Survivin siRNA对卵巢癌细胞侵袭的影响

目的：探讨survivin靶向小分子干扰RNA（siRNA）对卵巢癌细胞侵袭的影响。方法：在survivin基因的编码区内根据干涉位点的设计原则,体外转录合成survivin siRNA,转染人卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞,用Westernblot方法鉴定干涉位点对survivin基因蛋白的干扰效果;细胞侵袭实验（transwell）检测细胞体外侵袭能力的变化。结果：survivin siRNA能有效抑制survivin蛋白的表达,siRNA组survivin蛋白的相对表达水平分别与空白对照组、非特异性组相比,差异均有统计学意义（P〈0.05）。特异性干涉组细胞的侵袭能力明显低于非特异性干涉组及空白对照组,差异均具有统计学意义（P〈0.001）。结论：特异性的survivin siRNA能有效降低卵巢癌细胞survivin的表达,抑制细胞侵袭能力,这为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。     

高分子聚合物用于siRNA递送系统的研究进展

小干扰RNA（siRNA）具有沉默互补的目标信使RNA（mRNA）从而抑制疾病相关基因表达的作用。因其高效性及特异性,siRNA具有作为基因药物的巨大潜力,但其在体内易受到血管屏障、内涵体及RNA酶等因素的影响,从而难以发挥药效。因此,设计高效的能够负载siRNA的纳米载体以使其富集至靶标是目前siRNA药物研发的重要任务,高分子聚合物纳米载体是目前研究热点之一。本文就高分子聚合物纳米载体实现siRNA药物递送的研究进展进行综述。     

靶向survivin的siRNA对肝癌HepG2细胞增殖和转移能力的影响

目的探讨针对人survivin基因的siRNA对肝癌细胞HepG2的体内外抑制作用。方法合成survivin基因的RNA干涉（RNA interferance,RNAi）特异性片段,构建survivin特异性的RNA干涉载体pSiS,转染HepG2细胞,G418筛选稳定转染的细胞系。细胞计数检测细胞生长情况;Western blotting检测细胞中survivin蛋白表达的变化;通过AnnexinV法染色和流式细胞术检测细胞凋亡;观察裸鼠皮下HepG2移植瘤的形成。结果成功构建了survivin基因siRNA真核表达载体pSiS,获得了稳定转染的细胞HepG2／pSiS。与HepG2、HepG2／pSi（空质粒对照细胞）相比,HepG2／pSiS细胞生长曲线十分平缓,差异有统计学意义（P〈0．01）;Westernblotting显示,HepG2／pSiS细胞中survivin蛋白表达减少,细胞凋亡率增加（P〈0．01）。HepG2／pSiS移植瘤形成明显受到抑制。结论Survivin特异性siRNA可明显促进肝癌细胞HepG2的凋亡,抑制该肿瘤细胞体外生长和体内移植成瘤。     

siRNA沉默survivin基因表达对恶性胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的探讨针对人survivin基因的siRNA（small interfering RNA）对恶性胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法设计并合成针对survivin基因的siRNA片断,构建干涉质粒载体pSil4.1-shsurvivin1和pSil4.1-shsurvivin2（pSil4.1-shcontrol作为阴性对照）。利用脂质体辅助转染恶性胶质瘤细胞（U251）,以G418筛选稳定表达干涉载体的细胞系,RT-PCR和W estern blot试验检测survivin的m RNA和蛋白表达,并筛选survivin基因显著抑制的稳定转染细胞系（U251-s2）。通过克隆形成试验和皮下移植瘤试验分别在体外和体内检测恶性胶质瘤细胞放射敏感性的变化。结果相对于未转染和阴性对照组细胞,U251-s2细胞中survivin mRNA和蛋白表达分别显著下调了40.5%和51.8%;同时,survivin基因表达下调能够显著增强恶性胶质瘤细胞的体内外放射敏感性。结论Survivin基因过表达和恶性胶质瘤的放疗抗性密切相关,抑制其表达可以显著增强恶性胶质瘤细胞的放疗敏感性,具有潜在的临床应用前景。     

小干涉RNA导入哺乳动物体内的方法与策略研究进展

小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)是目前研究的比较活跃的一种小RNA。利用siRNA使基因沉寂从而调节目的蛋白的功能,在疾病的基因治疗中有巨大的应用潜力。该文从siRNA在哺乳动物整体水平研究的角度,对近年来siRNA的载体策略以及siRNA导入体内的方法和途径等方面的研究进展作一综述,并讨论了siRNA在体内应用的优势和可能存在的问题。     

生物技术及产品-RNAi：从核苷酸到临床应用还有相当距离

RNA干涉（RNAi）的发现从根本上改变了我们对生物学的理解,并为掌控这种天然过程的生物研究创造了一件强有力的工具。RNAi技术是药物研发越来越重要的平台。如同单克隆抗体（MAb）,RNAi治疗代表一种新的治疗模式。然而,同样地要开发一项赢得诺贝尔奖的发现直到广泛治疗应用可能要假以时日。有几个因素将推动RNAi从实验室推进到临床的决定。首先,人基因组项目的完成使得有可能设计能沉默任何基因的小干涉RNA（siRNA）。     

靶向Akt1小干扰RNA对人喉癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究Akt1基因沉默对人喉癌细胞系（Hep-2）增殖和凋亡的影响。方法：设计并合成针对Akt1的特异性小干扰RNA（siRNA）序列,利用转染试剂转入体外培养人Hep-2细胞,48h后收集细胞,RT-PCR和Westernblot验证siRNA的沉默效应,MTT法检测细胞增殖活性、台盼蓝细胞染色法计数细胞存活率、AnnexinV/PI检测细胞凋亡和坏死。结果：设计的Akt1siRNA能够有效抑制体外培养Hep-2细胞内Akt1表达实现其基因沉默效应;Akt1siRNA干扰组Akt1mRNA转录和蛋白表达水平均低于空白和阴性对照组;Akt1siRNA干扰组细胞增殖活性下降,细胞存活率下降,Akt1siRNA干扰后细胞凋亡率和坏死率增加。结论：RNA干扰Akt1基因沉默具有抑制喉癌细胞增殖,促进细胞凋亡的作用,Akt1可作为喉癌基因治疗的后选新靶点。     

c-Myc靶向小分子干扰RNA抑制人直肠癌Colo320细胞增殖的实验研究

目的：利用小分子干扰RNA（siRNA）技术抑制人直肠癌Colo320细胞c-Myc基因的表达。为研究c-Myc基因在人直肠癌Colo320细胞中的作用提供一个新的方法。方法：设计人直肠癌Colo320细胞基因特异性小分子干扰RNA，用体外转录方法合成人直肠癌Colo320细胞基因的小分子干扰RNA并转染人直肠癌Colo320细胞，培养48—96h后，收集细胞RNA应用实时荧光定量RT—PCR方法检测转染细胞中c-Myc基因mRNA水平变化，骶temblot检测C—MYC蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝（MTT法）和集落形成实验检测细胞增殖活性。结果：转染siRNA后，与对照组相比，实验组pGensil—c—Myc-14的c-Myc基因mRNA水平明显降低，MTT法和集落形成实验表明实验组的增殖速率明显低于对照组的增殖速率。结论：在人直肠癌Colo320细胞中存在RNA干扰的机制，特异性siRNA能够有效的抑制c-Myc基因的表达，为研究c-Myc基因在肿瘤细胞中的调节途径提供了一个新的方法。     

RNAi药物的临床研究进展

RNA干扰（RNAi）是指在细胞内由双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）介导的降解同源序列的mRNA,从而抑制相应基因表达的现象。它是转录后基因沉默（PTGS）的一种。RNA干扰不仅是基础研究的热点．也是临床应用研究的热点．小干扰RNA（siRNA）药物虽然在国际上已有部分进入Ⅰ-Ⅲ期临床研究,但是siR—NA的脱靶效应、siRNA的导入等实际问题一直是RNA干扰临床治疗的最大障碍。核酸药物比传统的化学分子甚至比蛋白质更容易被降解,而RNA干扰药物的有效传递依旧是RNAi药物临床应用的拦路虎,该技术一旦被攻克．将会被广泛应用于基因性疾病、传染性疾病及恶性肿瘤的临床治疗。本文就RNA干扰的作用机制、临床应用、存在问题及广阔前景作一简要综述。     

RNA干扰对乳腺癌细胞骨桥蛋白基因表达抑制的研究

目的应用RNA干扰术靶向降低乳腺癌MCF-7细胞中骨桥蛋白基因（OPN）的表达水平,研究OPN基因对乳腺癌细胞增殖和侵袭性等生物学行为的影响。方法将设计合成的骨桥蛋白OPN序列特异性小分子干扰RNA（siRNA）,转染乳腺癌细胞株MCF-7,用逆转录PCR和蛋白印记杂交测OPN mRNA及蛋白水平的表达,通过生长曲线、克隆形成实验来检测细胞增殖及侵袭性情况的变化。结果OPN特异性siRNA转染后,骨桥蛋白mRNA及蛋白水平均明显下降,比色法显示转染组72h吸光度值为（0．21±0．06）与空白对照组（1．18土0．05）相比较明显受到抑制。转染组细胞克隆形成数为3．8个,较空白对照组（7．3个）及阴性对照组（7．1个）明显下降（P〈0．05）。结论乳腺癌MCF-7细胞中,针对OPN合成的siRNA能够有效地抑制骨桥蛋白的表达,从而显著抑制细胞的增殖和侵袭能力。     

肝癌细胞MAT2A基因小干扰RNA靶位筛选体系的建立

目的:构建M AT 2A基因的小干扰RNA(siRNA)快速筛选体系,筛选出有效的小干扰RNA。方法:首先构建能产生M AT 2A基因小干扰RNA的质粒表达载体,细胞内转录合成4条小干扰RNA;然后构建M AT 2A基因与荧光素酶报告基因(luciferase)的融合质粒表达载体p lucF-M AT 2A;采用脂质体转染法将p lucF-M AT 2A与产生siRNA的质粒共转染293T细胞,定量测量荧光素酶活性,构建M AT 2A基因的小干扰RNA筛选体系,初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA;然后将有效的siRNA转染Bel-7402肝癌细胞,半定量RT-PCR检测M AT 2A mRNA表达,并检测转染后肝癌细胞M AT的活性,进一步证实siRNA对M AT 2A表达的抑制效果。结果:所合成的4条小干扰RNA中有2条抑制荧光素酶表达,抑制效率分别为81%和89%,并特异性抑制肝癌细胞M AT 2A mRNA表达,降低了肝癌细胞中M AT活性。结论:通过荧光素酶报告体系来检测siRNA有效性的方法为RNA i研究提供了一个快速有效地筛选小干扰RNA的途径。     

RNAi对人胃癌BGC-823细胞中HPA基因表达的影响

目的探讨RNAi（RNA interference,RNAi）对人胃癌BGC-823细胞中肝素酶（heparanase,HPA）mRNA表达的影响。方法针对HPA不同基因位点设计合成寡核苷酸然后转录为小干扰RNA（siRNA）,分别用浓度为10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L的siRNA经LipofectamineTM2 000脂质体介导转染BGC-823细胞72h,同时设无关序列组及不转染组。采用完整细胞原位杂交技术观察各组BGC-823细胞中HPA mRNA的表达。结果 siRNA可有效抑制人胃癌BGC-823细胞中HPA mRNA的表达,以20μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义（P〉0.05）,不同浓度siRNA对HPA mRNA表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组（P〈0.05）。结论 RNAi技术可有效抑制人胃癌BGC-823细胞中HPA mRNA表达,为进一步运用RNAi技术治疗胃癌等恶性肿瘤奠定了一定的理论基础。     

RNAi沉默核因子-B亚单位p65表达抑制胃癌细胞侵袭

目的采用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术敲除胃癌细胞核因子-kappa B（nucle-ar factor-B,NF-B）亚单位p65后,观察其对细胞增殖和侵袭力的影响。方法采用p65小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染胃癌细胞后,采用Western Blot检测细胞p65蛋白,分别采用软琼脂集落培养试验和Ttanswell检测癌细胞增殖和侵袭能力。结果 siRNA转染组细胞p65蛋白明显被抑制,且呈浓度依赖性。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈时间和浓度依赖性。结论针对NF-B重要亚单位的p65siRNA可抑制胃癌细胞侵袭。研究发现,NF-B途径的激活是胃癌等肿瘤细胞生存的重要机制之一。     

沉默MPR1基因的壳聚糖/siRNA纳米粒的制备与初步表征

摘要：目的:构建一种能够沉默肿瘤多药耐药相关基因MPR1的小干扰RNA（siRNA）的基因转染载体。方法:采用天然来源的高分子材料壳聚糖（CS）作为沉默MPR1的siRNA递送载体材料,以三聚磷酸钠（TPP）作为交联剂,制备了CS与siRNA静电结合的交联纳米粒-CS/siRNA。同时制备不经TPP交联的CS与siRNA简单静电结合物CS-siRNA作为对照。分别对其进行理化性质表征、稳定性、体外释药、细胞毒性及细胞摄取研究。结果:与CS-siRNA相比,CS/siRNA具有更小的粒径、更高的药物包封率、更少的药物释放和更好的血清稳定性,对siRNA的缩合保护作用更好,且CS/siRNA的放置稳定性显著优于CS-siRNA。所制备的空白载体、CS/siRNA和CS-siRNA均无明显的细胞毒性。CS/siRNA的细胞摄取率和胞内分布均显著优于CS-siRNA。结论:本研究所制备的CS/siRNA有望提供一个有潜力的siRNA转染载体。     

siRNA技术在哮喘治疗中的应用

RNA干扰是由双链RNA引发的序列特异的基因沉默现象,其中长度为21～23nt的小RNA分子（small inter-fering RNA,siRNA）是引起RNA干扰现象的直接原因。利用siRNA使基因沉寂从而调节目的蛋白的表达,在疾病的基因治疗中有巨大的应用价值。哮喘是一种常见的多发病,在治疗上仍面临极大的挑战。利用siRNA技术治疗哮喘是当今最新的一种治疗手段,虽然应用才刚刚起步,但其革命性的治疗理念,无疑给哮喘患者带来了新的希望。     

抑制ISL1的表达对胃癌干细胞特性影响的研究

目的研究针对胰岛素基因增强结合蛋白1（ISL1）的小干扰RNA（siRNA）对人胃癌干细胞特性的影响。方法体外合成ISL1的siRNA,转染人胃癌细胞系BGC823和BGC-S,逆转录酶链式反应（RT-PCR）和免疫印迹法检测ISL1基因和蛋白表达的变化,MTT比色法测定细胞存活率。结果构建的针对ISL1基因的siRNA能够显著抑制靶基因ISL1 mRNA和ISL1蛋白的表达。转染48h后BGC823和BGC-S细胞的存活率明显下降。结论 siRNA能明显抑制胃癌细胞BGC823和BGC-S的ISL1表达,从而对进一步研究胃癌干细胞奠定了基础。     

全身RNA干扰的重大突破

RNA干扰已经成为一种强有力的研究工具，然而这项技术在临床治疗应用方面的进展最近才开始起步。这个领域最主要的进展是Zimmermann等在Nature上首先报道的在灵长类动物中全身递送小分子干扰RNA（siRNA）后的基因沉默效应。     

哺乳动物中天然抗病毒RNAi的研究现状及其应用前景

RNA干扰（RNA interference,RNAi）能够特异性沉默与小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）互补的靶mRNA,在果蝇、线虫、植物和哺乳动物中发挥重要的抗病毒免疫功能.此文概述了抗病毒RNAi途径的发现、抗病毒RNAi的免疫机制、病毒编码的RNAi抑制子、天然抗病毒免疫RNAi在哺乳动物中的研究现状以及抗病毒RNAi的应用前景.     

化学修饰小干扰RNA作为治疗药物的研究进展

化学修饰为小干扰RNA（siRNA）治疗面临的诸多挑战提供了解决方法。此综述考察现有的各种siRNA修饰方法,包括RNA和双链siRNA结构的各个方面。然后考察化学修饰siRNA的应用,重点关注其作用的专一性（消除免疫反应和杂交依赖性的脱靶作用）和转运方法,同时对酶稳定性和效价也进行了讨论。     

Alnylam公司与葛兰素史克公司合作应用VaxiRNA技术提高疫苗生产能力

日前Alnylam制药公司就利用其开发的RNA干扰（RNAi）技术VaxiRNA生产疫苗产品,与葛兰素史克（GSK）公司达成合作伙伴协议。VaxiRNA技术通过采用小分子干扰RNA（siRNA）来增加疫苗生产过程中病毒滴度,从而提高疫苗生产能力。Alnylam公司CEO John Maraganore博士称,