新分离呼肠病毒的空斑试验及病毒纯化

目的：建立新分离呼肠病毒（reovirus）的空斑技术，进行病毒纯化，为呼肠病毒生物学和分子生物学的研究奠定基础。方法：4株新分离呼肠病毒的早代毒种经L929细胞连续传代，当产生细胞病变后进行空斑试验，加营养琼脂培养6d后加中性红，24h内挑取空斑，扩增一次后做PCR鉴定。取呼肠病毒PCR阳性病毒进行第2次克隆纯化。结果：4株新分离呼肠病毒经L929细胞连续传2～4代，均能观察到明显的细胞病变。用10^-3和10^-4接种L929单层细胞，第6～7天均能产生空斑，空斑呈圆形，直径为0．2～1．0mm，并分别测定其空斑滴度（PFU／ml）。两次纯化后进行PCR检测，呼肠病毒基因扩增阳性、脊髓灰质炎病毒基因扩增阴性。结论：4株呼肠病毒的空斑出斑规律，通过两次克隆，获得纯化的病毒。     

西藏新分离环状病毒毒粒沉降系数及分子量的研究

目的：用分析超离心测定病毒毒粒沉降系数及分子量的方法,对从西藏地区新分离的环状病毒Ｔｉ３０１０株进行分类鉴定。方法：从病毒感染的ＢＨＫ１３细胞悬液中,用ＰＥＧ６０００沉淀病毒,ＣｓＣｌ密度梯度离心纯化并测定病毒浮力密度,用分析超速离心机测定病毒毒粒沉降系数（Ｓ）和分子量。结果：病毒在ＣｓＣｌ等密度沉和中呈现两条相分隔的区带,上部区带为密度ρ２＝１．２８８ｇ／ｍｌ不含核酸的空壳病毒粒子,下部区带为密     

西藏地区新分离环状病毒基因组特性研究

目的：对从西藏地区新分离的环状病毒（Ｔｉ３０１０株）进行分类和鉴定。方法：从病毒感染的ＢＨＫ１３单层细胞中提取病毒基因组ＲＮＡ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析ＲＮＡ的耐ＲＮＡ酶特性和基因组ＲＮＡ特征。结果：ＲＮＡ抵抗ＲＮＡ酶消化,基因组ＲＮＡ由１０个片段组成,带形分布为３－３－２－２,相对分子质量范围在（０．７２～３．１８）×１０６,总相对分子质量为１６．８４×１０６。结论：结合该病毒的一些生物学性状,显示了西藏地区特殊生态环境下新分离病毒的独有特征,Ｔｉ３０１０可能是环状病毒属的一个新成员。     

SEN病毒中国分离株基因克隆及序列分析

目的：测定SENV-D亚型中国分离株的基因组序列，并对其进行初步分析。方法：根据国外已发表的SEN病毒基因序列设计特异性引物，应用套式PCR方法从一份非甲-非戊型(non-A-E)肝炎患者血清中，分段扩增了包括SENV-D型所有编码区(ORFs)长3175bp的DNA片段，将其克隆到T载体后测序。结果：测序结果经BLAST软件分析，与国外发表的3株D型SEN病毒SENV-D(AX025730)，SENV-D(AB059352)，TTV(AB028668)的核苷酸序列同源性分别为90％，88％和91％；与2株D型SEN病毒SENV-D(AX0Z5730)，TTV(AB028668)0RF1所编码蛋白的氨基酸同源性分别为93％和92％。ORF1蛋白中含有Rep蛋白(在病毒复制中起作用的一种蛋白)的两个保守基序，此外还有一个保守的ATP／GTP结合基序(P-loop)以及若干个高度保守的蛋白激酶磷酸化位点。结论：测定得到了SENV-D亚型中国分离株的基因组序列，有助于其检测方法及致病性的研究，并为研究SEN病毒的进化地位提供方便。     

新分离呼肠病毒BYD株生物学特性的研究

呼肠病毒为二十面体对称的双层衣壳结构，无包膜，能抵抗脂溶剂。完整的病毒颗粒直径为60-80nm；其核酸为RNA，分节，由10个片段组成。目前人呼肠病毒分为3个不同的血清型，这3个血清型都能凝集人O型红细胞。该病毒国外研究较多，国内研究少见。     

人免疫缺陷病毒及相关病毒形态学研究

引起艾滋病的人免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus HIV)属于逆转录病毒科慢病毒亚科慢病毒属。深入了解HIV及相关病毒的形态及形态发生过程,对进一步了解致病过程甚为重要。1 纯化HIV的形态学鉴定引进国外分离的HIVI病毒株、经人淋巴细胞系H9细胞悬浮培养适应后,大量培养经3批次微孔滤膜超滤浓缩及初步纯化,PGE沉降后行蔗糖密度梯度离心进一步纯化,分部收集的峰值(蛋白吸收峰)管里的病毒悬液,分别加入戊二醛(3.1%)固定处理后2%磷钨酸盐染色制备3     

人免疫缺陷病毒HB-J株的分离和生物学特性研究

目的：分离和鉴定我国流行的人免疫缺陷病毒（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ,ＨＩＶ）毒株,研究我国ＨＩＶ毒株的生物学特性。方法：周外用血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ,ＰＢＭＣ）共培养的方法分离ＨＩＶ,用观察细胞病变、检测Ｐ２４抗原和前病毒ＤＮＡ的方法监测病毒生长的情况。结果：在建立共培养的第１２天观察到明显的细胞病变,主要表面为大泡样细胞和多核巨细胞。接种第９天细胞培养上清液的Ｐ２４抗原由阴性转为阳性,并且浓度迅速增加,接种第１２天浓度即达到１７８０ｐｇ／ｍｌ,第１４天达到峰值,为２３２０ｐｇ／ｍｌ。但该株病毒的ＰＢＭＣ培养上清液转种于ＭＴ４细胞后,培养上清液Ｐ２４抗原和前病毒ＤＮＡ始终为阴性且不出现细胞病变。结论：用ＰＢＭＣ共培养的方     

我国新分离呼肠病毒血清型鉴定

在 2 0 0 3年上半年SARS流行中 ,本实验室从北京地区临床确诊的SARS患者的含漱液和咽拭子标本以及尸检肺标本中 ,先后分离到 4株呼肠病毒[1 ] 。经血清交叉中和试验证明 ,从不同地区、不同患者所分离到的呼肠病毒其抗原性均相同[2 ] 。最近又对其中 1株呼肠病毒进行了血清型的鉴定。抗呼肠病毒 1～ 3型豚鼠免疫血清由解放军第 30 2医院病毒室制备 ,其中 1型血清中和效价为 1∶32 0 (1980年 4月 5日制备 ) ,2型血清中和效价为 1∶32 0 (1980年 4月 12日制备 ) ,3型血清中和效价为 1∶16 0 (1983年 7月 15日制备 ) ,均为 - 80℃保存 ,近期…     

从SARS患者标本中分离的呼肠病毒的分纯及鉴定

目的：对SARS患者标本中分离的4株呼肠病毒进行分纯和鉴定。方法：根据呼肠病毒与有膜的冠状病毒对乙醚敏感性的不同对呼肠病毒进行分纯；对分纯后的呼肠病毒进行理化性质鉴定和血凝试验；用抗呼肠病毒猴血清对4株呼肠病毒进行抗原性分析。结果与结论：4株新分离呼肠病毒的理化性质符合呼肠病毒科呼肠病毒属的特性；4株呼肠病毒的抗原性相同；该病毒尚人“O”型红细胞未见有血凝，与已报道的呼肠病毒有所不同。     

河南新乡2008年手足口病病原分离鉴定及病毒基因组特征

目的:对2008年分离自河南新乡手足口病患者粪便标本的病原进行分离鉴定及全基因组序列测定,并同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解新分离病毒基因组序列特征及可能的传播来源.方法:将手足口病患者粪便标本接种敏感细胞进行分离传代培养,制备抗原片进行间接免疫荧光检测,采用特异性引物进行PCR鉴定,将病毒基因组分为8个片段进行RT-PCR扩增,扩增产物纯化后进行PCR测序.通过末端重叠序列拼接成全长病毒基因组序列,利用生物信息学软件对序列进行比对分析,绘制进化树.结果:测序获得的3株EV71病毒基因组全长均为7 405 nt,VPI氨基酸序列同源性达100%.Blast分析表明F3(F8)-Henan-08毒株均与安徽阜阳2008年分离的EV71毒株同源性最高,而F4-Henan-08毒株与我国台湾省2004年分离的EV71毒株同源性最高.序列进化分析表明,新分离毒株属于C4基因亚型.结论:新分离的河南EV71毒株与安徽阜阳分离的毒株可能具有相同来源.     

1株蝙蝠来源细小病毒的分离鉴定

目的：对1株蝙蝠来源病毒进行分离鉴定,进行简单的基因分析。方法从云南沧源县8个居民地附近捕获50只棕果蝠并制作组织标本,采用细胞培养分离病毒,采用 cDNA-RAPD 方法扩增序列,采用分子克隆进一步扩增序列,将序列在 NCBI 上进行 BLAST 比对,采用 DNAMAN5.0进行同源性分析,采用 MEGA 5建序列进化树。结果50份接毒细胞中,6份细胞出现细胞病变,cDNA-RAPD 扩增得到1份阳性片段,测序大小为614 bp,经比对该病毒株是细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属牛细小病毒种的一个毒株。结论成功分离并鉴定该毒株,确定该病毒是牛细小病毒的一个新的基因型。     

广东佛山地区登革热病毒的分离与鉴定

1978年7～10月间,广东佛山地区连续发生二千多例突然高热、剧烈头痛、肌痛、关节痛,有皮疹的疑似登革热病人。我们对部分病人作了病毒分离,并在军事医学科学院微生物流行病研究所的协作指导下,对分离的病毒进行了系统的鉴定。     

新分离呼肠病毒的致病性及其与SARS相关性的实验动物研究

尽管2003年上半年全球爆发的严重急性呼吸综合征(SARS)经世界卫生组织证实为一种SARS-冠状病毒(SARS-CorV)引起，但临床的一些证据表明还不能排除有其他微生物的作用。2003年3月，我们从北京第一例SARS患者A及其母亲的痰漱液和咽拭子标本中分别分离出BYD1和BLD1两株呼肠病毒(reovirus，Re0V)，随后又从患者A的父亲(死于SARS)的尸检脾组织样本中同时分离出SARS-CorV和     

龙眼肉多糖分离及结构研究

目的从龙眼肉中提取分离粗多糖LYRP,测定纯化后的组分分子质量及其单糖成分。方法采用超声浸提法、酶水解法去蛋白质、DEAE-纤维素和Sephacryl S-300柱层析法得到多糖组分LYRP2—1。高效凝胶渗透色谱测定分子质量,完全酸水解得到单糖成分,紫外光谱和傅立叶转换红外光谱法对其定性分析。结果均一LYRP2-1具有多糖特征性的紫外和红外吸收峰,分子质量为1．1×10^5U,由葡萄糖组成。结论分子质量为1．1×10^5H的LYRP2-1是由葡萄糖组成,α、β两种半缩醛羟基构型并存的吡喃环多糖。     

日本KAWASAKI BK117型救护直升机

由日本KAWASAKI重工航空航天集团与欧洲直升机(eurocopter)公司联合开发生产的急救医学勤务(EMS)直升机—BK 117,可提供给医生所需的一切设备。宽敞的,铺设拆卸自由的平地板的机舱保证了最理想的EMS设计和满足“黄金时间(Golden hour)”的快速反应。     

山东奶山羊中山羊关节炎脑炎病毒的分离鉴定

山东奶山羊中山羊关节炎──脑炎病毒的分离鉴定王治才，龚成润，李建军（新疆畜牧科学院兽医研究所）武福美，梁万敏，马俊（山东省兽医总站）（山东栖霞红旗牧场）自１９８０年Ｃｒａｗｆｏｒｄ确认山羊关节炎──脑炎（ＣＡＮ）的病源以来［１］，该病对奶山羊饲养业的...     

犬细小病毒抗原变异株的分离与鉴定

目的：从犬粪便病料中分离和鉴定犬细小病毒（canine parvovirus，CPV）抗原变异株CPV-2a和CPV-2b。方法：将疑似犬细小病毒感染的病犬粪便接种猫肾细胞，进行病毒分离、常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定。结果：常规病毒学鉴定和分子生物学鉴定表明，分离得到5株犬细小病毒抗原变异株，其中2株为CPV-2a，3株为CPV-2b。结论：本研究分离的5株犬细小病毒为研究CPV变异及制备CPV特异性诊断试剂奠定基础。     

新疆地区蓝舌病病毒的分离鉴定及编码VP5外壳蛋白的基因序列分析

对分离的新疆蓝舌病病毒（BTV）株编码VP5蛋白的S6基因序列进行比对分析,旨在了解分离毒株的基因遗传变异及进化关系,以期为新疆地区蓝舌病疫苗研究提供科学依据。本研究对绵羊全血中分离的疑似BTV分离毒株,提取RNA进行NS1-PCR扩增,克隆测序。应用全长cDNA扩增（full-length amplification of cDNAs,FLAC）技术获得S6基因序列,NCBI Blast比对S6基因同源性,MEGA5.0软件绘制进化树,分析BTV新疆分离株与蓝舌病病毒28个血清型S6基因的序列遗传进化关系。结果表明,新疆地区疑似蓝舌病病毒分离株NS1片段与蓝舌病病毒NS1片段序列相似性为98.04%,获得1株蓝舌病病毒。BTV分离株S6基因序列仅与GenBank中BTV strain XJ1407株、BTV strainMNG2/2016株及BTV-18 strain USA2014/FL株的S6基因具有同源性,且同源性均低于90%,分别为88.11%,87.35%以及70.92%。BTV分离株S6基因序列进化关系分析结果表明,分离株与BTV-18血清型在同一进化分支,与BTV-27...     

临床分离细菌的分布特征及耐药性研究

 目的 探讨临床常见病原菌的分布及耐药性特征,为临床合理使用抗生素提供依据.方法 对2005年从临床标本中分离出的768株致病菌的分布特征与耐药性趋势进行回顾性和前瞻性分析.结果 临床常见病原菌中,革兰阳性球菌占34.2%,革兰阴性杆菌占65.8%,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)与产广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的相对分离率分别为26.5%、38.6%和12.1%,铜绿假单胞菌仍是检出率最高的致病菌,这些菌株对临床常用抗生素均有不同程度耐药性,多重耐药性亦呈增加趋势.结论 重视细菌培养及药敏结果的准确应用,密切监测细菌耐药性变迁,对临床有效控制感染具有十分重要的意义.