γδT细胞在类风湿关节炎发病机制中的作用的实验研究

目的 检测胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠外周血γδT细胞、滑膜组织热休克蛋白60(HSP60)和70(HSP70)以及骨和软骨MHC-Ⅰ和NF-κB表达的变化,探讨γδT细胞在类风湿关节炎发病中的作用机制.方法 通过背部及尾根部多点皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂的方法制作Wistar大鼠CIA动物模型,运用流式细胞仪检测动物外周血γδT细胞百分比、ELISA法检测关节液TNF-α和IL-10的含量、SP免疫组化染色法检测滑膜组织HSP60和70以及关节软骨和骨MHC-Ⅰ类分子和NF-κB的表达.结果 与正常对照组相比,CIA模型组动物外周血γδT细胞百分比明显下降(P＜0.01),关节液中TNF-α含量升高(P＜0.05)、IL-10含量降低(P＜0.05),滑膜组织HSP60和70的表达上调(P＜0.05),关节软骨和骨MHC-Ⅰ、NF-κB的表达上调(P＜0.05).结论 关节液中细胞因子的变化,以及关节滑膜、软骨和骨细胞HSP60、HSP70和MHC-Ⅰ表达的上调,将有助于γδT细胞活化,进而引起关节的破坏.     

雷公藤甲素对胶原诱导的关节炎大鼠关节局部热休克蛋白和主要组织相容性复合体Ⅰ类分子表达的影响

目的观察雷公藤甲素对胶原诱导的关节炎大鼠关节局部热休克蛋白(HSPs)和主要组织相容性复合体类分子(MHC-)表达的影响。方法建立胶原诱导的关节炎大鼠模型,雷公藤甲素按40μg/kg im给药,运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫酶组织化学染色的方法,观察大鼠关节滑膜细胞和软骨细胞HSP60、HSP70和MHC-类分子的表达情况。结果与正常对照组相比,模型组大鼠关节滑膜细胞及软骨细胞HSP60、HSP70和MHC-类分子的表达均显著增高(P<0.05),与模型组相比,雷公藤甲素可以下调关节炎大鼠关节局部HSP60、HSP70和MHC-类分子的表达(P<0.05)。结论降低关节炎大鼠关节局部软骨细胞和滑膜细胞异常表达的HSPs与MHC-类分子的表达,可能是雷公藤甲素治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制之一。     

P2X7受体在类风湿关节炎中的诊断价值及炎症反应中的作用

目的研究P2X7受体在类风湿关节炎中诊断价值及在炎症反应中作用。方法以骨关节置换病人滑膜组织为对照组（n= 25）,类风湿关节炎患者滑膜组织为病例组（n=25）,qRT-PCR法检测骨关节置换病人和类风湿关节炎患者滑膜组织中P2X7受体 相对表达;特异性敲低P2X7受体的小分子干扰RNA干扰P2X7受体研究其对炎症细胞因子分泌作用;ELISA检测炎症细胞因 子白细胞介素IL-1β、IL-6、IL-8水平。结果类风湿关节炎患者滑膜组织P2X7受体水平明显高于骨关节置换手术患者滑膜组织 P2X7受体水平,其对类风湿关节炎诊断具有较好的价值;类风湿关节炎患者滑膜组织P2X7受体水平与血清中炎症细胞因子 IL-1β、IL-6、IL-8水平呈正相关,且有统计学意义（P<0.001）;干扰P2X7受体后明显抑制MH7A滑膜细胞的IL-1β和IL-6分泌。 结论类风湿关节炎患者滑膜组织P2X7受体水平升高,对类风湿关节炎具有诊断价值,阻断P2X7受体后抑制炎症细胞因子的 分泌和炎症反应。     

类风湿关节炎患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达及意义

目的研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,探讨其在RA致病中的作用.方法采用流式细胞仪检测RA患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,并设立正常对照组.结果RA患者外周血表达CD25的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比明显增多(P<0.01);关节滑膜液表达CD25的B淋巴细胞和表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比亦明显增多(P<0.01).结论外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HIA-DR的表达增高,在RA发病机制中起着重要的作用.     

类风湿关节炎组织CD109表达与疾病严重程度及局部炎症反应的关系研究

目的:探讨类风湿关节炎(RA)患者组织CD109表达与疾病严重程度及局部炎症反应的关系.方法:选择2019年2月至2020年1月在我院进行滑膜切除术或关节置换手术的56例RA患者作为研究组,另外选取30例接受全关节置换术的膝骨关节炎患者作为对照组.采用免疫组化染色法检测两组滑膜组织CD109表达,应用微量样本多指标流式...     

类风湿关节炎患者外周血和关节滑膜液中淋巴细胞CD25 HLA-DR的表达及意义

目的:研究类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达及意义。方法:采用流式细胞仪分析RA患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞活化标志CD25、HLA-DR的表达。结果:RA患者外周血表达CD25的T淋巴细胞和B淋巴细胞与正常对照组相比均明显增多(P<0.01),关节滑膜表达CD25的B淋巴细胞和表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞与正常对照组相比亦明显增多(P<0.01)。结论:RA患者外周血与关节滑液中活化的T淋巴细胞和B淋巴细胞增多,免疫功能亢进,这对RA的发生发展起着重要的作用。     

circ＿0072088靶向miR-578促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的机制研究

目的:探讨circ＿0072088对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和转移的影响及其对miR-578的调控作用。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常滑膜组织、类风湿关节炎患者滑膜组织中circ＿0072088和miR-578的表达量;原代分离培养类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,将细胞分为si-NC组、si-circ＿0072088组、miR-NC组、miR-578组、si-circ＿0072088+anti-miR-NC组、si-circ＿0072088+anti-miR-578组;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、平板克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测circ＿0072088与miR-578的相互作用。结果:与正常滑膜组织比较,类风湿关节炎患者滑膜组织中circ＿0072088的表达水平升高(P<0.05),miR-578的表达水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-circ＿0072088组细胞活力降低(P<0.05),克隆形成数及侵袭细胞数减...     

犀角地黄汤对胶原诱导性关节炎大鼠模型滑膜组织中磷脂酶C-γ1表达的影响

目的 探讨大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型形成及应用犀角地黄汤治疗过程中大鼠关节滑膜组织中磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)的表达情况,进一步探讨犀角地黄汤治疗类风湿关节炎的作用机制.方法 SD大鼠构建CIA模型,运用实时荧光定量反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法检测空白对照组、模型组和实验组大鼠在第42天关节滑膜组织中PLC-γ1的表达情况.结果 模型组大鼠关节滑膜组织中PLC-γ1的相对表达量(0.125±0.001)明显高于空白对照组(0.031±0.001)(P＜ 0.01),犀角地黄汤实验组PLC-γ1的相对表达量(0.072±0.001)低于模型组(P＜0.05).结论 犀角地黄汤可降低大鼠关节滑膜组织中PLC-γ1的表达,对类风湿关节炎急性期有一定的治疗作用.     

慢性萎缩性胃炎脾胃湿热证与热休克蛋白60、70及CD44s、CD44v6的相关研究

为探讨慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)脾胃湿热证与热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白70(HSP70),细胞粘附分子标准型CD44蛋白(CD44s)及CD44的变异体(CD44v)之一CD44v6之间的关系,选择CAG患者71例进行胃镜检查,胃窦部活检标本行快速尿素酶试验及13C呼气试验,检测幽门螺旋杆菌(Hp),病理诊断和HSP60、HSP70、CD44s及CD44v6的免疫组织化学染色,分析比较它们的相关性。结果:①脾胃湿热组的萎缩和肠化程度高于脾虚组(P<0．05～0．01);②正常对照组胃粘膜内HSP60主要呈阴性或弱阳性表达,CAG脾胃湿热组及脾虚组患者胃粘膜内HSP60表达增强,且二者Hp的感染率均高于正常对照组(P<0．05～0．01),Hp的感染情况与HSP60的表达呈非常显著相关(P<0．01)。脾胃湿热组HSP60 表达与脾虚组相比无显著性差异,但脾胃湿热组HSP60表达有增强的趋势;③脾胃湿热组HSP70的表达与正常对照组、脾虚组相比无显著性差异(P>0．05),但脾胃湿热组强阳性表达率(71．0％)高于脾虚组(47．5％)(P <0．05);④脾胃湿热组CD44s和CD44v6的表达与正常对照组和脾虚组相比无显著性差异(P>0．05)。说明;①CAG脾胃湿热组胃粘膜的萎缩和肠化程度均重于脾虚组,可能是由于脾胃湿热证与炎症关系密切所致。②CAG脾胃湿热组及脾虚组HSP60的表达均较正常对照组增强,原因可能与Hp感染有关。③CAG脾胃湿热组HSP70的强阳性表达率强于脾虚组。④3组之间CD44s和CD44v6的表达无明显差异,说明CAG作为胃癌前疾病尚未出现CD44s和CD44v6的异常表达。     

艾灸“肾俞”、“足三里”对类风湿关节炎模型大鼠基质金属蛋白酶-9的影响

[目的]观察艾灸"肾俞"、"足三里"对类风湿关节炎模型大鼠关节滑膜组织病理变化和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响,为艾灸治疗类风湿关节炎的作用机制提供实验依据。[方法]将80只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、艾灸治疗组和艾油治疗组,各组采用相应方法治疗15d,观察大鼠关节滑膜组织病理改变的影响以及血清中MMP-9的表达。[结果]治疗15d后,艾灸治疗组和艾油治疗组大鼠关节滑膜组织病理改变减轻,并且血清中MMP-9的表达显著减少(P0.05,或P0.01),其中艾灸治疗组效果优于艾油治疗组(P0.05)。[结论]艾灸能够减轻类风湿关节炎大鼠滑膜组织的病理改变,降低血清中MMP-9的表达,从而改善大鼠关节炎症状,减轻关节炎症反应,有效治疗类风湿关节炎。     

类风湿关节炎病人滑膜上类风湿因子的检测

用免疫组化法检测了20例类风湿关节炎者关节滑膜上的 IgM 和 IgG 类风湿因子。前者阳性率为60%,后者为45%,总阳性率为65%。并对免疫组化、临床化验和病理资料进行了综合分析.认为免疫组化法检测关节滑膜上的类风湿因子是诊断类风湿关节炎的有力依据,尤其是在关节镜的应用中,对排除其他炎性关节炎具有决定意义。     

CD147与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MMPs合成的关系

目的观察类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)与高表达CD147的单核细胞株(THP-1)共培养后,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)合成的变化.方法从手术切除的RA患者滑膜组织中,分离FLS,经流式细胞术测定CD14,CD68及免疫组化测定波形纤维蛋白(vimentin)证实后,传代培养.将FLS与高表达 CD147的THP-1共培养,观察THP-1细胞对FLS MMPs合成的影响.用明胶酶谱法测FLS MMP-2,MMP-9含量.同时观察CD147拮抗肽(AP9)对MMPs表达的影响.结果高表达CD147,低表达MMP-2、 MMP-9的THP-1细胞与CD147表达水平低的RA FLS混合培养后,FLS合成MMP-2、 MMP-9水平显著升高,随着THP-1细胞数的增加,MMP-2、 MMP-9的合成量也增加.THP-1对FLS合成MMP-2、 MMP-9的刺激作用可被CD147拮抗肽AP-9所抑制.结论高表达CD147的THP-1细胞对共培养的RA FLS合成MMP-2、MMP-9有刺激作用,这种刺激作用可被CD147拮抗肽AP-9所抑制,提示THP-1表面的CD147对FLS合成MMPs有促进作用.     

类风湿关节炎患者外周血CD4＋CD25^high曲调节性T细胞测定及意义

目的探讨CD4＋CD25^high岫调节性T细胞（CD4＋CD25^high Treg）在类风湿性关节炎（RA）发病机制中的作用。方法采用流式细胞仪（FCM）检测42例RA患者及23例健康对照组外周血CD4＋CD25^highTreg的数量。结果RA患者组及对照组外周血CD4＋CD25^highTreg的表达为（2．69±1．85）％和（3．83±0．89）％,RA患者组CD4＋CD25^highTreg的表达低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论RA组患者CD4＋CD25^highTreg表达下降。     

Premises for immune interventional therapy in rheumatoid arthritis

Consideration of rheumatoid arthritis (RA) as an autoimmune disease includes initiating event(s), genetic predisposition, immune regulatory derangements, and effector cycles of articular damage. The initiating event is still unknown. Collagen type 2 has good claims as a rheumatogenic autoantigen which perpetuates disease. The association of HLA DR4 with rheumatoid arthritis is in part explainable by the affinity of binding of the rheumatogenic antigen to a hypervariable portion of MHC Class II molecules with selective presentation of this complex to T cell receptors. Immune regulatory derangements include lymphokine-induced aberrant expression of MHC Class II molecules on synovial tissues, the presence of a 'resistant' subset of B cells (CD5 + ve), failure of anti-idiotypic control of autoantibodies (not well established as yet in rheumatoid arthritis), and defective immune suppression, revealed by low counts in synovial fluids of a suppressor-inducer subset of CD4 + ve T cells. The many possibilities for therapeutic immune intervention would include polyclonal or monoclonal antibody to block (a) receptors for antigen on B or T lymphocytes (but this would require knowledge of the rheumatoid arthritis-inducing antigen), (b) the CD4 complex on helper T lymphocytes, (c) MHC Class II (Ia) molecules, for which there are excellent prototypes in experimental immunopathology, or (d) lymphokines or their receptors. Induction of suppression by 'tolerogenic vaccines' is experimentally validated, but only for diseases for which an autoantigen can be identified.     

中枢神经系统海绵状血管瘤免疫组织化学研究

目的　了解中枢神经系统海绵状血管瘤 (CM)的组织结构、血管生成、增殖活性特点。方法　采用ABC法 ,对随机选取的 70例CM标本和 2 0例正常脑组织血管标本进行免疫组织化学染色 ,观察CD34、a 平滑肌抗 (a SMA) ;血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、Flt 1、转化生长因子a(TGFa)、Ki6 7的表达 ,并根据染色强度进行对比分析。结果　所有正常脑组织血管中CD34、a SMA呈明显阳性 ,有很好的连续性 ,VEGF、Flt 1、TGFa无明显表达。 70例CM中 ,CD34、a SMA呈阳性表达的分别为 4 7例和 5 0例 ,有明显的不连续性 ;VEGF、Flt 1呈阳性表达的分别为 6 8例和 4 4例 ,弥散分布 ;TGFa呈阳性表达的为 6 8例 ;2种组织中该 5项指标的染色强度差异均有统计学意义 (P <0 0 5 )。Ki6 7在 2种组织中均无明显表达。结论　CM生物学特性主要与其血管壁组织结构的不成熟有关 ,各种血管因子发挥了相当重要的促进作用 ,CM本身的增殖活性有待进一步研究。     

IL-33与类风湿关节炎相关性

白细胞介素33(IL-33)是IL-1家族的一个新的细胞因子,并通过磺基转氨酶2受体介导它的生物学效应。动物实验表明,IL-33具有很强的促炎作用,且其致损伤作用有赖于肿瘤坏死因子受体1和干扰素γ的存在,IL-33在许多炎性疾病中大量表达,这里主要介绍类风湿关节炎。在类风湿关节炎患者的滑膜组织中大量表达IL-33,IL-33通过肥大细胞依赖途径促进疾病从急性到慢性的转化,从而导致疾病的迁延难愈。由于可溶性ST2有助于减轻IL-33引起的炎性效应,从而在类风湿关节炎治疗中看到了曙光。     

热休克蛋白(HSP70)在肺癌中的表达及其临床意义

目的：测定热休克蛋白（heat shock protein HSP）在肺癌组织及正常肺组织中的表达,籍以探讨其在肺癌增殖,分化中的作用。方法：采用S-P免疫组化法,观察HSP70和PCNA在43例非小细胞肺癌（NSCLC）及5例小细胞肺癌（SCLC）中的表达情况。结果：NSCLC中HSP70表达较正常肺组织高：HSP70表达与PCNA表达有正相关关系;有淋结转移组HSP70表达高于无转移组：NSCLC中吸烟组HSP70表达高于不吸烟一。结论：HSP70在NSCLC组织中的高表达与癌细胞的增殖、转移有关,可能是调控肿瘤细胞增殖及凋亡的重要基因,可作入团NSCLC的辅助诊断及判断预后的参考指标。     

热休克蛋白70和糖调节蛋白94在人胃癌细胞BGC-823中的表达

目的 :探讨热休克蛋白 70 ( HSP70 )和糖调节蛋白 94( grp94)在人胃癌细胞BGC- 82 3中的表达及其意义。方法 :利用 En Vision免疫细胞化学、双抗体标记免疫荧光和流式细胞仪方法检测和分析人胃癌细胞 BGC- 82 3中 HSP70和grp94的表达及其与细胞周期的关系。结果 :胃癌细胞存在 HSP70和 grp94的高表达 ,免疫细胞化学显示 HSP70和 grp94主要定位于胞浆 ;免疫荧光法和流式细胞仪检测显示 HSP70的表达阳性率为 84.9% ,grp94为 79.7% ,与阴性对照组存在明显的差异 ;在整个细胞周期均存在 HSP70和 grp94的持续表达。结论 :胃癌细胞存在 HSP70和 grp94的高表达 ,在整个细胞周期 HSP70和 grp94均持续表达 ,其表达与细胞周期无明显关系。 HSP70和 grp94在人胃癌细胞中的表达特点为瘤苗的研究奠定了基础。     

TLR-4 介导的固有免疫在类风湿关节炎模型大鼠发病过程中的意义

[摘要] 目的 研究弗氏完全佐剂性关节炎（AIA） 大鼠外周血单核细胞（ PBMC） Toll 样受体4 （Toll-like receptor 4,TLR4）的表达及其与关节炎评分的关系。方法 流式细胞仪测定CD14+TLR4+细胞占CD14+细胞的比例和TLR4-PE的平均荧光强度（MIF） ;RT-PCR 法测定PBMC TLR4 mRNA 的表达量。比较造模后15d与正常对照组和造模后25d 时CD14+TLR4+/CD14+、MIF及其TLR4 mRNA 表达量的差异,并分析关节炎评分与TLR4 MIF的相关性。结果 在造模后15 d ,CD14+ TLR4+/CD14+、TLR4 MIF和PBMC TLR4 mRNA 的表达较正常对照组和造模后25 d 明显增高（P<0.01）,而且TLR4 MIF 与关节炎的评分有明显的相关性（15d：r=0.826,P<0.01;25d：r=0.688, P<0.05）。但造模后25d,CD14+TLR4+/CD14 +、TLR4 MIF和PBMC TLR4 mRNA的表达与正常对照组和造模前相比无统计学意义（P>0.05）。结论 TLR4 与AIA 发病有密切关系,提示固有免疫反应在类风湿性关节炎（RA）及其他自身免疫性疾病的发病中有重要的作用。