窄谱中波紫外线的生物学效应及在皮肤科的应用

紫外线（UV）照射治疗已经成为治疗皮肤病的一个重组成部分。1981年Pariish和Jaenicke发现了窄谱中波紫外线（NB—UVB）辐射是一种治疗银屑病的有效方式，此发现促进了飞利浦TI-01灯管的开发。紫外线波长不同其生物学效应也不同，短波紫外线（UVC）是DNA的吸收峰值，易致癌；长波紫外线（UVA）大部分可透过真皮，只有小部分被表皮吸收；而波长311—313nm的NB—UVB具有最佳的穿透作用，红斑效应小，     

UV-N光用于皮肤病

紫外光-N（UV～N）系列光疗机是由金属元素和卤素元素,按特定配比组成的一种特定波长的光量子辐射系统,产生的连续光波,以长波紫外线为主辐射能。其光谱组成为：70％UVA。14％UVB,2％UVC和可见光,具有UVA和UVB的综合效果。可用于银屑病、带状疱疹、单纯疱疹、玫瑰糠疹、疖肿痛、神经性皮炎、斑秃、白癜风、花斑癣、瘙痒症等多种皮肤疾病的治疗。     

EGCG对中长波紫外线引起的皮肤成纤维细胞光老化及光突变的干预作用

目的观察绿茶提取物中的主要活性成分没食子儿茶素没食子酸脂（EGCG）对经多次长、中波紫外线（UVA、UVB）照射后人皮肤成纤维细胞（HSF）光老化及突变情况的影响。方法分离并培养新生儿包皮HSF,将其分为正常对照组、EGCG干预组、UVA组、UVA＋EGCG组、UVB组、UVB＋EGCG组;UVB照射剂量为30mJ／cm^2,UVA照射剂量为10J／cm^2,每天照射HSF共持续2周。预实验选定EGCG浓度25μg／ml。采用组织化学染色法检测细胞中衰老相关β-半乳糖苷酶的表达量,观察细胞老化情况;采用克隆法检测次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HPRT）基因位点突变频率,观察紫外线照射的致突变力以及加入EGCG干预后的情况。结果（1）正常对照组及EGCG组均只见少量的β-半乳糖苷酶阳性细胞。其他几组阳性细胞比率为UVB组：43％±4％;UVA组：54％±4％;EGCG＋UVB组：64％±5％;EGCG＋UVA组：75％±5％,4组细胞间阳性比率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）正常对照组与EGCG处理组的HPRT自发突变率很低。单纯UVB及UVA照射诱导的突变分别是自发突变的72倍及241倍,而UVB＋EGCG组和UVA＋EGCG组分别较单纯UVB组和UVA组降低了52．78％和32．37％,差异有统计学意义（t=2．0742、2．7042,均P〈0．05）。结论UVA、UVB多次照射后均可上调HSF老化概率,加入EGCG可进一步上调其老化概率。UVA、UVB多次照射后均可增加HSF的HPRT基因位点突变频率,加入EGCG可显著减少HPRT基因位点突变频率。提示EGCG对UVA、UVB多次照射HSF后的保护干预作用可能与诱导突变细胞老化从而减少细胞突变频率有关。     

皮肤紫外辐射防护剂的机制研究进展*

紫外辐射（ultra—violet radiation,UVR）根据不同的生物学作用,可按波长大致分成UVA,UVB,UVC三个波段。能穿过臭氧层引起人皮肤损伤的紫外线成分是UVB（280～315nm）和UVA（315～400nm）,而UVB对皮肤的损伤强度比UVA大1000倍。来自日光的UVR能造成皮肤的多种不良反应,对皮肤晒伤、皮肤炎症、色素沉着、光老化与皮肤癌的发生与发展有重要影响。随着人们对UVR造成皮肤损伤的发生机制和影响因素的认知逐渐深入,其防护的方法也日趋成熟。目前国内外学者尝试了多种新方法,并取得了一定的进展。为开发防晒、抗氧化、抗炎症综合防护剂的研究及临床应用提供了科学依据。现将紫外线防护剂的研究进展综述如下。     

基于 EASI 量化观察的紫外线 UVA －UVB 结合封包治疗湿疹的效果

目的：应用湿疹面积及严重度指数（ EASI）评分观察紫外线UVA－UVB 结合封包综合治疗湿疹的临床疗效。方法将82例患有湿疹的患者随机分成对照组及观察组,其中对照组41例予糠酸莫米松软膏外用治疗,观察组41例在皮疹患处予紫外线UVA－UVB照射和封包治疗,每2周进行EASI评分,观察记录疗效,4周后统计记录总有效率,同时辅助运用皮肤病生活质量指数（ DLQI）评估疗效。结果接受紫外线UVA－UVB 结合封包治疗4周后,观察组使用EASI法评分方法进行详细的分析,总有效率为80．5％。对照组总有效率为58．5％。DLQI比较表明观察组生活质量明显优于对照组。结论紫外线UVA－UVB结合封包治疗能有效治疗湿疹。     

黄芩对皮肤细胞紫外线辐射损伤的保护作用

目的 研究传统中药黄芩对紫外线(UVA、UVB)损伤皮肤细胞(角质形成细胞和成纤维细胞)的保护作用。方法 采用30、60、90ml／cm^2的UVB和4、8、12J／cm^2的UVA照射培养的原代角质形成细胞和成纤维细胞，加入中药黄芩进行干预处理，以MTT法检测细胞活性。结果 UVA、UVB照射可引起皮肤角质形成细胞和成纤维细胞损伤，而黄芩预处理后细胞活性可恢复8％～38％。结论 黄芩具有光保护性能，可减轻UVA、UVB对皮肤细胞的损伤作用。     

硫酸锌对UVB致HaCaT细胞损伤的拮抗作用

目的：探讨中波紫外线（UVB）造成HaCaT细胞损伤的机制及硫酸锌能否拮抗UVB对细胞的损害作用,为开发预防UVB损伤的药物提供理论依据。方法：将HaCaT细胞随机分为对照组、UVB组、加锌（Zn）组和Zn+UVB组。对照组不施加任何处理因素;UVB组细胞进行UVB照射;Zn组只加入终浓度为50 μmol·L^-1的硫酸锌;Zn+UVB组,加入硫酸锌24　h后,进行UVB照射。UVB照射时间为6 min,照射后24　h,收集各组细胞,用台盼蓝拒染法检测细胞存活率,TBA显色法检测细胞内丙二醛（MDA）水平,单细胞凝胶电泳技术检测各组细胞DNA的损伤情况。结果：与对照组比较,UVB组和Zn+UVB组HaCaT细胞存活率显著降低（P<0.05）,MDA水平显著升高（P<0.05）;与UVB组比较,Zn+UVB组细胞存活率显著升高（P<0.05）,MDA水平显著降低（P<0.05）。单细胞凝胶电泳检测结果显示,UVB组和Zn+UVB组HaCaT细胞均出现彗星样拖尾现象。与对照组比较,UVB组和Zn+UVB组细胞尾部DNA尾距、Olive尾距显著增大（P<0.05）;与UVB组比较,Zn+UVB组尾距、Olive尾
距显著减小,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：UVB　能够导致HaCaT细胞存活率下降和MDA水平提高以及DNA损伤,而硫酸锌能够拮抗UVB对HaCaT细胞的损伤作用。
      

紫外线对皮肤作用机制的研究进展

皮肤是人体最大的器官,也是紫外线（UV）照射后最易遭受损伤的器官。紫外线辐射可以造成皮肤损伤,引起皮肤出现红斑、光老化等。紫外线照射皮肤产生一系列细胞因子的改变,细胞信号转导的变化及细胞凋亡。长波和中波紫外线（UVA和UVB）均能影响皮肤产生多种生物学效应,本文将从细胞水平和基因水平对UV照射皮肤产生的各种生物学效应进行综述。1紫外线照射皮肤引起的细胞学效应1.1角质形成细胞（KC）在表皮中,KC数量最多,KC在受到紫外线照射后,将引起表皮微环境的改变,可以释放许多细胞因子,这些细胞因子参与介导一些炎症和免疫反应。     

单细胞碱性凝胶电泳用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂

目的 引进单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法,用以检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂。方法 载有经紫外线和H2O2作用过的胸腺细胞和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1h,在电泳缓冲液中解旋30min,电泳30min,胸腺细胞核用20mg／L的EB染色5min,用荧光显微镜和显微细胞图像分析系统观察和分析H2O2和紫外线在体外条件下对正常胸腺细胞的DNA损伤作用。结果 紫外线和不同浓度H2O20．001、0．01、0．1、1．0mmoL／L均可导致小鼠胸腺细胞DNA损伤,且随着H2O2浓度的增加DNA损伤逐渐加重。结论 SCGE可用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2和紫外线引起的胸腺细胞DNA损伤。     

中波紫外线对成纤维细胞的损伤作用

目的：探讨中波紫外线(UVB)对成纤维细胞的损伤作用，建立细胞损伤模型。 方法：采用UVB灯照射小鼠成纤维细胞株NIH3T3，MTT法测细胞存活率，流式细胞术检测细胞周期、凋亡和H₂O₂的生成。 结果：0.2～3.0 kJ •m^-2 UVB照射后24 h细胞存活率明显降低（P<0.05或0.01）；1.5 kJ•m^-2 UVB照射后4、8、18和24 h细胞G₁期细胞百分数升高，凋亡小体增多；1.5 kJ •m^-2 UVB照射后8 h H₂O₂生成增多，与0、4、18和24 h组比较差异有显著性（P<0.05）。 结论：UVB照射可诱导成纤维细胞出现G₁期阻滞、细胞凋亡及H₂O₂生成增多。     

miRNA在中波紫外线照射的NIH3T3细胞中的差异表达谱

目的应用miRNAs芯片筛选中波紫外线（UVB）照射的NIH3T3细胞表达miRNAs,并寻找差异表达miRNAs调控的靶基因。方法 miRNAs微阵列技术筛选UVB照射的NIH3T3细胞差异表达miRNAs,同时运用miRNAs特异的引物组对差异表达的miRNAs进行荧光定量RT-PCR验证。结果 NIH3T3细胞受不同剂量UVB照射后,MTT结果显示细胞生存率明显下降。miRNAs芯片结果显示,实验组细胞与对照组细胞差异表达的miRNA共30个（占11%）,其中27个表达上调,3个表达下调。mmu-miR-365和mmu-miR-21显著上调,而mmu-miR-465在不同的时间点都下调。其差异表达均在2倍以上;mmu-miR-let-7a、mmu-miR-24、mmu-miR-376b和mmu-miR-21的实时荧光定量RT-PCR验证结果与芯片表达结果基本一致。结论 miRNA在UVB照射的NIH3T3细胞中有差异表达,提示miRNA可能参与UVB照射后NIH3T3细胞内的多种信号调控途径。     

蒿甲醚对紫外线照射后HaCaT细胞表达Fas和Bcl-2的影响

目的为探讨一定剂量不同波长紫外线照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响.方法采用45.00 mJ/cm2剂量的UVB及4.00 J/cm2剂量的UVA照射培养的HaCaT细胞(永生化角质形成细胞),以羟氯喹及不同浓度的蒿甲醚进行干预处理,应用流式细胞仪检测紫外线辐照及羟氯喹和蒿甲醚处理后HaCaT细胞Fas和Bcl-2蛋白水平的变化.结果(1)与未照射组相比UVA、UVB照射均可使HaCaT细胞表达Fas增加;(2)与UV组相比UVA加羟氯喹,UVB、UVA加25μg/mL蒿甲醚组使HaCaT细胞表达Fas减少;(3)与未照射组相比UVA、UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;(4)与UV组相比UVA加25μg/mL蒿甲醚组和UVB加100μg/mL蒿甲醚组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加.结论小剂量(25μg/mL、50μg/mL)蒿甲醚与凋亡相关的Fas和Bcl-2的表达有关.     

宫颈上皮液基薄片与传统涂片临床病理观察研究

目的：探讨液基薄层细胞技术对宫颈上皮细胞异常筛查的作用。方法；通过液基薄层细胞技术和传统涂片进行对比，观察宫颈上皮异常。结果：1121例传统涂片与703例液基薄层涂片细胞学诊断分别为：宫颈上皮细胞异常的传统涂片87例（7．7％），液基薄层细胞涂片97例（13．7％）。传统涂片质量满意度60％，液基薄层涂片质量满意度93％。结论：液基薄层细胞涂片技术使上皮细胞异常的检出率有了明显的提高，标本满意度也优于传统涂片。     

五味子甲素衍生物联苯双酯的紫外防护作用及机制研究

目的  探讨联苯双酯（DDB）对中波紫外线（UVB）的防护作用及其相关机制研究,为临床应用提供理论依据。方法  DDB和维生素C对照检测五味子甲素衍生物DDB对超氧阴离子（O2-）的清除率。MTT法测定DDB、UVB对人永生化角质形成细胞（HaCaT）、人真皮成纤维细胞（FB）生长的影响及DDB对UVB的防护作用。通过Giemsa染色,从形态学上观察DDB对UVB损伤的防护作用。激光共聚焦观察活性氧簇（ROS）及检测其荧光强度。结果  实验结果表明,相同浓度DDB具有强的清除O2-的能力;DDB对HaCaT、Fb细胞无毒性且可防护UVB损伤。Giemsa染色后,形态学上发现DDB可以明显抑制细胞的凋亡。DDB可抑制HaCaT细胞外ROS的生成。结论  五味子甲素衍生物DDB对UVB有明显的防护作用,DDB作用机制是通过其抗氧化活性抑制UVB辐射引起的氧化应激及细胞凋亡等,起到紫外线防护作用,有望开发成为有效的抗氧化剂和紫外防护产品。

     

维生素C对紫外线诱导HLF细胞凋亡的保护作用

目的 探讨紫外线诱导人HLF细胞凋亡对DNA降解特点，以维生素C对紫外线诱导细胞凋亡的保护作用。方法 紫外线（UVB）分别照射体外培养的人肺成纤维细胞3min和5min，同时添加维生素C（50μmol/L）。设立对照组。利用吖啶荧光染料染色鉴定凋亡细胞，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果 紫外线可以诱导人肺成纤维细胞凋亡，作用存在时间效应关系。紫外线诱导人肺成纤维细胞凋亡时，未出现典型的DNA ladder现象。维生素C对于紫外线诱导的细胞凋亡有显著的抑制作用。结论 DNAladder不能作为细胞凋亡的唯一的标志，紫外线诱导的细胞凋亡与DNA ladder的出现并不总是一致的。维生素C具有拮抗紫外线诱导的细胞凋亡作用。     

过表达α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ通过增强p38MAPK信号通路抑制UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡

 目的 初步探讨α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ（简称FUT7）在UVC照射诱导的人肝癌SMMC-7721(简称7721)细胞凋亡过程中的作用及机制。方法 用RT-PCR检测转染pcDNA3-FUT7质粒的7721细胞及转染空质粒pcDNA3的7721细胞中FUT7基因的转录水平；用流式细胞仪检测细胞表面FUT7产物SLex的表达水平；利用DAPI染核计算UVC照射后细胞的凋亡比率；用结晶紫染色法测定细胞的存活率；利用Western blot检测Caspase3的剪切情况及p38MAPK、JNK1/2和ERK1/2的磷酸化水平。结果 过表达FUT7能抑制UVC照射诱导的7721细胞凋亡，同时还增强了细胞中p38MAPK信号通路的活性，而用p38MAPK的特异性抑制剂处理则可削弱FUT7的抗凋亡作用。结论 在UVC照射诱导的7721细胞凋亡过程中FUT7具有抗凋亡的作用，这种作用可能部分通过增强p38MAPK信号通路活性而实现。     

紫外线及其辐射的尿刊酸对朗格汉斯细胞功能影响的研究

目的：探讨紫外线及其辐射的尿刊酸免疫抑制作用的可能机理。方法：观察中波紫外线（UVB）及尿刊酸对豚鼠郎格汉斯细胞刺激自体淋巴细胞增殖能力的影响。结果：低剂量UVB（25J／m^2)抑制率为10．5％，50J/m^2抑制率为22．4％，100J／m^2抑制率为54．5％，200J/m^2几乎可以完全抑制朗格汉斯细胞协同刺激功能，70％顺式尿刊酸（0．2mg/mL)抑制率仅为13．4％，反式尿刊酸无抑制作用。结论：紫外线可直接抑制朗格汉斯细胞的功能，并呈剂量依赖性，这可能在UVB免疫抑制过程中起着重要的作用，经紫外线辐射的顺式尿刊酸抑制作用轻微。     

中药复方软坚消肿液抗肿瘤作用及机理研究

探讨软坚消肿液（复方中药）对体外培养的人胃癌细胞凋亡及相关基因表达水平的影响。方法检测细胞凋亡采用DNA缺口末端标记法（TUNEL）、琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等技术。原癌基因的表达采用Northern杂交。结果用含软坚消肿液免血清处理的细胞，TUNEL染色、透射电镜均见许多细胞呈现凋亡特征性改变，DNA电泳呈典型梯状图谱；Northern杂交Bc1-2表达较对照组下调，C-myc和P53表达较对照组增强。结论软坚消肿液可诱导MGC-03细胞凋亡，其机理可能是通过调控Bc1-2、C-myc、P53的表达水平实现的，提示软坚消肿液对胃癌防治具有临床应用价值。     

高血压病患者外周血T淋巴细胞亚群及血浆白细胞介素Ⅱ水平的临床研究

采用间接免疫荧光法及双抗夹心法对高血压病（ＥＨ）患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群及白细胞介素（ＩＬ－２）水平进行检测。结果表明：ＥＨ患者细胞百分率、及ＩＬ－２明显低于对照组（Ｐ均＜０．０１），ＥＨ患者细胞百分率明显升高（Ｐ＜０．００１）；轻、中、重度ＥＨ患者细胞百分率、ＩＬ－２呈下降趋势，而细胞百分率呈上升趋势，与对照组比较，统计学有显著差异；ＥＨ患者平均动脉血压与ＩＬ－２呈负相关（γ＝－０．８７９，Ｐ＜０．０５）；ＥＨ患者ＩＬ－２与呈正相关（γ＝０．９９３，Ｐ＜０．０５）。本结果说明：细胞免疫参与了ＥＨ的病理过程，ＥＨ患者存在免疫功能紊乱，细胞百分率升高、降低引起ＩＬ－２水平下降是导致ＥＨ患者免疫功能紊乱的原因。