枸杞多糖通过激活Nrf2/HO-1通路保护HK-2细胞氧化损伤的作用

目的 分析枸杞多糖(LBP)干预对氧化损伤的人肾小管上皮细胞(HK-2)内的核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)通路蛋白表达的变化,探索LBP拮抗HK-2细胞氧化损伤的分子机制。方法 采用过氧化氢诱导HK-2细胞制备氧化损伤细胞模型,HK-2被分成4组：正常组、LBP组、氧化损伤组及LBP干预组。观察4组细胞的长势和形态变化;细胞活力测定法比较每组细胞的存活率;比色法分析氧化产物丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的水平;免疫印迹技术检测细胞内Nrf2/HO-1通路蛋白Nrf2、HO-1的相对水平。结果 正常组和LBP组相比,两组的细胞长势、形态和存活率,细胞产生MDA的量、SOD和GSH-Px的水平,通路蛋白Nrf2、HO-1的相对水平均无明显差异(均P>0.05);氧化损伤组和正常组相比,细胞皱缩变圆并脱落、贴壁细胞变少,存活率减少、MDA量增加、SOD和GSH-Px降低,通路蛋白Nrf2、HO-1的相对值下降(均P<0....     

Bach1/Nrf2通路调控HO-1在大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤中的作用机制研究

目的探讨Bach1/Nrf2通路调控血红素加氧酶(HO-1)在大鼠肢体缺血再灌注后肺损伤中的作用机制。方法选取120只SD大鼠作为研究对象,随机分为正常对照组、缺血再灌注组、Znpp组,Copp组。正常对照组不造成肢体缺血再灌注模型。缺血再灌注组给予缺血4 h,再灌注12 h处理。Znpp组加入HO-1的抑制剂原卟啉锌(5 mg/kg),Copp组加入HO-1的激动剂原卟啉钴(5 mg/kg)。测定各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO)水平,测定各组大鼠肺组织SOD、MDA、MPO水平。采用RT-PCR法测定肺组织中HO-1、Bach1、Nrf2蛋白的表达。采用Pearson相关性分析法分析HO-1、Bach1、Nrf2的相关性。结果缺血再灌注组血清和肺组织MDA、MPO水平显著高于正常对照组,SOD水平显著低于正常对照组(P 0. 05)。Znpp组的血清和肺组织MDA、MPO水平均显著高于缺血再灌注组(P 0. 05),SOD水平显著低于缺血再灌注组(P 0. 05); Copp组的血清和肺组织MDA、MPO水平均显著低于缺血再灌注组(P 0. 05),SOD水平显著高于缺血再灌注组(P 0. 05)。缺血再灌注组的HO-1和Nrf2蛋白水平显著低于正常对照组,Bach蛋白水平显著高于正常对照组(P 0. 05)。Znpp组的HO-1和Nrf2蛋白水平显著低于缺血再灌注组,Bach蛋白水平显著高于缺血再灌注组(P 0. 05); Copp组HO-1蛋白和Nrf2蛋白水平显著高于缺血再灌注组,Bach1蛋白水平显著低于缺血再灌注组(P 0. 05)。Pearman相关性分析法结果显示HO-1与Nrf2呈显著正相关关系,与Bach1呈显著负相关关系。结论 HO-1的表达可能受Bch1/Nrf2通路的调控参与肢体缺血再灌注后肺损伤的过程。     

柚皮素对糖尿病视网膜病变大鼠氧化损伤、细胞凋亡及Nrf2-ARE的影响

目的探讨柚皮素对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠氧化损伤、细胞凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)的影响。方法随机数字表法将健康雄性SD大鼠分为空白对照组、模型组、阳性对照组、低剂量柚皮素组、中剂量柚皮素组、高剂量柚皮素组。采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立DR大鼠模型。阳性对照组灌胃150 mg·kg^-1·d^-1羟苯磺酸钙,低、中、高剂量柚皮素组分别灌胃25 mg·kg^-1·d^-1、50 mg·kg^-1·d^-1、100 mg·kg^-1·d^-1柚皮素,空白对照组和模型组灌胃1%二甲基亚砜(DMSO),连续灌胃60 d。取各组大鼠视网膜组织,试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)活力,TUNEL染色法检测视网膜组织的神经节细胞凋亡情况,Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶-1(NQO1)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果与空白对照组比,模型组大鼠视网膜组织MDA含量、细胞凋亡指数显著升高(P<0.05),SOD和GSH-Px活力、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组比,中、高剂量柚皮素组和阳性对照组大鼠视网膜组织MDA含量、细胞凋亡指数显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活力、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达显著降低显著升高(P<0.05),但低剂量组各指标均无显著差异(P>0.05)。结论柚皮素可能通过激活Nrf2-ARE信号通路降低糖尿病视网膜病变大鼠氧化应激损伤,其作用呈剂量依赖性。     

黄芪提取物对病毒性心肌炎大鼠心肌组织Nrf2、HO-1表达水平的影响

目的探究黄芪提取物对病毒性心肌炎大鼠心肌组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)表达水平的影响。方法利用柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导病毒性心肌炎大鼠模型,40只心肌炎大鼠随机分为模型组、黄芪提取物低、中、高剂量组[10 mg/(kg·d)、20 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)],另设对照组,每组10只。黄芪提取物处理组灌胃各剂量的黄芪提取物,1次/d,连续灌胃15 d;对照组和模型组以等量生理盐水替代。观察大鼠大体情况,采用HE染色检测大鼠心肌组织病理变化及其病理评分,检测心肌细胞中氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽(GSH)的水平,实时荧光定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)和Western Blot检测心肌细胞中Nrf2、HO-1的表达。结果模型组病理评分显著高于对照组(P 0. 05),模型组SOD、GSH水平以及Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白的表达显著低于对照组,MDA水平显著高于对照组(P 0. 05);黄芪提取物可有效改善病毒性心肌炎大鼠少食、毛色灰暗、反应迟缓、活动度减少、腹泻等病症,减轻心肌组织损伤,降低心肌组织中MDA水平,提高SOD、GSH水平、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白的表达,且高剂量组效果显著。结论黄芪提取物可呈剂量依赖性明显上调病毒性心肌炎大鼠心肌组织中Nrf2、HO-1的表达,减轻大鼠心肌氧化应激损伤。     

广藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果研究及对p38MAPK/ERK通路蛋白的调控作用分析

目的对广藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果及对p38MAPK通路蛋白的调控作用进行分析,为临床治疗提供参考。方法 48只清洁级SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD98059组和广藿香油低、中、高剂量治疗组,每组8只。对照组大鼠给予正常光照射,其余各组采用长波段紫外线+中波紫外线(UVA+VUB)光源照射制备大鼠皮肤光老化模型。PD98059组和广藿香油组大鼠分别给予对应药物治疗,对照组给予生理盐水灌胃。分析各组大鼠血清中氧化还原酶、细胞凋亡蛋白及p38MAPK/ERK通路蛋白的表达。结果对照组皮肤无明显异常。模型组大鼠皮毛光泽度下降,皮肤颜色变深,且表皮干燥、粗糙、增厚、纹理增宽加深,弹性丧失;模型组大鼠血清中MDA、p38MAPK、Ras、Raf、MEK、ERK1/2、Bax、Caspase9及C-Fos和C-Jun水平明显升高而Bcl2、SOD、GSHPX和CAT蛋白水平明显降低(P0.01),而广藿香油治疗后上述蛋白异常得到明显的恢复,且与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01);同时,广藿香油治疗具有剂量依从性,低剂量组、中剂量组和高剂量组之前差异有统计学意义(P0.01)。结论藿香油治疗皮肤光老化大鼠的效果与其调控p38MAPK/ERK通路相关蛋白及Bax、Bcl2、C-Fos和C-Jun表达有关。     

血红素加氧酶-1对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:采用HO-1的诱导剂钴原卟啉(CoPP)和抑制剂锌原卟啉(ZnPP)分别进行干预处理后,建立大鼠的心肌缺血/再灌注损伤模型。观察大鼠再灌注后心肌形态变化,检测HO-1基因在大鼠心肌的表达情况,测定大鼠左心室心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:再灌注前使用CoPP进行预处理,可以诱导HO-1蛋白的表达上调;HO-1蛋白表达上调可以减少缺血再灌注后的心肌细胞坏死,提高心肌组织中SOD含量并降低MDA的含量。结论:CoPP诱导的HO-1过表达可以抑制心肌缺血再灌注损伤后的细胞坏死,从而减轻心肌的再灌注损伤,其主要机制与抗氧自由基有关。     

2型糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤转录因子E2相关因子2/血红素氧合酶1信号通路的表达及白藜芦醇的干预研究

目的探讨白藜芦醇在糖尿病心肌缺血再灌注（I/R）损伤中对转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶1（HO-1）信号通路的影响。 方法将2型糖尿病模型制备成功的60只大鼠分成假手术组、I/R组、白藜芦醇（R）组、白藜芦醇+ EX527（RE）组,每组各15只。采用结扎左冠状动脉前降支30 min、恢复灌注120 min的方法制备心肌I/R损伤模型。R组及RE组大鼠于术前7 d连续腹腔注射白藜芦醇15 mg/kg,假手术组及I/R组大鼠腹腔注射等容量的等渗NaCl溶液,RE组大鼠于缺血前15 min尾静脉注射EX527 1 μg/kg。于再灌注120 min末,采用酶联免疫吸附测定法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸激酶同工酶（CK-MB）。随后处死大鼠取心肌组织,采用苏木素-伊红（HE）染色观察心肌病理学变化,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑法检测心肌梗死面积百分比,并检测心肌组织丙二醛含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用Western-blotting法检测各组大鼠心肌沉默信息调节因子1（SIRT1）、Nrf2及HO-1蛋白表达水平。 结果HE染色可见,假手术组大鼠心肌细胞轻度断裂、水肿,少量炎症细胞浸润;I/R组大鼠心肌纤维排列杂乱,心肌间质充血水肿伴大量炎症细胞浸润;R组大鼠心肌组织结构相对整齐,偶见核固缩;RE组大鼠心肌纤维排列杂乱,核固缩现象明显,炎症细胞浸润明显。假手术组大鼠无心肌梗死发生,I/R组大鼠心肌梗死面积占比为（51 ± 6）%,R组大鼠占比为（37 ± 4）%,RE组大鼠占比为（41 ± 3）%,各组间比较差异有统计学意义（F = 160.703,P < 0.001）,R组及RE组大鼠心肌梗死的占比面积均显著小于I/R组大鼠,且R组大鼠心肌梗死面积的占比更小（P均<0.05）。各组大鼠血清LDH、CK-MB、丙二醛、SOD、SIRT1、Nrf2及HO-1表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 144.101、158.545、53.682、99.273、50.121、59.153、143.702,P均< 0.001）。进一步两两比较发现,与假手术组比较,I/R组、R组、RE组大鼠的LDH、CK-MB及丙二醛含量均显著升高,SOD活性、SIRT1、Nrf2及HO-1蛋白表达水平均显著降低（P均<0.05）;与I/R组比较,R组及RE组大鼠的LDH、CK-MB及丙二醛含量均显著降低,SOD活性、SIRT1、Nrf2及HO-1蛋白表达水平均显著升高,且LDH、CK-MB及丙二醛含量在R组大鼠更低,SOD活性、SIRT1、Nrf2及HO-1蛋白表达水平在R组大鼠更高（P均<0.05）。 结论白藜芦醇可通过促进SIRT1激活Nrf2/HO-1信号通路来减轻2型糖尿病大鼠心肌的氧化应激反应及心肌I/R损伤。     

益智仁提取物对糖尿病肾病小鼠肾氧化应激损伤的影响及机制研究

【目的】探讨益智仁提取物对糖尿病肾病(DN)小鼠肾氧化应激损伤的影响及机制。【方法】将40只SPF级SD雄性小鼠随机分为对照组、模型组及益智仁提取物低、高剂量组,每组10只。低剂量组、高剂量组及模型组成功建立DN模型后,同时间分别给予5 g/(kg?d)、20 g/(kg?d)益智仁提取物溶液、等量生理盐水灌胃处理(连续4周),对照组于同时间给予等量生理盐水灌胃处理。采用全自动生化分析仪测定24 h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮水平;采用苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理变化;采用比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,采用ELISA法检测谷胱甘肽(GSH-px)含量;采用免疫印迹法测定肾组织中核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)通路蛋白Nrf2、HO-1水平。【结果】DN模型建立成功;与对照组比较,模型组及低剂量组、高剂量组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐水平均升高,SOD、GSH-px水平及Nrf2、HO-1蛋白水平均降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量组、高剂量组大鼠24 h尿蛋白、尿素氮、血肌酐水平均降低,SOD、GSH-px水平及Nrf2、HO-1蛋白水平均升高(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐水平均升高,SOD、GSH-px水平及Nrf2、HO-1蛋白水平均降低(P<0.05)。【结论】益智仁提取物对DN小鼠肾脏发挥保护作用,可能是通过促进Nrf2/HO-1通路活化抑制肾脏氧化应激损伤实现。     

醒脑静注射液对脑出血大鼠神经功能以及 脑血肿周围组织中内源性抗氧化系统Nrf2通路的影响

目的分析醒脑静注射液对脑出血(ICH)大鼠神经功能以及脑血肿周围组织中内源性抗氧化系统Nrf2通路的影响。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠75只,分为假手术组、模型组、醒脑静低、中、高剂量组,每组15只。除假手术组外,其他大鼠制备ICH模型,术后醒脑静低、中、高剂量组大鼠静脉注入醒脑静溶液,假手术组和模型组大鼠静脉注入生理盐水。观察各组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑组织病理形态、脑组织内氧化应激指标含量、核因子相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶1(NQO1)及血红素加氧酶-1(HO-1) mRNA相对表达量及HO-1、Nrf2及Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织Nrf2、NQO1及HO-1 mRNA相对表达量上升;和模型组相比,醒脑静中、高剂量组大鼠脑组织Nrf2、NQO1及HO-1 mRNA相对表达量上升,差异均有统计学意义(P 0. 05),醒脑静低剂量组大鼠脑组织Nrf2、NQO1及HO-1 mRNA相对表达量略微上升,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论醒脑静注射液可改善ICH大鼠神经功能,调节Nrf2-ARE通路及下游基因表达来降低机体氧化应激反应。     

花青素通过上调Nrf2/HO-1途径抑制H2O2诱导脐静脉内皮细胞氧化损伤的研究

目的:花青素(PC)对H_2O_2作用下血管内皮细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞,H_2O_2作用于人脐静脉血管内皮细胞诱导其氧化损伤,设置空白对照组、模型组(400μmol/LH_2O_2处理)、不同浓度(100,50μg/ml)花青素组,抑制剂组(5μmol·L^-1全反式维甲酸)。使用MTT法检测各组细胞活力;ELISA检测各组细胞培养液中NO、TNF-α和IL-6的浓度变化;DHE荧光探针检测ROS的变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;Western blot法检测各组Nrf2/HO-1蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比H_2O_2损伤组能够显著降低HUVECs的活力,增加细胞中ROS的含量,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低NO分泌,诱导TNF-α和IL-6分泌及降低了Nrf2/HO-1的表达(P<0.01)。不同浓度花青素和H_2O_2同时作用HUVECs时,细胞存活率逐渐上升,ROS、LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,同时NO分泌增加,TNF-α和IL-6分泌下降,Nrf2/HO-1表达增加(P<0.01)。全反式维甲酸组(Nrf2抑制剂)上述指标的检测结果与花青素组相反。结论:花青素对H_2O_2诱导的损伤有保护作用,可能部分通过上调Nrf2/HO-1通路发挥作用。     

右美托咪定激活Nrf2-ARE信号通路对创伤性脑损伤的抗氧化作用

目的探讨右美托咪定（DEX）对创伤性脑损伤（TBI）模型大鼠的神经保护作用、氧自由基清除及脑组织红系衍生的核因子相关因子2（Nrf2）-抗氧化反应原件（ARE）信号通路参与的机制。 方法选择健康成年雄性大鼠体重300~350 g构建TBI模型,将60只SD大鼠分为3组：假手术组（Sham组）、TBI组和TBI＋DEX组,每组20只。其中Sham组仅去除脑颅骨不打砸,TBI组和DEX组均采用改良自由落体装置制备TBI模型,随后在造模后1 h分别给予等量0.9%NaCl和DEX（100 μg/kg）处理。通过采用改良神经功能缺损评分（mNSS）评价神经功能,脑组织干湿重称量法评价脑水肿。使用酶活试剂盒检测损伤24 h后抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）。最后使用免疫印迹试验（Western blot）和实时定量基因扩增荧光检测系统（RT-qPCR）的方法检测Nrf2-ARE信号通路及其下游分子血红素加氧酶1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO-1）的表达水平,表达情况。 结果与TBI组相比,DEX组mNSS评分显著降低（P<0.05）,DEX组能够明显减少脑水肿（P<0.05）;DEX组能够明显增加抗氧化酶SOD活性,降低氧化应激产物MDA的水平（P<0.05）。 结论DEX能够激活Nrf2-ARE信号通路诱导下游抗氧化/解毒酶等靶基因的表达,从而抑制氧化应激损伤发挥神经保护作用。     

厄多司坦对急性肺损伤小鼠肺内Nrf2表达的影响

[目的]探讨厄多司坦对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)小鼠肺内抗氧化转录因子Nrf2表达的影响.[方法]健康雄性C57bl/6小鼠24只随机分为对照组、ALI组和厄多司坦组,每组8只.采用气管注射LPS(5mg/kg)复制小鼠ALI动物模型.厄多司坦组通过提前30min灌胃(150mg/kg)给予预处理,造模12h后处理小鼠.HE染色观察小鼠肺组织形态学改变;检测丙二醛(MDA)含量和超氧歧化物(SOD)活性反映肺组织氧化应激;Western blot法检测肺组织核内Nrf2的表达;Real-time PCR检测肺组织hO-1和SOD mRNA含量.[结果]厄多司坦可改善LPS诱导的ALI小鼠肺组织病理形态学改变,降低肺组织内MDA含量,而增加SOD活性.厄多司坦亦可显著性增加ALI小鼠肺组织细胞核内Nrf2的表达,并显著增加Nrf2下游靶基因HO-1和SOD mRNA的表达.[结论]厄多司坦能减轻LPS诱导的小鼠ALI,通过增强ALI小鼠肺内抗氧化转录因子Nrf2的核转位及转录活性可能是其机制所在.     

MSCs局部注射对豚鼠光老化皮肤组织SOD、MDA的表达影响

目的 观察SOD、MDA在骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)修复皮肤光老化表达.方法 采用密度梯度离心法分离培养MSCs,利用UVB灯管照射豚鼠制备皮肤光老化模型,随机分为正常组、模型组及治疗组.检测皮肤组织中SOD、MDA表达.结果 MSCs细胞在豚鼠皮肤照射区局部多点皮内注射后,MDA表达较模型组明显下降(P＜0.01),但高于正常组.治疗组中SOD表达明显高于模型组(P＜0.01),低于正常组.结论 MSCs注射可以清除体内的氧自由基等有害物质,从而使抗氧化平衡系统保持稳定,MSCs对皮肤光老化有治疗作用.

Abstract：

Objective To observe the expressions of SOD, MDA on photoaging skin when it was repaired by bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) . Methods MSCs were isolated and cultured according to density gradient centrifugation. The model of photoaging skin was prepared in guinea pigs by exposure to UVB lamp. The animals were divided into the normal group, model group and treatment group. The expressions of SOD and MDA were detected in skin tissue. Results The expression of MDA in treatment group was significantly decreased compared with that of the model ( P ＜ 0. 01 ), but higher than that in the normal group. The expression of SOD in treatment group was significantly higher than that of model group ( P ＜ 0. 01 ), but lower than that of normal group. Conclusions MSCs can remove the harmful substances such as oxygen free radicals and keep the antioxidant balance of the system. MSCs play the role on the treatment of skin photoaging.     

稽留流产绒毛组织中APPL1，Nrf2 和HO-1 的水平表达与氧化应激的相关性研究

目的　探讨稽留流产绒毛组织中蛋白亮氨酸拉链基序1（leucine zipper motif 1, APPL1）、核因子E2 相关因子2（Nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2）和血红素加氧酶1（haem oxygenase 1,HO-1）的水平表达与氧化应激的相关性。方法　取46 例稽留流产并行人流术治疗者为实验组,取50 例同期正常早孕并行人工流产术者为对照组,收集两组绒毛组织标本,用放射免疫沉淀法裂解缓冲液(radio immunopreci pitation assay lysis buffer, RIPA) 提取绒毛组织蛋白。用免疫组织化学法检测绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 蛋白表达;用Western blot 检测绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 蛋白水平;酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定绒毛组织中氧化应激指标[ 超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）] 水平。Pearson 检验分析实验组绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 蛋白水平与氧化应激指标水平的相关性。结果　实验组绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 表达阳性率分别为21.7%,32.6% 和26.1%,明显低于对照组的56.0%,64.0%,58.0%,差异均有统计学意义（χ2=9.442 ～ 11.759,均P＜ 0.05）;APPL1（3.2±0.9）,Nrf2（3.7±0.7）和HO-1（3.5±0.8）表达免疫组化评分亦明显低于对照组（4.6±1.4,5.5±1.7,5.1±1.3）,差异有统计学意义（t=5.772 ～ 7.187,均P ＜ 0.05）。实验组绒毛组织中APPL1（1.3±0.1）,Nrf2（0.7±0.1）和HO-1（1.1±0.1）蛋白表达水平明显低于对照组（1.6±0.2,1.1±0.0.1,1.4±0.1）,差异有统计学意义（t=9.171 ～ 19.579,均P ＜ 0.05）。实验组绒毛组织中ROS（8.4±1.5U/ml）,MDA（11.7±2.3nmol/ml） 水平明显高于对照组（3.6±0.5U/ml,5.6±0.8nmol/ml）,SOD（23.9±6.8U/ml）水平明显低于对照组（28.1±6.6U/ml）,差异均有统计学意义（t=3.070 ～ 21.381,均P ＜ 0.05）。实验组绒毛组织中APPL1,Nrf2 和HO-1 蛋白表达与ROS 水平呈负相关（r=-0.628,-0.510,-0.575,均P ＜ 0.05）;与MDA 水平呈负相关（r=-0.541,-0.489,-0.556,均P ＜ 0.05）;与SOD 水平呈正相关（r=0.359,0.423,0.408,均P ＜ 0.05）。结论　APPL1,Nrf2 和HO-1 在稽留流产绒毛组织中呈低表达,且与氧化应激指标ROS,MDA和SOD水平具有显著相关性,其三者异常表达可能通过介导氧化应激失衡进而诱导了稽留流产的发生。     

萝卜硫素通过Nrf2/ARE通路缓解矽肺模型大鼠肺组织纤维化及氧化应激的实验研究

目的研究萝卜硫素对矽肺模型大鼠肺组织纤维化、氧化应激及抗氧化通路核因子E2相关因2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路的影响。方法选择SD大鼠并随机分为对照组、模型组和萝卜硫素组,对照组支气管灌注生理盐水,后两组给予1 ml含有50 mg/ml二氧化硅的生理盐水支气管灌注以建立矽肺模型。造模当天开始,萝卜硫素组给予5 mg/kg萝卜硫素腹腔注射,对照组和模型组给予等剂量生理盐水腹腔注射,1次/d,连续8周。取肺组织进行HE染色并检测胶原蛋白、氧化应激介质的含量及Nrf2/ARE通路分子的表达量。结果与对照组比较,模型组大鼠HE染色可见明显的病理变化且肺组织中胶原蛋白-I(Col-I)、胶原蛋白-III(Col-III)、丙二醛(MDA)的含量及Nrf2、ARE的表达量明显增多,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的含量及Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)的表达量明显减少,差异均有显著性(P<0.05);与模型组比较,萝卜硫素组大鼠HE染色可见病理变化减轻且肺组织中Col-I、Col-III、MDA的含量及Keap-1的表达量减少,SOD、GSH的含量及Nrf2、ARE的表达量明显增多,差异均有显著性(P<0.05)。结论萝卜硫素能够缓解矽肺模型大鼠肺组织纤维化及氧化应激,且该作用与Nrf2/ARE通路的激活有关。     

Sporidiobolus pararoseus wall-broken powder ameliorates oxidative stress in diabetic nephropathy in type-2 diabetic mice by activating the Nrf2/ARE pathway

In type 2 diabetes mellitus (T2DM), hyperglycemia promotes oxidative stress and eventually leads to diabetic nephropathy (DN). Sporidiobolus pararoseus is reported to exhibit enhanced anti-oxidation properties. However, its role in DN remains obscure. This study aimed to determine the antioxidative effects of a Sporidiobolus pararoseus wall-broken powder (SPP) supplement on DN and investigate the possible underlying mechanisms. A model of T2DM was successfully established, and C57BL/6J male mice were fed a high-fat diet for 4 weeks and then injected with streptozotocin (100 mg per kg per day) for three consecutive days. After eight weeks of intervention, SPP strongly lowered fasting glucose levels, serum creatinine, serum urea nitrogen, urinary albumin and reduced glomerular hypertrophy and mesangial matrix expansion. In addition, SPP increased the activities of SOD, T-AOC, CAT, and GST and decreased the amount of MDA. Furthermore, it was revealed that SPP significantly abrogated oxidative stress not only by activating the Nrf2 gene but also by activating two Nrf2-targeted antioxidative genes (NQO-1 and HO-1) compared with metformin hydrochloride, which is widely accepted as a diabetes drug. Our study showed that SPP has antioxidant properties and delays the progression of DN; the underlying mechanism may be associated with activation of the Nrf2/ARE pathway.

STZ-induced diabetic mice are given a high-fat diet and SPP, which is a rich source of β-carotene, γ-carotene, torulene and torularhodin. The result indicated SPP can ameliorate diabetic nephropathy via activating Nrf2/ARE pathway.     

丹酚酸B对小鼠皮肤光老化的保护效应

背景：中药及其提取物在改善皮肤组织结构、提高抗氧化酶活性、抑制基质金属蛋白酶高表达、增强皮肤免疫防御功能等多方面对皮肤光老化起着防治作用。目的：验证丹酚酸B对皮肤光老化的保护作用。方法：同时建立小鼠皮肤体外细胞培养紫外线损伤模型及小鼠紫外照射致皮肤衰老模型,给予不同剂量的丹酚酸B,通过MTT法,单细胞凝胶电泳等观察各组皮肤细胞损伤程度以及丹酚酸B对细胞损伤的保护作用,小鼠灌胃口服不同剂量丹酚酸B,通过对皮肤组织羟脯氨酸、超氧化物歧化酶等含量的检测,评价丹酚酸B是否具有抑制皮肤光老化的作用。结果与结论：紫外照射可使皮肤丙二醛含量明显上升,羟脯氨酸含量,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽氧化酶活性下降。丹酚酸B能有效地对紫外线引起细胞致死性损伤起到保护作用,能显著降低皮肤组织丙二醛含量,提高羟脯氨酸含量,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽氧化酶活性而起到抑制皮肤光老化作用。结果证实丹酚酸B具有保护皮肤光老化作用。     

SIRT1/FOXO1信号通路对小鼠脑缺血再灌注损伤的调控作用

目的 探讨沉默信号调节器1(SIRT1)/叉头转录因子(FOXO1)信号通路对小鼠脑缺血再灌注损伤的调控作用。方法 24只清洁级C57雄性小鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组(I/R组)、SIRT1FOXO1信号通路抑制组(实验组),每组8只小鼠。I/R组与实验组采用夹闭、开放双侧颈总动脉法建立脑缺血再灌注损伤小鼠模型,同时实验组给予EX527(SIRT1抑制剂)腹腔注射,I/R组和假手术组腹腔注射等剂量的生理盐水。比较三组的神经功能缺损评分、脑组织含水量、感觉功能和行走协调能力评分,血浆中白介素-6(IL-6)、白细胞介素1(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,SIRT1、FOXO1、NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达量,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、BCL-2关联蛋白X(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9) mRNA表达,超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果与假手术组相比,I/R组经功能缺损评分、行走协调能力评分和感觉功能、脑组织含水量、炎症因子水平、FOXO1蛋白表达、BAX、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达以及氧化应激指标NO和MDA含量均显著增加(P <0. 05),Nrf2、SIRT1和HO-1蛋白表达、Bcl-2 mRNA表达以及SOD和GSH含量均显著降低(P <0. 05);与I/R组相比,实验组所有指标变化更显著。结论 抑制SIRT1/FOXO1信号通路后,脑缺血/灌注小鼠神经功能降低,脑损伤程度均加重,由此推测SIRT1/FOXO1信号通路的激活与抑制脑缺血/灌注后的炎症反应、减轻氧化应激作用以及减缓细胞凋亡进程相关。     

Quantification and cytoprotection by vanillin, 4-methylguaiacol and 4-ethylguaiacol against AAPH-induced abnormal oxidative stress in HepG2 cells

Vanillin, 4-methylguaiacol, and 4-ethylguaiacol, three phenolic compounds in Gujinggong (GJG) Chinese baijiu (Chinese liquor), were quantified by liquid–liquid extraction (LLE) combined with gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and evaluated for their possible cytoprotective effects by AAPH-induced HepG2 cell model. To confirm whether vanillin, 4-methylguaiacol, and 4-ethylguaiacol protected HepG2 cells against AAPH-induced abnormal oxidative stress via motivating the Keap1–Nrf2 pathway, the gene and protein expression of Nrf2, Keap1, SOD, CAT, and GPx from the Keap1–Nrf2 pathway were measured with real-time PCR and western blot. Three levels of treatment doses (1000, 500, and 100 mg L⁻¹) were applied. Results showed that vanillin, 4-methylguaiacol, and 4-ethylguaiacol exhibited potent cytoprotective effect in a dose-dependent manner, greatly alleviating or reversing the increased oxidative stress induced by AAPH through up-regulating the mRNA and protein expression levels of Nrf2, SOD, CAT, and GPx, and thereby, significantly improving the intracellular antioxidant defense system in HepG2 cells (p < 0.05). Based on these findings, it was confirmed that vanillin, 4-methylguaiacol, and 4-ethylguaiacol, natural components of Chinese baijiu, were able to modulate the expression of Nrf2 and its downstream antioxidative enzymes (i.e., SOD, CAT, and GPx) against AAPH-induced abnormal oxidative stress. Further, this study lays the foundation for better illustrating the health benefits of Chinese baijiu.

Vanillin, 4-methylguaiacol, and 4-ethylguaiacol widely exist in Gujinggong Chinese baijiu and could protect HepG2 cells against oxidative stress via activating the Nrf2 pathway.