p38丝裂素活化蛋白激酶信号传导通路对低氧预处理后心脏成纤维细胞血红素氧化酶-1基因表达的影响

目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号传导对低氧预处理(HPC)的细胞保护作用以及HPC后血红素氧化酶-1(HO-1)mRNA表达的影响。方法:选用新生Wistar大鼠心脏进行成纤维细胞培养,给予HPC及低氧/复氧处理(HR)。药物处理组在HPC和HR处理过程中向培养液中加入SB203580。测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度和细胞HO-1 mRNA表达量。结果:低氧/复氧后,HPC/SB组LDH浓度显著高于HPC/NSB组(P<0.05)。HR组低氧/复氧后各亚组LDH浓度均显著升高(P<0.01,P<0.01);低氧/复氧处理前HPC组中NSB亚组于低氧预处理后HO-1 mRNA表达显著上升(P<0.001),低氧/复氧处理后其表达有所下降;SB亚组其表达也显著上升(P<0.01)。HR组中各亚组于低氧/复氧处理后HO-1 mRNA表达也显著上升(P<0.01)。结论:对培养的心脏成纤维细胞给予低氧预处理能够减轻其后低氧/复氧对细胞的损伤,低氧预处理较低氧/复氧处理更能够显著诱导心脏成纤维细胞HO-1 mRNA的表达。     

α-硫辛酸对H9 c2心肌细胞低氧及低氧/复氧损伤的保护作用及其机制探讨

目的：探讨α-硫辛酸(α-LA)对H9c2心肌细胞低氧及低氧/复氧损伤的保护作用及其作用机制。方法研究包括H9 c2心肌细胞低氧实验和低氧/复氧实验两部分,分成常氧组、低氧组或低氧/复氧组、LA组、乙醛脱氢酶抑制剂异黄酮苷(Daidzin)组(Daidzin组)、二甲亚砜(DMSO)溶剂对照组( DMSO组)。采用噻唑蓝( MTT)比色法检测心肌细胞存活率;微量酶标法测定乳酸脱氢酶( LDH)活性;ELISA法检测心肌细胞乙醛脱氢酶2(ALDH2)活性;硫代苯巴比妥酸法检测丙二醛( MDA)水平。结果与常氧组比较,低氧组及低氧/复氧组细胞存活率均下降(P<0．01),LDH活性及MDA含量均升高(P<0．01);与低氧组或低氧/复氧组比较, LA组细胞存活率上升( P <0．01)、ALDH2活性增加( P <0．05)、LDH活性及MDA含量降低(P<0．01);LA组、Daid-zin组、DMSO组3组比较, LA组与DMSO组间存活率、AL-DH2、LDH、MDA比较差异均无统计学意义( P>0．05);Daid-zin组与LA组、DMSO组比较,细胞存活率及ALDH2活性降低(P<0．05),LDH活性及MDA含量升高(P<0．05),差异均有统计学意义( P<0．05)。结论α-LA可通过上调AL-DH2活性并减少过氧化终产物形成,最终减轻心肌细胞低氧及低氧/复氧过程中的氧化损伤。     

低氧预适应对阿霉素致心肌细胞损伤的保护作用

目的观察低氧预适应(HPC)对阿霉素致心肌细胞损伤的保护作用。方法将培养的心肌细胞随机分为3组:对照组、阿霉素组、HPC+阿霉素组。MTT法测定心肌细胞存活率;试剂盒检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)半定量检测核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达量的改变。结果与对照组相比,阿霉素组心肌细胞存活率显著下降(P0.01),细胞LDH漏出量显著增加(P0.01),NF-κB蛋白表达水平增高显著(P0.01);与单纯阿霉素组相比,低氧预适应组心肌细胞存活率显著升高(P0.01),细胞LDH漏出量显著降低(P0.01),NF-κB蛋白表达水平明显降低(P0.01)。结论阿霉素导致心肌细胞氧化损伤,低氧预适应可能通过抑制NF-κB蛋白表达水平对其起保护作用。     

维生素E联合红景天对低氧复合运动小鼠骨骼肌保护作用的研究

目的 探讨维生素E联合红景天对低氧复合运动小鼠骨骼肌细胞损伤的保护性作用及其机制.方法 将40只ICR小鼠按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组均为20只.对照组小鼠给予灌胃维生素E(40 mg·kg-1·d-1),观察组小鼠给予灌胃维生素E(40 mg·kg-1·d-1)+红景天提取液(20 g·kg-1·d-1),两组小鼠连续给药15 d后进行为期4周的低氧(氧浓度11.3%)复合运动(5 ℃,15 m/min,60 min/d).最后一次运动后处死小鼠检测骨骼肌血清甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧类物质(ROS)、丙二醛(MDA);逆转录PCR(RT-PCR)法检测骨骼肌B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA水平的表达,进行氧复合运动过程中(运动前、1、2、4周)监测外周血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH).结果 运动后各时间点观察组CK与LDH活性均低于对照组(P<0.05).观察组小鼠骨骼肌组织的GSH-PX、SOD活性明显高于对照组(P<0.05),而ROS、MDA低于对照组(P<0.05);观察组小鼠骨骼肌组织Bax基因mRNA水平的表达与Bax/Bcl-2比值均明显低于对照组(P<0.05),而Bcl-2基因mRNA水平的表达明显高于对照组(P<0.05).结论 红景天联合维生素E能通过纠正低氧运动下的氧化与抗氧化失衡而抑制凋亡基因的表达.     

低氧预处理对心脏成纤维细胞血红素氧化酶1基因表达的影响

目的：探讨离体培养的心脏成纤维细胞低氧预处理后血红紊氧化酶1（HO-1）mRNA的表达及其经时变化。方法：选用新生Wistar大鼠心脏进行成纤维细胞培养，给予低氧预处理（HPC）及低氧／复氧处理（H／R）。测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）浓度。自处理后心脏成纤维细胞提取总RNA并进行逆转录扩增合成cDNA。应用即时定量PCR对HO-1mRNA进行定量分析。结果：HPC后HPC组LDH浓度未见显著升高；经过H／R后，H／R组LDH浓度显著高于HPC组（P〈0．01）。HPC后HO-1mRNA表达迅速增加，30min时达到高峰，此后逐渐下降，24h基本恢复到基线水平。结论：新生大鼠心脏成纤维细胞低氧预处理可减少低氧／复氧对细胞的损伤，低氧预处理后HO-1mRNA被显著诱导，并在12h内维持较高水平，24h后基本恢复至基线水平。     

在模拟低氧环境下心肌细胞HIF-1与CT-1的相互作用

目的:研究低氧环境下大鼠心肌细胞系H9C2细胞中HIF-1与CT-1的相互作用。方法:氯化钴(CoCl2)模拟低氧环境。采用CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率。化学合成siRNA片段,并通过li-pofectamine 2 000转染大鼠心肌细胞系H9C2。采用Real-time PCR和Western-blot技术分别检测HIF-1α和CT-1的mRNA和蛋白质水平。结果:低氧处理48h后,干扰组(转染针对HIF-1α的siR-NA的H9C2)中CT-1mRNA和蛋白水平较对照组(转染无义干扰片段的H9C2)明显减少(P<0.05)。低氧3d和4d后,加入CT-1组的心肌细胞存活率较对照组高(P<0.05),HIF-1mRNA表达水平与对照组无显著差异(P>0.05),HIF-1蛋白水平增加。结论:在培养心肌细胞中模拟低氧环境,HIF-1表达减少伴随着CT-1表达减少,加入CT-1后,HIF-1蛋白表达也增加,HIF-1与CT-1相互作用。     

低氧培养PC12细胞HO的表达

目的研究PC12细胞在低氧培养状态下,血红素氧合酶(HO)在细胞内的表达。方法将PC12细胞分为常氧对照组(C组)、低氧组(H组)和低氧加血红素氧合酶抑制剂卟啉锌-9组(H+ZnPP组)。检测2小时时间点PC12细胞血红素氧合酶的表达。结果氧应激状态下,HO-1明显表达,HO-2无表达;H组HO水平与C组、H+ZnPP组比较明显升高(P&lt;0.01)。与C组比较,H+ZnPP组的HO水平高于C组(P&lt;0.01)。结论低氧状态下,PC12细胞表面HO-1高表达,HO-2无明显表达。     

低氧肺动脉高压时血红素氧合酶基因表达状况的研究

目的 探讨血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)基因在低氧肺动脉高压大鼠肺动脉组织中的表达及一氧化碳(carbon monoxide,CO)对其的影响.方法 60只Wistar大鼠随机分为5组:常氧组;低氧肺动脉高压组;血晶素组;锡原卟啉组;低浓度CO组(n=12).采用紫外分光光度计、逆转录-聚合酶链反应、免疫组织化学染色和原位杂交进行检测.结果 ①HO-1活性:低氧组、血晶素组、低浓度CO组肺动脉组织HO-1活性以胆红素生成量计算,均升高,其中血晶素组最高,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01).②逆转录-聚合酶链反应:各组大鼠肺动脉HO-2 mRNA表达没有明显变化,均保持稳定.缺氧组、血晶素组、锡原卟啉组和低浓CO组HO-1 mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加深2～3级,低浓度CO组肺动脉外、中、内膜细胞质均明显加深4级.处理前后HO-2的染色变化不大.结论 低氧肺动脉高压时,肺动脉组织HO-1基因的表达升高,可能在肺动脉高压的发生和发展中起一定作用. mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加深2～3级,低浓度CO组肺动脉外、中、内膜细胞质 明显加深4级.处理前后HO-2的染色变化不大.结论 低氧肺动脉高压时,肺动脉组织HO-1基因的表达升高,可能在肺动脉高压的发生和发展中起一定作用. mRNA均明显高于正常对照组,以低浓度CO组升高最明显(P<0.01).血晶素组和低浓度CO组均显著高于缺氧组(P<0.01),而锡原卟啉组低于缺氧组.③免疫组织化学染色:低氧组肺动脉内膜、中膜的HO-1表达均明显升高,血晶素组和低浓度CO组更高,锡原卟啉组和常氧组均有很微弱表达.④原位杂交:低氧组肺动脉3层均加     

针刺预处理促进急性低氧大鼠海马腺苷A1受体表达及神经元的保护作用

目的通过针刺预处理来保护急性低氧对大鼠海马神经元的损伤作用及腺苷A1受体的表达。方法将45只SD大鼠随机分成常氧对照组、低氧组、针刺组。低氧组、针刺组（放入低氧舱之前先针刺30min）动物置于低氧舱,吸入15％的O2,30min后处死;对照组动物于常氧下处死。三组均测定海马腺苷A1受体表达水平,并对不同组大鼠海马神经细胞进行形态学观察。结果低氧组海马组织形态学显示神经元有明显的胞浆空染、核固缩现象,针刺组与正常对照组神经元无明显的胞浆空染现象;腺苷A1受体表达水平在低氧组明显降低,在针刺组显著增多,与低氧组相比有显著性差异（P〈0．01）。结论针刺具有保护急性低氧对大鼠海马神经细胞损伤的作用,而这种保护作用与脑组织中腺苷A1受体表达上调有关。     

LXA4诱导HO-1高表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:探讨脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)在大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用及可能机制?方法:将细胞随机分为5组,每组6孔,分别为对照组(con组)?缺氧/复氧组(H/R组)?LXA4预处理的缺氧/复氧组(LXA4 + H/R组)?HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理的缺氧/复氧组(ZnPP + H/R组)?LXA4 + ZnPP预处理的缺氧/复氧组(LXA4 + ZnPP + H/R组)?观察细胞形态改变,测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)?肌酸激酶(creatine kinase,CK)水平以反映细胞损伤,并检测心肌细胞HO-1活性和HO-1的mRNA表达水平? 结果:与H/R组比较,LXA4 + H/R组细胞形态较规整,LDH?CK水平较低,而HO-1的活性及mRNA表达水平明显增加;LXA4 + ZnPP + H/R组终止了LXA4对缺氧/复氧细胞的保护作用,细胞形态明显改变,细胞死亡较多,HO-1的活性及mRNA水平受到抑制?结论:LXA4预处理可诱导大鼠心肌细胞HO-1高表达,具有抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用?     

PI3K/Akt通路介导Apelin后处理减轻离体大鼠心脏缺血再灌注损伤

【目的】 探讨Apelin后处理对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及其信号机制.【方法】 32只SD大鼠随机分为4组,每组8只:缺血再灌注对照组、Apelin后处理组、Apelin后处理加渥曼青霉素(磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂)处理组、渥曼青霉素处理对照组,观察Apelin后处理对大鼠离体缺血再灌注心脏左心室收缩压、心率、冠状动脉流量、肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶释放以及左室心肌蛋白激酶B(Akt)磷酸化的影响.【结果】 与缺血再灌注对照组相比,Apelin后处理组心脏左心室收缩压、心率和冠状动脉流量得到改善,释放到冠状动脉循环流出液中的肌酸磷酸激酶,乳酸脱氢酶量减少,同时左室心肌磷酸化Akt(Ser473)水平增高;而渥曼青霉素抑制了Apelin后处理所致的Akt磷酸化,并完全消除了Apelin后处理的心脏保护作用.【结论】 Apelin后处理能够减轻离体大鼠心脏缺血再灌注损伤,PI3K/Akt信号通路参与介导Apelin后处理的心脏保护作用.     

基因干扰Sirtuin3后对缺氧预处理的影响

【目的】 探讨基因干扰Sirtuin3（SIRT3）后对缺氧预处理的影响。【方法】 使用空白载体pGCSIL-GFP进行预实验,筛选适合的感染复数（MOI）。正式实验使用pGCSIL-PUR-SIRT3转染PC12细胞。成功构建空白载体（empty vector）及SIRT3-/-稳定细胞株后,将两种细胞分别分为对照组（control）;缺氧预处理+缺氧组(Hyp+OGD);单纯缺氧组(OGD);MTT测定细胞活性。ATP荧光检测试剂盒测定胞内的ATP水平。Western Blot法测定各组细胞内SIRT3、过氧化物酶体增生激活受体-γ的共刺激因子-1α(PGC-1α),锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的蛋白表达水平。【结果】OGD后SIRT3-/-组(0.430±0.009)与Vector组(0.562±0.140)相比,细胞活性下降更明显（P<0.05）,经预处理后SIRT3-/-组细胞活性增加,且与Vector组间差异无统计学意义（P=0.311>0.05）。OGD后SIRT3-/-组（0.334±0.006）与Vector组（0.453±0.015）相比,ATP下降更明显（P<0.05）。经预处理后SIRT3-/-组ATP水平增加,且与Vector组间差异无统计学意义（P=0.866 >0.05）。SIRT3-/- 3组细胞间PGC-1α及MnSOD 蛋白的表达与Vector组对应的3组比较明显下降（P＜0.05）,Hyp+OGD及OGD相对于各自control组均上调（P＜0.05）,且预处理组的上调更明显（与OGD组比较,P＜0.05） 【结论】 干扰SIRT3基因后PGC-1α及MnSOD的表达下降,SIRT3为预处理或缺氧处理上调PGC-1α及MnSOD的其中一条途径,干扰SIRT3后其他的途径仍然在预处理中发挥重要的细胞保护作用。     

腺苷预处理对缺血再灌注心肌血红素加氧酶-1的影响

目的:观察腺苷预处理对心肌缺血再灌注损伤的影响,探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在其中的作用.方法:雄性SD大鼠18只,体重(250±16)g,随机分为3组,每组6只:①对照组(C组),②缺血再灌注组(IR组),③腺苷预处理+缺血再灌注组(AP组).采用结扎/放松左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注损伤模型.再灌注结束后...     

细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠缺血心肌的转导及影响

目的:探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:制备融合蛋白PEP-1/HO-1,通过酶联免疫吸附法检测给予融合蛋白后各时间点血清HO-1水平,探讨动物实验给予融合蛋白的最佳时间点。健康雄性SD大鼠18只,体重220-280g,随机分为3组:正常对照组(C组,n=6)、缺血再灌注组(IR组,n=6)和PEP-1/HO-1处理+缺血再灌注组(HO组,n=6)。制备心肌缺血再灌注损伤模型,于再灌注结束后,测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及心肌梗死面积。结果:给予融合蛋白后,血清HO-1蛋白浓度在1h和3h达峰值。与C组比较,IR组血清CK和LDH活性升高,心肌梗死面积增加(P<0.05);与IR组比较,HO组血清CK和LDH活性降低,心肌梗死面积减少(P<0.05)。结论:细胞穿透肽PEP-1介导的HO-1对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理对心肌缺血再灌注的影响

目的 探讨非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理对心肌缺血再灌注保护是否有叠加作用.方法 成年雄性SD大鼠40只,随机分为5组,假手术组（S组）;缺血再灌注组（I/R组）;非创性肢体远端缺血预处理组（NIPC组）;七氟醚后处理组（Spo组）;非创性肢体远端缺血预处理＋七氟醚后处理组（NIPC＋Spo组）.再灌注120min后检测CK-MB表达及心肌超氧化物歧化酶（SOD）的活性.结果 与I/R组比较,NIPC组、Spo组和NIPC＋Spo组CK-MB降低、SOD活性增加（P＜0.05）;与NIPC组和Spo组比较,NIPC＋Spo组CK-MB水平减少、SOD活性增加（P＜0.05）.结论 非创性肢体远端缺血预处理联合七氟醚后处理组对心肌缺血再灌注的保护有叠加作用.     

七氟醚预处理对肺叶切除术患者单肺通气诱导氧化应激损伤的影响

目的 观察肺叶切除术患者七氟醚预处理对术侧肺组织血红素氧合酶1(HO 1)表达水平的影响及其肺保护作用。方法 择期拟行单纯肺叶切除术患者30名,ASA分级Ⅰ～Ⅱ级 ,年龄40～60岁,体质量50～75kg,按照随机数字表法,分为丙泊酚全凭静脉麻醉组(P组)和七氟醚预处理组(S组)。S组单肺通气前吸入1%~2%七氟醚30min,模拟七氟醚预处理,P组在此阶段采用丙泊酚静脉麻醉作为对照。分别于诱导开始前即刻(T0)、单肺通气前即刻(T1),单肺通气结束前即刻(T2),双肺通气30min(T3)抽取肘静脉血4mL,测定血清丙二醛(MDA)的浓度。从切除肺叶取小块正常肺组织,测定肺组织HO 1的含量。术后2h抽取桡动脉血1mL,测定肺氧合指数。结果 术侧肺叶组织HO 1浓度S组高于P组(P<0.05),T3时刻血清MDA浓度S组低于P组(P<0.05)。术后2h时肺氧合指数S组高于P组(P<0．05)。结论 七氟醚预处理可通过上调肺组织HO 1的表达水平,减轻单肺通气诱导的氧化应激损伤,产生肺保护作用。     

乌司他丁预处理对大鼠双下肢缺血再灌注肺损伤的保护作用

目的 观察乌司他丁预处理对大鼠双下肢缺血再灌注肺损伤的保护作用.方法 将48只雄性大鼠分为假手术组（C组）、缺血再灌注组（R组）和乌司他丁预处理组（U组）,每组16只.再灌注2h和4h末取肺组织制备石蜡标本,用免疫组化法测定血红素加氧酶-1（HO-1） 的半定量和定位表达,新鲜肺组织测量湿/干比重,免疫印记法显示HO-1蛋白表达水平.结果 C组和U组大鼠再灌注2h和再灌注4h肺组织的湿/干比重与R组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.R组再灌注2h、4h肺组织HO-1的表达与C组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,U组再灌注2h、4h肺组织HO-1的表达与C组和R组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,同时降低肺湿/干比重.结论 乌司他丁预处理可以通过持续上调HO-1的表达而发挥肺保护作用,从而防止肺水肿的发生.     

丙泊酚预处理对单肺机械通气大鼠肺组织血红素氧合酶-1表达的影响

目的:研究丙泊酚预处理对单肺机械通气(OLV)时大鼠肺组织血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响。方法:36只雄性SD大鼠随机分成6组(n=6):对照(C)组,双肺通气(T)组,右侧单肺通气-左肺(OL)组,右侧单肺通气-右肺(OR)组,丙泊酚-右侧单肺通气-左肺(POL)组,丙泊酚-右侧单肺通气-右肺(POR)组。T组插气管导管双肺通气;OL、OR、POL和POR组大鼠麻醉后行右侧单肺通气,POL和POR组大鼠单肺通气1h前静脉泵入丙泊酚(50mg/kg)。C组大鼠麻醉后,直接开胸取左全肺。T、OL和POL组大鼠通气1h后取出左全肺,OR和POR组大鼠取出右全肺,行湿/干质量(W/D)比值计算,并采用Westernblot法测定HO-1蛋白的表达。结果:各组大鼠肺组织W/D比较差异有统计学意义(F=65.371,P<0.001),OL、OR组大鼠肺组织W/D高于C组(P<0.05)。各组大鼠肺组织HO-1蛋白表达差异有统计学意义(F=72.851,P<0.001),T、OL、OR组大鼠肺组织中HO-1蛋白的表达高于C组,POL组高于OL组,POR组高于OR组(P<0.05)。结论:丙泊酚预处理可以使大鼠肺组织HO-1表达增加,减轻OLV所造成的组织水肿。