快速反相杂交法检测HBV DNA

为建立一种简便快速的核酸探针杂交法检测 Ｐ Ｃ Ｒ扩增产物中的 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ,将 Ｐ Ｃ Ｒ 上游引物用生物素标记后进行扩增;核酸探针固定于硝酸纤维素膜上,与带有生物素的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增产物杂交,杂交信号用链霉亲和素 酶结合物显色检测。结果表明,该法检测的敏感性为 ５ ｆｇ,杂交时间为４０ 分钟。２００ 例临床标本检测的阳性率（２７５％ ）高于琼脂糖电泳法（２４５％ ）。同时具有操作简便的特点,可作为 Ｐ Ｃ Ｒ扩增产物中 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 的常规检测方法。     

PCR-微孔板反向杂交法检测HBV DNA

用ＰＣＲ－微也板反向杂交法检测ＨＢＶ ＤＮＡ，通过固定于板上的捕获探针与５′端带有生物素的ＰＣＲ扩增产物杂交后，加入酶标亲合素通过酶联反应显色。本法检测敏感度明显高于电泳法，检测时间约是Ｋｅｌｌｅｒ法的１／１０。     

双带PCR提高检测血清HBV-DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性。与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品），和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品）。ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）。ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交，证明了该方法的特异性。     

人乳头瘤病毒PCR产物酶标-微孔板杂交分型

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接酶标记微孔板反向分子杂交法用于人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）型别鉴定。方法利用ＨＰＶ通用引物介导ＰＣＲ（ＧＰＰＣＲ）扩增靶ＤＮＡ，然后对产物直接标记辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰＰＥＩＱＩ），与预先包被在微孔板上的ＨＰＶ寡核苷酸探针杂交后酶显色法检测。结果ＨＰＶ各型之间无交叉杂交；杂交灵敏度可达１３～７６个病毒ＤＮＡ拷贝，比ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳检测高１０倍；该法重复性好，阳性孔批内ＣＶ为６．３４％，批间ＣＶ为１０．５３％，阴性孔批内ＣＶ为１％，批间ＣＶ为５．７９％；而且杂交影响因素较少。结论该法特异性强、灵敏度高、操作简便，无放射性和ＥＢ染料污染，杂交时间短、仪器读取结果，便于大量常规临床样本定性或定量检测。     

PCR—ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方法学，探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规ＰＣＲ引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成份，再通过亲合素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯小孔中，通过固相探针与ＨＢＶＤＮＡ扩增产物进行杂交，与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经ＮＰＰ显色，根据其Ａ４０５ｎｍ值大小，推算样品中ＨＢＶ ＤＮＡ模板含量。建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ的最     

聚合酶链反应检测血透患者血清中HBV DNA的临床意义

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了４２例维持性血液透析患者血清标本的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，以评价ＰＣＲ技术在调查透析中心ＨＢＶ感染的流行病学方面的应用价值。结果在４２例标本中有１７例ＨＢＶＤＮＡ阳性（４０．５％），与常规血清标志物相比较，ＨＢｓＡｇ阳性者其ＨＢＶＤＮＡ阳性率为６０．９％，而全部血清标志物均阴性者其ＨＢＶＤＮＡ阳性率为１３．３％。提示：ＰＣＲ方法是监测中心透析ＨＢＶ传染的更灵敏、更可靠手段。它也是对ＨＢＶ变异类型的鉴别及疗效评价方面的一个重要方法。     

用通用引物PCR检测HBV DNA的研究

本文设计一对ＨＢＶ亚型通用的ＰＣＲ引物，用于检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ。ＰＣＲ扩增后，产物经２％琼脂糖凝胶电泳分析与ＥＩＡ法有较高的阳性符合率。阳性扩增条带单一清晰，扩增产物的分子量可靠，可测出８０ｆｇ／ｍｌ的微量ＨＢＶ ＤＮＡ。本法准确、敏感，可用于临床常规检测ＨＢＶ ＤＮＡ。     

酶联杂交法定量检测乙型肝炎病毒DNA的聚合酶链反应产物

近年文献报告采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）定量检测乙型肝炎（乙肝）病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ,但大多操作复杂,或需要特殊仪器设备。为此,我们建立了一种特异、灵敏、准确且简便的微孔板酶联杂交法,以定量检测ＨＢＶＤＮＡ的ＰＣＲ产物,报告如下。一、材料和方法１材...     

聚合酶链反应结合探针杂交检测幽门螺杆菌

目的建立特异、灵敏的聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合长臂光敏生物素探针杂交检测幽门螺杆菌（ＨＰ）的方法。方法用ＰＣＲ产物直接克隆并测序，以含ＨＰＤＮＡ序列的重组质粒外源片段为探针。用细菌培养、单纯ＰＣＲ和ＰＣＲ结合杂交（ＰＣＲ－Ｓｂ）检测经胃镜诊断为慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠球部炎症、十二指肠溃疡的胃活检组织、唾液和粪便标本中的ＨＰ。结果检测胃活检标本７９份，ＰＣＲ－Ｓｂ阳性率为９９％，单纯ＰＣＲ及细菌培养的阳性率分别为９５％和６５％，ＰＣＲ－Ｓｂ的灵敏度达到１ｆｇ。唾液标本的检测阳性率为３５％，粪便标本的检测结果均为阴性。结论测序证实了ＰＣＲ扩增的正确性。ＰＣＲ结合长臂光敏生物素探针杂交是特异、灵敏、简便和对人体无害的检测ＨＰ的方法。     

不同片段的Dig－HBV－DNA探针在检测血清HBV－DNA的比较

本文运用分子克隆技术、随机引物法用非放射性Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记制备ｐＢＲ３２２－ＨＢＶ－ＤＮＡ全基因探针（７．５ｋｂ）、单纯ＨＢＶ－ＤＮＡ全基因探针（３．２ｋｂ）及经ＢｇＬⅡ限制性内切酶切割后片段ＨＢＶ－ＤＮＡ探针（２．４ｋｂ）。通过检测１３０份血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，比较三种探针的敏感度和特异性。     

鉴别乙型肝炎病毒野毒株及E阴性突变株的新方法

目的同时检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）野毒株及２种ＨＢｅＡｇ阴性突变株（Ｅ阴性突变株）。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，以人为改变核苷酸序列的２对引物，自乙型肝炎患者血清ＤＮＡ中，同时扩增出１４８ｂｐ及１０２ｂｐ两种产物，根据限制性内切酶Ｂｓｕ３６Ⅰ和ＡｆｌⅢ对ＰＣＲ产物消化后片段长度多态性的分析，鉴别ＨＢＶ野毒株Ｍ０与２种Ｅ阴性突变株Ｍ１、Ｍ２。结果突变株Ｍ１的１０２ｂｐ扩增产物经Ｂｓｕ３６Ⅰ酶切，可产生一８２ｂｐ片段；突变株Ｍ２除１０２ｂｐ产物含Ｂｓｕ３６Ⅰ酶切点外，其１４８ｂｐ产物经ＡｆｌⅢ酶切后，可产生一１１７ｂｐ片段；野毒株Ｍ０的２种产物不含上述酶切点。用该法对３４例ＨＢｅＡｇ阴性患者进行检测，结果与寡核苷酸探针杂交完全一致。结论该方法简便、准确，为ＨＢＶ变异株的检测探索了一条非放射性的新途径。     

用微板核酸杂交-ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况

目的：用微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术检测皖北地区不同人群ＴＴＶ感染情况。方法：用ＰＣＲ法将患者血清标本中的ＴＴＶ ＤＮＡ扩增后,与两条特异性探针夹心杂交,通过酶联显色检测血甭标本中的ＴＴＶ ＤＮＡ,进行分型并与套式ＰＣＲ方法比较。结果：ＴＴＶ在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为３．３％,１６．７％和１３．５％,前者与后两者比较差异均有显著意义（Ｐ〈０．０５）;１４例非甲－非戊（ＮＡ－ＮＥ）肝     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍＧＤＳ）技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法 用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像,分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析邮阳性的血清标本,用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果 通过３８份血清标本的检测,发现     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

温度计一道消毒法的探讨

选用ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性的唾液和血清污染温度计７２例，用使用中的０．５％的过氧乙酸浸泡消毒３０ｍｉｎ，取出凉干，用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ，结果全为阴性。从而提出，温度计的消毒用０．５％过氧乙酸浸泡消毒３０ｍｉｎ即可，替代了以往温度计用０．５％￣１％过氧乙酸消毒的二道法。     

荧光探针定量PCR检测HBV—DNA

本文采用荧光探针定量（ＦＱ－ＰＯＣＲ）法准确定量检测ＨＢＶ－Ｍ阳性标志中的ＨＢＶ－ＤＮＡ数量。结果显示：ＨＢｅＡｇ（＋组（３２份）的阳性率为１００％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数范围在１０＾５－１０＾９／ｍｌ之间。ＨＢｅＡｂ（＋）组（４７份）的阳性率为２３．４％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝范围在１０＾３－１０＾５．７／ｍｌ之间;ＨＢｓＡｂ（＋）组（３７份）的阳性率为２．７％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数为１０＾５／ｍｌ。     

巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立

目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）即刻早期（ＩＥ）基因ｍＲＮＡ。方法设计合成跨越ＨＣＭＶＩＥ基因内含子区的一对引物，分别用ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｍＲＮＡ和ＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性产物。结果ＨＣＭＶＩＥ基因ｍＲＮＡ表达在感染后６小时即可出现，并持续到感染后至少９６小时，ＲＴＰＣＲ检测的最低敏感性为１００ｆｇ总ＲＮＡ，其他病毒和细胞ＲＮＡ不能被扩增。结论ＲＴＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶｍＲＮＡ敏感、特异，有望应用于临床作为ＨＣＭＶ活动性感染的早期诊断方法     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ，ＧＤＳ）技术，并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像、分析，并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较，对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析出阳性的血清标本，用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果通过３８份血清标本的检测，发现用凝胶呈像技术判断的结果比单纯肉眼观察的阳性率高。前者１９份阳性（５０％），后者１６份阳性（４２．１％），符合率为９２．１％。经χ２检验（χ２＝０．４７７，Ｐ＞０．０５），说明两种方法有很好的一致性。凝胶呈像分析为阳性，而肉眼观察阴性的３份血清标本，经定量ＰＣＲ检测为阳性。结论应用凝胶呈像技术比ＰＣＲ产物电泳后紫外灯下肉眼观察的灵敏度高、客观性强，能避免与紫外线接触，并可长期保留检测结果。     

不同血清学标志血清中HBV DNA和HCV RNA的分析研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４８１例乙肝血清学五项指标至少一项阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ，结果显示ＨＢＶＤＮＡ的检出率为９１．５％，ＨＣＶＲＮＡ的检出率为１５．４％，并提示（１）当乙肝患者血清中抗ＨＢｅ阳性甚至抗ＨＢｓ阳性时，仍有相当部分的ＨＢＶ存在且仍在复制；（２）ＨＢＶ和ＨＣＶ感染可相互增加其易感性；ＨＢｓＡｇ阳性与否与抗ＨＣＶ可能有一定关系；（３）ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ具有较高的敏感性。