脂肪组织巨噬细胞与胰岛素抵抗关系的研究进展

脂肪组织除了能够储存能量,还能过度分泌各种细胞因子,促使巨噬细胞大量募集,而募集的巨噬细胞进一步分泌各种炎性因子作用于脂肪细胞,二者互相作用导致慢性炎症发生。肥胖相关的脂肪细胞肥大、慢性炎性状态以及脂肪组织异常分化是导致胰岛素抵抗的重要原因。巨噬细胞大量浸润脂肪组织是脂肪组织慢性炎性反应的重要标志。     

TRB3与胰岛素抵抗的研究进展

胰岛素抵抗是2型糖尿病、心血管疾病、多囊卵巢综合征以及代谢综合征等疾病的病理生理基础。TRB3是最近发现的与胰岛素抵抗相关的一种假性激酶。因此,对于TRB3的深入研究有助于揭示上述的多基因疾病的分子生物学机制。     

脂肪组织和脂肪细胞因子的研究进展

脂肪组织是一个活跃的内分泌和旁分泌器官，分泌许多细胞因子和生物活性因子。脂肪组织的分泌功能存在节律性，全身各脂肪库脂肪因子的表达和分泌具有特异性，提示其复杂的生物学功能。脂肪组织是促炎症反应介质的丰富来源，这些介质参与炎症、凝血和纤溶反应，可直接引起血管损伤、胰岛素抵抗和动脉粥样硬化；脂肪细胞因子是肥胖和代谢综合征的分子联系。     

胰岛素抵抗大鼠骨骼肌蛋白激酶B的表达

蛋白激酶B(pmtein kinaseB,PKB)具有促进生长、增殖、抑制凋亡的作用,对糖代谢有明显影响。本研究通过高脂喂养诱导sprague-Dawley(SD)大鼠产生胰岛素抵抗,检测大鼠骨骼肌中胰岛素诱导的蛋白激酶B的表达的改变,揭示胰岛素抵抗与蛋白激酶B表达的关系。     

脂联素与胰岛素抵抗研究进展

脂联素（Adiponectin）为脂肪组织分泌的一种脂肪细胞因子。近年来研究发现脂联素具有增加胰岛素敏感性、抗炎、抗动脉粥样硬化多种生理功能，参与了胰岛素抵抗的发生发展过程。现就脂联素与胰岛素抵抗的关系作一综述。     

UPS-E3泛素连接酶ITCH与胰岛素抵抗的关系

<正>糖尿病已成为严重的世界性公共卫生问题,预计至2045年全球糖尿病患者将超过6亿人^[1]。胰岛素抵抗是2型糖尿病的重要表型,是指各种原因导致胰岛素促进葡萄糖摄取和利用率下降,机体代偿性地分泌过多胰岛素,产生高胰岛素血症。胰岛素是一种蛋白类激素,促进糖原、脂质和蛋白质合成等多种生物代谢过程,其作用的发挥依赖于胰岛素信号正常转导;胰岛素重要靶器官如肝脏、脂肪、肌肉、胰腺和脑中胰岛素信号通路阻断将导致胰岛素抵     

应用组织芯片研究Pim-3、p-STAT3在胰腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨Pim-3、p-STAT3蛋白在胰腺导管腺癌组织中的表达情况及生物学行为意义.方法 应用组织芯片和免疫组化的方法,检测88例人胰腺导管腺癌组织和11例非癌组织中Pim-3、p-STAT3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征及患者预后的关系.结果 在88例胰腺癌组织中Pim-3、p-STAT3的阳性表达率分别为76.1%和75.0%,在非癌胰腺组织内均为阴性表达.Pim-3在肿瘤细胞的胞质内表达,p-STAT3在肿瘤细胞的胞核与胞质内表达,两者的表达与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移相关(P<0.01),与患者年龄、性别、肿瘤大小、位置和病理学分级无关(P>0.05),且其之间成正相关(r=0.416,P<0.01).Kaplan-Meier生存分析结果显示,胰腺癌组织中Pim-3、p-STAT3表达阳性的患者生存时间缩短.Cox多因素相关分析表明Pim-3和p-STAT3阳性表达是影响患者生存期的独立预后因素(分别P=0.003和P=0.015).结论胰腺癌中Pim-3、p-STAT3的阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移密切相关,且两者均可作为胰腺癌患者预后不良的判断因子.     

皮下脂肪组织与内脏脂肪组织

肥胖不仅指过多的脂肪积聚,还包括脂肪的分布异常。内脏脂肪的增加是多种代谢性疾病（如2型糖尿病、心血管疾病等）的高危因素。脂肪组织通过分泌脂肪细胞因子和炎症因子调节胰岛索敏感性和参与胰岛素信号通路。因此,研究脂肪组织分布与内分泌特点对防治肥胖及其相关疾病具有重要的意义。     

高脂饲料诱导的大鼠胰岛素抵抗及其与血清瘦素的关系

摄入大量脂肪被认为是胰岛素抵抗（insulin resistance,IR)形成的一个主要因素，本工作根据Storlien LH的配方制作高脂饲料，分别喂饲成年雄性SD大鼠30d和／或60d，用Kraegen EW方法建立正糖钳技术评估IR，观察IR形成和发展过程中基础血清瘦素和胰岛素刺激下血清瘦素的变化。结果喂饲大鼠高脂饲料30d形成IR，其血糖，血清瘦素水平，肩胛区脂肪、肾周脂肪、附睾脂肪垫重量均较对照组显著升高（均P＜0．01），但血清胰岛素水平与对照组比较无差别；喂饲大鼠高脂饲料60d,IR程度和高血糖水平与30d高脂组仍一样，血清瘦素水平和三处脂肪重量进一步升高（P＜0．001和0．01），出现高胰岛素血症（P＜0．05）；但喂饲高脂30和60天动物体重增长和正糖钳实验中灌流胰岛素2h后的血清瘦素水平与对照组无差别。结果：提示高脂饲料可诱导正常成年大鼠形成IR，体脂增高，高血糖，高瘦素血症是这类IR大鼠的特征，而高瘦素血症可能是IR形成的原因，而高胰岛素血症是IR的结果。     

胰岛素抵抗与脑卒中急性期关系的初步研究

目的 :探讨脑血管病患者是否存在胰岛素抵抗 (IR) ,以及IR与患者病情、预后的关系。方法 :测定了 30例脑梗塞、31例脑出血患者和 2 8例健康人的空腹血糖 (FPG)、空腹血清胰岛素 (FINS)、血皮质醇 (F) ,计算胰岛素敏感性指数 (ISI) ,并与神经功能缺损评分和病灶大小进行直线相关分析。结果 :脑卒中患者FPG、FINS及F显著高于对照组 (p<0 .0 0 1) ,ISI较对照组明显降低 (p<0 .0 0 1)。脑卒中轻型组和中重型组的FPG、F、ISI之间也存在明显差异 (p<0 0 0 1、p <0 0 1、p <0 0 5 )。ISI与脑梗塞的面积、脑出血量呈负相关 (r=- 0 372 ,r=- 0 40 6 ,p <0 0 5 )。ISI与神经功能缺损评分亦呈负相关 (r=- 0 32 1,p <0 0 5 )。中重型组的死亡率与病残率高于轻型组。结论 :脑卒中患者存在IR ,其急性期胰岛素水平及IR程度与患者病情与预后有关。建议对血糖水平升高并存在IR与ISI下降者应积极使用胰岛素治疗     

STAT3介导了血小板源性生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞Pim-1表达

 目的： 观察血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)是否可以诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）表达Pim-1及Pim-1对VSMCs增殖的影响,探讨STAT3信号分子在这一过程中的作用,为血管重建性疾病（VRD）的研究提供实验依据。方法： 不同浓度PDGF-BB作用不同时间刺激体外培养的VSMCs,用细胞计数法检测增殖;用real-time RT-PCR 检测Pim-1 mRNA表达水平;Western blotting 检测STAT3 的活性变化;用放线菌素D（actinomycin D）、AG490（JAK特异性抑制剂）及siRNA沉默Pim-1和STAT3进行干预。结果： PDGF-BB（20 μg/L）作用VSMCs 24 h,可以诱导细胞增殖,Pim-1沉默抑制了这一过程;正常未经处理的VSMCs Pim-1 mRNA表达量较低,不同浓度PDGF-BB（10 μg/L~50 μg/L ）作用VSMCs 1 h,Pim-1 mRNA表达明显增加,其中以20 μg/L最显著;用PDGF-BB（20 μg/L）作用VSMCs 不同时间（0.5 h~4 h）,可显著上调Pim-1 mRNA表达,以0.5 h最显著。用actinomycin D及AG490预处理后Pim-1 mRNA表达随之降低。PDGF-BB可激活VSMCs中磷酸化STAT3水平,AG490和转染STAT3-siRNA可抑制 STAT3的磷酸化以及相应的Pim-1 mRNA表达。结论： PDGF-BB可通过Pim-1调节VSMCs增殖;STAT3可能参与了PDGF-BB诱导的VSMCs Pim-1表达。     

pim-3基因的分子生物学特性及作用

Pim家族是一组编码丝/苏氨酸蛋白激酶的原癌基因,由pim-1、pim-2、pim-3组成。它们在人体不同组织器官中广泛分布,对其正常生长发育、分化、成熟起重要作用。Pim-3作为Pim家族的新成员,与Pim-1、Pim-2相似能磷酸化众多特异性底物,在细胞周期和细胞凋亡进程中起重要调控作用。同时,其在成体组织中的表达上调可导致某些恶性肿瘤的发生。     

p38 MAPK- Pim-3通路可能介导预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的： 研究MAPK通路在原癌基因Pim-3抗心肌急性缺氧复氧损伤中的作用。方法：采用原代培养新生大鼠的心肌细胞,随机分为4组：正常对照组（control）、缺氧复氧组(A/R)、缺氧预适应组(APC+A/R)、阻断剂组。在缺氧预处理前分别用终浓度为10 μmol/L SB203850(p38 MAPK阻断剂)、U0126（ERK1/2阻断剂）、SP600125（SAPK/JNK阻断剂）与细胞孵育30 min。实验结束后测定MAPKs通路中ERK1/2、JNK、p38 MAPK 磷酸化蛋白表达水平及Pim-3蛋白的表达水平,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性、四唑盐（MTT）比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果： SB203850、U0126、SP600125能分别取消由APC或A/R所诱导ERK1/2、JNK、p38 MAPK的磷酸化水平的升高;由APC所诱导的Pim-3表达的升高在p38 MAPK通路被阻断后明显下调(P<0.01),并且心肌细胞LDH值升高,细胞存活率则下降,心肌细胞的凋亡指数升高。结论： p38 MAPK的激活可上调原癌基因Pim-3的表达,从而可能对心肌细胞起到保护作用。     

Pim-1在组织中的表达及作用

Pim-1为原癌基因,表达丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属于钙-钙调蛋白调节激酶。它表达的激酶广泛存在于各组织细胞中,如胸腺、骨髓、结肠、睾丸、前列腺、心血管、大脑皮质、海马和视网膜等,并磷酸化特异性底物,参与细胞增殖、分化、存活等,如参与血管平滑肌及心脏祖细胞的增殖和存活,调节神经元兴奋性及可塑性,促进神经发育、受损心肌及神经元修复,保护呼吸道上皮,介导白细胞存活及炎症反应等,在组织发育、损伤和再生中起关键作用。     

Pim-1基因重组腺相关病毒2载体的构建及感染大鼠视网膜

目的构建携带大鼠原癌基因Pim-1的重组腺相关病毒2载体(rAAV2-Pim-1),检测其体内感染大鼠视网膜的细胞类型及目的基因Pim-1在视网膜中的表达。方法 p AOV-CAGMINI-EGFP-2A-MCS-3FLAG载体及Pim-1基因PCR产物用Nhel酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定后回收载体及目的基因DNA并连接转化,鉴定质粒阳性克隆及测序。rAAV2-Pim-1表达质粒p AOV-CAGMINI-EGFP-2A-Pim-1-3FLAG及包装质粒p AAV-RC和辅助质粒p Helper,通过Lipofectamine 2000共转染293细胞,纯化获得高滴度的rAAV2-Pim-1。大鼠玻璃体注射rAAV2-Pim-1,用免疫荧光组织化学检测其感染视网膜的细胞类型;用Real-time PCR和Western blotting检测Pim-1在视网膜中的表达。结果rAAV2-Pim-1质粒构建成功并且核苷酸序列比对正确;质粒转染293细胞后出现绿色荧光;包装出的病毒浓缩滴度为5.7×1015vg/L。rAAV2-Pim-1组体内感染视网膜神经节细胞(RGCs)达71%,并感染少量无长突细胞,几乎不感染星形胶质细胞;Pim-1 mRNA和蛋白在视网膜中的表达约为rAAV2-EGFP组的6.61倍和2.29倍。结论成功构建rAAV2-Pim-1病毒载体,并在感染后的大鼠视网膜RGCs中过表达Pim-1。     

CTRP3下调炎症因子表达改善胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性

 目的:观察脂肪因子C1q/TNF相关蛋白3（CTRP3）对胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的效应及机制。方法:通过软脂酸培养构建3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型,以不同浓度重组CTRP3蛋白（10、50、250、1 250 μg/L）干预12 h,以及250 μg/L CTRP3干预不同时间（2、6、12、24 h）,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,以2-脱氧-［3H］-葡萄糖摄入法检测葡萄糖转运率,以酶联免疫吸附（ELISA）法检测上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）的含量,以荧光实时定量PCR（real-time PCR）检测TNF-α、IL-6及葡萄糖转运子4（GLUT-4）的mRNA表达水平,以Western blotting检测GLUT-4蛋白表达水平。结果:与正常对照组（NC）相比,胰岛素抵抗组（IR）葡萄糖摄取率及葡萄糖消耗量分别降低了50.6%及57.9%（均P<0.01）;与IR组相比,干预组随CTRP3浓度增加,葡萄糖消耗量分别增加22.1%、42.9%、76.6%及80.5%（均P<0.01）,葡萄糖摄取率分别增加39.0%、68.0%、108.0%及111.0%（均P<0.01）;250 μg/L CTRP3干预时间增加,葡萄糖摄取率分别增加23.0%、79.0%、 109.0%及114.0%（均P<0.01）;250 μg/L CTRP3干预12 h,上清中的TNF-α及IL-6浓度分别降低了17.4%及17.1%（均P<0.01）,其mRNA相对表达量分别下降了26.0%及18.9%（均P<0.01）,而GLUT-4 mRNA及蛋白相对表达量分别增加了61.5%及55.6%（均P<0.01）。结论: CTRP3具有改善胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的作用,其机制可能与下调炎症因子表达、改善胰岛素信号转导和增加葡萄糖转运子表达等有关。     

流体剪切应力对人脐静脉内皮细胞Pim-1基因表达的影响

目的　探讨流体剪切应力对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中Pim-1基因表达的影响及可能的信号机制。 方法　酶消化法分离健康产妇新鲜脐静脉获取原代HUVECs,应用平行平板流动腔系统给HUVECs加载不同时间（1、4、6 h）和不同大小（0.5、1.5、3.0 Pa）的层流剪切应力,用实时定量RT-PCR检测Pim-1基因的表达水平,用蛋白质印迹法检测p-Akt和p-STAT3的表达水平,利用Wortmannin (PI3K抑制剂)、 Deguelin (Akt抑制剂) 和AG490 (JAK抑制剂) 信号阻断剂探讨信号转导途径。 结果　HUVECs在1.5 Pa 剪切应力作用4 h后Pim-1基因表达明显增加。不同强度的切应力均会刺激Pim-1基因的表达,其中3.0 Pa表达最强。切应力能显著激活p-Akt和p-STAT3的表达。AG490可以明显抑制Pim-1的表达,而Wortmannin和Deguelin增强Pim-1的表达。 结论　流体剪切应力可诱导HUVECs中Pim-1基因表达,其表达量与刺激时间和剪切应力的强度密切相关,这种作用可能通过JAK/STAT3和PI3K/Akt信号通路调节。     

3-硝基酪氨酸与糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡的关系研究

目的：探讨2型糖尿病大鼠心肌组织及血中3-硝基酪氨酸（3-NT）与糖尿病心肌病（DCM）心肌细胞凋亡的关系。方法：选取8周龄雄性SD大鼠60只,将其随机分为4组,空白对照组、DCM组、糖尿病+缬沙坦处理组和DCM+缬沙坦处理组,每组15只。用TUNEL法检测DCM心肌细胞的凋亡指数（AI）;用免疫组化的方法检测心肌组织中3-NT的表达指数（EI）;用ELISA法检测血清中3-NT的浓度。结果：(1) 4组大鼠的心脏重量指数有显著差异（P<0.01）,DCM组和DCM+缬沙坦处理组心脏重量指数大于空白对照组和糖尿病+缬沙坦处理组。(2) 心肌组织免疫组化方法检测表明,心肌组织中3-NT的EI与心肌细胞的AI呈正相关（P<0.01）,而血中3-NT的含量与心肌细胞的AI无相关关系（P>0.05）。(3) 4组大鼠间的AI比较有显著差异（P<0.01）。两两比较各组AI,DCM组 > 糖尿病+缬沙坦预处理组、DCM+缬沙坦处理组 > 空白对照组。(4) 4组大鼠心肌组织3-NT表达指数比较有显著差异（P<0.01）;两两比较,DCM组显著大于其它3组。(5) 4组大鼠血中3-NT的浓度比较无显著差异（P>0.05）。结论：(1) DCM大鼠心肌组织中3-NT的表达显著增多并与心肌细胞凋亡密切相关,缬沙坦能够抑制DCM大鼠心肌细胞中3-NT的表达,并由此抑制DCM大鼠心肌细胞凋亡。(2) 循环血中的3-NT水平不能真实反映DCM大鼠心肌组织中3-NT表达水平及其对心肌细胞凋亡的影响。