葫芦科植物药材中葫芦素类成分的含量差异

目的:分别测定6种葫芦科植物药材中总葫芦素、葫芦素B、葫芦素E的含量,比较不同药材中葫芦素类成分的含量差异。方法:建立UV-Vis分光光度法测定总葫芦素含量,显色剂:5%香草醛-冰醋酸-浓硫酸溶液,检测波长:543 nm。采用HPLC同时测定葫芦素B、葫芦素E的含量,流动相:乙腈-0.1%冰醋酸水溶液(49:51),检测波长230 nm。结果:总葫芦素含量以木鳖子、栝楼最高,南瓜蒂最低;葫芦素B含量以甜瓜蒂最高,雪胆、栝楼、南瓜蒂均较低;葫芦素E含量以栝楼、甜瓜蒂最高,雪胆、南瓜蒂较低。结论:所建立UV-Vis分光光度法测定总葫芦素含量,简便、可靠、准确、重复性好。不同药材中葫芦素类成分含量有一定差异,可作为葫芦科植物药材质量评价、新药组方药材选择、中药药效机理研究的基本依据。     

葫芦素类化合物的抑瘤作用及其作用机制和联合用药研究进展

目的:为发现新的抑瘤靶点、完善葫芦烷型四环三萜类化合物的构效关系以及开发四环三萜类抗肿瘤新药提供参考。方法:以"葫芦素""肿瘤""Cucurbitacin""Tumour"等为关键词,组合查询2005-2016年在Pub Med、Wiley-Blackwell、EBSCO、中国知网、万方、维普等数据库中的相关文献,对葫芦素类化合物中抑瘤效果最明显的葫芦素B、D、E、I及雪胆甲素的抑瘤作用及其作用机制和联合用药进行综述。结果与结论:共检索到相关文献237篇,其中有效文献47篇。葫芦素是从葫芦科植物中分离出的葫芦烷型四环三萜类化合物,其对乳腺癌、肺癌、结肠癌等抑瘤效果显著,可通过诱导细胞凋亡、诱导细胞自噬、阻滞细胞周期、抑制肿瘤转移、破坏细胞骨架以及调节细胞内的信号转导子与转录激活子3、丝裂原激活的蛋白激酶等信号通路来发挥抑瘤作用。葫芦素类药物无论是与临床上使用的药物联合还是自身联合应用,均有较好的协同作用;此外,葫芦素类药物还能提高放疗的敏感性,逆转卵巢癌紫杉醇耐药细胞的多药耐药。目前,关于葫芦素的抗肿瘤研究虽然很多,但大多集中于体外研究,体内研究较少且未见临床应用。今后对含量丰富的葫芦素类化合物开展抑瘤研究的同时,也应对其他的葫芦素及衍生物进行研究对比。     

细花雪胆中的新成分——新葫芦素

本文报告从细花雪胆(Hemsleya graciliflora(Harms)cogn)地下茎中分离鉴定了五个化合物Ⅰa,Ⅰb,Ⅱa,Ⅱb和Ⅲ。经UV,IR,¹HNMR,MS分析及催化氢化证明Ia是一个新葫芦素:19-失碳,9β-甲基,10 α-H,2β,3α,16α,20,25-五羟基,△^5,23-羊毛甾二烯,11,22-双酮,25-乙酸酯即葫芦素F-25-乙酸酯(cucurbitacin F-25-acetate)。Ib是雪胆甲素(23,24-dihydrocucurbitacin F-25-acetate)。Ⅱa是葫芦素F(cucurbitacin F)。Ⅱb是雪胆乙素(23,24-dihydro-cucurbitacin F)。Ⅲ是齐墩果酸-28-O-β-D吡喃葡萄糖甙(C₂₈-glucoside of oleanoIic acid)。     

葫芦素B抗肿瘤作用及其机制研究进展

葫芦素是从葫芦科等植物中分离的三萜类天然产物,具有多种药理作用。葫芦素B是葫芦素家族的重要成员,对多种肿瘤具有抑制作用,是潜在的抗肿瘤药物。葫芦素B能够抑制肿瘤细胞STAT3转录因子的活化,干扰丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路,诱导细胞周期阻滞于G2/M期,诱导肿瘤细胞凋亡,引起细胞骨架变化。越来越多的研究表明,葫芦素B的抗肿瘤作用可能与其破坏肌动蛋白细胞骨架的活性密切相关。本文综述了葫芦素B的抗肿瘤作用及其可能的机制。     

葫芦素B体外对乳腺癌细胞的生长抑制作用研究

目的观察葫芦素B(Cucurbitacin B)对非磷酸化STAT3人乳腺癌细胞系MCF-7和磷酸化STAT3人乳腺癌细胞系MDA-MB-435S的增殖抑制和诱导凋亡作用,为临床应用提供依据。方法用不同浓度的葫芦素B分别处理MCF-7和MDA-MB-435S细胞,48 h后用MTT法检测细胞增殖;用荧光显微镜观察细胞凋亡。结果MTT结果显示,葫芦素B对MCF-7和MDA-MB-435S细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量依赖性,统计学分析提示,各实验组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);荧光显微镜显示典型的细胞凋亡。结论葫芦素B对人乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用(与STAT3的活化状态无关),诱导乳腺癌细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤效应。     

HPLC法同时测定葫芦素原料中葫芦素B和葫芦素E的含量

目的建立同时测定葫芦素原料中葫芦素B和葫芦素E含量的方法。方法采用HPLC法。色谱柱为Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(体积比50∶50∶0.1),流速为1.0 mL.min-1,柱温为室温,检测波长为234 nm,进样量为20μL。结果葫芦素B和葫芦素E质量浓度分别在28.2~253.8 mg.L-1和2.02~18.18 mg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.1%(RSD=1.0%,n=9)和99.5%(RSD=0.83%,n=9)。结论该方法快速、准确、重复性好,能更好的控制葫芦素原料的质量。     

雪胆素的研究进展

本文针对国内外对雪胆素的提取分离、药理作用和临床应用等方面的研究状况进行综述。雪胆属植物中多富含雪胆素,具有抑菌、抗肿瘤、抗人免疫缺陷病毒(HIV)活性和抗胃溃疡等作用。     

葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨葫芦素B对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响及其作用的分子机制。方法体外培养BGC-823细胞,MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性,采用Western blot方法检测葫芦素B对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果葫芦素B对BGC-823细胞的增殖有抑制作用,且此作用呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测结果显示,葫芦素B诱导BGC-823细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B处理后Caspase-3、Caspase-9活性升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bak的表达增加。结论葫芦素B可以抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

葫芦素B水-醇凝胶的体外经皮通透性

目的考察处方因素对葫芦素B水-醇凝胶的体外通透性的影响。方法建立了HPLC法测定葫芦素B的方法。采用Franz扩散池,以大鼠离体皮肤为通透膜,研究葫芦素B水-醇凝胶体外经皮通透性。结果选择的3种通透促进剂中,质量分数(w)为1%的油酸溶液具有最佳的促透效果,含葫芦素B质量分数为0.2%的凝胶经大鼠皮肤24 h累积通透量Qt达(410.39±33.75)μg.cm-2。结论水-醇凝胶是葫芦素B经皮给药的有效载体。     

应用高效液相色谱法测定葫芦素片中葫芦素B的含量

目的测定葫芦素片中葫芦素B的含量。方法采用高效液相色谱法,应用Waters Symmetry C18（250 mm×4.6 mm,5.0μm）色谱柱,流动相∶乙腈-水（51∶49）,流速：1.0 ml/min,柱温：25℃,检测波长：228 nm。结果葫芦素B的回归方程：Y=1 067.3C-0.508 4（r=0.999 9）,平均回收率为99.39%（n=6）,RSD为0.56%,说明该法具有良好的回收率。结论用HPLC法测定葫芦素片中葫芦素B的含量,方法简便,重复性好,结果准确。     

外翻肠囊法研究姜黄素促进葫芦素B肠段吸收作用

目的:建立大鼠肠吸收模型,考察对葫芦素B的吸收以及姜黄素对葫芦素B吸收的促进作用。方法:采用大鼠离体外翻肠囊模型,通过HPLC法测定肠囊内样品溶液中葫芦素B的含量,研究葫芦素B在不同肠段的吸收特性和不同比例姜黄素对葫芦素B的促吸收作用。结果:葫芦素B的肠吸收随其浓度的升高而增大,当葫芦素B联合不同比例姜黄素后,百分吸收率(P%)、累计吸收量(Q)和吸收速率常数K_a值均具有显著性差异。结论:葫芦素B主要吸收部位为十二指肠,且在大鼠肠内主要以被动扩散方式吸收;姜黄素能够促进葫芦素B的大鼠肠吸收,且呈浓度依赖性。     

葫芦素B通过激活线粒体途径诱导人肺癌NCI-H460细胞凋亡

目的探讨葫芦素B对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外培养NCI-H460细胞,MTT法观察葫芦素B对细胞增殖的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。采用罗丹明123(Rhodamine 123)染色,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm),采用Western blot方法检测线粒体内和胞浆内的细胞色素C。结果葫芦素B对NCI-H460细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;葫芦素B处理组细胞形态发生显著改变,细胞皱缩、变圆,可见胞核染色质浓缩;流式细胞仪检测结果显示葫芦素B诱导NCI-H460细胞凋亡,呈剂量依赖性。葫芦素B处理后线粒体膜电位显著下降,细胞色素C由线粒体释放到胞浆中。结论葫芦素B可以抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖并诱导细胞凋亡,线粒体途径参与葫芦素B诱导的NCI-H460细胞凋亡。     

葫芦素B和阿霉素联合应用在体内外对肝癌细胞H22的生长抑制作用

目的研究葫芦素B和阿霉素联合应用在体内外对肝癌细胞H22的生长抑制作用。方法将40只雌性昆明小鼠随机分为4组,每组10只,包括阴性对照组(生理盐水组)、阿霉素组、葫芦素B组、联合组。分别以阿霉素、葫芦素B、葫芦素B联合阿霉素处理H22细胞,培养48 h后MTT法检测细胞增殖情况。计算抑瘤率、白细胞数、胸腺指数、脾脏指数和血药浓度。结果 MTT结果显示,与阿霉素组相比,联合组对H22细胞的增殖抑制作用明显增强,联合组与阿霉素组之间、高剂量组与低剂量组之间的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。联合组与阿霉素组相比,抑瘤率明显增强,并且联合组阿霉素在心脏中的浓度明显降低(P<0.05)。结论葫芦素B和阿霉素联合应用具有增强抗H22肝癌作用。     

葫芦素B调节Hippo-Yes相关蛋白通路对宫颈癌中调节性T细胞介导免疫逃逸的有关机制研究

目的 探讨葫芦素B调节Hippo-Yes相关蛋白(YAP)通路对宫颈癌中调节性T细胞(Treg)介导的免疫逃逸的影响。方法 选取BALB/c裸鼠32只作为研究对象,皮下注射人宫颈癌Hela细胞建立裸鼠移植瘤模型,将造模成功的裸鼠按照随机数字表法分为CON组、葫芦素B组、LPA组和葫芦素B-LPA组,每组8只。CON组采用腹腔注射生理盐水,葫芦素B组和LPA组采用腹腔注射剂量0.5 mg/kg的葫芦素B和剂量为3 mg/kg的JAP激活剂LPA,葫芦素B-LPA组采用腹腔同时注射0.5 mg/kg的葫芦素B和3 mg/kg的LPA,每2天给药一次,共处理21 d后取材;采用ELISA试剂盒法比较各组裸鼠血清白介素-2(IL-2)、IL-10和转化生长因子-β₁(TGF-β₁)水平;采用流式细胞术比较各组裸鼠淋巴细胞CD4⁺、CD4⁺CD25⁺叉状头状螺旋转录因子3(Foxp3⁺)Treg水平;采用Western blot法比较各组瘤组织Foxp3、TGF-β...     

星点设计-效应面法优化葫芦素口服脂质纳米乳剂的处方

目的借助星点设计-效应面法确定葫芦素口服脂质纳米乳剂的最优处方。方法提出了2个量化乳剂稳定性的常数:灭菌稳定性常数KS和冻融稳定性常数KF。用微射流仪制备葫芦素口服脂质纳米乳剂,采用星点设计-效应面法,以葫芦素口服脂质纳米乳剂的平均粒径(Y1)、灭菌稳定性常数KS(Y2)及冻融稳定性常数KF(Y3)为评价指标,考察了葫芦素口服脂质纳米乳剂处方中聚氧乙烯40氢化蓖麻油的用量(X1)、大豆卵磷脂的用量(X2)及中链脂肪酸甘油三酯的用量(X3)对制剂的影响,以效应面法预测最佳处方。结果优选的最优处方为:m(聚氧乙烯40氢化蓖麻油)∶m(大豆卵磷脂)∶m(中链脂肪酸甘油三酯)=1.15∶0.50∶5.52。采用优化处方制得的葫芦素口服脂质纳米乳剂的平均粒径为(113.6±2.1)nm,灭菌稳定性常数KS为2.92±0.7,冻融稳定性常数KF为5.14±0.2,同预测值的偏差均较低,最大偏差为4.6%。结论星点设计-效应面法所建立的模型能较好地应用于葫芦素口服脂质纳米乳剂处方的优化。     

葫芦素脂肪乳剂成型性影响因素考察

目的了解影响葫芦素脂肪乳剂成型性的因素.方法以葫芦素脂肪乳的外观、粒径、药物含量及稳定性为指标,分别考察渗透压、高压乳匀、pH、空气置换剂及灭菌等因素对乳剂成型性的影响.结果等渗调节剂甘油对乳剂粒径没有影响;高压乳匀可降低乳剂粒径,适当压力下多次乳匀可获得粒径小、均匀性好的乳剂;pH可影响乳剂中药物含量;使用空气置换剂的乳剂在37℃放置3个月后稳定性良好,而充空气的乳剂发生破裂;高压灭菌时,升温速度对乳剂的稳定性亦有影响.结论控制和掌握好高压乳匀、pH、空气置换剂及灭菌等因素,就可获得粒径大小适宜、粒度均匀、性质稳定、供静脉注射的葫芦素脂肪乳剂.     

注射用葫芦素B聚乳酸-羟基乙酸纳米球的制备

目的制备葫芦素B聚乳酸羟基乙酸纳米球。方法采用溶剂挥发法制备葫芦素B聚乳酸羟基乙酸纳米球;以包封率、载药量及粒径为指标,考察处方因素及工艺条件对纳米球质量的影响;采用正交设计法L9(34)对处方进行优化;采用冰箱及室温留样观察法考察制剂稳定性。结果纳米球包封率为85.61%,平均粒径为126 nm;纳米球混悬液在冰箱中4℃保存1个月能基本保持稳定,长期放置则不稳定;纳米球冻干品,室温放置3个月,pH值、粒度分布、包封率和载药量均无明显变化。结论溶剂挥发法制得的葫芦素B聚乳酸羟基乙酸纳米球包封率较高,制备工艺简单。     

人肝癌细胞系对葫芦素B的体外摄取经时过程

目的:考察人肝癌细胞系HepG-2细胞对葫芦素B摄取过程的经时变化规律。方法:采用MTT法确定药物摄取剂量与时间,细胞培养技术考察药物摄取过程,高效液相色谱-二极管阵列检测(HPLC-DAD)法检测药物摄取量,并对摄取的量-时过程进行分析。结果:确定葫芦素B摄取为10μg.mL-1,摄取时间4 h。在0.5 h前,细胞摄取速度较平缓,0.5～1 h摄取速度呈指数增加趋势,1 h后摄取速度放缓,2 h到达最大量,摄取率30.37%,2 h后细胞摄取葫芦素B的量逐渐减小。结论:摄取过程表现出一定的剂量与时间相关性;建立的方法能够用于HepG-2细胞对葫芦素B的摄取研究,亦可为其他药物的摄取研究提供借鉴。     

高效液相色谱法测定葫芦素B人血清白蛋白纳米粒中药物含量

目的:建立葫芦素B人血清白蛋白纳米粒中药物含量的测定方法。方法:采用Diamonsil C18柱(200mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-水-磷酸(45∶55∶0.1)作为流动相;流速为1 mL.min-1;检测波长为228 nm;柱温30℃。结果:在本实验条件下蛋白纳米粒中辅料对葫芦素B的测定无干扰,在1.0~20 mg.L-1浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=5),葫芦素B平均回收率为100.2%,RSD为0.8%(n=3)。结论:本法准确可靠,简便易行,可用于葫芦素B人血清白蛋白纳米粒中药物含量的测定。     

葫芦素B脂肪乳注射液处方及制备工艺的研究

目的确定葫芦素B脂肪乳注射液的最优处方和最佳制备工艺。方法利用高压均质技术制备葫芦素B脂肪乳注射液,分别对药物和磷脂的加入方式、均质压力和次数、pH值和灭菌方式等制备工艺进行了考察,对油相组成、磷脂、F68和油酸钠的用量及抗氧剂的选择进行了优化。结果确定了最终的处方和制备工艺：将葫芦素B与2.0%磷脂溶解于无水乙醇中,70℃氮气流下挥干无水乙醇后加入2.5%长链三酰甘油、7.5%中链三酰甘油及0.05%dl-α-生育酚,70℃继续搅拌使其溶解,2.5%注射用甘油、0.2%F68和0.3%油酸钠分散于适量注射用水中,70℃加热搅拌至溶解;油相加入水相至15 000 r.min-1高速搅拌5 min得初乳;将初乳pH值调至8.0,定容,40℃下,700 bar高压均质8次;灭菌条件为121℃热压蒸汽灭菌8 min。结论所制备葫芦素B脂肪乳注射液具有较好的物理化学稳定性。