大鼠脑挫伤后HIF-1α表达规律的实验性研究

目的 观察大鼠脑挫伤后不同时间段内低氧诱导因子(HIF-1α)的表达,探讨其在脑挫伤过程中的表达规律及法医学意 义.方法 以Feeney法建立大鼠闭合性脑挫伤模型,将实验动物分为挫伤后1 h组、4 h组、12 h组、48 h组、72 h组、7 d组、14 d组 以及对照组,运用免疫组化SABC法观察HIF-1α蛋白的表达.结果 伤后1 h可观察到少量表达,4 h后表达开始增加,48 h迭高峰,到14 d时基本恢复正常.多见HIF-1α免疫阳性反应细胞在大脑皮层、脑干、海马区呈弥漫性表达.结论 脑挫伤后随着时间的延长H1F-1α的表达呈现出一定规律性.     

大鼠液压冲击颅脑损伤后核因子κB在脑组织的表达变化的研究

目的 探讨成年大鼠液压冲击性脑损伤后核因子kB(NF-κB)表达变化和意义.方法 建立液压损伤模型,观察成年性Wistar大鼠168只,其中实验组(126只)和对照组(42只).实验组分为3个亚组,每组各42只大鼠.实验组用液压冲击致伤,造成大鼠轻、中、重型脑损伤模型,分别在0.5 h、2 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h进行大体标本观测、病理切片观察;应用免疫组化方法研究两组大鼠中NF-κB在脑组织皮层创伤区的表达.结果 实验组大鼠皮层损伤区NF-κB表达明显高于相应时间(除0.5 h外)的假手术组(P<0.05或P<0.01):核因子KB在对照组低水平表达,在损伤组伤后0.5 h即开始增高,2 h即开始明显增高.6 h和12h逐步升高,24 h和48 h达到峰值,72 h开始下降,24 h和48 h实验组随损伤程度的增加而增高.结论 创伤性脑损伤后核因子KB早期显著表达,在创伤性脑损伤时的损伤与抗损伤机制中起着重要作用.     

颅内出血大鼠脑组织核转录因子κB与抑制因子κBα的表达

目的研究实验性大鼠脑出血后脑组织核转录因子κB(NF-κB)及其抑制因子κBα(IκBα)的表达变化。方法将24只大鼠随机分为正常对照组和脑出血后6h、1d和3d实验组,每组6只大鼠。采用定量Ⅶ型胶原酶注入大鼠尾状核建立脑出血模型,用免疫组织化学法分别检测各组NF-κB及IκBα蛋白的表达。结果脑出血后6h,NF-κB蛋白表达增加,1d增加最为明显,广泛表达于血肿周围组织、远区皮质、海马等部位,并有核移位现象。在脑出血后6h、1d、3d,NF-κB吸光度值分别为0·21±0·05、0·32±0·09、0·25±0·07,与正常对照组的0·08±0·01相比,差异均有显著性(P<0·01)。在脑出血后6h、1d、3d,IκBα吸光度值分别为0·15±0·06、0·12±0·04、0·14±0·05,与正常对照组的0·30±0·07比较,IκBα表达量均减弱,差异有显著性(P<0·01)。结论NF-κB参与了脑出血后血肿周围的损害过程,而IκBα可能起到脑保护作用。     

模拟失重大鼠肝组织中NF-κB的表达及意义

目的:研究模拟失重环境下大鼠肝脏组织中NF-κB的表达及意义.方法:成年♂ Wistar 大鼠84只,随机分为模拟失重组和对照组,每组又分别设1、2、3、4、5、6和7 d共7个时相点,每时相点模拟失重和同步对照各6只大鼠.采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.各组大鼠肝组织中NF-κB表达分别应用Western blot 和免疫组化PV-6001法进行检测.结果:在尾悬吊1-2 d期间,大鼠焦躁不安,饮食量减少,精神较差,活动减弱,2-3 d后有所适应,逐渐恢复稳定状态.模拟失重环境下大鼠肝脏NF-κB表达水平明显升高,1、2 d悬尾组大鼠肝组织中NF-κB表达率明显高于对照组(F=271.36,P＜0.01),其后,NF-κB表达水平呈明显下降趋势势(F=60.68,P＜0.05),5-7 d悬尾组NF-κB表达水平接近对照组,差异无统计学意义.NF-κB阳性产物主要见于实验大鼠肝细胞内,亦见于炎细胞及Kupffer 细胞内,可分为胞质型、核型、核浆型等三个类型,单独或混合存在.结论:模模拟失重使大鼠肝脏组织中NF-κB表达发生明显变化,提示在失重环境中肝脏NF-κB的早期高表达和逐渐恢复过程与失重应激反应及失重耐受有密切关系.     

核转录因子κB在大鼠脑出血后血肿周围组织中的表达及水蛭素的保护作用

目的探讨大鼠实验性脑出血后脑组织核转录因子κB(NF-κB)的表达及水蛭素对其表达的影响。方法采用自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,免疫组化染色法检测脑组织NF-κB的表达和采用干湿比重法测定脑含水量。结果脑出血后6 h血肿周围组织NF-κB开始表达,3 d达高峰,脑含水量6 h升高,3 d达高峰。水蛭素组脑含水量、NF-κB表达与对照组及脑出血组比较均有统计学意义(P<0.05 orP<0.01)。结论NF-κB参与了脑出血继发性脑组织损伤。     

硝酸甘油诱导偏头痛大鼠三叉神经尾核核因子-κB表达增加

目的：观察硝酸甘油（NTG）诱导偏头痛大鼠三叉神经尾核核因子（NF）-κB表达。方法：72只大鼠随机分为偏头痛模型组和对照组,各组再随机分成皮下注射NTG（模型组）或生理盐水（对照组）1、2、3、4、5、和6h组,每组6只。免疫组织化学染色、图像处理检测三叉神经尾核NF-κB阳性单位值。结果：对照组大鼠各时间点三叉神经尾核均可见NF-κB阳性反应,且各时间点无显著差异（P〉0．05）。模型组皮下注射NTG后1h即可见NF-κB阳性反应增强,3h达高峰,之后逐渐回落。模型组各时间点NF-κB阳性单位值匀显著高于对照组,且模型组3、4h组显著高于1、2、5、6h组（P〈0．05）。结论：皮下注射GTN后大鼠三叉神经尾核NF-κB表达呈时限性增强,提示NF-κB表达增强可能参与了偏头痛的发病机制。     

EPO对大鼠脑出血血肿周围组织细胞凋亡与NF—κB表达的影响

目的研究脑出血后血肿周围组织细胞凋亡与核转录因子κB（NF—κB）的表达及促红细胞生成素（EPO）的干预作用。方法将126只大鼠随机分为假手术组、脑出血组、EPO干预组,每组各42只,建立脑出血模型。EPO干预组大鼠于造模后及每24h腹腔注射人重组促红细胞生成素（rhEPO）3000U／kg。分别在术后3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d断头取脑,作NF-κB免疫组化染色和原位末端标记（TUNEL）染色,观察各组各时间点NF—κB的表达及TUNEL阳性细胞数。结果与脑出血组比较EPO干预组NF-κB表达增多,凋亡细胞减少。结论脑出血周围细胞凋亡与NF—κB表达均有增多,EPO通过促进NF—κB活化抑制细胞凋亡,从而起到神经保护作用。     

环磷酰胺对大鼠脑出血血肿周围组织核因子-κB及细胞间黏附分子1表达的影响

目的研究环磷酰胺对大鼠脑出血血肿周围组织NF-κB和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法健康SD大鼠125只,随机分为假手术组(25只)、治疗组(50只)和对照组(50只),采用Fredrik建立的自体股动脉取血,并向大鼠尾壳核注射方法复制脑出血模型。各组按术后6、24、48、72 h及5 d分为5个时间点,经尾壳核行冠状切片,分别按干湿重法测脑含水量,免疫组织化学法测定血肿周围组织NF-κB及ICAM-1的表达。结果假手术组各时间点NF-κB、ICAM-1表达无明显变化。除6 h及5 d,治疗组24、48、72 h血肿周围脑组织含水量及NF-κB、ICAM-1表达均明显低于对照组(P0.05)。NF-κB表达与ICAM-1表达呈现同步性,而且NF-κB的表达高峰时间先于ICAM-1的表达。结论环磷酰胺能够减少并抑制NF-κB的表达,减轻脑出血血肿周围组织的炎性反应,起到神经保护作用。     

脑缺血再灌注后实验大鼠核因子kappaB的变化

目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后核因子kappaB(NF-κB)在时间上表达的变化过程。方法线栓法建立右侧大脑中动脉闭塞大鼠模型,分别于缺血90min后再灌注2h,6h,12h,24h,72h,大鼠在各时间点断头取脑,测算脑梗死体积,用免疫印迹法检测脑组织胞核内NF-κB的表达。结果脑缺血再灌注后NF-κB的表达在6h出现明显升高(P<0.01),在24h达到高峰,72h略有下降,其脑梗死体积随着再灌注时间延长而增加,脑梗死体积与NF-κB表达水平之间有显著的相关性。结论脑缺血再灌注后,脑梗死区域出现胞核内NF-κB表达增加,NF-κB在再灌注损伤中起重要作用。     

亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后NF-κB基因的表达变化

目的研究亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后核转录因子（NF-κB）基因表达变化。方法将新生SD大鼠随机分为3组,假手术组（n=40）、常温组（n=40）、亚低温组（n=40）,根据处死的时间不同均分为1h、6h、12h、24h、48h五个亚组,利用Real-Time PCR方法在mRNA水平检测各组脑组织NF-κB表达含量。结果假手术组各时间点NF-κB mRNA表达甚微,常温组NF-κB mRNA随时间延长逐渐升高,24h达到高峰,亚低温组各时间点与常温组比较均下降（P〈0.01）,24h组下降最为显著。结论亚低温的神经保护机制可能为抑制NF-κB的基因表达。     

暴发性肝功能衰竭大鼠肝组织核因子-κB和诱导型一氧化氮合酶的表达及其意义

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在暴发性肝功能衰竭肝细胞炎性反应中的作用机制.方法 Wistar大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gain)和脂多糖(LPS)制作暴发性肝功能衰竭模型.免疫组织化学技术分别观察注药后2、4、8、12和24 h大鼠肝组织中NF-κB和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况,分析NF-κB、iNOS与暴发性肝功能衰竭的关系.结果 模型组NF-κB p65蛋白表达阳性细胞主要为肝细胞、库普弗细胞.造模后4、8和12 h时,核阳性表达的细胞数逐渐增多,明显高于对照组.2 h组主要是非实质细胞的胞质着色;而4、8、12和24 h组以肝细胞胞核着色为主.对照组不同时间点NF-κB p65蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),模型组则随肝细胞坏死程度的加重而增加(r=0.694,P＜0.01).随着肝细胞炎性反应、坏死程度的增高,模型组肝细胞质iNOS表达逐渐增多(r=0.867,P＜0.01),以肝细胞表达为主.对照组肝细胞质iNOS表达较弱(P＞0.05).肝组织中NF-κB活化与iNOS表达呈正相关(r=0.801,P＜0.01).结论 NF-κB可能是暴发性肝功能衰竭肝细胞炎性反应、坏死过程中的关键环节.     

脑出血大鼠血肿周围组织IL-17与NF-κBp65的表达及意义

目的探讨脑出血大鼠血肿周围组织中白细胞介素(IL)-17与核因子(NF)-κBp65的表达及其意义。方法 90只大鼠随机分成对照组,假手术组,出血组,每组30只。选取6、24 h,3、7、14 d五个时间点。RT-PCR法检测大鼠血肿周围组织中IL-17 m RNA,NF-κBp65 m RNA的表达。结果对照组与假手术组IL-17 m RNA与NF-κBp65 m RNA的表达在各时间点均无统计学差异(P0.05)。在同一时间点,出血组IL-17 m RNA与NF-κBp65 m RNA的表达与对照组、假手术组均具有统计学差异(P0.05)。在各时间点,出血组IL-17 m RNA、NF-κBp65 m RNA的表达均具有统计学差异(P0.05);出血组IL-17 m RNA与NF-κBp65 m RNA的表达在脑出血后7 d高于其他时间点(P0.05)。结论 IL-17 m RNA与NF-κBp65 m RNA的表达在脑出血后6 h就开始增加,7 d高于6、24 h,3、14 d。IL-17与NF-κBp65参与脑出血后的炎症反应。     

重症急性胰腺炎肺损伤大鼠NF-κB、ICAM-1的变化

Wistar大鼠72只随机分为重症急性胰腺炎(SAP)模型组、PDTC保护组、假手术组,每组24只.造模后3、6、12 h处死大鼠,测定各组肺组织内细胞核因子κB(NF-κB)结合活性、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA 表达量.结果SAP损伤后模型组肺组织内NF-κB活性较对照组明显增加,可于损伤后6 h达高峰,PDTC保护组NF-κB活性明显减弱;模型组于3 h ICAM-1mRNA表达量已开始升高,12 h表达量明显升高;PDTC保护组各时间点表达量均低于模型组,其中6、12 h与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).认为NF-κB高水平激活直接或间接上调ICAM-1 mRNA表达量是引起急性坏死性胰腺炎合并肺损伤的重要原因.     

核转录因子NF-κB对血管损伤和新生内膜形成的影响

目的:探讨核转录因子NF-κB对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜的作用。方法:原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB水平。制作大鼠血管球囊损伤模型,检测血管新生内膜形成及单核细胞化学趋化因子(MCP-1)、NF-κBp65和细胞外信号调节激酶(ERK2)的表达。结果:增殖的平滑肌细胞PCNA和NF-κBp65蛋白水平表达增加。NF-κBp65反义和诱骗寡核苷酸抑制PCNA表达。大鼠血管球囊损伤后第7天,正义组、诱骗对照组、模型组的内膜面积、中膜面积、内膜/中膜比值达到高峰。反义组、诱骗组和反义诱骗组显著降低内膜与中膜比值(P<0.05)。球囊损伤后3d、5d、7d,MCP-1mRNA和蛋白质水平持续而明显的表达增强,14d后略为降低。反义组、诱骗组、反义诱骗组在各时间点均能减少MCP-1mRNA和蛋白质表达。Western Blot检测显示血管球囊损伤后7d,NF-κBp65、ERK2的蛋白合成达到高峰。反义组、诱骗组、反义诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时相点蛋白合成均减弱。结论:增殖的平滑肌细胞NF-κBp65基因表达增加。NF-κB调控PCNA、MCP-1、ERK2的基因表达和蛋白质水平。局部转染NF-κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制血管新生内膜的形成。     

模拟失重对大鼠肠黏膜NF-κB表达的影响

目的:探讨模拟失重条件下健康大鼠肠道黏膜组织中核因子-κB(NF-κB)的表达变化及其意义.方法:成年Wistar大鼠807,,随机分为10组,按模拟失重时相分别为0.5、1、2、7、21 d和相应的对照组.采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.免疫组织化学法检测肠道黏膜组织中NF-κB的表达水平.结果:0.5、1、2、7、21 d模拟失重组大鼠肠道组织NF-κB表达水平均显著高于相应对照组(10.11%±3.29%vs 5.50%±1.92%,22.00%±5.31%vs 6.50%±2.32%,25.50%±4.11%vs8.75%±6.36%,21.50%±3.02%vs 6.75%±2.12%,10.87%±2.64%vs 5.62%±2.13%,均P＜0.01),模拟失重0.5 d组肠道组织NF-κB表达开始升高,2 d组达高峰,随模拟失重时间的延长,NF-κB表达水平依次下降,21 d组仍然高于相应对照组.结论:尾悬吊模拟失重大鼠肠道组织NF-κB表达水平明显上调,提示肠道组织NF-κB表达变化与失重应激反应和失重耐受有密切关系.     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞核转录因子及细胞间黏附分子的影响

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)对脑微血管内皮细胞(BMEC)损伤后NF-κB及其下游调控因子细胞间黏附分子1(ICAM 1)的影响。方法通过培养大鼠BMEC,用1 mmol/L浓度的Hcy及CuSO_4μmol/L共同干预培养的BMEC,分别作用0、6、12和18h,观察不同时间点细胞NF-κB p65及ICAM-1的表达。结果与0h比较,用Hcy干预6 h后,细胞开始出现ICAM-1蛋白表达,但差异无统计学意义(P>0.05),至1 2 h ICAM 1蛋白表达明显升高(P<0.05),18 h升高更明显(P<0.01);与0h比较,Hcy干预6h后,细胞NF-κB p65表达明显增加(P<0.05),至12h NF-κB p65核转位更明显(P<0.01);而18h NF-κB核转位的现象开始减弱,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Hcy可以促进NF-κB的核转位,诱导ICAM-1的表达。     

NF-κB和IL-6在局灶脑缺血/再灌注损伤大鼠脑组织中的表达

目的 探讨局灶脑缺血／再灌注损伤（I／R）时核因子-κB（NF-κB）和白介素-6（IL-6）的动态变化。方法 采用线栓法制备大鼠模型，采用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织NF-κB和IL-6并进行图像分析。结果 6h开始，皮质区和纹状体区神经细胞NF-κB表达逐渐增强，于再灌注1d达高峰，之后逐渐下降。IL-6表达部位和变化规律与NF-κB相似，但其表达高峰在再灌注2d。大鼠脑组织NF-κB和IL-6二因子水平在缺血损伤后的变化规律具有显著相关性（P〈0．01）。结论 NF-κB和IL-6水平在脑损伤的炎性病理过程中起重要作用。     

大鼠主动脉内皮损伤后核因子κB活性的动态变化及血管细胞黏附分子1的表达

目的 观察动脉损伤后核因子Κb活性的动态变化,以及血管局部血管细胞黏附分子1的表达,分析二者的关系.方法 SD大鼠以球囊剥脱主动脉内皮建立大鼠动脉损伤模型.按照术后处死的时间点,将动物分为8组:0 h(对照组)、12 h、24 h、1天、2天、3天、7天及14天,每组6只.凝胶迁移率实验检测各个时间点核因子Κb活性的动态变化,免疫组织化学观察血管细胞黏附分子1在血管局部的表达.结果 术后即刻以扫描电镜观察内皮完全剥脱.术后14天可见明显的增生内膜,模型建立成功.大鼠主动脉球囊损伤后,核因子Κb在术后12 h即有明显活化,高峰在1～3天,然后逐渐下降,14天左右接近术前水平.术后即刻无血管细胞黏附分子1表达,7天时在内膜表面及少量中膜平滑肌细胞可以看到血管细胞黏附分子1表达,术后14天时在未有内皮细胞覆盖处,新生内膜的近血管腔面少量表达,而主要的 阳性转移到新生内膜近内弹力板处.结论 核因子κB和血管细胞黏附分子1参与大鼠的主动脉损伤后的炎症过程;核因子κB的活化与失活成动态变化;血管细胞黏附分子1不同时间表达在不同的部位,核因子κB的活化与失活在血管细胞黏附分子1的表达与消退之前,核因子κB对血管细胞黏附分子1的表达起调节作用.     

丹皮酚预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠核因子-κB的影响

目的探讨丹皮酚预处理对脑缺血再灌注(CI/R)损伤大鼠脑组织中核因子-κB(NF-κB)的影响。方法采用四血管阻塞10min再灌注12h方法建立CI/R损伤大鼠模型,分为模型组、丹皮酚不同剂量组(分别为5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)、假手术组,术前7d开始腹腔注射给药,每日1次,术后1h给药1次。再灌注12h后,免疫组化法检测各组脑组织海马CA1区NF-κB的水平。结果丹皮酚高剂量、中剂量可降低神经行为学评分,与模型组评分比较差异均有统计学意义(P0.05)。丹皮酚不同剂量均可降低脑组织NF-κB表达,与模型组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论丹皮酚预处理对CI/R损伤大鼠的脑保护作用可能与其下调NF-κB的表达、减轻脑组织的炎症反应等有关。     

转Nanog基因对6-羟基多巴胺帕金森病大鼠脑核因子-κB表达的影响

目的探讨转Nanog基因对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)大鼠A脑内核因子(NF)-κB表达的影响。方法取SD大鼠随机分成正常对照组、6-OHDA+磷酸盐缓冲液(PBS)组、6-OHDA+PNL组与6-OHDA+Nanog组,各组又分注射后1、14 d亚组。除正常对照组外,采用脑立体定向注射技术,6-OHDA+PBS组注入PBS,6-OHDA+PNL组注入空载体,6-OHDA+Nanog组注入转Nanog基因载体。各组动物注射阿朴吗啡(APO)后观察各时间点大鼠的旋转行为改变;行脑免疫组织化学染色,观察黑质多巴胺(DA)能神经元数量变化、纹状体NF-κBp65的表达改变;激光扫描共聚焦显微镜技术检测NF-κBp65表达的定位。结果注射后14 d,6-OHDA+Nanog组大鼠APO诱发的旋转效应明显低于6-OHDA+PNL组与6-OHDA+PBS组(P<0.05);除正常对照组外,其他各组大鼠注射后14 d黑质TH阳性细胞数普遍较注射后1 d减少(P<0.01),但6-OHDA+Nanog组损毁侧黑质存活的TH阳性细胞数明显高于6-OHDA+PNL组与6-OHDA+PBS组(P<0.01),且其注射侧纹状体NF-κBp65阳性细胞数低于注射后1 d组(P<0.05)、注射后14 d的6-OHDA+PNL与6-OHDA+PBS组(P<0.05)。除正常对照组外,注射后各组各时程均可见NF-κBp65的阳性表达,并呈现核内转移现象。结论转Nanog基因可抑制6-OHDA诱导的PD大鼠模型脑内NF-κB的活化,同时具有神经元保护作用。