趋化因子9在口腔黏膜下纤维化和口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的:探讨趋化因子9(CXCL9)在口腔黏膜下纤维化(OSF)和口腔扁平苔藓(OLP)中的表达以及在炎症和免疫反应中意义。方法:采用免疫组化技术检测66例OSF、17例OLP和10例正常颊黏膜中CXCL9蛋白的表达及定位情况,采用Western blotting定量检测OSF颊黏膜、OLP颊黏膜和正常颊黏膜中CXCL9蛋白表达。结果:43例(65.2%)OSF和16例(94.1%)OLP淋巴细胞和内皮细胞胞质呈CXCL9强阳性表达,而在正常组中CXCL9呈阴性表达。OSF和OLPCXCL9阳性表达率显著高于正常组,而OLPCXCL9阳性表达率明显高于OSF(χ2=4.20,P<0.05)。CXCL9蛋白在OSF中的阳性表达率与病理分期无关(χ2=3.84,P>0.05)。Western blotting结果显示CXCL9蛋白表达水平在正常颊黏膜、OSF和OLP中依次增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CXCL9在淋巴细胞和炎症细胞的趋化、聚集以及OLP和OSF发生发展中发挥了重要作用。     

PTPRZ1在口腔黏膜下纤维性变癌变中的表达及临床意义

目的:研究蛋白酪氨酸磷酸酶Z1型受体(PTPRZ1)蛋白在口腔黏膜下纤维性病变(OSF)癌变中的表达及分布特征,探讨其在OSF癌变发生、发展过程中的作用及临床意义.方法:利用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)及蛋白印迹技术(Western blot,WB)检测36例OSF癌变患者、23例非OSF癌变鳞癌患者及21例身体健康者颊黏膜组织中PTPRZ1蛋白分布及表达差异.采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析.结果:免疫组织化学结果显示,PTPRZ1蛋白在OSF癌变组的颊黏膜中呈阳性表达,阳性表达率为72.22％;在非OSF癌变的颊黏膜鳞癌组织中呈弱阳性表达,表达率为43.47％;在正常颊黏膜组织中呈阴性表达.PTPRZ1蛋白在OSF癌变组及非OSF癌变组中的表达显著高于正常对照组(P＜0.01);OSF癌变组显著高于非OSF癌变的口腔癌组(P＜0.05).Western印迹结果显示,PTPRZ1在正常组织中不表达,在非OSF癌变的口腔鳞癌中微量表达,在OSF癌变组中显著表达.PTPRZ1与一般临床资料相关性分析发现,PTPRZ1与复发及转移呈显著正相关性(rk=0.642,P＜0.01;rk=0.656,P＜0.01).结论:PTPRZ1在OSF癌变的发生、发展及侵袭、转移过程中发挥重要作用,可作为早期诊断分子标志物及治疗的靶基因.     

软骨寡聚基质蛋白、趋化因子9和细胞角蛋白19在口腔黏膜下纤维化中的表达

目的 探讨软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)、趋化因子9(C-X-C motif 9,CXCL9)和细胞角蛋白19(keratin 19,KRT19)在口腔黏膜下纤维化(oral submucousfibrosis,OSF)特征性病理变化形成过程中的作用.方法 采用免疫组化技术检测66例OSF和14例正常颊黏膜标本中3种蛋白的表达与定位,同时采用Western blotting和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别在OSF患者和正常颊黏膜组织中检测其蛋白和mRNA的表达.结果 36例(55%)OSF呈现COMP阳性表达,并与嚼槟榔的时间和病理分期有关(P<0.05);CXCL9阳性表达的OSF病例有43例(65%).正常颊黏膜中KRT19均在基底细胞胞质内呈强阳性表达,OSF中只有7例(11%)出现基底细胞KRT19弱阳性表达.Western blotting和RT-PER结果与免疫组化结果一致.结论 COMP、CXCL9和KRT19在OSF发生、发展过程中发挥着重要作用.     

RUNX3和RASSF1A在口腔黏膜下纤维性变及其癌变组织中的表达

目的：研究Runt相关转录因子3（RUNX3）、RAS相关区域家族1A（RASSF1）在口腔黏膜下纤维性变（OSF）及其癌变组织中的表达与分布,初步探讨二者在OSF癌变过程中的作用。方法：采用免疫组织化学SP法检测10例正常口腔黏膜组织、35例OSF组织、10例OSF癌变组织中RUNX3、RASSF1A蛋白的表达及分布。结果：RUNX3在正常口腔黏膜组阳性表达率为90.00%（9/10）,OSF组为85.71%（30/35）,OSF癌变组为30.00%（3/10）,正常对照组与OSF组无统计学差异,OSF癌变组显著低于正常对照组（P〈0.05）及OSF组（P〈0.05）。RASSF1A在正常口腔黏膜组阳性表达率为80.00%（8/10）,OSF组为62.86%（22/35）,OSF癌变组为20.00%（2/10）,正常对照组与OSF组无统计学差异,OSF癌变组织组显著低于正常对照组（P〈0.05）及OSF组（P〈0.05）。结论：RUNX3和RASSF1A表达下调或缺失与OSF癌变有关。     

口腔黏膜下纤维性变组织中Smad7蛋白的表达研究

目的检测Smad7蛋白在口腔黏膜下纤维性变(OSF)组织中的表达及分布,探讨其在OSF发病机制中的作用。方法采用免疫组化抗生蛋白链菌素生物素复合体法(strept Avidin-Biotin complex,SABC),用Smad7兔抗人多克隆抗体检测20例OSF病变组织及10例正常口腔黏膜组织中的Smad7蛋白的表达及分布。结果Smad7在OSF病变组织中为弱阳性表达,在正常口腔黏膜组织中为阴性表达,差别具有显著意义(P<0.05)。结论Smad7蛋白在OSF病变组织中弱阳性表达,在OSF发病机制中有重要作用。     

TLR2在口腔黏膜下纤维性变组织中的表达及意义

目的：通过检测口腔黏膜下纤维性变（OSF）组织中TLR2的表达情况,初步探讨TLR2在OSF发病中的作用。方法：选取OSF患者30例（早、中、晚期各10例）为实验组,正常者5例为对照组,每例研究对象取其口腔颊黏膜,采用免疫组化SABC法检测各组织中TLR2的表达情况。结果：正常口腔颊黏膜组织中TLR2呈阳性表达,在OSF组织中TLR2表达明显增强（P〈0.05）,主要表达于黏膜下组织;OSF早、中、晚期组织中TLR2的表达无显著性差异（P〉0.05）。结论：与正常口腔黏膜相比,OSF组织中TLR2的表达增高,提示TLR2在OSF发病中起一定的促进作用。     

单核细胞趋化蛋白-1在口腔黏膜下纤维性变中的表达及意义

目的：探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在口腔黏膜下纤维性变（OSF）组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测45例OSF和15例正常口腔黏膜组织中MCP-1的表达及分布情况。结果：OSF组织中MCP-1的表达较正常组织增加,差异有统计学意义（P〈0.01）,MCP-1在OSF早期组织与中、晚期组织中的表达有显著性差异（P〈0.05）。结论：MCP-1可能通过趋化、激活免疫和炎症细胞,在OSF发生发展中发挥重要作用。     

口腔黏膜下纤维化中VEGF和TSP表达及相关性的研究

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血小板反应蛋白(thrombo-spondin,TSP)在口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis,OSF)中的表达,探讨两者的相关性及在OSF发病中的作用.方法:选取30 例OSF患者,其中早、中、晚期各10 例, 5 例健康志愿者作为对照组.取每例研究对象口腔颊黏膜,采用免疫组化SP法检测VEGF和TSP的蛋白表达. 结果:VEGF在OSF早期较正常口腔黏膜中表达增高,中、晚期逐渐下降,其中早期组与正常组、中期组、晚期组比较均有显著性差异(P<0.05).TSP在OSF早、中期表达持续增高,晚期稍下降,各组间差异无显著性(P>0.05).病变组织黏膜下层中VEGF与TSP呈负相关(r=-0.620,P<0.05).结论:VEGF和TSP的异常表达可能是OSF微血管病变的重要发病机制之一.     

核转录因子-κB在金地鼠颊囊癌变过程中的表达研究

目的　探讨核转录因子-κB家族成员的重要亚基p65及其抑制蛋白IκBα在金地鼠颊囊鳞癌发生过程中的 表达及意义。方法　建立金地鼠颊囊癌变的动物模型,采用Western blot法检测金地鼠正常颊黏膜、上皮单纯增生 黏膜、上皮异常增生黏膜和鳞癌组织所提取的核蛋白中p65的表达差异;采用SABC免疫组织化学法检测在金地鼠 颊黏膜正常上皮、上皮单纯增生、上皮异常增生、鳞状细胞癌中IκBα的表达变化。结果　正常黏膜和上皮单纯增生 黏膜中,p65表达很弱,但普遍存在IκBα的表达,该表达多局限于黏膜基底层和棘层底部细胞的胞浆中。随着上皮 异常增生的出现,p65表达增强,与正常黏膜和单纯增生黏膜相比有统计学意义(P<0.01),而IκBα表达则显著下 降(P<0.05)。鳞癌组织中p65的表达显著高于正常黏膜和异常增生黏膜(P<0.01),IκBα的表达显著升高,明显 高于上皮异常增生黏膜(P<0.01),甚至超过正常水平(P<0.01)。结论　p65在金地鼠颊囊鳞癌发生、发展过程中 被激活。p65和IκBα在金地鼠颊囊癌变过程中的表达异常,上皮异常增生阶段p65的表达上调而IκBα的表达下调, 可能是口腔黏膜上皮癌变过程中的早期事件,可作为口腔早期癌变监测的生物学指标。     

核受体共激活因子7在槟榔碱诱导的上皮间充质转化中的生物学功能

目的研究核受体共激活因子7(nuclear receptor coactivator 7,NCOA7)在口腔黏膜下纤维性变(OSF)中的表达及意义,并探讨其在人口腔角质细胞株HOKs间充质转化过程中的作用。方法收集OSF组织30例及正常口腔黏膜组织15例,采用免疫印迹法检测NCOA7、上皮间充质转化相关标记物在OSF组织及正常黏膜组织中蛋白水平的表达情况;以Western blot法检测槟榔碱刺激后HOKs中NCOA7、上皮及间充质标记物的蛋白水平变化。结果 NCOA7在30例OSF组织高表达(P<0.05);同时在细胞基底层出现间充质标记物的阳性表达。NCOA7在槟榔碱刺激的HOKs中高表达,且具有槟榔碱浓度依赖性(P=0.004 3);随着槟榔碱浓度的升高,上皮标志物表达逐渐下调,间充质标记物表达逐渐升高。结论口腔黏膜下纤维性变组织中高表达的NCOA7,可能参与调控上皮细胞间充质转化过程,进一步促进纤维化进程。     

化疗前后Caspase-3和P73在颊粘膜鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究Caspase-3和P73在颊粘膜鳞状细胞癌中应用奥铂联合替加氟化疗前后的表达及临床意义。方法选取30例颊粘膜鳞状细胞癌患者的癌组织为实验组,10例颊粘膜良性肿瘤患者的正常黏膜为对照组。将癌组织和正常粘膜组织分为三组,即A组(化疗前)、B组(化疗后)和C组(正常粘膜)。应用免疫组织化学SP法和流式细胞术,检测Caspase-3和P73在各组中的表达。结果①免疫组化:Caspase-3在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中阳性率为69.65±2.75%,化疗后为83.96±3.37%,正常黏膜组织阳性率为98.53±1.08%;P73在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中阳性率为89.57±4.0%,化疗后为71.19±12.3%,正常黏膜组织阳性率为54.85±4.43%。②流式细胞术:Caspase-3在化疗前颊粘膜鳞状细胞癌中的表达为0.715±0.063,化疗后为0.880±0.038,正常口腔粘膜细胞为1.000±0.091。各组之间比较有显著性差异(P<0.05)。P73在化疗前为1.310±0.065,化疗后为1.134±0.037,正常粘膜细胞为1.000±0.091。各组之间比较有显著性差异(P<0.05)。结论 Caspase-3和P73可能是颊黏膜癌变的早期事件,可作为癌变监测和临床疗效观察的辅助指标。     

LncRNA H19与OSF发生及癌变的关系

目的:探讨lncRNA H19在口腔黏膜下纤维性变(OSF)发生及癌变过程中的表达变化及其意义.方法:实时荧光定量PCR技术分别检测12例正常颊黏膜组织、33例OSF颊黏膜组织、31例伴OSF颊癌组织中的LncRNA H19的表达水平.结果:LncRNA H19在颊黏膜组织、OSF颊黏膜组织、伴OSF颊癌组织中的相对表达量分别为1.17±0.37、3.44±1.08、8.88±1.78,组间两两之间比较,P＜0.01.结论:LncRNA H19可能参与OSF的发生及癌变.     

bFGF在口腔黏膜下纤维性变组织中的表达研究

目的:检测碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)在正常颊黏膜(normal buccalmucosa,NBM)、口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis,OSF)上皮组织中的表达,探讨bFGF在OSF发生发展中可能发生的作用。方法:收集10例NBM、30例颊部OSF上皮组织,利用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)、聚合酶链式反应(PCR)和Western Blotting(WB)的方法研究bFGF在其中的分布和表达情况。结果:IHC提示:bFGF在NBM和OSF上皮组织中均有表达。在正常黏膜中,bFGF主要表达在黏膜下层的成纤维细胞胞浆中。在OSF早期,bFGF主要表达在上皮细胞间隙,基底膜和细胞浆中,发展到中晚期后则逐渐扩大表达,广范分布在细胞核中。bFGF的阳性表达率与其病理级别呈正相关。PCR提示正常黏膜组织中有bFGF mRNA的表达。在OSF组织中,bFGF mRNA随病变的加重而表达增加。WB提示:NBM上皮组织中未探及bFGF蛋白的表达,在OSF标本中bFGF随病变的加重而表达增强。结论:bFGF在OSF的发生发展中起着一定的作用。     

常山酮对口腔黏膜下纤维性变SD大鼠模型抗纤维化作用研究

目的　探讨常山酮对博来霉素致口腔黏膜下纤维性变（oral submucous fibrosis,OSF）大鼠的药理作用。方法　将40只SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只。实验组大鼠在麻醉状态下,于双侧颊黏膜下局部注射1 mg/mL 博来霉素稀释液100 μL,每天1次,共持续给药8周;对照组大鼠注射等量的生理盐水。分别于实验前和给药2、4、6、8周时用游标卡尺对每只大鼠进行张口度测量,每次每只大鼠测量3次,求平均值。建模过程中实验组大鼠有3只死亡。8周后分别处死建模成功的实验组大鼠5只和全部对照组大鼠,取其双侧颊黏膜组织置于多聚甲醛中固定。另建模成功的实验组12只大鼠随机分为常山酮治疗组和常山酮对照组各6只。常山酮治疗组大鼠给予1 μg/mL常山酮稀释液 200 μL,给药方式同建模时博来霉素的注射,每天1次,持续6周;常山酮对照组大鼠给予相同剂量的生理盐水。分别于2、4、6周时对每只大鼠进行张口度测量,测量方法同上。6周后处死全部大鼠,取其双侧颊黏膜组织置于多聚甲醛中固定。采用HE染色观察各组大鼠颊黏膜组织病理变化情况。结果　（1）20只SD大鼠局部注射博来霉素 8周诱导出了17只临床和病理上与人OSF相似改变的SD大鼠模型;（2）局部给药常山酮6周缓解了OSF模型鼠的纤维化情况。结论　常山酮可改善博来霉素致OSF大鼠的纤维化情况,阻止纤维化的进一步发展。     

口腔黏膜下纤维性变中MMP-2基因的表达及意义

目的：检测口腔黏膜下纤维性变中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的表达并探讨其病理意义.方法：抽提11例口腔黏膜下纤维化组织和10例正常口腔黏膜组织的总RNA,通过逆转录聚合酶链反应（PF-PCR）检测MMP-2mRNA在口腔黏膜下纤维性变患者颊黏膜中的表达并与正常口腔黏膜进行比较.结果：口腔黏膜下纤维性变患者颊黏膜组织中MMP-2 mRNA表达高于正常颊黏膜（p＜0.05）.结论：MMP-2基因的表达与口腔黏膜下纤维性变组织重塑过程密切相关.