组与B组,各40例.A组采用四联疗法治疗,B组采用消化内镜联合四联疗法治疗,比较两组临床疗效、再次出血率、血红蛋白水平、留院观察时间及止血时间.结果 B组治疗...     

E1A基因对人乳腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及机制探讨

目的 探讨E1A基因对人乳腺癌细胞化疗药物的增敏作用及相关机制.方法 通过PEI-Fe3O4纳米粒介导将E1A基因导入人乳腺癌细胞系MCF-7,经G418筛选获得稳定表达E1A的转染细胞(MCF-7-E1A).用不同浓度的表阿霉素、泰素帝及5-氟尿嘧啶等化疗药物处理细胞,通过MTT法测绘细胞存活曲线,观察E1A基因对表阿霉素、泰素帝、和5-氟尿嘧啶等化疗药物敏感性的影响;用同浓度的泰素帝和5-氟尿嘧啶处理细胞,观察E1A基因在不同时间对癌细胞存活率的影响.结果 转染E1A基因的人乳腺癌细胞(MCF-7-E1A)对表阿霉素和泰素帝的敏感性显著增加,与MCF-7和MCF-7-vect细胞系比较,MCF-7-E1A细胞对表阿霉素和泰素帝的敏感性增加11倍和15倍;对5-氟尿嘧啶的增敏作用不明显.结论 E1A基因能显著增加人乳腺癌细胞对表阿霉素和泰素帝等化疗药物的敏感性.     

人宫颈癌发生中p16INK4A表达缺陷与其外显子甲基化的关系

目的 研究抑癌基因p16INK4A在宫颈癌发生中的表达变化，分析这种差异表达与甲基化的关系。方法 逆转录聚合酶链技术（RT．P（1R）检测30例宫颈癌组织标本、48例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织（CIN Ⅰ12例、CINⅡ16例、CINⅢ20例）中p16INK4A基因的表达。Western Blot分析P16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术（MSP）对p16INK4A DNA进行甲基化分析。以每例标本相应正常宫颈组织作为对照。结果 70％（21／30）宫颈癌组织中p16INK4A表达下降或缺失，与正常宫颈组织、CIN Ⅰ和CINⅡ中的p16INK4A表达相比，差异具有统计学意义（P〈0．05），与CIN Ⅲ相比差异无统计学意义（P〉0．05）。蛋白的表达检测也得到相似的结果。MsP检测发现宫颈癌组织中有9例p16INK4A外显子甲基化，甲基化率为30％，其中8例年龄小于40岁，提示甲基化易于出现在年轻患者。而CIN组织中仅CIN Ⅲ发现1例甲基化，说明甲基化随着宫颈病变的发展而增多。分析甲基化与p16INK4A表达的关系，发现42．86％（9／21）的宫颈癌组织中p16INK4A表达下降与甲基化有关，甲基化的宫颈癌组织中p16INK4A表达均下降。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因，它的表达缺失或下降在宫颈癌的发生中起重要作用，外显子甲基化是导致其表达缺陷的部分原因。     

肿瘤抗原P1A与细胞因子mGM-CSF共表达载体的构建和表达

目的：构建并鉴定细胞因子mGM-CSF和肿瘤特异抗原PIA共表达载体，为研究新型的肿瘤疫苗提供新的策略。方法：以PCR方法从pCI-neo／PIA中扩增出PIA编码基因片段，构建于pRSC质粒上；再从pORF-mGM-CSF中扩增出mGM-CSF基因片段．插入pRS-PIA重组质粒PIA基因的上游。以酶切和DNA测序进行鉴定。并将鉴定过的重组质粒以脂质体法转染7721细胞．用RT-PCR法鉴定转染细胞中PIA基因和mGM-CSF基因的表达。结果：经酶切鉴定和DNA测序证实mGM-CS17和PIA重组质粒构建正确，并在转染此质粒的7721细胞中检测出了PIA和mGM-CSF基因的表达。结论：成功构建mGM-CSF和PIA的共表达载体，为研制新型肿瘤疫苗奠定了基础。     

miR-194对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨microRNA-194(miR-194)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-194的表达差异,并在A549/DDP细胞中转染miR-194-inhibitor后检测miR-194的表达变化;应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性?细胞增殖能力及凋亡变化;Western blot检测转染后A549/DDP细胞中Bax和Bcl-2的表达变化?结果:miR-194在耐药细胞A549/DDP中的表达量显著高于其亲本细胞株A549(P < 0.05),A549/DDP在转染miR-194-inhibitor 24 h后miR-194的表达水平较对照组显著下降(P < 0.05)?抑制miR-194表达后,相对于对照组,DDP对转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞增殖能力减弱,经DDP处理后凋亡细胞增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与对照组相比,转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低?结论:miR-194可能通过抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白表达而增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,抑制miR-194的表达可逆转A549/DDP细胞的耐药性?     

载脂蛋白A1与结直肠肿瘤恶性度的相关研究

目的研究载脂蛋白A1（apolipoprotein A1,APOA1）在结直肠息肉、不同分级分期及远处转移的结直肠癌患者血清中的表达,旨在探讨APOA1与结直肠肿瘤恶性度的相关性。方法收集59位结直肠肿瘤患者血清,由病理学医师根据肿瘤细胞浸润及分化程度进行分期及分级,并对是否伴随远处转移进行分类。本实验采用蛋白免疫印迹法与免疫比浊法对APOA1的表达进行分析。结果 APOA1在低分化结直肠癌患者血清与息肉、高分化及中分化血清相比表达量减少（P=0.035,P=0.028,P=0.028）,APOA1在结直肠息肉血清中的表达量与不同分期及远处转移的结直肠癌血清中的表达比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 APOA1与结直肠肿瘤的分级存在相关性,对不同恶性度的结直肠肿瘤患者可发挥肿瘤标志物的作用。     

与甲型副伤寒杆菌噬菌体LSPA1早期蛋白GP23相互作用的宿主蛋白的筛选

目的 筛选与甲型副伤寒杆菌(副甲)CMCC50973噬菌体LSPA1早期蛋白GP23相互作用的宿主蛋白。方法 Sau3AⅠ酶切副甲基因组, 回收250~1 500 bp的条带与pAT质粒连接, 构建pAT-副甲基因文库;扩增噬菌体早期基因gp23, 与pBT构建pBT-gp23作为诱饵质粒;将pAT-副甲基因文库和pBT-gp23共转KS宿主菌, 利用细菌双杂交技术筛选蓝色单菌。检测筛选出阳性单菌的LacZ活性, 并提质粒测序, 分析其编码蛋白。结果 成功构建副甲基因文库, 其库容量满足实验的要求, 基因文库阳性率接近100%;筛选出的插入基因为编码嘌呤透性酶。结论 宿主蛋白(嘌呤透性酶)可能与副甲噬菌体LSPA1早期蛋白GP23有相互作用。     

细胞因子负调控因子3对A549细胞株的侵袭及FAK磷酸化水平的影响

目的 观察细胞因子信号负调控因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)对人肺腺癌细胞株A549侵袭能力及黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)磷酸化水平的影响.方法 建立SOCS3稳定表达细胞株;Boyden Chamber分析法测定细胞的侵袭能力;RT-PCR检测FAK mRNA 表达水平;Western blot检测FAK和磷酸化FAK表达水平.结果 在纤维粘连蛋白(fibronectin,Fn)介导下,SOCS3加Fn组A549细胞穿过滤膜细胞数显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);A549细胞各组细胞间FAK mRNA水平差异无统计学意义;而SOCS3加Fn组细胞FAK蛋白及磷酸化FAK蛋白水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 SOCS3从转录后水平调控FAK表达和活性从而降低A549的体外侵袭能力.     

神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

小鼠cyclin A2正义和反义真核表达载体的构建及鉴定

目的构建小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体。方法采用小鼠胚胎组织取材,提取总RNA。设计引物,采用RT-PCR方法扩增小鼠cyclin A2 mRNA得到cyclin A2的DNA,将此DNA插入pGEM-T载体,转化入JM109感受态细菌。将鉴定得到的重组质粒进行扩增,EcoRⅠ酶切后,回收cyclin A2目的片段亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体。酶切筛选鉴定重组的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2。结果将小鼠基因的开放阅读框(ORF)重组到真核表达载体pcDNA3.1内,用EcoRⅠ酶切重组质粒后可得到一接近1660 bp的DNA条带,核酸测序证实和GenBank所公布序列相符。HindⅢ酶切鉴定重组质粒后,证明分别为正向和反向插入载体的质粒。DNA测序证明构建的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2的序列是正确的。结论成功构建了小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体。     

探讨MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的：研究不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,并且观察对细胞中Bcl-2和Bad两种凋亡相关蛋白表达的影响。方法：体外培养A549细胞分别暴露于0、5、10、20、40Ixmol／L的MGl32,24h后MTF法测定细胞存活率,流式细胞术（FCW）检测细胞的凋亡率,WesternBlot方法测定A549细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况。结果：MTY法和流式细胞术检测结果显示,A549细胞的存活率和凋亡率与MGl32呈浓度依赖性关系,MG132浓度越高细胞存活率越低,并且凋亡率越高。WesternBlot方法测定结果显示A549细胞中Bcl-2的表达随着MG132浓度增高而逐渐减少,而Bad的表达无明显变化。结论：MG132可以诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,实现该作用的可能机制部分是通过降低Bcl-2蛋白的表达,而Bad在这一过程中似乎没有表现出明显的作用。     

乌司他丁在胰腺癌围手术期中的临床研究

目的 研究乌司他丁对围手术期胰腺癌患者的胰瘘发生率、炎性介质水平、免疫功能和预后的影响。 方法 选取上海交通大学附属第一人民医院普通外科2015年3月—2017年12月收治的胰腺癌患者90例,通过分层随机的方式将围手术期患者分为乌司他丁A组、乌司他丁B组和对照组,每组30例。乌司他丁A组术前5 d和术后5 d给予乌司他丁治疗,B组术前3 d和术后3 d采用乌司他丁治疗,对照组采用术前3 d和术后3 d生理盐水治疗。比较3组患者术后7 d腹腔液引流量、引流液淀粉酶含量、炎性介质、免疫指标及预后情况。 结果 乌司他丁A组和B组的腹腔引流量、引流液淀粉酶含量均较对照组少,差异有统计学意义(均P<0.05),而A组与B组间差异无统计学意义;乌司他丁A组和B组炎性介质水平低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05),而A组与B组间差异无统计学意义;乌司他丁A组与B组CD4+淋巴细胞占总淋巴细胞、CD4+/CD8+淋巴细胞比值均明显高于对照组(均P<0.05),3组间CD3+、CD8+占总淋巴细胞差异无统计学意义;乌司他丁A组和B组生存率高于对照组,A组生存率略高于B组,差异无统计学意义。 结论 乌司他丁可降低围手术期胰腺癌患者胰液的渗出及胰瘘的发生率,有效改善患者预后的生存率。      

DNA甲基转移酶在胃癌和癌前病变中的表达及意义

目的本研究通过对胃癌及癌前病变组织中Dnmt3A和Dnmt3B表达水平的检测,为探讨其在胃癌发病中的作用机理提供依据。方法通过手术及内镜活检取68例病例标本,依据病理检查结果,分为三组：胃癌组26例;胃癌前病变组（萎缩性胃炎伴肠化及不典型增生）20例;正常对照组21例。应用免疫组织化学SP法检测组织中Dnmt3A和Dnmt3B的表达水平。结果胃癌组Dnmt3A表达的阳性率是96.2%,胃癌前病变组是65.0%,正常对照组是76.2%。在胃癌组织中Dnmt3B表达的阳性率96.2%,胃癌前病变组是55.0%,正常对照组是81.0%。结论 1.胃癌组织中Dnmt3A、Dnmt3B高表达。Dnmt3A、Dnmt3B可能通过促进DNA甲基化,抑制相关基因的表达,在胃癌发生发展的过程中,Dnmt3A、Dnmt3B可能参与胃癌的分化过程。2.检测胃黏膜组织Dnmt3A、Dnmt3B可能是一种有用的肿瘤标志物。3.Dnmt3A、Dnmt3B的表达不参与胃癌的进展。     

组蛋白变异体macroH2A1真核表达载体构建及其细胞内定位的研究

目的构建带有血凝素(HA)标签的小鼠组蛋白变异体macroH2A1(mH2A1)的真核表达载体,并观察其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况。方法提取内毒素休克的BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应获得内毒素休克小鼠肝脏组织的cDNA,以cDNA为模板使用PCR方法扩增得到mH2A1编码序列,并将其酶切后连接至带有HA标记的载体pcDNA3-HA上;对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。随后将重组质粒瞬时转染293T细胞,利用荧光显微镜观察。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明pcDNA3-mH2A1-HA真核表达质粒构建正确;经转染实验发现,该质粒能够在293T细胞中表达,表达产物主要定位在细胞核中。结论 mH2A1真核表达载体pcDNA3-mH2A1-HA的成功构建及明确其在哺乳动物细胞中的具体核定位,为进一步研究mH2A1作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具。     

81例尖锐湿疣伴包皮过长治疗分析

目的观察男性生殖器尖锐湿疣伴包皮过长患者,行包皮环切术能否提高单纯CO2激光治疗尖锐湿疣治愈率。方法将81例男性生殖器尖锐湿疣伴包皮过长患者随机分两组分别为A组41例,B组40例。两组年龄、病程、皮损部位比较差异无统计学意义。手术A组41例予以行包皮环切术+CO2激光治疗;对照B组40例予以单纯CO2激光治疗。结果随访期半年内未再复发感染且无新皮损出现者为治愈。未再不洁性生活接触感染但皮损原位或邻近皮肤再次出现疣体者为复发。A组手术均成功,切口甲级愈合,切口缝线于1个月后均自行脱落。半年内未复发者35例,复发者总计6例,治愈率85.36%,复发率为14.64%。B组40例在单纯CO2激光治疗后创面7～10 d愈合,半年内未复发者23例,复发者总计17例,治愈率57.51%,复发率为42.49%,A组治愈率高于B组,复发率低于B组。结论男性生殖器尖锐湿疣伴包皮过长患者行包皮环切术,能够提高单纯CO2激光治疗尖锐湿疣治愈率。