载印度墨水相变型光声/超声双模态造影剂的制备及体外显影

目的 制备一种新型的光声/超声双模态造影剂,观察其体外光致相变作用以及光声/超声显影效果。方法 采用多步乳化法 合成载印度墨水及全氟己烷(PFH)的高分子微球(i-PFH-PLGA),检测其基本理化性质、光致相变作用及体外增强光声及超声成像的显像效果。结果 制备的i-PFH-PLGA呈球型,平均粒径为(542.1±68.91)nm。经激光辐照后,显微镜下可观察到较多的i-PFH-PLGA纳米粒发生液气相转变产生微泡;体外光声成像实验显示,i-PFH-PLGA纳米粒可检测到明显的光声信号,且光声信号的强度随纳米粒浓度的增加而增强;体外超声成像实验显示,经激光照射后,i-PFH-PLGA纳米粒组回声强度较辐照前明显增强(P<0.05),而单纯的液态氟碳和印度墨水辐照前后回声强度未见明显改变。结论 成功制备出的载印度墨水和液态氟碳的双模态造影剂可用于体外光声/超声成像研究。     

携Herceptin靶向高分子造影剂的制备及体外寻靶能力研究

目的 制备一种携Herceptin的靶向高分子造影剂,并研究其体外寻靶能力.方法 通过双乳化法制备出高分子PLGA-COOH造影剂,采用碳二亚胺法将高分子PLGA-COOH造影剂与Herceptin相连制备出靶向高分子造影剂,检测其一般性质,然后通过免疫荧光法检测其与抗体的连接情况,用光镜及激光共聚焦显微镜观察其与细胞的结合能力,并与普通高分子造影剂做比较.结果 靶向高分子造影剂的粒径范围为466.8～857.6 nm,平均粒径为(662.2±69.7)nm,有85.9%的微球粒径落于该范围内,通过免疫荧光法可在荧光显微镜下观察到许多绿色点状荧光,体外寻靶能力实验显示靶向高分子造影剂能与乳腺癌细胞较好的结合.结论 成功制备出的携Herceptin的靶向高分子造影剂在体外与人乳腺癌细胞有较好的结合能力.     

携RGD肽靶向高分子造影剂的制备及体外靶向实验

目的 制备携RGD肽的PLGA造影剂,并观察其在体外的靶向能力。 方法 采用双乳化法制备PLGA-COOH造影剂,利用碳二亚胺法将RGD肽与PLGA-COOH造影剂共价结合,制备出RGD-PLGA的靶向造影剂。用激光共聚焦检测FITC-RGD与PLGA造影剂的连接情况,并在光镜及荧光显微镜下对比观察RGD-PLGA与普通PLGA靶向SKOV-3细胞的能力,而后利用流式细胞检测技术对比RGD-PLGA与普通PLGA的靶向能力。 结果 连接FITC-RGD的PLGA显示出明显的绿光,体外靶向实验显示RGD-PLGA较普通PLGA更多地聚集在SKOV-3细胞的周围,流式细胞检测显示RGD-PLGA较普通PLGA有更好的靶向性。 结论 成功制备出RGD-PLGA,且在体外实验中对高表达整合素α_vβ₃的SKOV-3细胞有较强的结合能力。     

携抗HER-2抗体PLGA高分子纳米超声造影剂的制备及其体外寻靶实验

目的以高分子聚合物聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）为成膜材料制备携抗HER-2抗体空心纳米靶向超声造影剂,并考察其体外寻靶及显像效果。方法以樟脑为致孔剂,通过改进的双乳化溶剂挥发法制备PLGA纳米超声造影剂,利用扫描电子显微镜、透射电子显微镜及激光粒度仪对其一般特性进行表征;并用碳二亚胺法将造影剂与抗HER-2抗体耦联制备携抗HER-2抗体的PLGA靶向纳米超声造影剂,用激光共聚焦扫描显微镜对其体外寻靶能力进行初步评估,考察其体外成像效果。结果 PLGA纳米超声造影剂的平均粒径为（152.00±58.08）nm,粒子呈规则球形,大小均一,分散性好。体外寻靶实验显示,携抗HER-2抗体的PLGA靶向造影剂较多牢固地聚集到乳腺癌细胞表面。体外成像实验显示,PLGA靶向纳米超声造影剂显像呈细腻均匀的点状高回声,后方回声未见明显衰减。结论本研究成功制备了携抗HER-2抗体的PLGA靶向纳米超声造影剂,其能与HER-2受体高表达的乳腺癌细胞体外特异性靶向结合,且体外显像效果较好。     

制备包裹吲哚菁绿和液态氟碳的纳米级双模态造影剂

目的制备包裹吲哚菁绿(ICG)全氟己烷(PFH)的纳米级双模态显像造影剂,观察其体外热致相变,光声成像及超声成像效果。方法采用多步乳化技术制备包裹ICG及PFH的聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA纳米粒(INP纳米粒),观察及分析INP纳米粒理化性质、相变过程及体外增强光声及超声显像效果。结果成功制备INP纳米粒,其平均粒径为(607.26±23.53)nm,温度达70℃时,纳米粒逐渐增大变为微气泡,温度保持不变随着时间延长,气泡变大且数量增多,最后气泡破裂,整个过程约持续40s。激光辐照30s后,INP纳米粒可检测到明显光声信号和超声信号。结论成功制备包裹ICG和PFH的PLGA纳米粒,其在激光辐照下可产生光声信号和超声信号。     

穿膜肽与P-选择素抗体修饰的载基因超声造影剂的制备及体外靶向实验研究

目的制备穿膜肽与P-选择素抗体修饰的载基因超声造影剂,并在体外评价其靶向结合能力。方法采用机械振荡法制备载基因及穿膜肽超声造影剂,激光共聚焦显微镜观察质粒DNA和穿膜肽的分布,并用碳二亚胺法制备P-选择素靶向超声造影剂,通过免疫荧光法检测其与抗体的连接情况。制备人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧模型,光镜及流式细胞仪检测该靶向超声造影剂与缺氧HUVEC的结合情况。结果激光共聚焦显微镜可以观察到穿膜肽和质粒DNA均匀地分布在超声造影剂壁上。通过免疫荧光法在荧光显微镜下观察到靶向超声造影剂表面呈红色荧光。体外寻靶实验显示,光镜下靶向组超声造影剂牢固地结合在缺氧HUVEC周围,而非靶向组未见超声造影剂结合;流式细胞仪检测靶向组大约有73.80%的细胞表面结合有该靶向超声造影剂。结论成功制备了穿膜肽与P一选择素抗体修饰的载基因超声造影剂,并具有较强的靶向结合能力。     

纳米级液态氟碳靶向超声造影剂的制备及 体外寻靶的实验研究

目的制备一种新型的具备特异性肝细胞靶向性能的超声造影剂,即携半乳糖化多聚赖氨酸(Gal-PLL)的脂质包裹的纳米级液态氟碳微球超声造影剂,并研究其在体外肝细胞的寻靶能力。方法应用还原胺化法优化制备肝脏去唾液酸糖蛋白受体的配体Gal-PLL,将其磷脂膜洗脱下来并逐滴加入液态氟碳,通过超声波细胞粉碎机进行振荡获得目标造影剂,并观察其形态,检测其粒径和电位。将靶向造影剂和非靶向造影剂分别滴入贴壁生长的正常大鼠肝细胞及正常人肝细胞中,比较观察两组造影剂与肝细胞的靶向效果。结果成功制备Gal-PLL,并合成了靶向纳米液态氟碳脂质微球超声造影剂,电镜下其形态圆整、大小均一,性质稳定,平均粒径200 nm,平均电位35 m V。制备的靶向纳米液态氟碳脂质微球超声造影剂能靶向聚集于体外正常大鼠肝细胞和正常人肝细胞周围。结论自制携Gal-PLL的脂质包裹的纳米级液态氟碳微球超声造影剂具有性质稳定、靶向性等优点,为今后实时在体监测并定量评估肝脏损伤程度的超声显影研究提供了前期基础。     

携Gelsolin单抗靶向相变型超声造影剂的制备及体外靶向实验

目的制备一种以凝溶胶蛋白(GSN)为靶点的包裹液态氟碳的纳米级PLGA高分子造影剂(GSN-PLGA-PFP),并评价其体外热致相变、靶向及显影能力。方法采用双乳化法及碳二亚胺法制备靶向相变型高分子超声造影剂。检测此造影剂的一般性质;显微镜加热板法进行热致相变;激光共聚焦显微镜体外观察GSN-PLGA-PFP被小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移Hca-F细胞摄取的情况,初步评价其寻靶能力;体外低强度聚焦超声(LIFU)仪辐照后观察其超声显影效果。结果 GSN-PLGA-PFP的平均粒径为(328.59±3.82)nm,造影剂表面平均Zeta电位为(-10.36±1.34)mV,造影剂表面GSN单抗连接率高达98.31%,且于43.5℃时纳米粒开始发生相变;体外摄取实验显示Hca-F细胞可较多地摄取GSNPLGA-PFP,体外行LIFU辐照后可观察到显影效果明显增强。结论自制携Gelsolin单抗包载PFP的PLGA造影剂热致相变效果明显,可与Hca-F细胞特异度结合且体外显影效果较好。     

pH响应型纳米探针用于超声/光声成像引导下的乳腺癌光热治疗

目的评估负载聚多巴胺（PDA）的pH响应诊疗一体化碳酸钙（CaCO₃）纳米探针的体外超声/光声双模态成像效果及光热治疗疗效。 方法通过一锅气相扩散法及两步法制备聚乙二醇（PEG）修饰的搭载PDA的CaCO₃纳米探针（CaCO₃-PDA-PEG）,观察其宏观及微观形貌、粒径、红外光谱、稳定性等表征;监测该纳米探针体外超声/光声双模态成像效果和pH响应超声造影显像能力,评估纳米探针的光热转换性能和细胞毒性并通过共聚焦显微镜观察其肿瘤细胞靶向能力;最后,通过细胞增殖实验和活死细胞染色评估纳米探针的体外光热杀瘤效率。 结果成功制备CaCO₃-PDA-PEG纳米探针,呈球形,大小均一,平均粒径约为258 nm,表面电位约为-21 mV;该纳米探针可明显增强光声显像效果,光声信号随纳米探针浓度升高而增强;在肿瘤酸性微环境中,CaCO₃-PDA-PEG遇H⁺可产生二氧化碳气泡进而增强超声造影成像;激光共聚焦显微镜下观察,纳米探针可被动靶向4T1细胞;CaCO₃-PDA-PEG（4 mg/ml）与4T1乳腺癌细胞共同孵育,无激光辐照时,细胞存活率高达92.31%;联合808 nm激光辐照后,对肿瘤细胞具有明显的光热杀伤效应,细胞存活率下降至26.61%,同时激光共聚焦显微镜下见大量红色荧光（死细胞）。 结论所制备的CaCO₃-PDA-PEG纳米探针具有良好的pH响应能力,可显著增强体外超声/光声双模态显像效果和光热治疗疗效,为进一步开发可视化肿瘤精准光热治疗方式奠定了基础。     

载金纳米棒和液态氟碳纳米造影剂及其体外显影

目的制备一种载金纳米棒(Au)和液态氟碳全氟己烷(PFH)的纳米级造影剂,并对其进行体外双模态(光声/超声)显影研究,进一步实现体内显影。方法采用双乳化法制备包裹金纳米棒-液态氟碳的高分子聚合物(PLGA)纳米粒(GNPs)及只包裹双蒸水的纳米粒(WNPs)或只包裹金纳米棒的纳米粒(Au-NPs);MTT对不同浓度的GNPs行体外细胞毒性实验;分别对GNPs、W-NPs、A-NPs在激光辐照前后二维超声、造影强度和光声信号显影,并统计激光辐照前后二维超声灰度值、造影值及光声信号值。结果成功制备包裹金纳米棒-液态氟碳双模态纳米级造影剂,体外光声和造影效果好;GNPs对HUVECs的毒性,各个浓度抑制率较低,且各组间无统计学差异;在激光辐照前,GNPs、Au-NPs、W-NPs二维超声及造影模式下均为低回声;激光辐照后,GNPs超声灰度和造影强度明显增强,光声显影明显,W-NPs超声灰度和造影模式未见增强,光声未见显影,Au-NPs超声灰度造影强度未见明显增强,光声显影明显。结论成功制备包裹金纳米棒-液态氟碳的纳米级造影剂,实现了体外超声/光声双模态增强显影,为体内靶向显影提供实验基础。     

携紫杉醇和抗人表皮生长因子受体2抗体高分子造影剂的制备及体外寻靶实验研究

目的制备一种携紫杉醇和抗人表皮生长因子受体2（HER-2）抗体的高分子造影剂,并考察其体外寻靶能力及体外显像效果。 方法通过双乳化法及碳二亚胺法制备携紫杉醇和抗HER-2抗体的高分子造影剂,并对其一般性质进行检测,激光共聚焦显微镜观察制备的靶向载药造影剂与SKBR-3乳腺癌细胞的结合能力,并使用高频超声观察其体外显影效果。 结果载药靶向羧基端乳酸（PLGA）纳米粒平均粒径为（318.07±12.51）nm,表面电位（-2.16±0.31）mV,包封率为（60.00±3.40）%,载药量为（6.00±0.34）%,粒子呈规则球形,大小均一,分散性好。激光共聚焦显微镜观察到抗HER-2抗体和羧基端乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA-COOH）造影剂大量结合,流式细胞术观察到两者的结合率高达（99.59±0.42）%,体外寻靶实验示靶向载药高分子超声造影剂与SBKR-3乳腺癌细胞较强的结合在一起。体外成像实验显示,靶向载药高分子造影剂显像呈细腻均匀点状强回声。 结论成功制备了携抗HER-2抗体和紫杉醇高分子造影剂,该纳米粒相关性能良好,有较高的载药量及包封率,且与高表达HER-2受体的乳腺癌细胞有较强结合能力,有较好的体外显像效果。     

携Herceptin包裹紫杉醇的高分子造影剂的制备及体外显影实验研究

目的 制备一种携Herceptin包裹紫杉醇的高分子造影剂,并进行体外显影实验.方法 通过双乳化法制备出包裹紫杉醇的高分子PLGA-COOH造影刺,然后通过碳二亚胺化学连接法将制备出的载药造影剂与Herceptin连接,检测其一般性质及其包封率与载药量,观察所制备的载药靶向高分子造影剂与乳腺癌细胞的结合能力,并进行体外显影实验.结果 载药靶向高分子造影剂的平均粒径大小为(733.4±30.7)nm,包封率为(65.08±2.31)%,载药量为(6.51±0.23)%,体外寻靶能力实验可观察到载药靶向高分子造影剂与乳腺癌细胞有较强的结合能力,体外显影实验显示载药靶向造影剂显影效果好.结论 成功制备出的携Herceptin包裹紫杉醇的高分子造影剂具有较高的包封率和与乳腺癌细胞结合的能力,在体外显影实验中显影效果好.     

诊疗一体化双模态相变纳米液滴的制备及其对肿瘤细胞的分子靶向诊疗研究

目的制备双模态相变纳米液滴IR780/FA-Nds-DTX作为分子靶向超声造影剂,用于肿瘤细胞的精准靶向与联合高效杀伤。方法改良"双步乳化法"制备纳米液滴。探索IR-780和多西紫杉醇(DTX)合适载量的配比模式并检测液滴各项理化性能。体外观察液滴对肿瘤细胞高效靶向及联合杀伤效应。结果 "0.15 mg IR-780/1.0 mg DTX"初始剂量配比在液滴中载量最高。液滴外观呈粒径均一乳液状[(205.3±54.1)nm,n=3],镜下为带近红外荧光的圆球形小液滴。4℃下至少12 d内稳定性好,安全性可靠。一定量低强度聚焦超声辐照20 s时液滴发生相变最多且超声造影效果最好。在体外,该液滴可以高效靶向到肿瘤细胞,介导光热效应与化疗联合致细胞几乎全部凋亡。结论新合成的IR780/FA-Nds-DTX造影剂性能良好,对肿瘤细胞能高效靶向探查并实施有效联合杀伤。     

超声辐照载腺病毒靶向微泡增强报告基因在小鼠颅内胶质瘤中的转染效果

目的探讨低频聚焦超声辐照携载腺病毒靶向微泡增强基因转染颅内胶质瘤的效果。方法原位接种U251胶质瘤细胞制备小鼠颅内胶质瘤模型25只;制备可以携载腺病毒载体和偶联RGD肽的脂质体微泡,并检测其性状。筛选颅内胶质瘤直径3.0～4.0 mm的小鼠分为3组,Ⅰ组注射未携带腺病毒的非靶向微泡(对照组),Ⅱ组注射载腺病毒的非靶向微泡,Ⅲ组注射载腺病毒的靶向微泡,各组注射微泡后均接受超声辐照,频率1 MHz,强度0.7 W/cm~2,时间5 min;使用小动物活体荧光成像系统观察各组小鼠颅内荧光强度。结果制备的脂质体微泡直径为1.10～1.20μm,平均浓度(7.8±0.43)×10~8/ml,其可携带腺病毒,还可偶联RGD肽。MRI筛选颅内肿瘤直径3.0～4.0 mm的荷瘤小鼠15只,分为3组(每组5只),小动物活体荧光成像显示,与Ⅰ组和Ⅱ组比较,Ⅲ组小鼠颅内荧光强度显著增强(均P0.01)。结论静脉注射偶联RGD肽的载腺病毒靶向微泡可以将携载的目的基因有效地转染至颅内胶质瘤,为胶质瘤的基因治疗提供了一种新思路。     

双模态纳米级肿瘤靶向超声造影剂的制备及对比研究

目的制备结合不同近红外荧光成像染料的纳米级肿瘤靶向超声造影剂,比较二者的理化性质及体外肿瘤靶向性。方法薄膜水化法制备纳米级超声造影剂(nanobubble,NB),直接吸附法将IR780、 IR783与NB结合,制备纳米级双模态靶向超声造影剂NB-IR780和NB-IR783,测量其理化性质,通过流式细胞技术与免疫荧光成像技术比较以上造影剂在体外对肿瘤细胞的靶向识别能力。结果 NB-IR780与NB-IR783的粒径分别为(552.7±55.0)、(551.8±114.8)nm。随时间变化稳定性良好;IR780的最低毒性剂量为3 200μg/ml,IR783的最低毒性剂量为35μg/ml。体外实验NB-IR780与NB-IR783可以靶向结合乳腺癌细胞,靶向结合率分别为37.5%、97.6%。结论 IR780的最低毒性剂量远高于IR783的最低毒性剂量,但作者在实验中所使用的IR783浓度为3μg/ml,远低于35μg/ml,为安全范围。纳米微泡与IR780和IR783结合后,可以实现乳腺癌细胞的靶向结合,但靶向结合率NB-IR783明显高于NB-IR780,为根据不同研究需要选择不同近红外荧光染料实现肿瘤细胞靶向成像提供实验依据。     

肝癌靶向液态氟碳脂质微球造影剂的体外寻靶实验研究

目的 制备液态氟碳脂质微球造影剂并研究其体外基本特性,再引入抗人肝癌细胞单克隆抗体,采用生物素亲和素法,进行体外靶向结合的研究.方法 采用旋转蒸发法和高压均质法制备一种纳米液态氟碳脂质微球造影剂,观察其外观、形态、大小及分布情况,计算其浓度,并测定其粒径、电位;制备生物素的抗人肝癌细胞单克隆抗体HAb18,用HABA/Avidin试剂盒检测抗体的生物素化程度;制备NBD标记的生物素化的微球,采用生物素亲和素法研究其体外靶向作用.结果 所制备的液态氟碳脂质微球造影剂外观呈乳白色的混悬液,镜下观察,微球形态圆整,大小均一,性质稳定,平均粒径171.9 nm;采用生物素亲和素法制备的NBD标记的生物素化的微球可靶向结合到靶细胞上.结论 成功制备出稳定的纳米液态氟碳脂质微球造影剂,并引入抗人肝癌细胞单克隆抗体,通过生物素亲和素系统可将其特异结合到靶细胞上.     

抗VEGF抗体介导靶向超声造影剂的体外实验研究

目的以抗血管内皮因子（VEGF）抗体为配体研制能与血管内皮细胞特异性结合的靶向脂质体超声造影剂并检测其体外寻靶能力。 方法以静电吸附法将抗VEGF抗体连接到脂质体造影剂微泡的表面；体外培养ECV304人血管内皮细胞，用免疫荧光法检测靶向造影剂与其体外结合能力，以普通造影剂为对照组。 结果所制备的靶向超声造影剂与普通微泡无显著差异；免疫荧光实验结果显示靶向造影剂能在体外与血管内皮细胞特异性结合。 结论携抗VEGF抗体的脂质体靶向造影剂能通过静电吸附法成功制备，且在体外能与血管内皮细胞特异性结合。     

VCAM-1靶向双模态光声/超声纳米级分子探针的制备及其体外寻靶实验

目的 制备一种靶向炎症内皮细胞的双模态纳米级分子探针,并对其进行体外寻靶研究。方法 采用双乳化法制备包裹金纳米棒(Gold nanorods)-液态氟碳全氟己烷(PFH)的高分子聚合物纳米粒(GNPs)、只包裹PFH的纳米粒(NPs)和只包裹金纳米棒的纳米粒(Au-NPs);采用碳二亚胺法制备靶向血管内皮粘附因子(VCAM-1)靶向连接的纳米粒(VCAM-1-GNPs);于光镜、电镜下对GNPs基本性质进行检测;用激光辐照仪进行辐照观察GNPs、NPs和Au-NPs的光致相变情况;采用光镜和流式细胞仪观察GNPs与靶向抗体连接情况;用不同浓度肿瘤坏死因子(TNF-α)作用于人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后,采用蛋白质印迹法(Western Blot)测量HUVECs膜上VCAM-1的表达量;观察靶向组和非靶向组与VCAM-1-GNPs的结合情况。结果 成功制备包裹金纳米棒-液态氟碳双模态靶向纳米粒,平均粒径(463.67±8.23)nm;激光辐照GNPs相变明显,而NPs和Au-NPs未见明显相变;流式仪检测GNPs和VCAM-1抗体的连接率为99.87%;10 ng/ml浓度的TNF-α作用于细胞后可见VCAM-1明显表达;光镜下VCAM-1-GNPs特异性与靶向组HUVECs结合,非靶向组则未见明显结合。结论 成功制备包裹金纳米棒-液态氟碳双模态靶向纳米粒,GNPs光致相变效果明显,靶向性好。     

携iRGD肽阳离子微泡的制备及其基本性质检测

目的将iRGD肽和PEI600连接至微泡上,制备靶向阳离子微泡。方法采用硫醇-马来酰亚胺法连接iRGD肽,通过PEI600修饰使微泡表面电荷呈现正电荷,观察制备的携iRGD肽阳离子微泡(MBiRGD)与bEnd.3内皮细胞和人MCF-7乳腺癌细胞的黏附情况,并检测MBiRGD结合质粒DNA的情况。结果制备的MBiRGD表面电荷为正电荷,能有效结合质粒DNA,并能靶向bEnd.3内皮细胞和人MCF-7乳腺癌细胞,其黏附能力明显高于非靶向微泡。结论制备的携iRGD肽阳离子微泡是一种能靶向肿瘤细胞的新型阳离子微泡。     

携载腺病毒的靶向超声微泡对颅内胶质瘤转染能力的实验研究

目的 探讨载腺病毒靶向微泡在低频聚焦超声辐照下对颅内胶质瘤的靶向转染能力。 方法 原位接种U251胶质瘤细胞制备小鼠颅内胶质瘤模型;制备可以携载腺病毒载体和偶联RGD肽的脂质体微泡,并检测脂质体微泡的性状;实验动物分为3组,Ⅰ组为注射未携带腺病毒的非靶向微泡(对照组),Ⅱ组注射载腺病毒的非靶向微泡,Ⅲ组注射载腺病毒的靶向微泡,3组在注射微泡后接受超声辐照;利用小动物活体荧光成像系统观察和分析3组动物颅内荧光强度。结果 原位小鼠颅内胶质瘤模型符合临床胶质瘤影像学和病理学特征;制备的微泡直径在1.10～1.20μm之间,平均浓度为(7.8±0.43)×10_⁸/ml,既可以携带腺病毒,又可以链接RGD肽;小动物活体荧光成像显示,与Ⅰ组和Ⅱ组相比,Ⅲ组小鼠颅内荧光强度显著增强(P＜0.01)。结论 静脉注射偶联RGD肽的载腺病毒靶向脂质体微泡可以将携载的目的基因有效地转染颅内胶质瘤。