酶联免疫吸附试验检测血清天疱疮抗体的评价

目的评价酶联免疫吸附试验(ELISA)用于天疱疮血清学诊断的意义。方法用ELISA法检测49例天疱疮患者和36例非天疱疮对照者血清,同时以间接免疫荧光法(IIF)检测患者血清抗桥粒芯糖蛋白(Dsg)抗体滴度,比较两者的检测结果。结果27例寻常型天疱疮(PV)、14例落叶型天疱疮(PF)和6例非天疱疮大疱性疾病患者Dsg1ELISA呈阳性,27例PV、1例PF及1例非天疱疮大疱性疾病患者Dsg3ELISA呈阳性。Dsg1ELISA的敏感性和特异性分别是81.25%和88.89%,Dsg3ELISA的敏感性和特异性分别是81.82%和97.22%。与IIF相比,两者检测结果差异有显著性(χ2=4.31,P<0.05)。结论ELISA是一种简便、敏感和特异性高的天疱疮血清学诊断方法,并能辅助鉴别PV和PF。     

抗桥粒芯蛋白抗体对天疱疮的临床诊断价值

目的研究天疱疮患者血清中抗桥粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)1和抗Dsg3抗体水平在天疱疮的临床诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定62例天疱疮患者血清中抗Dsg1和抗Dsg3抗体水平;间接免疫荧光法(IIF)测定天疱疮抗体Ig G水平。结果 62例天疱疮患者中抗Dsg1抗体或抗Dsg3抗体任一阳性共50例,阳性率80.65%,与间接免疫荧光法(IIF)相比两种方法差异无统计学意义(P0.05)。因此抗Dsg抗体具有和IIF一样的临床诊断价值。34例寻常型天疱疮(PV)中抗Dsg3抗体阳性或抗Dsg1和抗Dsg3抗体均阳的28例,阳性率82.35%;24例落叶型天疱疮(PF)中抗Dsg1抗体阳性的为20例,阳性率83.33%。可见抗Dsg3抗体是PV的鉴别诊断指标,抗Dsg1抗体是PF的鉴别诊断指标。此外,通过对治疗前后抗Dsg1抗和Dsg3抗体的滴度水平的检测发现,抗Dsg1和抗Dsg3抗体还可作为天疱疮治疗监测的指标。结论采用ELISA方法测定天疱疮患者外周血抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体,方法简便,对患者创伤小,有一定的诊断和鉴别诊断价值。另外,抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体还可作为监测天疱疮治疗效果的指标。     

天疱疮患者病情与抗桥粒芯蛋白抗体水平的相关性研究

目的:研究天疱疮患者血清中抗桥粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)1和抗Dsg3抗体水平与其皮肤、口腔黏膜损害严重程度的相关性,同时对间接免疫荧光(IIF)检测的天疱疮抗体滴度与治疗中使用皮质类固醇控制剂量的相关性进行分析。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定55例天疱疮患者血清中抗Dsg1和抗Dsg3抗体水平。结果:抗Dsg1抗体水平与患者皮肤损害严重程度有显著相关性(P<0.01),抗Dsg3抗体水平与口腔黏膜损害严重程度有显著相关性(P<0.01)。天疱疮患者血清IIF滴度与抗Dsg1抗体水平相关(P<0.01),寻常型天疱疮患者IIF滴度与抗Dsg1和抗Dsg3抗体水平均有相关性(P分别<0.01和<0.05)。寻常型天疱疮患者皮质类固醇控制剂量与抗Dsg1抗体水平和IIF滴度显著相关(P<0.05)。结论:ELISA方法检测天疱疮患者抗Dsg1和抗Dsg3抗体对天疱疮的临床诊断、分型、衡量口腔黏膜和皮肤损害严重程度具有一定意义。     

大疱及疱疹性皮肤病

20120217 ELISA技术检测寻常型天疱疮桥粒芯蛋白3抗体水平研究/闫言(中国医科院、北京协和医院皮肤科),徐浩翔,晋红中…//临床皮肤科杂志.-2011,40(9).-529 ～531采用ELISA和间接免疫荧光法对106例寻常型天疱疮患者和106例对照人群进行检测.结果:ELISA法的敏感度、特异性分别为77.5％和94.3％,间接免疫荧光法分别为79.2％和94.3％,两种方法间差异无统计学意义.认为ELISA检测桥粒芯蛋白3抗体对寻常型天疱疮诊断是一种较好的辅助方法.     

天疱疮患者273例组织病理和免疫病理分析

目的分析组织病理、DIF、IIF和ELISA四种实验室检测方法在天疱疮患者诊断中的临床意义。方法回顾性分析273例天疱疮住院患者的组织病理、DIF、IIF、抗Dsg1和抗Dsg3抗体的检查结果。结果组织病理检查显示,186例(82.30%,186/226)表现为表皮内水疱形成或细胞松解;DIF检查显示,170例(80.19%,170/212)结果阳性,其中7例仅出现皮肤基底膜带C3线状沉积,伴有/不伴有IgG线状沉积;IIF检查显示,77例(69.37%,77/111)检查结果呈现阳性;抗Dsg1和抗Dsg3抗体检测显示,126例(95.45%,126/132)出现抗Dsg1抗体和/或抗Dsg3抗体阳性。寻常型及增殖型天疱疮抗Dsg3抗体阳性率(89.53%)明显高于红斑型及落叶型(25.64%),差异有统计学意义(P=0.000);伴有/仅有黏膜损害的天疱疮患者抗Dsg3抗体阳性率(89.04%)亦显著高于仅有皮肤损害的天疱疮患者(38.18%),差异有统计学意义(P=0.000)。结论在天疱疮四种实验室诊断方法中,抗Dsg1和抗Dsg3抗体检测的阳性率最高。四种检查方法联合应用有助于天疱疮的正确诊断。     

寻常型天疱疮抗原Dsg3基因的真核表达

目的 探讨寻常型天疱疮自身抗原Dsg3EC1-EC5在哺乳动物细胞的克隆、表达及纯化,并以重组的Dsg抗原检测寻常型天疱疮患者及正常人血清中的天疱疮抗体.方法 根据基因库中的Dsg3基因序列分析,采用RT-PCR法扩增自身抗原Dsg3EC1-EC5多肽片段的cDNA,定向插入真核表达质粒pcDNA3.1TM/myc-His(-)B中,稳定转染人宫颈癌细胞系表达重组融合蛋白,并经Ni+亲和层析柱纯化.采用蛋白质印迹法鉴定蛋白表达产物.以重组Dsg3EC1-EC5蛋白为抗原用ELISA检测40份寻常型天疱疮患者及40份正常人对照组血清.结果 成功构建真核表达重组体pcDNA3.1TM/myc-His(-)B-Dsg3.纯化的Dsg3EC1-EC5蛋白能够与寻常型天疱疮患者血清中的天疱疮抗体发生反应.ELISA方法检测寻常型天疱疮患者血清,结果显示,天疱疮抗体的阳性率为95%.结论 真核表达的Dsg3EC1-EC5蛋白与寻常型天疱疮患者血清中的抗体发生特异性反应.     

血清抗桥粒芯蛋白1和3抗体在天疱疮临床诊断中的意义

目的探讨血清抗桥粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)1抗体和抗Dsg3抗体检测在天疱疮诊断中的临床意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测拟诊为天疱疮的113例患者血清中的抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体,同时行皮损组织病理以及直接免疫荧光和间接免疫荧光检查。结果 77例(68.14%)患者经组织病理、直接免疫荧光和间接免疫荧光检查确诊为天疱疮,其中Dsg1抗体阳性71例,阳性率62.83%,敏感度为92.21%,特异度100%;Dsg3抗体阳性45例,阳性率39.82%,敏感度58.44%,特异度100%;二者均阳性39例(34.51%)。其余36例(31.86%)患者经组织病理、直接免疫荧光和间接免疫荧光检查确诊为其他大疱性皮肤病,Dsg1抗体和Dsg3抗体均为阴性。结论 ELISA方法测定外周血抗Dsg1抗体和抗Dsg3抗体具有较高的敏感度和特异度,方法简便,对患者创伤小,对天疱疮临床诊断和鉴别诊断具有重要参考价值。     

寻常型天疱疮患者及一级亲属抗体IgG亚型检测

目的观察寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris,PV)患者和一级亲属血清中PV自身抗体(PV-IgG)亚型及其与桥粒芯糖蛋白(desmoglein,Dsg)反应性,探讨PV-IgG检测的临床意义和PV的发病机制。方法用间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence,IIF)检测27例PV患者、40例一级亲属和20例正常对照者血清PV-IgG,并用免疫印迹法(Westernblot,WB)检测PV-IgG亚型及其与Dsg1、Dsg3反应性。结果PV患者的PV-IgG阳性率和平均抗体滴度明显高于其一级亲属者(P0.001),活动期患者的PV-IgG阳性率和平均抗体滴度也明显高于缓解期(P0.01);PV患者中PV-IgG阳性率(92.9%)明显高于一级亲属(17.5%)和正常对照组(0%)(P0.0001,0.001),PV患者中Dsg3反应性IgG4水平明显高于一级亲属(P0.01),且其在活动期病例中水平也明显高于缓解期(P0.05)。结论本病的发生与PV-IgG水平有关;Dsg3是PV的主要自身抗原;IgG4是PV的主要致病抗体。     

天疱疮患者皮损局部B淋巴细胞及其产生特异性抗体的功能研究

目的 检测寻常型天疱疮患者皮损局部B淋巴细胞及其产生特异性抗体的功能。方法 寻常型天疱疮患者35例,健康对照22例。取健康对照皮肤和寻常型天疱疮患者初发水疱或糜烂皮损组织,分离获得单个核细胞。流式细胞仪检测患者皮损局部淋巴细胞、CD19+ B细胞比例,以及特异性识别桥粒芯糖蛋白1（Dsg1）和Dsg3的CD19+ B淋巴细胞比例。体外培养寻常型天疱疮患者皮损局部淋巴细胞,ELISA法检测培养上清液中抗Dsg1和Dsg3抗体滴度,采用受试者工作特征曲线（ROC）分析阳性率。结果 寻常型天疱疮患者皮损局部淋巴细胞、CD19+ B细胞比例分别为17.95% ± 3.85%、4.27% ± 1.13%,高于健康对照组（7.83% ± 1.29%、0.61% ± 0.31%）,差异有统计学意义（t = 2.49,U = 13.00,均P < 0.05）。天疱疮患者皮损局部CD19+ B淋巴细胞中,表达IgG的细胞比例为（38.33 ± 5.56）%,表面识别Dsg1与Dsg3的细胞比例分别为12.87% ± 1.267%、10.42% ± 1.243%。局部淋巴细胞体外培养6 d后,培养上清液中抗Dsg1与Dsg3抗体滴度分别为（4.89 ± 1.56） U/ml、（35.45 ± 13.03） U/ml,阳性率分别为85%（17/20）和95%（19/20）。 结论 寻常型天疱疮患者皮损局部有可与Dsg1及Dsg3特异性结合的B淋巴细胞聚集,体外培养后可产生特异性抗Dsg1与抗Dsg3自身抗体。     

大疱及疱疹性皮肤病

20110915血清抗Dsg1特异性抗体水平变化与落叶型天疱疮病情的关系/王佩茹(北大一院皮科),钟珊,陈喜雪…∥中国皮肤性病学杂志.-2010,24(12).-1088~1091检测8例落叶型天疱疮(PF)患者不同时期病情变化及相应时间点血清中特异性抗体的间接免疫荧光(IIF)滴度和Dsg1-ELISA指数,并对结果进行分析。结果:7例(87.5%)患者病情评分与Dsg1-ELISA指数有