吲哚-2,3-二酮对SH-SY5Y细胞增殖与迁移的影响及其机制

目的 研究吲哚-2,3-二酮(ISA)对SH-SY5Y细胞增殖与迁移的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测ISA对SH-SY5Y细胞活力的影响,并计算其半致死浓度(IC₅₀值)作为后续实验中浓度设定的参考值。以IC₅₀值为依据,向SH-SY5Y细胞中分别加入总浓度为0、50、100、200μmol/L的ISA(A、B、C、D组),采用平板克隆实验、划痕实验、细胞凋亡率检测及PI染色流式细胞仪(FCM)分析实验检测ISA对各组SH-SY5Y细胞增殖、迁移、凋亡及细胞周期的影响。采用Western blot实验检测各组SH-SY5Y细胞中Bax、Bcl2等蛋白的相对表达量。结果 CCK-8实验结果显示,随着ISA浓度的增加,SH-SY5Y细胞活力明显下降(F=1 632.62,P<0.05);平板克隆结果显示,随着ISA药物浓度的增加,细胞的集落形成能力被抑制(F=1 038.21,P<0.05);划痕实验结果显示,细胞的迁移能力随着ISA浓度的增加而明显下降(F=147.86,P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,随着...     

microRNA-125b在骨肉瘤患者血清中的表达及增殖抑制作用

目的研究microRNA-125b在骨肉瘤患者血清中的表达及增殖抑制作用。方法选取2014年1月至2015年1月本院收治的20例骨肉瘤患者纳入观察组,另选取同期20例健康体检者纳入对照组。应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测两组研究对象血清、骨肉瘤组织及肉瘤旁正常组织中microRNA-125b的表达水平;转染microRNA-125b抑制物后,采用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞在G0/G1期、S期、G2/M期所占的比例。结果 microRNA-125b在观察组患者血清中的表达水平明显低于对照组(P<0.05);microRNA-125b在两组患者正常组织中的表达水平比较无显著差异(P>0.05);microRNA-125b在骨肉瘤的诊断中,其灵敏度为90%,特异度为95%;骨肉瘤细胞(SOSP-9607)转染microRNA-125b抑制物24小时后,处于G0/G1期的细胞比率明显高于未转染组(P<0.05),且处于G2/M期及S期的骨肉瘤细胞比率明显低于未转染组(P<0.05)。结论骨肉瘤组织中microRNA-125b的表达水平明显下降,增加microRNA-125b的表达水平可抑制骨肉瘤细胞的增殖,且监测microRNA-125b水平有助于诊断骨肉瘤。     

microRNA-100对膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的研究microRNA-100对膀胱癌T24细胞增殖的影响及对VEGF和survivin蛋白的调节。方法采取人工合成miR-100形成的双链互补DNA片段将p Silencer TM 3.1-H1 neo载体表达载体插入,经过鉴定之后以此当做表达microRNA的质粒,于T24膀胱癌细胞中加入miR-100高表达质粒,对细胞系中survivin以及VEGF和m RNA和膀胱癌T24细胞增殖、蛋白表达等情况进行检查。结果数据显示,Western blot得到miR-100可对VEGF以及survivin蛋白表达进行抑制,RT-PCR方法检查发现会降低survivin和VEGF的m RNA水平,MTT检查发现转染之后的细胞生长速率,相比较未转染细胞的速度更慢。流式细胞仪检测细胞周期中G0/G1期细胞比率增高。结论 miR-100RNA抑制VEGF和survivin基因表达可能是抑制T24膀胱癌细胞增殖原因miR-100能促进T24细胞凋亡,可能与细胞周期阻滞有关。     

吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡及STAT3蛋白的影响

目的探讨吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡及STAT3蛋白表达的影响。方法 MTT法测定吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的增殖抑制作用,PI单染流式细胞术检测人食管癌Eca-109细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测人食管癌Eca-109细胞的凋亡情况,蛋白质印迹法检测STAT3蛋白的表达情况。结果不同浓度吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞的抑制率均明显高于正常对照组(P<0.05),且随着药物浓度的增加,抑制率越高;吉西他滨0.20 mg/L组、0.40 mg/L组及0.80 mg/L组G0/G1期人食管癌Eca-109细胞百分数逐渐下降(P<0.05),G2/M期细胞百分数无变化(P>0.05),而S期细胞百分数逐渐增加(P<0.05)。吉西他滨0.20 mg/L组、0.40 mg/L组、0.80 mg/L组细胞凋亡率均明显高于正常对照组(P<0.05),且上述三组的STAT3蛋白表达均低于正常对照组(P<0.05),呈剂量依赖性。结论吉西他滨对人食管癌Eca-109细胞具有增殖抑制作用,阻滞细胞于S期,明显促进细胞凋亡,下调STAT3蛋白的表达。     

长链非编码RNA ZFAS1在非小细胞肺癌中的表达

目的检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer. NSCLC患者癌组织中锌指结构反义转录本1 (zine finger antisense 1, ZFAS1)表达水平,探讨ZFAS1在NSCLC进展中的生物学作用。旨在探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在非小细胞肺癌组织中的表达水平。方法通过RNA提取及聚合酶链定量反应,质粒构建及细胞转染,细胞生长曲线和克隆形成和Western blot检测RACI蛋白表达等程序,研究60例非小细胞肺癌组织及癌旁肺组织中ZFASl的表达水平。结果锌指结构反义转录本1 (zine finger antisense 1, ZFAS1)基因敲减后,A549细胞增殖能力明显减弱(P 0.01);A549细胞周期G期比例升高,S期比例下降(P 0.01);A549细胞凋亡比例明显增加(P 0.01);A549细胞迁移和侵袭能力明显下降(P均0.01);A549细胞中Cyclin DI、Bcl2、N-cadherin、ZEBI、Slug和Twist基因表达水平均降低(P均0.05)。结论 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中呈高表达。ZFAS1基因敲减诱导细胞周期阻滞、凋亡和抑制上皮-间质转变(epithelialmesenchymal transition, EMT),减弱NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力。与癌旁肺组织相比较之下,ZFASl在非小细胞肺癌组织中的表达出现了明显的下调。且其表达水平与60位患者的病例有显著的相关性,包括患者肿瘤的大小、分化程度、淋巴转移与远端转移等。     

Ⅲ~Ⅳ期鼻咽癌患者血清CD_(44)表达水平与疗效关系的初步研究

目的:观察Ⅲ~Ⅳ期鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)患者治疗前后血清CD44表达水平,并评估其在Ⅲ~Ⅳ期患者预后判断中的意义。方法:采用流式细胞术检测75例Ⅲ~Ⅳ期鼻咽癌患者的治疗前后血清CD44表达水平,并结合临床及随访资料进行统计分析。结果:75例鼻咽癌患者治疗前后血清CD44表达水平分别为76.41±10.36和73.79±13.00,P=0.054,有下降趋势。Ⅲ期患者治疗后血清CD44下降者较上升者有更长的无瘤生存时间,中位无瘤生存时间分别为51.75±1.63(月)、41.84±4.76(月)(Breslow法P=0.046)。Ⅳ期患者治疗后血清CD44下降者与上升者中位无瘤生存时间分别为47.32±2.61(月)、45.17±2.78(月),P=0.68,前者无瘤生存时间比后者有延长趋势,但统计学上无明显差异。Cox回归模型分析法发现T分期、治疗前后CD44表达水平的变化为潜在的独立预后因子,P值分别为0.019、0.011。结论:CD44的高表达可能与鼻咽癌患者肿瘤高负荷相关,治疗后CD44下降者可能提示更长的无瘤生存时间。     

透明质酸钠介导的创面修复中真皮细胞增殖周期的动态变化

目的本研究利用透明质酸钠作为磺胺嘧啶银药物载体作用于大鼠烧伤创面,观察大鼠烧伤创面真皮细胞周期DNA分布情况,以期制备出一种加快速面愈合的新型外用制剂。方法自制恒温恒压烧伤仪复制SD大鼠Ⅱ～Ⅲ度烧伤模型,创面标记后分别外涂安慰剂、磺胺嘧啶银混悬剂、透明质酸钠、磺胺嘧啶银和透明质酸钠混合制剂,行暴露疗法,创面每2 d清创后涂药1次,连续28 d,分别于烧伤后第3、5、7、10、14、21天采用颈椎脱臼法分批处死SD大鼠,每批5只。观察烧伤创面渗出和愈合情况,行创面皮肤组织病理和生化检测,机械加胰酶法制备标本,采用流式细胞仪测定烧伤后创面真皮细胞G0/G1期和S期DNA含量。结果烧伤后第3、5、7、10、14、21天,磺胺嘧啶银组、透明质酸钠组和混合制剂组大鼠真皮细胞G0/G1期DNA含量均显著低于同期空白组(均P <0.05);烧伤后第5天和第7天,透明质酸钠组大鼠真皮细胞G0/G1期DNA含量均显著低于同期磺胺嘧啶银组(均P <0.05);烧伤后第3天和第5天,混合制剂组大鼠真皮细胞G0/G1期DNA含量均显著高于同期磺胺嘧啶银组和透明质酸钠组(均P <0.05),烧伤后第7、10、14、21天混合制剂组大鼠真皮细胞G0/G1期DNA含量均显著低于同期磺胺嘧啶银组和透明质酸钠组(均P <0.05)。烧伤后第3、5、7、10天,磺胺嘧啶银组大鼠真皮细胞S期DNA含量均显著高于同期空白组(均P <0.05);烧伤后第3、5、7、10、14、21天,透明质酸钠组和混合制剂组大鼠真皮细胞S期DNA含量均显著高于同期空白组(均P <0.05);烧伤后第5、14、21天,透明质酸钠组大鼠真皮细胞S期DNA含量均显著高于同期磺胺嘧啶银组(均P <0.05);烧伤后第7、10、14、21天,混合制剂组大鼠真皮细胞S期DNA含量均显著高于同期磺胺嘧啶银组和透明质酸钠组(均P <0.05)。结论透明质酸钠可促使大量处于G1和G0期的静止细胞进入S期进行DNA复制,细胞增殖效果明显。     

下调claudin-1对胆囊癌细胞SGC996生物学行为的影响

目的探讨下调claudin-1对胆囊癌细胞生物学行为的影响。方法通过慢病毒LV-CLDN1-RNAi感染下调claudin-1在胆囊癌细胞SGC996中的表达。检测细胞增值、细胞周期、细胞凋亡、细胞侵袭和凋亡相关基因Bax及Bcl-2蛋白表达水平,分析下调claudin-1在胆囊癌细胞中的表达后对其增殖、凋亡及侵袭等生物学行为的影响。结果感染LV-CLDN1-RNAi后SGC996增殖无明显变化,被阻滞的G1期细胞明显增多(P=0.003 7),S期细胞明显减少(P=0.0021),细胞凋亡比例增加(P 0.021 1)。下调claudin-1表达能抑制胆囊癌细胞侵袭;促凋亡基因Bax的蛋白表达增加,抑制凋亡基因Bcl-2的蛋白表达降低。结论下调claudin-1表达能有效促进胆囊癌细胞的凋亡,抑制其侵袭,提示claudin-1在胆囊癌的复发和转移中可能会发挥作用。     

miR-122-5p对滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响

目的:探讨miRNA-122-5p对人滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响.方法:采用脂质体法分别转染miR-122-5p mimic和inhibitor至SW982细胞.流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞活力.通过γ-射线干预细胞,分析其对放疗的敏感性.结果:与癌旁组织相比,滑膜肉瘤m iR-122-5p明显低表达,而且在转移者及低分化型中水平最低,而甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)的表达与之呈显著负相关(均P<0.05).与对照组相比,miR-122-5p mimic可上调miR-122-5p水平,下调MeCP2蛋白表达,抑制SW982细胞增殖,并增加SW982细胞对射线的放疗敏感性(均P<0.05);而过表达MeCP2却能阻断miR-122-5p的作用,增加细胞对放疗的抵抗(均P<0.05).结论:miR-122-5p在滑膜肉瘤中低表达,miR-122-5p/MeCP2轴参与调控肿瘤细胞增殖以及肿瘤细胞对γ-射线的放疗敏感性.     

miR-183及Akt1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的探讨mi R-183及Akt1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义。方法收集2014年3月至2016年9月暨南大学附属第一医院手术切除的60例子宫内膜癌标本及癌旁组织标本,术后均经病理学确诊。培养子宫内膜癌Ishikawa细胞株,采用LipofectamineTM2000脂质体转染试剂进行转染,将其分为A组(转染mi R-183的特异性抑制剂反义寡核苷酸)、B组(转染无关mi R-183的特异性抑制剂核苷酸序列)、C组(转染LipofectamineTM2000脂质体转染试剂)、D组(空白对照,不转染)。采用流式细胞仪检测四组子宫内膜癌Ishikawa细胞的凋亡情况,实时逆转录聚合酶链反应检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中mi R-183及Akt1m RNA表达水平,蛋白质印迹法检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中Akt1蛋白的表达水平。结果子宫内膜癌组织中mi R-183表达水平低于癌旁组织,Akt1蛋白m RNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。A组子宫内膜癌Ishikawa细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均显著低于B、C、D组(P<0.05),B组早期凋亡率和晚期凋亡率均显著高于A、C、D组(P<0.05)。A组子宫内膜癌Ishikawa细胞中mi R-183表达水平低于B、C、D组(P<0.05)。A、B组子宫内膜癌Ishikawa细胞中Akt1m RNA表达水平均显著低于C、D组(P<0.05)。A组Akt1蛋白表达水平显著高于B、C、D组(P<0.05),B组Akt1蛋白表达水平显著低于C、D组(P<0.05)。结论 mi R-183在子宫内膜癌组织中呈低表达,Akt1蛋白呈高表达;在子宫内膜癌Ishikawa细胞中mi R-183通过抑制Akt1蛋白的表达影响癌细胞增殖和凋亡,进而影响子宫内膜癌的发生和发展。