EPO对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑红蛋白表达的影响

目的观察促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑红蛋白(Neuroglobin,Ngb)表达的影响。方法选用60只健康雄性SD大鼠为研究对象,制备缺血再灌注损伤模型。采用随机区组设计将大鼠分为非治疗组(N-T组30只)、EPO治疗组(T组30只)。其中治疗组再按EPO不同剂量分为三个亚组(EPO1组、EPO2组、EPO3组)。EPO治疗组缺血再灌注损伤2h后分别注射EPO1000u/Kg,3000u/Kg以及5000u/Kg,24h后所有受试对象均处死取脑。应用免疫组织化学技术检测脑缺血再灌注后Ngb的表达情况。结果EPO治疗组Ngb表达明显高于非治疗组,差异具有统计学意义(t=112.205,P=0.000);EPO治疗组不同亚组之间随着EPO剂量的增大,Ngb的表达呈递增趋势,三组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05),且与EPO治疗剂量呈正相关(rs=0.872,P=0.000)。结论大鼠脑缺血再灌注损伤后采用EPO治疗能促进Ngb的表达。     

不同剂量促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的:探讨促红细胞生成素(Epo)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的影响.方法:32只雄性SD大鼠随机分成Epo低、中、高剂量组和缺血再灌注组,4组大鼠均采用线栓法阻断一侧大脑中动脉血流2 h再灌注24 h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型.缺血开始时Epo低、中、高剂量组分别腹腔注射Epo 1000 U/kg、3000U/kg、5000U/kg,缺血再灌注组注射等量生理盐水.再灌注24 h后断头取脑,制作石蜡切片,免疫组化染色检测Bcl-2和Bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:与缺血再灌注组比较,Epo各剂量组凋亡细胞均少,Bcl-2表达较高,Bax表达较少,Bcl-2/Bax比值变大.Epo各剂量组间Bax的表达差异无统计学意义;高剂量Epo组对Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值影响最大;中剂量Epo对细胞凋亡的影响最为显著;低剂量Epo对Bcl-2表达和细胞凋亡的影响最小,对Bcl-2/Bax比值的影响与中剂量相同.结论:不同剂量的Epo对大鼠脑缺血再灌注损伤后皮层神经细胞凋亡的影响不完全相同,3000 U/kg可能最接近最佳应用剂量.     

促红细胞生成素对大鼠全脑缺血再灌注后海马 CA1区神经元的保护作用

目的　观察促红细胞生成素 (EPO)对短暂性全脑缺血再灌注后海马神经元凋亡的影响 ,探讨其对缺血脑组织的保护作用。方法　应用四动脉血流阻断法制作大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型 ;于再灌注开始时经腹腔注入EPO(3 0 0 0U/Kg) ;48h后灌注取脑。H -E染色观察细胞死亡情况。应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记 (TUNEL)法检测海马CA1区神经元凋亡情况。结果　全脑短暂缺血 15min再灌注后 48h ,H -E染色海马CA1区存活神经元细胞数正常组为 2 11.2 8± 7.95,假手术组为 2 0 9.2 8± 11.3 4 ,EPO治疗组为 170 .2 8± 8.12 ,缺血组为14 6.84± 8.3 5。EPO治疗组与缺血组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。TUNEL法凋亡细胞测定 ,正常组无阳性细胞 ,假手术组单位面积内阳性细胞为 152 .48± 18.52 ,EPO治疗组阳性细胞为 1797.51± 151.3 5,缺血组阳性细胞为2 2 50 .41± 180 .0 6,后两者比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　EPO可减少大鼠短暂性全脑缺血脑组织神经元的死亡和凋亡 ,对缺血神经元具有保护作用     

促红细胞生成素对脑缺血再灌注模型大鼠脑能量代谢影响的研究

目的 研究促红细胞生成素(EPO)对缺血再灌注大鼠脑能量代谢的影响.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组以及EPO治疗组,构建脑缺血再灌注模型.观测再灌注24 h后3组大鼠脑内乳酸含量以及Na+、K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶活性,并用HPLC检测各组脑内三磷酸腺苷(ATP)与总腺苷酸(TAN)含量,Westem-blotting检测脑内单羧酸转运蛋白MCT1基因水平的表达.结果 与模型组比较,EPO治疗组脑内ATP酶活性显著升高,乳酸含量降低,ATP与TAN含量显著增高,MCT1表达水平显著提高;与假手术组比较,EPO治疗组的脑内乳酸含量和ATP酶活性差异无统计学意义,ATP与TAN含量下降,MCT1蛋白表达水平明显提高.结论 EPO可通过改善能量代谢对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

重组人促红细胞生成素对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对脑缺血再灌注损伤后脂质过氧化反应的影响。方法：健康雄性W istar大鼠36只,随机分为假手术组（n=12）、脑缺血再灌注组（n=12）、rhEPO治疗组（n=12）;rhEPO治疗组于再灌注开始时经腹腔注射rhEPO 3000 U/kg,缺血再灌注组与假手术组经腹腔注射等量的生理盐水,假手术组条件同上,但不做线栓,仅结扎左侧颈外动脉和颈总动脉;3组大鼠均在再灌注24 h后进行神经功能评分,测定血清中MDA及SOD含量。结果：缺血再灌注组与假手术组比较,SOD活性明显下降,而MDA含量却明显上升,差异有统计学意义（P〈0.05）;rhEPO治疗组SOD活性较缺血再灌注组升高,MDA含量明显下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：rhEPO可以对抗氧自由基损害,对大鼠脑缺血再灌注损伤可能具有一定的保护作用。     

促红细胞生成素对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元凋亡和学习记忆能力的影响

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）进行预处理对全脑缺血大鼠学习记忆能力的影响。方法采用4-VO法制作全脑缺血模型，将SD大鼠分为假手术组、生理盐水组和EPO组。生理盐水组和EPO组于术前3h，分别脑室立体定向注射生理盐水和重组人促红细胞生成素（rHu—EPo），假手术组只进行假手术处理。观察缺血后72h海马细胞凋亡和缺血后4周大鼠学习和记忆力的变化。结果缺血后72h，EPO组海马CA1区较生理盐水处理组有较少的凋亡细胞（P〈0．01），并且缺血4周后，EPO组学习记忆能力明显高于生理盐水组（P〈0．01）。结论EPO预处理可以抑制缺血海马神经元凋亡及减轻全脑缺血造成大鼠学习和记忆力的损害。     

EPO对大鼠脑缺血-再灌注后炎症损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠脑缺血-再灌注的保护作用。方法将216只雄性大鼠随机分为3组(n=72):假手术组,模型组,EPO干预组;每组再分为缺血-再灌注后3、6、12、24、48和72h6个亚组,每亚组大鼠各12只,采用线栓法制备一侧大脑中动脉缺血模型。模型组和EPO干预组缺血2h后再灌注,EPO干预组于缺血2h后腹腔注射EPO(3 000U/kg),假手术组和模型组于同一时间点注射等量生理盐水,然后分别于上述6个时间点断头取材,标本分别用于免疫组化、Westernblot分析海马组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)的表达。结果与假手术组比较,模型组ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达明显增多(P<0.05);与模型组比较,EPO干预组ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达明显减少(P<0.05)。结论 ICAM-1和VCAM-1蛋白在大鼠脑缺血-再灌注后的炎症反应中起重要作用,EPO对此过程具有抑制作用,从而发挥其神经保护作用。     

促红细胞生成素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆障碍的保护作用

目的　探讨促红细胞生成素 (Erythropoietin ,EPO)对全脑缺血再灌注后学习和记忆能力的影响。 方法　阻断大鼠四动脉血流 15min ,再灌注 7天制成全脑缺血再灌注模型 ;于再灌注开始前 ,EPO治疗组经腹腔给予 3 0 0 0U /Kg剂量的EPO ;缺血再灌注组和假手术组给生理盐水注射。再灌注第 7天 ,应用Y型迷宫测定学习和记忆能力 ,然后断头取脑。脑块以石蜡包埋制作HE切片镜检。结果　全脑缺血再灌注后 7天 ,缺血再灌注组可见大量神经细胞坏死 ,EPO治疗组组织学检查仅见少量神经细胞变性坏死 ,脑缺血程度明显轻于缺血再灌注组。与缺血再灌注组相比 ,大鼠学习尝试次数减少 (P <0 .0 5 ) ,记忆测试 10次所用时间缩短 ,正确次数增多 (P <0 .0 5 )。结论　促红细胞生成素能够显著减少细胞死亡、提高大鼠全脑缺血再灌注后学习和记忆能力 ,对脑缺血再灌注有保护作用。     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注神经元凋亡、bcl-2和bax表达的影响

目的观察促红细胞生成素(Epo)对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白bc l-2、bax表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为6组,缺血再灌注治疗A组、B组、C组、D组(分别在缺血前30 m in及再灌注后2 h、6 h、12 h腹腔注射Epo 3 000 IU.kg-1)、缺血再灌注组(E组)和假手术组(F组)。观察Epo对大鼠脑缺血再灌注后脑组织的病理变化,Epo、bc l-2、bax的表达及神经细胞凋亡情况。结果(1)A组、B组、C组及F均未见明显病理性改变,D组及E组显示梗死区神经元缺血改变;(2)各组均可见不同程度Epo阳性表达细胞,且A组、B组、C组较D组、E组表达明显增多(P<0.05);(3)TUNEL法见A组、B组、C组、F组凋亡阳性细胞较D组、E组明显减少(P<0.05);(4)A组、B组、C组bc l-2蛋白表达较D组、E组、F组明显增多(P<0.05),而bax蛋白表达较D组、E组及F组明显减少(P<0.05)。结论Epo通过调控凋亡相关基因bc l-2/bax的比率而发挥抗神经元凋亡的脑保护作用。     

EPO对缺血/再灌注损伤大鼠肾脏细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对急性缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响,探讨EPO对急性肾脏I/R损伤保护作用的可能机制.方法 取30只Wistar大鼠随机分为3组,假手术对照组、I/R组和EPO干预组(I/R+T),每组10只.I/R、I/R+T组采用夹闭大鼠双侧肾动脉45 min后,再灌注12 h制备肾脏缺血再灌注损伤(IRI)模型,假手术组未行以上处理,I/R+T组术前予EPO干预.并应用细胞凋亡原位标记法(TUNEL法)、免疫组化技术等检测EPO干预后对肾脏细胞凋亡及bax、bcl-2蛋白表达的影响.结果 通过电镜观察:假手术组未发现明显凋亡,I/R+T组较I/R组凋亡指数减少(13.4±1.5 vs 28.0±2.3 P<0.05),bcl-2/bax增多(0.93±0.12 vs 0.83±0.09 P<0.05).结论 EPO对大鼠急性肾脏I/R损伤具有保护作用,其作用机制可能通过增加凋亡相关蛋白bcl-2/bax的比率,抑制细胞凋亡的过度表达.     

Expression of EPO Receptor in Pancreatic Cells and Its Effect on Cell Apoptosis

In order to explore the expression of erythropoietin receptor （EPOR） in pancreatic cell line NIT-1 and its effect on cell apoptosis after binding with erythropoietin （EPO）, NIT-1 cells were cultured and expanded. The expression of EPOR was detected using electrophoresis. NIT-1 apoptosis was induced by cytokines and their effects on cell apoptosis and cell insulin secretion were assayed after binding of EPO to EPOR. The results showed that EPOR was expressed in NIT-1 cells. Recombinant human EPO （rHuEPO） had no effect on cell apoptosis but significantly inhibited apoptosis induced by cytokines, rHuEPO had no effect on cell insulin secretion but significantly improved insulin secretion inhibited by cytokines. From these findings, it was concluded that EPOR was expressed in NIT- 1 cells and EPO could protect NIT- 1 cells from apoptosis induced by cytokines.     

降纤酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的影响

目的:观察降纤酶对大鼠脑缺血再灌注后脑细胞凋亡的影响。方法:96只雄性SD大鼠,随机分为降纤酶治疗1,2组和对照组1,2组,制造大鼠脑中动脉栓塞模型,降纤酶治疗1,2组于缺血3h经腹腔注射降纤酶治疗,对照1,2组在相同时间点给予等量生理盐水。降纤酶治疗和对照1组利用流式细胞仪检测缺血3h再灌注3h、6h、24h、72h后脑组织中凋亡细胞百分率。降纤酶治疗和对照2组利用Tunel方法检测神经元凋亡数目及利用免疫组化方法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:降纤酶治疗和对照1组凋亡细胞率、降纤酶治疗和对照2组凋亡细胞数均随再灌注时间延长而渐增多,于24h达高峰,以后逐渐减少,2组6h、24h和72h差异均有统计学意义(P<0.05)。降纤酶治疗和对照2组bcl-2蛋白表达于24h明显减低,bax蛋白表达于24h升至最高,Bcl-2和Bax蛋白表达时相与神经细胞凋亡高峰基本一致,降纤酶治疗2组24hBcl-2和Bax蛋白表达较对照2组明显减少(P<0.05)。结论:降纤酶有降低大鼠脑缺血再灌注后脑细胞凋亡的作用,对脑组织有保护作用。     

促红细胞生成素对缺氧缺血新生鼠脑组织一氧化氮水平及细胞凋亡的影响

目的探讨体外注射重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,RhEPO）对新生鼠缺氧缺血后脑组织一氧化氮（nitric oxide,NO）水平及脑细胞凋亡的影响。方法 7日龄Wistar大鼠101只,随机分成3组,假手术组（n=25）、对照组（生理盐水组）（n=38）、实验组（RhEPO组）（n=38）。对照组与实验组建立HBID模型,模型制备后即刻实验组腹腔注射RhEPO 4000 U/kg,对照组注射同体积生理盐水,假手术组不结扎颈总动脉,不缺氧。各组于处置后不同时间段处死取脑组织,制作脑组织匀浆,测定NO水平。同时于术后24hTunel染色,观察海马区神经细胞凋亡情况。结果对照组与假手术组比较NO2h显著升高（P〈0.05）,12-96h差异有显著性意义（P〈0.01）。实验组与对照组比较,NO明显降低,24-96h差异有显著性意义（P〈0.01）。Tunel染色对照组海马区凋亡细胞数明显高于实验组。结论 RhEPO抑制新生鼠缺氧缺血脑组织NO过量产生及神经细胞凋亡,对HIBD起保护作用。     

白花丹参对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响及机制研究

目的探讨白花丹参制剂对大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型（MCAO），将动物随机分为假手术组、MCAO组、生理盐水组和白花丹参组，白花丹参组大鼠采用术前水提物灌胃，用免疫组化法检测bcl-2和bax的表达水平，TUNEL法检测凋亡水平，流式细胞术测凋亡率。结果白花丹参可有效提高大鼠局灶性脑缺血时脑组织中bcl-2的含量，并抑制bax的表达，降低凋亡细胞水平。结论白花丹参可抑制MCAO后神经元凋亡。     

Topiramate对宫内缺血大鼠脑组织含水量及神经细胞凋亡的影响

目的 : 观察topiramate对宫内急性脑缺血损伤的Wistar大鼠神经细胞凋亡及脑组织含水量的影响。方法 : 夹闭足月妊娠大鼠子宫血管，制成急性脑缺血损伤的新生鼠模型(n=315)，随机分为topiramate 1次和5次给药组及缺血组（n=105），另取105只正常Wistar大鼠作为正常对照组。治疗组给予topiramate，观察脑缺血后再灌注3 h、6 h 、24 h、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d海马TUNEL法标记的凋亡神经细胞的变化及生后7 d内脑组织 含水量的变化。结果 ： topiramate 1次组脑组织含水量12和72 h显著低于缺血对照组，topiramate 5次组48和72 h显著低于缺血对照组及topiramate 1次组（P<0.05）；topiramate 1次组24 h、3 d、7 d、21 d 凋亡神经细胞数明显低于缺血对照组，topiramate 5次组3和7 d凋亡神经细胞数明显低于缺血对照组和topiramate1次组（P<0.05）。结论 ： topiramate可以明显减少宫内急性脑缺血后新生大鼠神经细胞的凋亡数目，并可以缩短凋亡持续时间；延缓脑水肿的发生，减轻脑水肿的程度, 并缩短其持续时间,多次给药组的作用明显高于1次给药 组。     

几种不同药物对缺氧缺血新生大鼠神经元凋亡的影响

目的：探讨7—硝基吲唑(7—NI)、N—乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、硫酸镁、脑细脆生长肽(bFGF)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时神经细胞凋亡的影响。方法：72只Wistar大鼠随机分成6组，(1)假手术组(n＝12)，仅作正中切口，不作颈总动脉结扎；(2)空白对照组(生理盐水组)(n＝12)，HIBD后即刻腹腔注射生理盐水(NS)0．5ml；(3)7—NI组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射7—NI 25mg/kg；(4)NAC组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射NAC200μg/只；(5)硫酸镁组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射硫酸镁450mg／kg；(6)bFGF组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射bFGF 10mg。各组均于处置后24小时(h)处死断头取脑，取丘脑中1／3平面行冠状切片，常规石蜡包埋后切片6um,用HE和Tunel染色检测脑细胞凋亡数目。结果：假手术组末见有凋亡特征的阳性细胞；7—NI、NAC硫酸镁和bFGF组脑细胞凋亡数均明显低于对照组；各组与对照组分别经统计学处理差异有显著意义。结论：7—NI、NAC硫酸镁和bFGF对HIBD时脑细胞凋亡确有显著的影响。     

凝血酶对血脑屏障通透性的影响及细胞凋亡机制的研究

目的探讨凝血酶（thrombin，TM）对血脑屏障（blood brain barrier,BBB）通透性的影响和细胞凋亡（Apoptosis）的可能机制。方法108只SD大鼠随机分为A、B、C3组。分别向大鼠右侧基底节区注入凝血酶、凝血酶加组织蛋白酶G（Cathepsin G，CATG）、生理盐水，于注射后6、24、48和72h取脑组织。测定BBB通透性（Evans-blue法）、脑水含量（干湿重法）以及Caspase-3蛋白表达（Western-blot）。结果TM脑内注射后6h同侧基底节区BBB通透性明显增加（P〈0．05），24h时达高峰（P〈0．01），持续至48h（P〈0．05），然后逐渐消退；脑水含量的变化规律与BBB通透性的变化类似。TM脑内注射后6h Caspase-3蛋白开始增加（P〈0．01），24h达高峰（P〈0．01），然后逐渐下降。TM＋CATG组在各个时间点BBB通透性、脑水含量和Cmpme-3蛋白表达与对照组比较均无明显差异（P〉0．05）。结论TM增加BBB通透性是其诱发脑水肿形成的主要机制。TM对BBB通透性的影响可能是通过激活蛋白酶激活受体-1（protease activated receptor-1，PAR-1）实现的；凝血酶可能通过激活pAR-1受体诱导凋亡。     

吡格列酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤中炎症反应及细胞凋亡的影响

目的探讨吡格列酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤中炎症反应和细胞凋亡的影响及其机制。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吡格列酮组、GW9662组及DMSO组,每组各16只,术前5 d分别给予相应处理。采取体内结扎左前降支的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型,予ELISA法检测大鼠心肌组织中NF-κB p65及IFN-γ含量水平,HE染色观察左心室前壁细胞病理形态学改变,并采用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡数。结果与假手术组相比,其余四组大鼠心肌组织中NF-κB p65及IFN-γ含量水平、心肌细胞凋亡数均显著升高（P〈0.05）;与模型组比较,吡格列酮组大鼠心肌组织中NF-κB p65及IFN-γ含量水平,心肌细胞凋亡数明显降低（P〈0.05）;模型组与吡格列酮组中NF-κB p65及IFN-γ含量水平均呈显著正相关（P〈0.001）。结论吡格列酮在心肌缺血再灌注损伤中可能通过负性调节NF-κB p65含量水平进而减少IFN-γ的释放,抑制心肌细胞的凋亡,从而发挥相应的心肌保护作用。     

缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的 :研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法 :新生 7日龄SD大鼠随机分为空白对照组 (n =12 )、假手术组 (n =12 )、缺氧缺血组 (HIBD组 ,n =15 )和缺氧预处理后缺氧缺血组 (HPC组 ,n =2 1) ,缺氧预处理组在行HIBD模型前 2 4h吸 8%浓度氧 3h。各组大鼠均于 14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化 ;采用末端脱氧核苷酸介导的X DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况 ;采用定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法测定大鼠脑组织HIF 1αmRNA的表达。结果 :HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻 ,HPC组大鼠脑组织HIF 1α基因的表达较HIBD组下降 ,HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论 :缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 ,减弱HIF 1αmRNA的表达 ,减少脑细胞凋亡