大鼠慢性高眼压视网膜Nogo-A的表达

目的:研究慢性高眼压大鼠视网膜髓鞘相关抑制蛋白No-go-A表达的变化。方法:成年雄性Wistar大鼠36只随机分为正常对照组6只和慢性高眼压组30只,应用免疫组织化学方法观察慢性高眼压大鼠视网膜不同时点Nogo-A表达的变化。结果:与正常对照组相比,慢性高眼压21d大鼠视网膜变薄,节细胞数量减少(P<0.05);Nogo-A表达增多,与形态学变化相一致(P<0.05)。结论:髓鞘相关抑制蛋白Nogo-A在慢性高眼压大鼠视网膜损伤过程中发挥了重要作用。     

大鼠视神经损伤后Toll样受体4在视网膜中的表达

背景Toll样受体4（TLR4）是一种重要的免疫相关受体,在多种疾病的发生中起致炎作用。研究发现,视神经损伤后继发的炎症反应可进一步引起视网膜损伤,因此视神经损伤后TLR4的表达及其效应值得研究。目的研究大鼠视神经损伤后视网膜TLR4的表达情况。方法选取成年健康SPF级SD大鼠24只,按随机数字表法随机分为视神经损伤3d组和视神经损伤7d组。取大鼠右眼用视神经钳夹法制备视神经损伤模型,左眼不予处理为对照组。分别于视神经损伤后3d和7d用过量麻醉法处死大鼠并分离视网膜,采用免疫荧光法检测各组大鼠视网膜中TLR4的表达;分别采用逆转录PCR法（RT—PCR）和Westernblot法检测大鼠视网膜中TLR4mRNA及其蛋白的表达;采用TUNEL染色法观察各组大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的凋亡情况。结果视网膜免疫荧光法检测结果显示,TLR4在大鼠视网膜中呈绿色荧光,视神经损伤3d组和视神经损伤7d组造模眼视网膜中的荧光强度较对照组左眼均明显增强,绿色荧光主要分布在视网膜内层。RT—PCR法检测表明,模型眼视网膜损伤后3d和7d视网膜中TLR4mRNA相对表达量分别为2．92±0．06和3．92±0．12,对照眼TLR4mRNA的相对表达量分别为2．87±0．12和3．44±0．17,大鼠模型眼TLR4mRNA表达的灰度值较对照眼明显增加,差异均有统计学意义（t3d=-12．888,P〈0．001;t7d=-4．669,P=0．010）。Westernblot法检测显示,大鼠模型眼视网膜损伤3d和7d视网膜中TLR4蛋白的相对表达量分别为1．14±0．05和1．49±0．03,对照眼TLR4蛋白的相对表达量分别为0．99±0．09和1．38±0．07,模型眼视网膜中TLR4蛋白表达量明显高于对照眼,差异均有统计学意义（t3d=-11．324,P〈0．001;t7d=-5．638,P=0．005）。TUNEL染色显示,模型眼RGCs凋亡数较对照眼增多。结论TLR4在视神经损伤大鼠视网膜内层的表达明显上调,提示TLR4通路可能参与RGCs的损伤。     

Nestin在高眼压大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达

目的探讨第六类中间丝蛋白nestin在高眼压大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及意义。方法42只SD大鼠采用烧灼右眼涡静脉的方法制作高眼压模型为模型组,剪开左眼结膜作为假手术组。测量并记录眼压,计数术后不同时间点视网膜神经节细胞（RGCs）数。Westernblot半定量分析术后视网膜内nestin蛋白含量。免疫电镜检测nestin在高眼压大鼠视网膜Mailer细胞上的诱导表达。行nestin／谷氨酰胺合成酶（GS）或nestin／胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光双标,共焦显微镜观察nestin／GFAP在Mailer细胞上的表达情况。结果术后各时间点模型组与假手术组眼压的差异有统计学意义（P〈0．05）。术后1～3周模型组RGCs数量显著减少,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光结果显示术后2h～3周,模型组nestin在Maller细胞上表达的荧光强度逐渐增强,与假手术组比较差异有统计学意义。Westernblot半定量分析结果与免疫荧光染色结果一致。免疫电镜结果进一步证实眼压升高后Mailer细胞上出现nestin的诱导表达。结论Nestin在Maller细胞上的诱导表达是Mailer细胞对眼压升高产生的一种反应,nestin的表达量与病程进展相一致。眼压升高时,nestin在Mailer细胞上诱导表达,尤其在足板处的强烈表达,可能对RGCs具有保护作用。Nestin有望成为一种新的研究视网膜损伤的生物标记物。     

慢性高眼压大鼠模型视网膜中Brn-3a表达的动态变化

背景Brn-3a是最近发现的一种视网膜神经节细胞（RGCs）特异性标记物。高眼压的视功能损害主要与RGCs损伤有关,但高眼压大鼠视网膜损伤与Brn-3a表达的关系尚不清楚。目的观察慢性高眼压大鼠不同时期眼压、视网膜的形态学和Brn-3a表达的变化。方法将35只健康成年SD大鼠用随机数字表法随机分为正常对照组5只和模型组30只,术前测量眼压。模型组大鼠一侧眼用Shareef—Sharma手术方法建立慢性高眼压模型,对侧眼只切开结膜,不烙闭巩膜表层静脉作为伪手术眼。按照术后不同处理时间随机将模型组分为术后1、3、5、7、14、28d组共6个亚组,每组5只。分别于术前及术后30min,1、3、7、14、28d用Tono—Pen接触式眼压笔测量双眼眼压。各模型组于术后各相应时间点与正常对照组分别取5只大鼠过量麻醉处死,制作视网膜石蜡切片行常规组织病理学检查,评价视网膜形态变化,用甲苯胺蓝染色法计数RGCs,采用免疫组织化学法检测各时间点各组大鼠Brn-3a在RGCs中的表达。结果高眼压模型组大鼠术后各时间点眼压均明显高于术前,差异有统计学意义（F=95．631,P=0．001）,术后28d时眼压是正常对照组大鼠眼压的1．59倍。与伪手术眼相比,模型眼术后各时间点眼压均明显升高,差异均有统计学意义（q=18．418、15．261、10．987、6．931、4．975、2．962,P〈0．05）。正常对照组RGCs数量为（29．08±1．98）个／高倍视野,造模后3、5、7、14、28d组大鼠RGCs计数逐渐下降,差异均有统计学意义（t=5．943、8．034、15．023、17．004、19．371,P〈0．05）。免疫组织化学染色表明,随着造模时间的延长,各组Brn-3a阳性RGCs数量逐渐下降,差异有统计学意义（F=127．583,P=0．000）。结论采用Shareef—Sharma法可成功建立大鼠慢性高眼压动物模型,其眼压为中等程度升高;高眼压持续时间越长,RGCs的丢失越多。Brn-3a仅在RGCs层表达,随眼压持续时间的增加,Brn-3a的表达减少。     

活血化瘀汤对急性高眼压模型大鼠视网膜谷氨酸转运体表达的影响

背景高眼压及缺血缺氧可使眼内谷氨酸的浓度增加,对视网膜神经节细胞（RGCs）造成兴奋性损伤,诱导其凋亡。国内外已进行了大量的谷氨酸兴奋性损伤的防护研究,但目前尚未见从细胞和分子水平对中药复方进行相关研究的报道。目的探讨活血化瘀汤方剂对急性高眼压模型大鼠视网膜谷氨酸转运体L-谷氨酸／L-天门冬氨酸转运体（GLAST）表达的影响。方法健康Wistar大鼠45只,随机分为正常对照组（5只）、单纯加压组（20只）、活血化瘀汤治疗组（20只）,后2组随机取一侧眼制作急性高眼压模型,活血化瘀汤治疗组于造模后即刻给予活血化瘀汤灌胃治疗,分别于给药后1、3、7、14d各时间点随机处死5只大鼠,单纯加压组分别在相同时间点随机处死5只大鼠,并获取其视网膜组织。用实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）法检测3组大鼠视网膜中GLAST的表达变化,并对不同时间点视网膜组织行透射电镜及光学显微镜观察。结果急性高眼压损伤后3d,光学显微镜下可见视网膜变薄,14d时视网膜变得更薄,内层较显著,RGCs数量减少。透射电镜下,急性高眼压损伤后1d可见RGCs细胞器变性、肿胀,14d时出现部分细胞凋亡。Real—time PCR结果显示,单纯加压组及活血化瘀汤治疗组视网膜中GLAST mRNA的表达量在造模后1d快速上调,与正常对照组大鼠比较差异有统计学意义（P〈0．05）;3d时单纯加压组大鼠视网膜中GLAST mRNA表达量下降,与活血化瘀汤治疗组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;7d及1dd时单纯加压组与活血化瘀汤治疗组大鼠视网膜中GLAST mRNA的表达量均恢复至正常水平,2组间差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论活血化瘀汤方剂有可能通过增强GLAST的表达减轻急性高眼压对大鼠视网膜的损伤。     

氨基胍对大鼠慢性高眼压视网膜PI-3K表达的影响

目的研究慢性高眼压过程中大鼠视网膜磷脂酰肌醇-3-激酶（PI-3K）表达的变化及应用氨基胍对其表达的影响，探讨氨基胍对慢性高眼压视网膜的保护作用。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和Westernblot的方法，观察应用及未应用氨基胍的慢性高眼压大鼠视网膜在不同时点的差异及PI-3K表达的变化。结果与正常对照组相比，慢性高眼压大鼠应用与未应用氨基胍者，视网膜均随着高眼压时间的延长逐渐出现形态学变化，于高眼压的第21d视网膜变薄，节细胞数量减少；在此过程中，PI-3K表达增多。慢性高眼压大鼠的视网膜应用氨基胍者与未应用氨基胍者相比，其形态学变化较小，而PI-3K表达则明显增多，两者差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论PI-3K是慢性高眼压视网膜损伤过程中的保护性因素，氨基胍通过上调其表达发挥对视网膜的保护作用。     

热休克蛋白72在急性高眼压模型大鼠视网膜神经节细胞中的表达

目的检测热休克反应和硫酸锌腹腔内注射诱导热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72)在急性高眼压模型大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中的表达及时间规律。方法以平衡盐溶液(barbitol buffer solu-tim,BSS)在前房内加压灌注制作大鼠急性高眼压模型;用热休克反应或硫酸锌腹腔内注射处理模型大鼠,在不同时间点处死大鼠,摘取模型眼,剥离视网膜,行Western blot分析。结果正常大鼠RGCs中无HSP72的表达。急性高眼压模型眼前房灌注BSS后6~36 h,RGCs内出现HSP72的微量表达,48 h后消失。热休克反应和硫酸锌腹腔内注射处理后,模型大鼠RGCs中均出现HSP72的表达,但HSP72的表达持续时间不同。热休克反应组,6 h出现HSP72的表达,以后逐渐增加,48 h达到最高峰,然后逐渐减弱,至反应后第8天消失;硫酸锌注射组,24 h后开始出现HSP72的表达,72 h达到最高峰,以后逐渐减弱,到第21天后消失。结论正常大鼠RGCs中无HSP72的表达;热休克反应和硫酸锌腹腔内注射均可以诱导急性高眼压模型大鼠RGCs中HSP72的表达。     

水通道蛋白4在慢性高眼压模型大鼠视网膜的表达

目的:研究慢性高眼压大鼠视网膜水通道蛋白4(AQP4)表达的变化与视网膜损伤的关系。方法:通过电凝巩膜表层静脉的方法制成慢性高眼压模型。用免疫组化和RT-PCR的方法观察AQP4在高眼压过程中不同时点的表达变化,同时观察在慢性高眼压过程中大鼠视网膜的形态学变化。结果:AQP4在正常和高眼压大鼠的视网膜皆有表达,表达的部位都位于节细胞层、内丛状层、内核层、外丛状层及外核层。在高眼压大鼠的视网膜上AQP4的表达随着高眼压时间的延长而增多。HE染色的组织切片上发现,与正常对照组相比高眼压大鼠视网膜的厚度有显著变化。结论:眼压升高后AQP4表达上调,与视网膜的厚度变化密切相关。     

两种慢性高眼压大鼠模型视网膜结构和眼压变化的评估

目的 评估两种慢性高眼压大鼠模型的升眼压效果和视网膜结构的改变.方法 分别通过前房内注射微珠(微珠组)和结扎3支巩膜上静脉(结扎组)的方法制作两种慢性高眼压大鼠模型(每组6只).使用TonoPen眼压计测量大鼠眼压,模型制作当天及其后每周测量大鼠眼压,大鼠右眼为实验眼,左眼为对照眼(假手术眼).采用荧光金上丘逆标的方法标记视网膜神经节细胞并计数;使用免疫荧光标记的方法观察大鼠视网膜结构的改变.结果 造模后1-8周微球组和结扎组大鼠眼压均升高;其中结扎组眼压为(27.20±1.83) mmHg(1 kPa=7.5 mmHg),其对照眼眼压为(19.80±1.35) mmHg(P=0.001,n=6);微珠组眼压为(27.40±1.88) mmHg,其对照眼眼压为(19.40±1.00) mmHg(P=0.000,n=6).造模后8周,巩膜上静脉结扎组视网膜神经节细胞丢失37.9％、39.6％和33.5％(均为P=O.000,n=6),前房内注射微珠组丢失37.3％、39.4％和32.3％(均为P=0.000,n=6),两组视网膜神经节细胞的丢失数量比较差异均无统计学意义(P =0.855、0.949、0.634,n=6).高眼压模型8周后,相较于对照组,微珠组和结扎组视网膜神经节细胞核数量均有明显减少,组织厚度变薄,但两组间差异无统计学意义[对照组厚度(7.32±0.39) μm,结扎组厚度(4.97±0.33)μm,微珠组厚度(5.00 ±0.31) μm].前房内注射微珠组在部分组织切片可发现微珠污染.结论 巩膜上静脉结扎和前房内注射微珠均可以使大鼠眼压稳定增高.巩膜上静脉结扎具有实施方便和价格低的优势,并且没有微珠污染的缺点.     

川芎嗪对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的 研究川芎嗪对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(retina ganglion cells,RGC)凋亡的保护作用.方法 健康SD大鼠30只,随机分为正常组、高眼压组和川芎嗪治疗组,每组10只.高眼压组和治疗组分别采用上巩膜静脉烧灼法制作高眼压模型,正常对照组不做处理.造模成功后7d治疗组给予川芎嗪腹腔注射,正常组与高眼压组给予等量的生理盐水腹腔注射.造模3周后取三组大鼠眼球,行视网膜HE染色、TUNEL原位细胞凋亡检测和Bcl-2免疫组织化学检测.结果 造模后高眼压组、川芎嗪治疗组各时间点眼压与正常组比较,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05),而两组间各时间点比较,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).正常组、高眼压组、川芎嗪治疗组大鼠视网膜RGC层TUNEL阳性细胞数分别为0、9.00±0.89、3.50±1.89,三组间差异有统计学意义(F =86.160,P=0.000);三组间两两比较,差异均有统计学意义(均为P =0.000).三组大鼠RGC层Bcl-2阳性表达光密度值分别为0.373±0.090、0.375±0.146、0.390±0.268,三组差异有统计学意义(F=84.658,P=0.000);三间组两两比较,差异均有显著统计学意义(均为P=0.000).结论 川芎嗪通过上调Bcl-2蛋白的表达可明显抑制慢性高眼压大鼠RGC凋亡,从而发挥RGC保护作用.     

雷公藤甲素在慢性青光眼大鼠模型中对视网膜神经节细胞的保护

背景青光眼是一种以视神经损害为病理特点的常见致盲性眼病。目前,通过延缓或阻止病程的进展而保护视神经是青光眼研究的热点。目的研究中药雷公藤的有效提取成分雷公藤甲素对慢性青光眼大鼠模型视网膜神经节细胞（RGCs）的保护作用。方法选用清洁级Wistar雌性大鼠80只,采用房水释放联合激光房角光凝法建立慢性青光眼大鼠模型。右眼为激光眼,左眼为对照眼。激光光凝前3d起每日雷公藤甲素组大鼠腹腔给予雷公藤甲素5μg／kg直至处死,生理盐水组以同样的方式给予等量生理盐水。于术前,术后1、3、5d,1周及此后每周用Tono—PenXL眼压计监测眼压。激光光凝术后1、2、4、8周制作大鼠眼球视网膜铺片并行Nissl染色,对RGCs进行定量检测。结果激光眼术后1d眼压较术前增高,术后1周达高峰,持续约3周,4周时眼压恢复正常;对照眼各时间点眼压值与术前相比差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后各时间点雷公藤甲素组激光眼与生理盐水组激光眼间眼压的差异无统计学意义（P〉0．05）。生理盐水组激光眼术后1周RGCs数量开始减少,术后4～8周RGCs存活数量明显下降;与生理盐水组激光眼相比,各时间点雷公藤甲素组激光眼RGCs数量明显增多,差异均有统计学意义（P〈0．05）。雷公藤甲素组激光眼与其对照眼相比,各时间点RGCs数目的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论雷公藤甲素能防止慢性青光眼大鼠模型的RGCs损伤,对RGCs具有保护作用,该作用并不依赖于眼压的下降,这可能为青光眼的治疗提出新思路。     

Expression of Nogo-A on the retina in rat model with chronic ocular hypertension

AIM: To study the expressive variation of Nogo-A on rat retina in the process of chronic ocular hypertension. METHODS: Thirty-six healthy adult male Wistars were randomly divided into control group (6 rats) and chronic hypertension group (30 rats). Chronic hypertension was created by cauterizing the superficial scleral veins. Immunohistochemistry technique was used to evaluate the expressive varieties of Nogo-A at different time points during the course of chronic ocular hypertension. RESULTS: The success of the model was indicated by over 40% of increase in the IOP as compared with normal rats. Compared with control group, as time passed chronic hypertension group gradually had detectable morphology changes in the retina. At the 21st day of chronic ocular hypertension, retinas became thinner and the quantity of retinal ganglion cells (RGC) decreased (P<0.05). Assoicated with the morphological changes, the expression of Nogo-A was strongly increased (P<0.05). CONCLUSION: Myelin associated protein Nogo-A plays a part in the process of chronic ocular hypertension.     

大鼠实验性慢性高眼压对视网膜神经节细胞的损伤

目的:制作高眼压大鼠模型,观察高眼压对视神经的损害。方法:成年Wistar雄性大鼠65只,烧灼右眼上方2支和外侧1支巩膜上静脉,建立慢性高眼压模型。左眼作为对照眼。对造模成功的,分别于造模后1d,1,2,3,4,6,8,10wk各摘除6只大鼠双眼。在取出眼球前24h,用Fluoro-gold进行视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)逆行性染色,做视网膜铺片计数RGC,观察不同时段高眼压对RGC的影响。结果:右眼巩膜上静脉烧灼后各时间点造模眼平均眼压分别为42.2±1.8mmHg,37.9±2.3mmHg,36.1±2.0mmHg,33.6±2.2mmHg,32.2±2.4mmHg,30.1±2.0mmHg,30.5±2.1mmHg和27.6±1.3mmHg。术后各时间点的成模率分别为80.0%,76.9%,74.5%,71.7%,63.8%,56.1%,42.9%,41.4%。成模率和成模眼的眼压随时间延长呈下降趋势。实验组和对照组的RGC密度在早期(巩膜上静脉烧灼术后3wk内)没有显著差别。造模后4wk高眼压组RGC密度明显低于对照组(P<0.05),随着时间的推移差别越来越显著。结论:巩膜上静脉烧灼法能诱导出持续的肯定的大鼠慢性高眼压模型,成模眼的眼压和随时间而下降。高眼压持续的时间越长,RGC的损失越多。     

兔眼慢性高眼压模型视网膜损害相关基因的克隆及筛选

目的　构建慢性高眼压条件下兔眼视网膜组织差异表达基因的消减cDNA文库并鉴定、克隆及筛选与慢性高眼压视网膜损害相关的基因表达片段。方法　于兔眼前房注射1%甲基纤维素每周1次,连续5周,制作慢性高眼压模型。提取实验组和对照组兔眼视网膜组织总RNA及纯化mRNA。采用原位杂交技术,进行视网膜组织差异表达基因抑制性消减文库的构建及初步的基因筛选。对一个上调的cDNA片段用地高辛标记,采用原位杂交的方法在实验组和对照组的视网膜中进行相关基因片段的细胞定位。结果　成功构建慢性高眼压条件下兔眼视网膜损害相关基因的抑制性消减cDNA文库,经基因片段测序及同源性检索,得到有效基因序列16个,经NCBI BLAST信息途径分析,发现高度同源序列(同源性>98% )2个。其中一个编号F9基因片段与Ras家族基因相似,原位杂交结果确定其大量表达于实验组视网膜神经节细胞及内核层细胞中,而对照组视网膜组织未表达。结论　慢性高眼压条件下视网膜组织基因表达失调,F9片段在慢性高眼压视网膜损害过程中表达明显增高。建立慢性高眼压条件下视网膜损害相关基因的抑制性消减cDNA文库,可为今后青光眼视神经损害机制及视神经保护的研究奠定基础。     

慢性高眼压大鼠视网膜神经胶质细胞组织病理学改变

目的 研究青光眼视网膜神经胶质细胞组织病理学改变及其在青光眼视网膜神经节细胞损伤中的作用机制.方法 对照实验研究.选用造模成功的慢性高眼压雄性SD大鼠72只,眼压＞22 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa).右眼为慢性高眼压眼,左眼为假手术对照眼.根据慢性高眼压模型建立的时间(手术结束时开始计算),将实验鼠分为6组(2、12 h,1 d,1、4、8周),每组12只鼠.正常组SD大鼠12只,平均眼压12.56 mm Hg.分别取实验各组(慢性高眼压)、假手术组及正常组大鼠4只眼球,冰冻切片行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学染色,在激光共焦显微镜下观察视网膜星形胶质细胞及Müller细胞的GFAP表达情况;分别取实验各组(慢性高眼压)和正常组大鼠4只眼球,在视网膜铺片上进行GFAP免疫组织化学染色,进行星形胶质细胞计数并观察其形态;分别取实验各组(慢性高眼压)、假手术组及正常大鼠4只眼球的鼻侧半视网膜,在视网膜铺片上行小胶质细胞标记物OX42免疫组织化学染色,进行小胶质细胞计数并观察其形态;取剩余的颢侧中周部视网膜,半薄切片行甲苯胺蓝染色并进行Müller细胞计数.对不同时间点慢性高眼压组与正常组大鼠细胞表达数最进行比较,采用单因素多水平设计定量资料的方差分析.结果 慢性高眼压模型建立后2 h,即有活化的小胶质细胞出现;1 d后小胶质细胞的数量开始增加,为(327.40±68.32)个/mm2;1周后小胶质细胞的数量达到高峰,为(965.06±86.63)个/mmw,与正常组小胶质细胞数最比较,差异有统计学意义(F=196.56,P＜0.01);其后小胶质细胞数量逐渐减少.慢性高眼压模型建立后12 h,星形胶质细胞及Müller细胞开始呈现活化状态;4周时两种细胞的活化程度达到高峰,以后活化程度逐渐下降,且活化的星形胶质细胞在结构上出现明显异常,表现为星形胶质细胞突起变得粗短、僵硬,胞体的星型结构破坏;但慢性高眼压组视网膜星形胶质细胞及Müller细胞数量与正常组相比,差异均无统计学意义(F=1.36,1.89;均P＞0.05).结论 在慢性高眼压条件下,小胶质细胞可能是视网膜最早发生病理学改变的组织;活化的星形胶质细胞可出现明显的形态和结构变化,其结果不仅将加速神经节细胞的损伤,同时也会形成不利于神经节细胞轴突再生的视网膜微环境.     

鼠类慢性高眼压模型的研究进展

青光眼的特征性病变为神经节细胞死亡、视神经变性、视乳头凹陷及进行性的视野缺损.高眼压是青光眼最主要的危险因素之一,因此,国内外的研究者通过建立高眼压动物模型,模拟人类青光眼的主要病理过程,以揭示其发病机制并寻求新的治疗方法.笔者就目前国外研究者对鼠类慢性高眼压模型的建立、模型的评估及模型的应用进行综述,以与眼科同道交流.(中华眼科杂志,2009,45:663-668)     

不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的影响

目的 研究不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4表达的影响.方法 原代培养C57小鼠角膜上皮细胞,随机分为对照组(无肽聚糖刺激)及按照肽聚糖刺激浓度分为10 mg·L-1组、30 mg·L-1组、80 mg·L-1组(作用时间均为12 h);按照肽聚糖刺激时间分为12 h组、24 h组、36 h组(作用浓度均为30mg·L-1),应用实时荧光定量PCR与流式细胞术检测各组TLR2、TLR4 mRNA和蛋白的表达量.结果 与对照组(1.00±0.14、1.00±0..01)相比,10 mg·L-1组(4.35±0.46、3.53±0.50)、30 mg· L-1组(8.06±0.72、5.31±0.34)、80 mg· L-1组(2.93±0.46、2.23±0.04)的TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,12h组(2.94±0.46、2.23±0.50) TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与对照组相比,各浓度组和12 h组角膜上皮细胞TLR2、TLR4蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 肽聚糖可以刺激小鼠角膜上皮细胞TLR2、TLR4 mRNA和蛋白表达增加,提示感染性角膜炎的发生、发展可能与角膜上皮细胞TLR2、TLR4识别病原体并参与炎症反应有关.     

Understanding glaucomatous damage: anatomical and functional data from ocular hypertensive rodent retinas

Glaucoma, the second most common cause of blindness, is characterized by a progressive loss of retinal ganglion cells and their axons, with a concomitant loss of the visual field. Although the exact pathogenesis of glaucoma is not completely understood, a critical risk factor is the elevation, above normal values, of the intraocular pressure. Consequently, deciphering the anatomical and functional changes occurring in the rodent retina as a result of ocular hypertension has potential value, as it may help elucidate the pathology of retinal ganglion cell degeneration induced by glaucoma in humans. This paper predominantly reviews the cumulative information from our laboratory’s previous, recent and ongoing studies, and discusses the deleterious anatomical and functional effects of ocular hypertension on retinal ganglion cells (RGCs) in adult rodents. In adult rats and mice, perilimbar and episcleral vein photocauterization induces ocular hypertension, which in turn results in devastating damage of the RGC population. In wide triangular sectors, preferentially located in the dorsal retina, RGCs lose their retrograde axonal transport, first by a functional impairment and after by mechanical causes. This axonal damage affects up to 80% of the RGC population, and eventually causes their death, with somal and intra-retinal axonal degeneration that resembles that observed after optic nerve crush. Importantly, while ocular hypertension affects the RGC population, it spares non-RGC neurons located in the ganglion cell layer of the retina. In addition, functional and morphological studies show permanent alterations of the inner and outer retinal layers, indicating that further to a crush-like injury of axon bundles in the optic nerve head there may by additional insults to the retina, perhaps of ischemic nature.