RAIL泰素帝协同诱导人肺腺癌细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL）和化疗药物泰素帝（TXT）联合应用对体外培养人肺腺癌A549细胞的凋亡诱导作用,并初步探讨其作用机制。方法：通过形态学观察和MTT比色法检测TRAIL、TXT及二者联合应用对A549细胞的形态学影响和细胞增殖的抑制作用； Annexin Ⅴ FITC/PI染色，流式细胞术检测A549细胞的凋亡率；半定量RT PCR检测TXT对A549细胞死亡受体DR4、DR5基因表达的影响。结果：①TXT对A549细胞的生长有明显的抑制作用，且呈显著的剂量依赖性，IC50为62.1?ng/ml；而A549对TRAIL不敏感，100?ng/ml的抑制率仅为（6.84±1.14）%，1600?ng/ml的抑制率为（26.10±4.02）%。4?ng/ml TXT与100?ng/ml TRAIL联合应用有显著的协同抑制作用（P＜0.05），抑制率为（19.98±4.15）%；②100?ng/ml TRAIL、4?ng/ml TXT单独作用A549细胞24?h的凋亡率为4.44%和12.26%。100?ng/ml TRAIL与4?ng/ml TXT联合作用A549细胞24?h的凋亡率为16.84%；③4?ng/ml TXT作用前后，死亡受体DR4、DR5mRNA表达水平无明显改变。结论：人肺腺癌细胞A549对TRAIL不敏感，但TRAIL与TXT联合有显著的协同诱导细胞凋亡作用，这种协同作用机制与DR4、DR5的表达无关。     

TRAI联合吉西他滨体外诱导人肝内胆管细胞癌细胞凋亡作用的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人肝内胆管细胞癌细胞HCCC-9810的作用及联合化疗药物吉西他滨(GEM)共同作用人肝内胆管细胞癌细胞对TRAIL抗肿瘤活性的影响。方法:单独应用不同浓度TRAIL(10、30、100、300、1 000 ng/ml),不同浓度GEM(10、20、40、80μg/ml)及100 ng/ml TRAIL+GEM(10、20、40、80μg/ml)联合作用于人肝内胆管细胞癌细胞HCCC-9810,应用四氮唑蓝快速比色(MTT)进行检测,计算肿瘤细胞生长抑制率。结果:GEM与TRAIL联合应用对HCCC-9810细胞抑制率明显高于单独应用TRAIL和GEM(P<0.05)。结论:TRAIL通过诱导肝内胆管细胞癌细胞凋亡而起到抑癌作用,GEM能加强TRAIL的抗癌活性。     

TRAIL蛋白联合吉西他宾对肝癌细胞的体外杀伤作用

目的研究肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（TRAIL）和吉西他宾对肝癌细胞的杀伤作用及联合作用。方法将生长良好的肝癌细胞接种于96孔板,培养24h后,加入不同浓度TRAIL和吉西他宾,倒置显微镜下观察细胞形态变化;利用非同位素细胞增殖试剂盒和流式细胞仪分别检测细胞的生长抑制率和细胞凋亡。结果（1）TRAIL组、吉西他宾组、TRAIL和吉西他宾联合用药组24h后肝癌细胞几乎全部从培养瓶壁脱落;（2）TRAIL与吉西他宾对10株肝癌细胞均有不同程度的生长抑制作用。其中ch—hep-2对TRAIL及吉西他宾最敏感,其IC50分别为24．33ng／ml和328mg／ml;当TRAIL蛋白浓度为500ng／ml时,吉西他宾对ch—hep-2的生长抑制作用明显增强,IC50为065mg／ml,其细胞毒作用增强5倍,流式细胞仪检测两者作用后的细胞,均可检测到细胞调亡峰。结论TRAIL和吉西他宾协同诱导肝癌细胞发生调亡,TRAIL蛋白可明显增加吉西他宾的杀伤效应,它可作为临床肝癌化疗的辅助药物。     

紫杉醇体外诱导人胃癌细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的 研究紫杉醇对人胃癌细胞诱导凋亡作用及端粒酶活性变化。方法 0．001－1μmol/L的紫杉醇处理SGC7901细胞后,用MTT法测定胃癌细胞的生长抑制率,通过形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量TRAP－银染法测定端粒酶活性变化。结果 不同浓度的紫杉醇对胃癌细胞均有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性,光镜及流式细胞术分析表明,0．01μmol/L的紫杉醇处理后24h,细胞即出现明显的凋亡形态特征及凋亡峰,对端粒酶活性的同步检测结果显示,紫杉醇在诱导细胞凋亡的同时伴随端粒酶活性下调,且随紫杉醇浓度增大,抑制作用逐渐增强,24h酶活性即显著受抑制,72h变为阴性。结论 紫杉醇对胃癌细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一,端粒酶可作为肿瘤化疗的敏感性指标。     

凋亡素-2配体对胰腺癌细胞PC3和Pancl作用研究

目的了解凋亡素-2配体(又称肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体,TRAIL)对人胰腺癌细胞株Pancl、PC3凋亡作用的影响.方法采用MTT法、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞仪方法检测TRAIL对Pancl和PC3体外增殖的影响.结果 TRAIL可诱导胰腺癌细胞Pancl和PC3的凋亡,并呈时间和浓度依赖性,PC3的凋亡率明显高于Pancl.结论 TRAIL可以诱导胰腺癌细胞的凋亡,胰腺癌细胞系对TRAIL的敏感性有差异,TRAIL可能为胰腺癌的生物学治疗提供一种新途径.     

2-脱氧葡萄糖可增强TRAIL诱导的口腔癌细胞凋亡的敏感性

目的探讨糖基化抑制剂2-脱氧葡萄糖（2-DG）对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导肿瘤细胞凋亡作用的影
响。方法MTT法检测不同浓度（0、0.625、1.25、2.5、5、10 mmol/L）2-DG及不同浓度2-DG与TRAIL（200 ng/ml）合用对口腔癌
细胞KB的增殖抑制作用。集落克隆法检测2-DG及TRAIL对口腔癌细胞KB的增殖抑制作用。溴化丙啶（PI）单染法检测
2-DG（5 mmol/L）对TRAIL诱导口腔癌细胞KB凋亡的影响;Western blot检测2-DG（5 mmol/L）处理口腔癌细胞KB不同时间
（0、6、16、24 h）,DR5 的表达以及联合TRAIL处理后Caspase-3 的表达。结果5 mmol/L 2-DG作用于口腔癌细胞KB 24、48、
72 h细胞存活率分别为75.25%、69.06%、59.19%,但24 h细胞凋亡率仅为15.9%。5 mmol/L 2-DG与TRAIL联合作用于口腔癌
细胞KB 24 h的凋亡率为72.5%,高于TRAIL本身诱导凋亡率45.3%,并且2-DG可增强TRAIL抑制口腔癌细胞KB的集落克隆
形成的作用。2-DG上调DR5的表达并且增强Caspase-3的激活。结论2-DG能增强TRAIL诱导口腔癌细胞的凋亡,其机制可
能是上调DR5的表达及增强Caspase-3的激活。
     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体与放、化疗联合应用诱导喉癌Hep-2细胞凋亡途径研究

 目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的敏感性及其与放、化疗联用时的凋亡途径。方法 采用CCK-8法检测TRAIL、顺铂、紫杉醇作用下Hep-2细胞生长抑制率;流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡率;Western blot法检测Hep-2细胞内caspase蛋白表达变化。结果 Hep-2细胞对TRAIL诱导的凋亡不敏感,24 h IC₅₀为596. 92 μg/L;顺铂、紫杉醇、放射线与TRAIL联合应用时Hep-2细胞凋亡率显著高于单药应用（P＜0.05）;caspase-9抑制剂Z-LETD-FMK使TRAIL、顺铂、紫杉醇对Hep-2细胞的生长抑制率显著下降（P＜0.05）;联合用药组caspase-8,caspase-9表达量均有显著升高（P＜0.05）。结论 人喉癌Hep-2细胞对TRAIL诱导的细胞凋亡不敏感,TRAIL通过内源性途径诱导Hep-2细胞凋亡;活化后的caspase-9、caspase-3通过环状反馈作用激活caspase-8,增强了Hep-2细胞对TRAIL的敏感性,是联合用药对Hep-2细胞发挥协同效应的机制之一。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合8-氯腺苷在前列腺癌治疗中的作用及机制研究

目的观察低剂量8-氟腺苷对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导细胞凋亡的增敏作用。方法人前列腺癌细胞株PC-3M经过TRAIL（100ng／ml）、低剂量8-氟腺苷（0-200μmol／L）以及联合用药处理96h，用流式细胞分析仪和蛋白质免疫印迹分析测定细胞生存率、细胞周期以及相关细胞凋亡蛋白的动态变化。结果人前列腺癌细胞株PC-3M单独经过TRAIL或低剂量8-氟腺苷处理后并不能降低其存活率，但联合用药后细胞生存率大大降低。结论低剂量8-氟腺苷可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应，效果优于二种药物的单独使用。8-氟腺苷主要诱导人前列腺癌细胞株PC-3M发生G2／M期阻滞和细胞凋亡，p53和p21蛋白参与了这一分子生物学事件。     

TRAIL和抗肿瘤药物协同诱导非小细胞肺癌凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）体外诱导非小细胞肺癌渊亡的效果及和抗肿瘤药物的协同作用。方法用20-160ng／ml浓度范围的rhTRAIL单独及联合阿霉素、顺铂和紫醇处理体外培养的非小细胞肺癌NCI—H460细胞，8h后测定细胞Caspase 3的活性变化，并于24h后用荧光显微镜观察药物处理对NCI—H460细胞核形态的影响。结果经药物处理8h后NCI-H460细胞的Caspase3活性提高，24h后各处理组细胞出现不同程度的细胞核固缩、碎裂等形态学改变，联合用药组上述变化更明显，细胞凋亡率更高。结论TRAIL可以有效诱导非小细胞肺癌的体外凋亡，其效果与作用浓度呈正相关；TRAIL和常用抗肿瘤药物有协同促进肿瘤细胞凋亡的作用。     

TRAIL联合5-氟脲嘧啶体外杀伤胆管癌细胞作用的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人胆管癌的作用及联合化疗药物5-氟脲嘧啶(5-FU)共同作用胆管癌细胞对TRAIL抗瘤活性的影响。方法:应用四氮唑蓝快速比色(MTT)检测单独应用不同浓度TRAIL(1、10、100、1000ng/ml)及不同浓度(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL 10mmol/ml5-FU对胆管癌细胞QBC939活性的抑制作用。结果:单独应用(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL作用于QBC939细胞后抑制率分别为15.6%、31.2%、37.5%、40.6%(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL 10mmol/ml5-FU作用于QBC939细胞后抑制率分别为46.9%、62.4%、68.7%、78.1%,5-FU与TRAIL联合应用对QBC939细胞抑制率明显高于单独应用TRAIL(P<0.05)。结论:TRAIL通过诱导胆管癌细胞凋亡而起到抑癌作用,化疗药物5-FU能加强TRAIL的抗癌活性。     

凋亡素-2配体对胰腺癌细胞PC3和Panc1作用研究

目的 了解凋亡素-2配体(又称肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体，TRAIL)对人胰腺癌细胞株Panc1、PC3凋亡作用的影响。方法 采用MTT法、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞仪方法检测TRAIL对Pancl和PC3体外增殖的影响。结果 TRAIL可诱导胰腺癌细胞Panc1和PC3的凋亡，并呈时间和浓度依赖性，PC3的凋亡率明显高于Pancl。结论 TRAIL可以诱导胰腺癌细胞的凋亡，胰腺癌细胞系对TRAIL的敏感性有差异，TRAIL可能为胰腺癌的生物学治疗提供一种新途径。     

Bexarotene协同TRAIL对白血病细胞株KG1a的凋亡诱导作用

目的 探讨bexarotene联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对白血病细胞株KG1a凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 取对数生长期KG1a,根据不同处理方式分为TRAIL组、bexarotene组、300 ng/mL TRAIL联合bexarotene组和2.0 μmol/L bexaroten联合TRAIL组.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.以先加bexarotene或TRAIL孵育,后加TRAIL或bexarotene处理设计序贯实验,流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blotting分析KG1a细胞型自杀相关因子(Fas)相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)表达变化.结果 TRAIL和bexarotene组的各浓度组间(bexarotene 2.0 μmol/L除外)细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05);两联合用药组的细胞凋亡率均明显高于相应浓度的TRAIL组和bexarotene组(P<0.01).序贯实验表明,bexarotene具有逆转 KG1a对TRAIL耐药的作用(P<0.001).与2.0 μmol/L bexarotene 或300 ng/mL TRAIL 单独用药比较,两者联合应用能显著下调c-FLIP表达(P<0.05).结论 Bexarotene能显著增强TRAIL对KG1a的诱导凋亡作用,下调c-FLIP表达是协同作用的可能机制.     

Bexarotene协同TRAIL对白血病细胞株KG1a的凋亡诱导作用

目的 探讨bexarotene联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对白血病细胞株KG1a凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法 取对数生长期KG1a,根据不同处理方式分为TRAIL组、bexarotene组、300 ng/mL TRAIL联合bexarotene组和2.0 μmol/L bexaroten联合TRAIL组。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。以先加bexarotene或TRAIL孵育,后加TRAIL或bexarotene处理设计序贯实验,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blotting分析KG1a细胞型自杀相关因子(Fas)相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)表达变化。结果 TRAIL和bexarotene组的各浓度组间（bexarotene 2.0 μmol/L除外）细胞凋亡率比较,差异无统计学意义（P>0.05）;两联合用药组的细胞凋亡率均明显高于相应浓度的TRAIL组和bexarotene组(P<0.01)。序贯实验表明,bexarotene具有逆转KG1a对TRAIL耐药的作用（P<0.001）。与2.0 μmol/L bexarotene 或300 ng/mL TRAIL 单独用药比较,两者联合应用能显著下调c-FLIP表达（P<0.05）。结论 Bexarotene能显著增强TRAIL对KG1a的诱导凋亡作用,下调c-FLIP表达是协同作用的可能机制。     

EGCG enhances TRAIL-mediated apoptosis in human melanoma A375 cell line

Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand （TRAIL） is a promising anti-cancer agent. Epigallocatechin-3-gallate （EGCG） is a polyphenolic constituent of green tea. In this study, inhibitory effect of combined use of EGCG and TRAIL on human melanoma A375 cells was examined and the possible mechanism investigated. The cells were divided into 4 groups： control group, EGCG group （EGCG： 10, 20 μg/mL）, TRAIL group （TRAIL： 25 ng/mL） and EGCG＋TRAIL group （combined group）. The growth inhibition was measured in the A375 cells treated with different concentrations of TRAIL （（25, 50, 75, 100, 125, 150 ng/mL） by MTT assay. The apoptosis was assessed by flow cytometry. The expressions of DR4 and DR5 were detected by flow cytometry and western blotting. The activities of caspase-8 and caspase-3 were determined by colorimetric assay. The results showed that TRAIL could dose-dependently inhibit the growth of A375 cells and the IC50 of TRAIL was 150 ng/mL. The apoptosis rate was 11.8% in the TRAIL group, 5%–7% in the EGCG group and 48.9%–59.1% in the combined group. Significant difference was found in the apoptosis rate between the combined group and the EGCG or TRAIL group （P〈0.05 for each）. The expression of DR4 instead of DR5 was significantly increased in the EGCG group. The activity of caspase-3 rather than caspase-8 was substantially enhanced in the EGCG group. These results suggest that EGCG is useful for the TRAIL-based treatment for melanoma.     

Induction of apoptosis in osteogenic sarcoma cells by combination of tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand and chemotherapeutic agents

Background Osteosarcoma is one of the most common primary malignant tumors of bone with poor prognosis. TNF-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) is a member of the tumor necrosis factor (TNF) cytokine family. TRAIL induces apoptosis in various tumor cell lines but is not found to be cytotoxic to many normal cell types in vitro. We investigated the cytotoxic activity of TRAIL and chemotherapeutic agents, including methotrexate (MTX), doxorubicin (DOX) and cisplatin (CDDP), on established osteosarcoma cell line—OS-732.Methods OS-732 cells were incubated with chemotherapeutic agents MTX,DOX and CDDP at various peak plasma concentrations(PPC), 0.1PPC,1PPC and 10PPC, alone or with 100 ng/ml of TRAIL for 24 hours or 48 hours. MTT was used to evaluate the cytotoxic activity of different agents on OS-732. The apoptosis proportion was assayed by flow cytometry. Cellular morphologic changes were observed by phase contrast microscope, scan electron microscope, and transmission electron microscope.Results The inhibitory rate was (24.438±3.414)% with TRAIL of 100 ng/ml for 24 hours. The cells were responsive to DOX and CDDP with a dose-effect relationship (P&lt;0.05). In OS-732 cells, DOX and CDDP cooperated synergistically with TRAIL when incubated the cells with them for 24 hours (the combined inhibitory rate is (58.360±2.146)% and (54.101±2.721)%, respectively). TRAIL alone or drugs alone induced the apoptosis rate was less than 25% (P&lt;0.05). However, the combination of TRAIL and MTX did not present synergistic effects on OS-732 cells (P&gt;0.05, compared with TRAIL alone). Conclusions Osteosarcoma OS-732 cells were not responsive to TRAIL-induced apoptosis. DOX and CDDP sensitize osteosarcoma OS-732 cells to TRAIL-induced apoptosis. The combination of TRAIL and MTX presented no synergistic effects on killing OS-732 cells.     

Plumbagin enhances TRAIL-mediated apoptosis through up-regulation of death receptor in human melanoma A375 cells

Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is a promising anti-cancer agent. However, emergence of drug resistance limits its potential use. Plumbagin is a natural quinonoid compound isolated from plant. In this study, induced apoptosis effect of the combined treatment with plumbagin and TRAIL on human melanoma A375 cell line was examined and possible mechanism was investigated. The cells were divided into four groups: control group, plumbagin group (plumbagin, 5 or 10 μmol/L), TRAIL gr...     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体与肿瘤治疗的关系进展

 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL）能选择性诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡，对机体正常组织细胞无毒副作用，有望成为新型的抗肿瘤制剂。探讨TRAIL的生物学特点及其对肿瘤的治疗策略，能够为其临床应用于肿瘤治疗提供理论基础。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.