促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法。方法引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法。结果方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01%～5.40%,批间变异系数为2.96%～17.9%,回收率为90.6%～114.4%,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性。结论生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法.方法 采用两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,采用辣根过氧化物酶/鲁米诺/过硼酸钠体系,建立了测定人血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法,并进行了方法学鉴定.用该法测定80例正常人血清,确定正常参考值范围;测定临床病理样品27例,与Beckman全自动化学发光试剂测定值进行相关性分析.结果 本方法测定范围0.3 ～ 100μg/L,分析灵敏度0.16μg/L;37℃反应时间30min;回收率76.8％ ～ 111.1％;高浓度cTnI血清样品经系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.999;批内、批间变异系数分别为3.90％～6.71％,7.66％～10.34％;与心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白C(TnC)、骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(sKTnI)、骨骼肌肌钙蛋白T(sKTnT)、人心肌脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、人心肌肌酸激酶(CK-MB)、人心肌肌红蛋白、C-反应蛋白(CRP)均无交叉;确定临床正常参考值小于0.304μg/L;与Beckman全自动化学发光试剂比较,两者测定值线性相关系数为0.925.结论 该方法反应时间短、特异性强、重复性好,具有应用及推广价值.     

广谱检测磺胺类药物的酶联免疫分析方法的建立

目的 利用抗磺胺类药物多抗建立酶联免疫分析方法,测定磺胺类药物在动物源食品中的残留.方法 以抗磺胺类药物抗体包被微孔板,辣根过氧化物酶(HRP)标记磺胺类半抗原磺胺噻唑(ST),磺胺间甲氧嘧啶为标准品建立酶联免疫分析方法.结果 本方法的标准曲线测定范围为0.3～ 100ng/mL.方法学鉴定结果表明,灵敏度为0.2ng/mL,批内、批间变异分别为9.2％ ～ 14.4％、10.5％～ 12.7％.牛奶、蜂蜜、水产品及鸡肉、鸡蛋样品的添加回收率分别在79.3％～88.9％、65.5％～136.4、63.0％～83.3％、59.3％～78.1％之间.牛奶稀释实验表明,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.997.结论 本方法可同时快速测定动物源性食品中23种磺胺类药物的残留,对19种磺胺类药物的检测灵敏度高于10ng/mL.     

化学发光免疫法测定血清孕酮的研究

本文报道以化学发光反应为显示系统的血清孕酮免疫测定方法。用化学发光化合物氨基丁基乙基异鲁米诺(ABEEI)标记孕酮,以牛血清白蛋白-孕酮连接物为免疫原,免疫家兔制备孕酮抗血清,经过优选抗血清稀释度、标记物用量和温育时间,建立了孕酮的化学发光免疫测定法;经方法学评价,该测定方法的灵敏度达每管17.6fmol,批内变异系数为6.4％,批间变异系数为15.9％,平均回收率为104％。对41例血清标本的测定结果表明,化学发光免疫测定法与~3H-孕酮的放射免疫测定法相关良好,其相关系数为0.953。     

人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

目的建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA)。方法用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法。结果本MEIA法的灵敏度为0.1IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizinghormone,LH)、促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)和促卵泡成熟激素(folliclestimulatinghormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1000IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月。结论本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒。     

微粒子化学发光免疫测定促甲状腺素敏感性方法的建立与应用

目的 :建立一种低成本、高敏感性检测血清促甲状腺激素(TSH)的微粒子化学发光免疫分析 (CLEIA)方法。方法 :采用碱性磷酸酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体 (mAb) ,与FITC偶联的抗TSHα亚单位的另一mAb配对 ,构成双抗体夹心免疫结合 ,用抗FITC多抗免疫磁珠做固相分离载体 ,用金刚烷胺CSPD为发光底物的非均相免疫分析法。结果 :方法灵敏度 4 μIU/L ,批内变异系数 (CV)平均为7.4 5 % ,批间CV平均为 10 .4 5 % ,回收率为 91.4 %～ 10 2 .4 %。将实际样品测定与ACS 180  系统检测的结果相比较有较好的相关性。结论 :微粒子化学发光定量测定TSH的成本低、灵敏度及特异性高和稳定性好 ,具有广阔的应用前景     

人血清脂联素酶联免疫吸附试验测定方法的建立及临床应用研究

利用自行制备的抗脂联素单克隆抗体（McAb）,建立双抗体夹心酶联免疫（ELISA）分析人血清脂联素水平,优化实验条件,评价检测方法,并将该方法进行初步的临床应用。用抗脂联素McAb包被酶标板,加入待测抗原,再加入酶标记抗体,DAB显色。方法的线性范围为1.25~40μg/mL,灵敏度为0.2μg/mL,批内、批间变异系数分别为5.4%和7.1%,回收率为92.0%。与进口试剂盒比较,相关性良好（r=0.921）。测定了150份正常人血清脂联素含量,测定值为10.2±3.9μg/mL;66例2型糖尿病患者血清,含量为7.3±4.2μg/mL。结果表明,该方法简便可行,标准曲线范围、灵敏度、特异性、重复性、准确性均符合临床质控要求,适用于基础研究和临床检验。     

磁分离酶联免疫荧光法(MEIF)检测人血清中胰岛素

目的:采用磁微粒分离酶联免疫荧光(MEIF)分析技术建立一种简便、高敏感性、定量检测人血清胰岛素(insulin)的新方法.方法:选用2株识别人胰岛素不同表位的单克隆抗体(mAb).一株mAb用异硫氰酸荧光素(FITC)标记, 另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;偶联羊抗FITC抗体的磁珠用作固相分离载体, 4-甲基磷酸伞型酮用作荧光底物.结果:成功建立了定量检测人血清胰岛素的MEIF, 灵敏度2.0 μIu/mL, 线形范围0～188.52 μIu/mL, 批内变异系数(CV)为4.3%～5.2%, 批间CV为2.6%～9.5%, 稀释回收率为93%～117%, 加标回收率为94%～113%.实际样品的测定结果与倍爱康公司商品化人insulin磁分离发光系统检测试剂盒的检测结果比较, 具有良好的相关性.结论:MEIF定量测定人insulin方法成本低、灵敏度高、稳定性好, 在临床免疫检测领域具有广阔的应用前景.     

血管紧张素玉化学发光免疫分析方法的建立

目的：建立人血管紧张素Ⅰ（Ang Ⅰ）化学发光免疫分析方法,通过测定血浆中血管紧张素Ⅰ的含量计算肾素活性。方法：用生物素标记Ang Ⅰ抗原,荧光素标记AngⅠ抗体,将抗荧光素抗体包被于化学发光板,以链亲和素酶为催化剂,采用竞争法建立Ang Ⅰ化学发光免疫分析方法。结果：本方法的测量范围为100～7 800 pg/ml,灵敏度为24.3 mU/ml,批内变异为5.6%～8.7%,批间变异为6.8%～10.4%,回收率为95.4%～105.3%,稀释实验测定值与理论值呈线性相关,相关系数为r=0.999。与放射免疫分析试剂盒的相关性方程分别为y=0.95x+235.70,相关系数r=0.973。包被板、生物素标记AngⅠ抗原以及荧光素标记AngⅠ抗体在37℃存放一周稳定性良好。结论：方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。     

双抗体夹心ELISA检测人血清生长激素

本文用两株高亲和力,特异性好的hGH单克隆抗体(McAb),建立了高灵敏度的人血清生长激素(GH)ELISA双抗体夹心法。方法灵敏度为0.05～0.1μg/L,批内、批间变异系数分别为6.1％,11.4％。稀释度试验线性关系好(r=0.99),且通过原点。本法与放射免疫分析法(RIA)结果之间相关性好(r=0.92),与其他垂体激素皆无交叉反应。用本法测定了20名正常儿童,18名正常成年人,10例肢端肥大症,8例GH完全缺乏性侏儒症患者血清hGH基础值,说明本法灵敏,方便,能够满足临床要求。