糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1基因表达的影响

为探讨糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞表达单核细胞趋化蛋白 1基因的影响 ,体外分离培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,然后用不同浓度葡萄糖 (0、5、2 0、5 0和 80mmol L)制备的糖基化终产物 BSA(2 0 0mg L)干预 2 4h和用葡萄糖浓度为 5 0mmol L孵育的糖基化终产物 BSA干预 0、12、2 4和 36h ,逆转录聚合酶链反应检测细胞中单核细胞趋化蛋白 1mRNA表达水平。结果发现 ,葡萄糖浓度 2 0mmol L、5 0mmol L和 80mmol L孵育的糖基化终产物都增加单核细胞趋化蛋白 1mRNA的表达 ,其中 5 0mmol L组作用最明显 (P <0 .0 0 5 ) ,干预 12h、2 4h、36h后单核细胞趋化蛋白 1mRNA表达均较未干预组明显增加 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,糖基化终产物促进大鼠主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白 1基因的表达     

糖基化终产物对U937细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的影响

目的探讨糖基化终产物(AGEs)对U937细胞巨噬细胞炎性蛋白-1αmRNA表达的影响,及AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将U937细胞用不同浓度(100、200、400 mg/L)AGEs孵育24 h及同一浓度(400 mg/L)AGEs孵育0、12、24及36 h,采用原位杂交(PT-PCR)方法检测巨噬细胞炎性蛋白-1αmRNA的表达水平。结果对照组U937细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α呈弱表达;100、200及400 mg/LAGEs孵育24 h后,各组U937细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1αmRNA表达的平均积分光密度值较对照组均显著升高(P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12、24及36 h后,各组U937细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1αmRNA表达的平均积分光密度值均高于0 h(P<0.05)。结论AGEs以时间及剂量依赖的方式促进U937细胞巨噬细胞炎性蛋白-1αmRNA的表达。     

球形脂联素对糖基化终产物诱导血管内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α的影响

目的 观察球形脂联素(gAdAPN)对糖基化终产物诱导血管内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,以人血清白蛋白作为阴性对照,用含不同浓度梯度(100、200、400 mg/L)糖基化终产物的培养液对内皮细胞体外培养60 min及gAdAPN 100 nmol/L作用30 min后再加入400 mg/L糖基化终产物作用内皮细胞60 min,采用Western印迹法检测内皮细胞MIP-1α蛋白的表达.结果 糖基化终产物组内皮细胞MIP-1α蛋白的表达明显高于对照组(P＜0.05),且呈剂量依赖方式;经灰度值分析,各组内皮细胞内MIP-1α蛋白的表达量分别为对照组的1.12倍、1.47倍及1.98倍(P＜0.05).gAdAPN干预组内皮细胞MIP-1α蛋白的表达降低为对照组的1.64倍(P＜0.05).结论 gAdAPN能抑制糖基化终产物诱导血管内皮细胞表达MIP-1α,可能有助于延缓糖尿病大血管病的发生.     

不同蛋白糖基化终产物对大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

探讨大鼠Ⅰ型胶原及牛血清白蛋白的糖基化终产物对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。用贴块法培养SD大鼠主动脉平滑肌细胞至3-4代，分别用体外合成的大鼠Ⅰ型胶原糖基化终产物和牛血清白蛋白糖基化终产物刺激，并以大鼠Ⅰ型胶原和牛血清白蛋白处理的细胞作为对照，与此同时加入大鼠抗血管内皮生长因子抗体，采用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定细胞增殖情况。结果发现，大鼠Ⅰ型胶原糖基化终产物能够显著地促进主动脉平滑肌细胞增殖，抗血管内皮生长因子抗体则能有效地抑制上述作用；牛血清白蛋白糖基化终产物对血管平滑肌细胞的增殖有明显的抑制作用，加入抗血管内皮生长因子抗体后未见明显影响。结果提示，不同蛋白的糖基化终产物对血管平滑肌细胞增殖的影响不同，对细胞因子分泌作用的影响也不相同。     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 研究糖基化终产物对结缔组织生长因子(CTGF mRNA)及蛋白质表达的影响,探讨糖基化终产物致动脉粥样硬化机制. 方法 采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞.反转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测血管平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA及蛋白质的表达. 结果 随着糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)的干预浓度(100、200、400 mg/L)升高,CTGF mRNA的表达水平呈上升趋势,分别为(0.78±0.03)、(1.15±0.03)、(1.40±0.04)mg/L,与未干预(0.40±0.02)mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度间差异亦有统计学意义(P<0.05).以200 mg/L的AGE-BSA对平滑肌细胞分别干预0、4、8、16、24、48、72 h,发现4 h时CTGF mRNA表达即已升高(0.93±0.04)mg/L,8 h时最高(1.29±0.04)mg/L,以后虽略有下降,但仍维持较高水平. 结论 糖基化终产物促进血管平滑肌细胞表达结缔组织生长因子,可能是其致动脉粥样硬化机制中的一个重要方面.     

糖尿病大鼠糖基化终产物与主动脉细胞外基质成分的关系

为探讨糖基化终产物在糖尿病大鼠动脉粥样硬化发生中对主动脉细胞外基质成分生成增加所起的作用,本实验将糖尿病大鼠、糖尿病＋ 氨基胍治疗大鼠和正常大鼠分别喂养１、２、３ 和４ 个月后,测定其血红蛋白－ 糖基化终产物及主动脉壁Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、Ⅳ型胶原－ 糖基化终产物及层粘蛋白含量。结果发现,糖尿病组大鼠各时相点血红蛋白－ 糖基化终产物（１ ～４ 个月分别为６．８８±１ ．２３、１０ ．２６±０．６３、１５．３±１．４９ 和１８．５７ ±２．９０ ｋｕｇ, 与血糖水平相关）、Ⅲ型前胶原（１ ～４个月分别为１５．２０±３．０３ 、２１．４４ ±１．７９、２７．１９±３ ．２８ 和３３．９９±４ ．９６ μｇＬ, 与血红蛋白－ 糖基化终产物和Ⅳ型胶原－ 糖基化终产物相关） 、Ⅳ型胶原（１～４ 个月分别为２３．６７±１．４９、３０．３７ ±２ ．８６、３６．６５ ±１．９８ 和４５．４６±５．７７ μｇＬ, 与血红蛋白－ 糖基化终产物和Ⅳ型胶原－ 糖基化终产物相关）、Ⅳ型胶原－ 糖基化终产物（１～４ 个月分别为０．７９ ±０．１５、１．２５ ±０．２２ 、１．５４ ±０．０６ 和１．８０±０ ．１４ Ｍｕｇ, 与血红蛋白－ 糖基化终产物和Ⅳ型胶原相关）      

α-硫辛酸对糖基化终产物诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的观察α-硫辛酸对糖基化终产物诱导血管内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,以人血清清蛋白作为阴性对照,用含不同浓度梯度(100、200、400mg/L)糖基化终产物的培养液对内皮细胞体外培养60min及α-硫辛酸200μg/ml作用30min后再加入200mg/L糖基化终产物作用内皮细胞60min,采用ELISA法检测内皮细胞8-OHdG水平,瑞氏-吉姆萨染色及Hoechst33258染色观察内皮细胞形态学变化。结果糖基化终产物组内皮细胞8-OHdG水平较对照组明显增加(P0.05),糖基化终产物以剂量依赖方式诱导培养的内皮细胞凋亡,α-硫辛酸干预后内皮细胞8-OHdG水平显著降低,明显减轻内皮细胞凋亡的形态学改变。结论α-硫辛酸抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡,其作用机制可能是通过降低细胞氧化应激水平。     

糖基化终产物对平滑肌细胞增殖及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响

目的探讨糖基化终产物对大鼠平滑肌细胞增殖以及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响。方法体外分离培养大鼠平滑肌细胞,以不同浓度(50、100、200和400mg/L)糖基化终产物作用于平滑肌细胞不同时间(0、4、8、16、24、48、72和96h),MTT法观察糖基化终产物对平滑肌细胞增殖的影响,逆转录聚合酶链反应测定纤溶酶原激活物抑制剂1基因的表达。结果不同浓度的糖基化终产物作用8h均对平滑肌细胞增殖无影响,以后各时间点不同浓度的糖基化终产物均导致平滑肌细胞增殖,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。糖基化终产物作用不同时间均可使平滑肌细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂1基因水平升高,且随着浓度升高而增加(分别为0.85±0.05、0.97±0.05、1.08±0.12和1.41±0.05),与对照组(0.80±0.03)比较差异有显著性(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导血管平滑肌细胞增殖并增加纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达是糖尿病患者易患动脉粥样硬化的可能原因。     

维生素E对糖基化终产物刺激大鼠主动脉平滑肌细胞信号转导物甘 …

为探讨抗氧化剂维生素Ｅ对糖基化终产物刺激大鼠主动脉平滑肌细胞信号转导的影响及其机制，应用薄层层析、放射自显影和放射酶标记分离来检测平滑肌细胞中甘油二酯含量；采用检测糖基化终产物的荧光值判断糖基化终产物的形成量。结果发现，维生素Ｅ与葡萄糖、牛血清白蛋白共同孵育后糖基化终产物荧光值明显降低，其刺激细胞产生甘油二酯的能力随之减弱。而维生素Ｅ预先处理平滑肌细胞中，糖基化终产物刺激细胞产生二酯的水平也显著降     

糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体蛋白表达的影响

目的　研究诱导分化及糖基化终产物 (AGEs)对人单核 /巨噬细胞 (U937细胞 )高密度脂蛋白受体 (SR BI)蛋白表达的影响 ,探讨AGEs和巨噬细胞SR BI在动脉粥样硬化中的作用。方法　U937细胞经PMA诱导分化 ,并将不同浓度或同一浓度AGEs与诱导分化 48h后的U937细胞共同孵育 ,用免疫细胞化学法和Western印迹法检测SR BI蛋白的表达。结果　诱导分化后U937细胞SR BI表达在 2 4、48h逐渐升高 ,72h下降 ;1 0 0、2 0 0和 40 0 μg/mlAGEs刺激后细胞表面SR BI蛋白表达量分别是BSA组的 1 44、2 38和 2 77倍 (P <0 0 5) ;40 0 μg/ml的AGEs作用 6、1 2、2 4、48h后 ,U937巨噬细胞SR BI蛋白表达量分别为 0h的 1 38、2 49、3 76和 4 2 5倍 (P <0 0 5)。结论　AGEs可增加U937巨噬细胞SR BI蛋白表达且呈浓度和时间依赖性。     

维生素E对糖基化终产物刺激大鼠主动脉平滑肌细胞信号转导物甘油二酯的影响

为探讨抗氧化剂维生素Ｅ对糖基化终产物刺激大鼠主动脉平滑肌细胞信号转导的影响及其机制,应用薄层层析、放射自显影和放射酶标记分离来检测平滑肌细胞中甘油二酯含量;采用检测糖基化终产物的荧光值判断糖基化终产物的形成量。结果发现,维生素Ｅ与葡萄糖、牛血清白蛋白共同孵育后糖基化终产物荧光值明显降低,其刺激细胞产生甘油二酯的能力随之减弱。而维生素Ｅ预先处理平滑肌细胞后,糖基化终产物刺激细胞产生甘油二酯的水平也显著降低。以上提示维生素Ｅ能明显抑制糖基化终产物刺激平滑肌细胞产生甘油二酯,并且能抑制糖基化终产物的形成。     

谷胱甘肽对糖基化终产物诱导平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨糖基化终产物(AGEs)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖作用和还原型谷胱甘肽(GSH)对AGE介导的动脉平滑肌细胞增殖作用的抑制机制。方法以体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞为实验模型,分为8组,每组12孔,每孔细胞密度1×10~5/mL,与不同浓度的糖基化终产物共同培养,并用不同浓度的谷胱苷肽干预。分别用噻唑蓝(MTT)比色法测定血管平滑肌细胞增殖和用夹心ELISA方法测定细胞的磷酸化P38丝裂素蛋白激酶(P-P38 MAPK)的浓度来探讨平滑肌增殖的机制和干预因素。结果 (1)AGEs对血管平滑肌细胞MTT吸光度的影响:经过AGEs干预,与对照组比较,血管平滑肌细胞MTT的吸光度(OD)值增高(P<0.01),分别为:B组0.43±0.146,C组0.49±0.16,D组0.48±0.185。但随着AGEs浓度增加,B、C、D组间MTT OD值无统计学上差异(P>0.05)。(2)GSH对AGEs干预的血管平滑肌细胞MTT吸光度的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组与AGEs(25 mg/L)对照组比较,MTT吸光度下降(P<0.01),分别是F组0.347±0.102,G组0.333±0.108,H组0.285±0.08。但随着GSH浓度增加,F、G、H组组间无统计学差异(P>0.05)。(3)AGEs对血管平滑肌细胞内P-P38 MAPK的影响:经过AGEs干预后,p-p38MAPK吸光度增加(P<0.01),B组0.65±0.17,C组0.85±0.26,D组0.94±0.17,分别为对照组0.26±0.06的2.5、3.2和3.6倍(P<0.01)。随AGEs浓度增加,C、D组与B组相比,P-P38有显著增加(P<0.01)。(4)GSH对AGEs干预的血管平滑肌细胞内P-P38的影响:在加入GSH的AGEs干预组,F、G、H组与B组即AGEs对照组比较,p-p38 MAPK吸光度降低(P<0.01),分别是F组0.356±0.09 G组0.281±0.07 H组0.256±0.072,与对照组相比分别下降45%,56%,60%(P<0.01)。随着GSH浓度增加,G、H组与F组相比,p-p38MAPK逐渐降低(P<0.01)。结论 (1)AGEs具有促进血管平滑肌细胞增值的作用,其作用机理可能与激活了P-P38MAPK信号传导通路有关。(2)GSH对AGEs介导的血管平滑肌细胞增值     

活化蛋白-1和巨噬细胞炎性蛋白-1α在实验性关节炎大鼠发病中的分子机制及亚砷酸的影响

目的研究活化蛋白(AP)-1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α在佐剂性关节炎大鼠发病中的分子机制及亚砷酸(SA)对它们的影响。方法随机将大鼠分成4组:正常对照组(NC组)、模型组(M组)、SA1组(腹腔注射SA0.5mg·kg-·1d-1)、SA2组(腹腔注射SA1.0mg·kg-1·d-1)。免疫组织化学检测各组C-fos、MIP-1α的表达;生化法测C反应蛋白。结果NC组未见C-fos和MIP-1α表达,M组C-fos及MIP-1α大量表达(P<0.05),C反应蛋白水平升高(P<0.01);与M组比较,SA1组及SA2组C-fos、MIP-1α表达降低(P<0.05),C反应蛋白水平下降(P<0.01),且SA2组更明显。结论AP-1和MIP-1α在大鼠佐剂性关节炎发生发展具有重要作用;亚砷酸能下调AP-1和MIP-1α的表达,降低CRP的水平,提示亚砷酸对RA有一定的治疗作用。     

1-磷酸鞘氨醇受体1参与晚期糖基化终产物引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的观察1-磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)在晚期糖基化终产物(AGE)引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用。方法培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),葡萄糖与牛血清白蛋白(BSA)孵育法获得AGE-BSA,分为对照组、BSA组和AGE-BSA组,采用CCK-8实验检测平滑肌细胞增殖能力,采用细胞划痕和Transwell实验检测平滑肌细胞迁移能力,并进一步观察BSA和AGE-BSA在有或无S1PR1拮抗剂VPC23019/激动剂SEW2871预处理后的细胞增殖和迁移。结果与对照组比较,BSA和AGE-BSA均能诱导HUASMC增殖和迁移,AGE-BSA的作用比BSA更加显著(P0.05);S1PR1拮抗剂VPC23019可以明显抑制BSA和AGE-BSA诱导的HUASMC增殖和迁移;S1PR1激动剂SEW2871本身就可以促进HUASMC增殖和迁移,并且进一步促进BSA诱导的HUASMC增殖和迁移,而对AGE-BSA诱导的HUASMC增殖和迁移没有进一步的促进作用。结论血浆白蛋白本身对平滑肌细胞的增殖具有促进作用,糖基化修饰的白蛋白这一作用更加明显;S1PR1的激活参与了BSA和AGE-BSA促进平滑肌细胞增殖和迁移,AGE-BSA对S1PR1的激活作用更加显著。     

糖基化终末产物对ECV-304细胞ICAM-1及VCAM-1表达的影响

目的探讨糖基化终产物(AGEs)与其受体(RAGE)对ECV-304细胞上血管细胞黏附分子-(1ICAM-1)和细胞间黏附分子-(1VCAM-1)的影响,为研究AGEs在动脉粥样硬化发生发展中的作用提供实验依据。方法采用体外制备的糖基化终产物——糖基化的牛血清白蛋白(AGE-BSA)和反义RAGE寡核苷酸处理ECV-304细胞,通过流式细胞仪技术、Western印迹技术检测ECV-304细胞上ICAM-1、VCAM-1蛋白质的表达。结果AGEs处理ECV-304细胞后,可诱导ECV-304细胞上VCAM-1和ICAM-1的表达增加,且这种效应呈剂量依赖性。采用反义技术阻断RAGE的mRNA水平的翻译后,ECV-304细胞ICAM-1和VCAM-1的表达呈剂量依赖性降低。结论AGEs可通过与其膜受体RAGE的结合激活血管内皮细胞VCAM-1和ICAM-1的表达,这可能是AGEs促动脉粥样硬化发生发展的机制之一。     

巨噬细胞炎症蛋白-1α与动脉粥样硬化斑块

巨噬细胞炎症蛋白-1α是一种CC亚族的趋化因子蛋白,它可以通过不同途径发挥多种的生物学效应。巨噬细胞炎症蛋白-1α在血管细胞的分布及其生理作用,对动脉粥样硬化的发生发展起到一定的作用。     

糖基化终末产物对大鼠平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响

目的 观察糖基化终末产物对大鼠血管平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响.方法 采用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞.用体外制备的外源性糖基化终末产物和血管平滑肌细胞共孵育24 h,利用BCECF通过荧光分光光度计检测细胞上钠/氢交换蛋白1活性.结果 不同浓度糖基化终末产物(1、5和10mg/L)与血管平滑肌细胞共孵24 h后,能显著增强钠/氢交换蛋白1的活性,分别使钠/氢交换蛋白1的活性从0.66±0.05升高至0.71±0.03、0.80±0.07和0.88±0.06(P<0.05或P<0.01),使钠/氢交换蛋白1 mRNA表达从0.77±0.07分别升高至0.88±0.08、1.23±0.06和1.33±0.08(P<0.05或P<0.01);预先使用糖基化终末产物受体阻断剂5 mg/L,钠/氢交换蛋白1活性比糖基化终末产物处理组明显降低(0.68±0.04比0.90±0.05,P<0.05);使用不同浓度的丝裂原活化蛋白激酶阻断剂PD98059(1、10和25 μmol/L),使钠/氢交换蛋白1活性从0.94±0.05分别降至0.86±0.06、0.74±0.05和0.66±0.07(P<0.05或P<0.01).结论 外源性糖基化终末产物能诱导血管平滑肌细胞上钠/氢交换蛋白1活化,其机制可能与糖基化终末产物激活糖基化终末产物受体,引起丝裂原活化蛋白激酶信号通路活化有关.     

巨噬细胞炎症蛋白-1α在机械通气大鼠肺泡巨噬细胞中的表达

目的 通过检测不同潮气量机械通气大鼠肺泡巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)和核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65蛋白表达水平,探讨肺泡巨噬细胞(AM)活化在呼吸机所致肺损伤(VILI)中的作用.方法 32只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、小潮气量组、常规潮气量组和大潮气量组.采用SABC法分别测定各组大鼠BALF肺泡MIP-1α及NF-κB p65蛋白表达水平.并用100-CX型透射电镜观察其AM的超微结构.结果 大潮气量和常规潮气量组大鼠BALF肺泡MIP-1α及NF-κB p65蛋白染色阳性细胞百分比均明显高于对照组和小潮气量组(P＜0.01);大潮气量组大鼠BALF肺泡MIP-1α及NF-κB p65蛋白染色阳性细胞百分比与常规潮气量组比较亦有显著差异;小潮气量组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).透射电镜下显示,大潮气量和常规潮气量组大鼠AM呈功能激活状态.结论 AM是引起VILI的始动细胞之一,在VILI的发病中具有重要作用;AM活化并释放MIP-1α是引起肺内PMN聚集、活化,导致VIL1发生的一个重要因素;AM表达与释放MIP-1α在某种程度上可能受NF-κB的调控.     

玉葵清对糖基化终产物诱导的人肾系膜细胞趋化因子表达的影响

目的 探讨玉葵清对糖基化终产物（AGEs）诱导的人肾系膜细胞（HRMC）趋化因子表达及其趋化效应的影响. 方法 糖基化牛血清白蛋白（AGE-BSA）和玉葵清干预HRMC. 结果 AGE-BSA组较BSA组HRMC趋化单核细胞数增加,单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、Fractalkine（FKN）中和抗体组HRMC趋化单核细胞数较AGE-BSA组减少;玉葵清组MCP-1、Fractalkine基因表达、上清中的蛋白含量和趋化单核细胞较BSA组降低（P＜0.05）. 结论 玉葵清减弱AGE-BSA诱导的HRMC趋化因子表达及其趋化效应,可能改善DN肾脏炎症反应.