CAR-T细胞治疗实体肿瘤相关肿瘤抗原的研究进展

摘 要：以嵌合型抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）为基础的细胞免疫治疗是一种新的治疗恶性肿瘤的模式,为部分晚期实体瘤患者带来治愈的希望。目前CAR-T细胞已应用于多种实体肿瘤临床试验研究,尤其是在晚期进展性肿瘤中研究广泛,选择特异性强的合适的TAA,将使CAR-T细胞造福越来越多的晚期肿瘤患者。     

卵巢癌相关肿瘤睾丸抗原的研究进展

卵巢癌从本质上来说是一种免疫原性肿瘤,以免疫治疗为主的生物治疗已成为备受人们关注的一种新的辅助治疗卵巢癌的方法。肿瘤睾丸抗原参与肿瘤的发生、发展,可以作为肿瘤标志物或治疗靶标,是当前肿瘤免疫诊断和免疫治疗的研究热点。多项研究表明,肿瘤睾丸抗原对卵巢癌的早期诊断和治疗具有较好的前景。本文综述目前在卵巢癌中研究较为广泛的3种肿瘤睾丸抗原（cancer testis antigen,CTA）NY-ESO-1、精子蛋白17（sperm protein 17,Sp17）和精子相关抗原9（sperm associated antigen 9,SPAG9）的研究进展。     

三阴性乳腺癌肿瘤新抗原相关研究进展

三阴乳腺癌作为乳腺癌的一种独立临床病理类型,具有总生存期短、恶性程度高、侵袭能力强及早期复发率高等特点,目前治疗仍以化疗为主。新抗原是由体细胞DNA突变产生的肿瘤特异性抗原,在免疫治疗中与疗效和预后具有一定的相关性,肿瘤新抗原的研究有望进一步揭示免疫治疗的机制,近年来已经成为肿瘤领域研究热点。本文综述了肿瘤新抗原的鉴定识别、新抗原与免疫治疗的关系、新抗原疫苗及在三阴性乳腺癌中的相关进展。     

肿瘤睾丸抗原基因研究进展

当前,导致人类死亡的主要原因之一为恶性肿瘤。WHO统计结果显示,每年约有700万人因肿瘤而死亡[1],而且这一数字呈逐年递增趋势。肿瘤发生是一个长期累积的过程,受多基因控制和多因素调节。     

应用SEREX技术筛选肿瘤抗原的研究进展

SEREX (serologicalidentificationofantigenbyrecombi nantcDNAexpressionlibraries)技术 ,即重组克隆表达抗原的血清学鉴定技术 ,是由德国血清学家Sahin等[1] 建立的从分子水平鉴定肿瘤抗原的方法。其理论基础是肿瘤能刺激机体产生免疫反应 ,人体B淋巴细胞可以识别自身肿瘤抗原 ,产生高价抗体 ,引起强烈的IgG反应。SEREX技术不需要特异CTL和瘤细胞的体外建株 ,而是应用cDNA表达文库使抗原浓度成百倍的增高 ,解决了既往肿瘤抗原抗体反应中的关键问题 ,新发现了大量肿瘤抗原。1　SEREX技术SEREX技术的基本步骤[1,2 ] :①患者…     

肿瘤相关抗原LEA与CEA在大肠癌表达的对比研究

目的：探讨ＬＥＡ对大肠癌的诊断价值。方法：用免疫组织化学方法（Ｓ－Ｐ法）检测１１７例大肠癌组织呼９９例大肠非癌变组织ＬＥＡ（Ｌａｒｇｅ Ｅｘｔｅｋｍａｌ Ａｎｔｉｇｅｎ）与ＣＥＡ的表达状况。结果：ＬＥＡ在组织学上诊断大肠癌的灵敏度为８６．３％,特异度为５３．５％,与ＣＥＡ相比,灵敏度与ＣＥＡ相似（Ｐ〉０．０５）,特异度要强于ＣＥＡ（Ｐ〈０．０５）。两种抗原联合应用并不比ＬＥＡ单独应用的诊断价值高。     

MAGE-A基因亚家族及其在肿瘤临床上的应用前景

黑素瘤相关抗原（melanoma-associated antigen,MAGE）-A基因亚家族属于癌睾丸抗原家族,其定位于X染色体,包括MAGE-A1～MAGE-A12共12个成员。对MAGE-A在基因和蛋白水平的研究发现,其在正常组织中几乎不表达,而在多种肿瘤组织中均有较高水平的表达,并且往往表达一种以上的MAGE-A亚型。正常情况下,由于CpG岛高度甲基化,MAGE-A基因沉默表达。受辐射等因素影响时,基因组易发生去甲基化,促使MAGE-A基因表达。组蛋白的乙酰化也与MAGE-A的表达有关。MAGE-A作为肿瘤相关抗原,与肿瘤的发生、发展、耐药及较差的预后密切相关。由于MAGE-A特异性的表达于多种肿瘤,对MAGE-A亚型的检测尤其是多种亚型的联合检测有助于MAGE-A阳性肿瘤的诊断。此外,MAGE-A基因编码的抗原肽由MHCⅠ分子提呈至细胞毒性T细胞,从而发挥抗肿瘤活性。应用MAGE-A抗原肽的肿瘤疫苗已经投入临床试验,并取得了良好的治疗效果。     

超抗原与肿瘤免疫治疗和基因治疗研究进展

近年发现一类抗原能同时激活比一般抗原多达数千倍的 T细胞 ,被称为“超抗原”,主要是一些细菌毒素和逆转录病毒基因产物。研究表明 ,超抗原能以与普通抗原不同的方式 ,与 MHC 类分子和 T细胞受体 ( TCR) Vβ的某个片段结合 ,活化大量 T细胞。超抗原所激活的 T细胞可引发人类多种急慢性疾病 ,也可将其用于肿瘤治疗 ,以激活抗肿瘤的 T细胞。本文就该领域进展简介如下。1　超抗原的特性一般多肽抗原仅激活机体淋巴细胞库中万分之一到百万分之一的细胞 ,而有些物质却能使 1 /5 0以上甚至超过 1 /1 0的 T细胞激活 ,White等将具有这种性质…     

肿瘤相关抗原LEA的表达及其在病理诊断中的意义

背景与目的：目前,大肠癌诊断的肿瘤标志物如CEA（carcinoembryonic antigen)等,对大肠癌患者的特异性不强,用于早期诊断价值不高,研究表明LEA（large external antigen)对大肠癌组织有极好的特异性,本研究应用抗LEA单抗ND－1和抗CEA单抗对大肠癌组织的对比,探讨LEA在大肠癌中的表达及其临床病理诊断意义。方法：采用免疫组织化学S－P法检测170例大肠癌组织和100例大肠非癌组织（41例大肠腺瘤,32例癌旁粘膜,27例正常粘膜）LEA与CEA的表达,结果：LEA在高、中、低分化腺癌组织中表达阳性率分别为100％,83．1％和51．8％,而CEA分别为93．8％,92．3％,和70．4％,LEA大肠腺瘤,癌旁粘膜和正常粘膜中表达阳性率分别为75．6％,53．1％和14．8％,而CEA分别为82．9％,62．5％和40．7％,LEA对高分化腺癌表现出更高的选择性（P＜0．01）,CEA单抗对高、中、低分化腺癌选择性相似（P＞0．05）,与CEA相比,LEA在非癌组织中表达的阳性率较低（P＜0．05）,LEA与CEA的表达除在正常为膜外均有显著的相关性,LEA与CEA在组织学上诊断大肠癌的灵敏度分别为84．1％和88．8％,而特异度分别为48％和35％,结论：LEA可能是一种与细胞分化,侵袭能力相关的肿瘤抗原,LEA可用于大肠癌恶性程度判断的参考指标,是具有临床实用价值的肿瘤生物标记物。     

肺癌组织中黑色素瘤抗原-A3基因mRNA的表达及其序列点突变分析

目的检测肺癌组织中黑色素瘤抗原-3基因(MAGE-A3)mRNA的表达。方法用逆转录-套式聚合酶链反应(RT-PCR)对31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织MAGE-A3mRNA表达情况进行测定;PE-377DNA测序仪对5例10个RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA序列测定。结果31例肺癌患者癌组织中26例表达MAGE-A3mRNA,阳性率为83.9%;相应的癌旁组织均未表达。DNA序列测定证明PCR扩增产物中目的基因片段均为MAGE-A3cDNA序列,所测5例样本中4例样本有两个相同位置的碱基发生了点突变(C2773→T2773;G2807→A2807),导致一个氨基酸残基改变(E143→K)。结论MAGE-A3mRNA在肺癌中呈高比例表达,提示此抗原有可能作为肺癌患者免疫治疗的靶抗原。我国肺癌患者中存在MAGE-A3基因个别位点的变异。     

CAGE? MAGE-A1和MAGE-A3去甲基化在胃癌发生发展中的作用

探讨肿瘤相关抗原基因（CAGE）、黑色素瘤抗原基因-A1（MAGE-A1）和黑色素瘤抗原基因-A3（MAGE-A3）启动子区去甲基化状态改变在胃癌早期发生、发展中的作用及意义。方法:87例内镜活检标本分为胃癌组、癌前病变组和正常对照组,应用甲基化特异性PCR方法分别检测各组中3种基因启动子区的去甲基化状态。结果:胃癌组、癌前病变组和正常对照组中,各基因启动子区的去甲基化阳性率分别为:CAGE:80.0%（24/30）、37.5%（12/32）和4.0%（1/25）;MAGE-A1:60.0%（18/30）、21.9%（7/32）和0（0/25）;MAGE-A3:46.7%（14/30）、12.5%（4/32）和8.0%（2/25）,呈下降趋势。3种基因启动子区去甲基化阳性率在3组间比较,差异有统计学意义（P<0.05）。30例胃癌至少发生1种基因启动子区去甲基化的有27例;至少发生2种基因启动子区去甲基化23例;7例同时发生了3种基因启动子区的去甲基化。结论:这3种基因启动子区去甲基化改变可能发生于胃癌发病早期,且贯穿于胃癌发生、发展的全过程并起到一定的作用,联合检测可能有助于提高胃癌去甲基化诊断的阳性率。      

MAGE-A1 和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

[摘要] 目的：探讨黑色素瘤抗原基因-A1（MAGE-A1）和MAGE-A3 在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法：选取2006 年1 月至2010 年1 月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78 例脑胶质瘤组织标本和15 例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR法检测胶质瘤组织中MAGE-A1 和MAGE-A3 的表达,分析其表达水平与患者预后的关系;用MSP-PCR术检测MAGE-A1 和MAGE-A3 基因启动子区的甲基化状态,分析两者表达与甲基化之间的关系;用RT-PCR法检测胶质瘤U251 和U87 细胞中MAGE-A1 和MAGE-A3 表达以及经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2''-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）联合作用后两者的表达水平。结果：78 例胶质瘤组织中MAGE-A1 和MAGE-A3 mRNA阳性表达率分别为65.34%和38.46%,而在15 例正常脑组织中未发现2 种mRNA表达。MAGE-A1 阳性组患者5 年生存率较阴性组低（P<0.05）。MAGE-A1 和MAGE-A3 基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性（均P<0.01）。未经5-Aza-CdR 和TSA处理的U87 细胞未见MAGE-A1 和MAGE-A3 mRNA的表达,U251 细胞则有少量表达。单独给予TSA不能引起MAGE-A1 和MAGE-A3 基因的表达激活,单独给予5-Aza-CdR 或与TSA合用可以引起该2 个基因的表达激活,且两者合用的作用优于单独给药。结论：脑胶质瘤组织中有不同程度的MAGE-A1 和MAGE-A3 基因表达,MAGE-A1 基因表达与患者的预后不良相关。DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是MAGE-A1和MAGE-A3基因表达激活的重要机制。     

肺癌组织中黑色素瘤抗原-A3基因mRNA的表达及其序列点突变分析(英文)

目的检测肺癌组织中黑色素瘤抗原-3基因(MAGE-A3)mRNA 的表达。方法用逆转录-套式聚合酶链反应(RT-PCR)对31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织 MAGE-A3 mRNA 表达情况进行测定;PE-377DNA 测序仪对5例10个 RT-PCR 扩增产物中的目的基因片段进行 DNA 序列测定。结果 31例肺癌患者癌组织中26例表达 MAGE-A3 mRNA,阳性率为83.9%;相应的癌旁组织均未表达。DNA 序列测定证明 PCR扩增产物中目的基因片段均为 MAGE-A3 cDNA 序列,所测5例样本中4例样本有两个相同位置的碱基发生了点突变(C2773→32773;G2807→A2807),导致一个氨基酸残基改变(E143→K)。结论 MAGE-A3mRNA 在肺癌中呈高比例表达,提示此抗原有可能作为肺癌患者免疫治疗的靶抗原。我国肺癌患者中存在 MAGE-A3基因个别位点的变异。     

Detection of MAGE-A3 in breast cancer patients' sentinel lymph nodes.

The detection of occult metastatic breast cancer cells by RT-PCR is limited by the poor specificity of most tumour mRNA markers. MAGE-A3 is a highly specific tumour mRNA marker that is not expressed in non-cancer cells. This study assesses MAGE-A3 mRNA as a molecular marker for the detection of tumour cells in the sentinel lymph nodes (SLN) of breast cancer patients. Serial frozen sections of SLN (n = 121) were obtained from 77 AJCC (American Joint Committee on Cancer) Stage I-IIIA breast cancer patients. MAGE-A3 mRNA analysis of SLN was performed by RT-PCR and Southern blot analysis. Tumour cells were detected in 48 of 121 (40%) SLN from 77 patients by H&E or IHC staining, and 35 of 77 (45%) patients, overall, had histopathologically (H&E and/or IHC) positive SLN. Among histopathologically negative SLN, 28 of 73 (38%) SLN were MAGE-A3 mRNA positive by RT-PCR. Overall, 41 of 77 (53%) patients and 50 of 121 (41%) SLN were positive for MAGE-A3. MAGE-A3 mRNA expression in the SLN occurred more frequently with infiltrating lobular carcinoma (P < 0.001) than with infiltrating ductal carcinoma, adding further evidence of possible phenotypic differences between these 2 subtypes of breast cancer. Due to its high specificity, MAGE-A3 mRNA is a potentially useful marker for detecting breast cancer cells in the SLN. One half of breast tumours expressed MAGE-A3 mRNA, which has important potential implications for antigen-specific targeted immunotherapy.     

乳腺癌中MAGE-A9和MAGE-A11基因的表达及表达机制的研究

【】 目的：探讨黑色素瘤抗原MAGE-A9和MAGE-A11在乳腺正常组织、乳腺良性病变、乳腺癌组织中的表达以及甲基化酶抑制剂5-氮杂-２"-脱氧胞苷(5-aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对MAGE-A9和MAGE-A11基因表达的影响。方法：应用RT-PCR检测60例乳腺正常组织、60例乳腺良性病变及60例乳腺癌组织中MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的表达,分析其与乳腺癌患者临床病理学特征的关系。乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231经5-aza-CdR 和 TSA 单独或联合作用后,应用RT-PCR法检测细胞中 MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA 表达的变化。结果：乳腺癌组织中MAGE-A9 mRNA阳性表达率为45%(27/60),MAGE-A11 mRNA阳性表达率为66.7%(40/60),而乳腺正常组织及良性病变中均未发现MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的表达。 MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的表达与乳腺癌患者的年龄、病理类型、临床分期、肿瘤大小、淋巴转移、瘤栓及孕激素受体的表达均无明显关系(P ＞0.05),与人表皮生长因子受体2(HER-2)和雌激素受体(ER)的表达有关(P＜0.05)。未经药物处理的MCF-7、MDA-MB-231细胞未见MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA表达。单用5-aza-CdR后可见MAGE-A9和MAGE-A11基因重新表达,联合应用5-aza-CdR和TSA使MAGE-A9和MAGE-A11基因表达进一步增加(P＜0.05)。TSA单独作用对基因表达没有影响(P＞0.05)。结论：乳腺癌组织中MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的表达与ER 和HER-2的表达有关,5-aza-CdR单用或联合应用TSA可诱导不表达MAGE-A9和MAGE-A11 mRNA的细胞重新表达,说明DNA的去甲基化和组蛋白乙酰化是调控人类肿瘤细胞MAGE的表达的重要机制。     

重组腺病毒载体Ad-CRT/MAGE-A3抑制肺腺癌细胞A549侵袭的体外研究

目的:探讨同时携带CRT基因及MAGE-A3基因的重组腺病毒载体转染人肺腺癌细胞A549后基因的表达及其对体外增殖、侵袭、凋亡及血管形成能力的影响.方法:Ad-CRT/MAGE-A3转染A549细胞,转染48h后以Western blotting法检测CRT及MAGE-A3蛋白的表达;MTT法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞增殖的影响;Transwell方法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞侵袭的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测Ad-CRT/MAGE-A3对A549细胞凋亡的影响;小管形成实验检测Ad-CRT/MAGE-A3对血管形成的影响.结果:转染48h,Western blotting结果显示转染Ad-CRT/MAGE-A3的A549细胞能够表达CRT及MAGE-A3蛋白;MTT检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的增殖;Transwell检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549细胞的侵袭能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够诱导A549细胞凋亡;小管形成实验结果显示Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制血管形成.结论:Ad-CRT/MAGE-A3能够明显抑制A549的增殖及侵袭能力,诱导其凋亡,并能明显抑制血管内皮细胞血管生成,其作用机制可能与CRT及MAGE-A3蛋白同时表达后相互作用有关,提示Ad-CRT/MAGE-A3可以作为潜在的肺癌基因治疗的新方法.     

MAGE-A protein and MAGE-A10 gene expressions in liver metastasis in patients with stomach cancer

Tumour samples from 71 patients with stomach cancer, 41 patients with liver metastasis (group A) and 15 patients each in stages II-IV (group B) and stage I (group C) without liver metastasis were analysed. MAGE-A protein expression was evaluated by immunohistochemistry using a 6C1 monoclonal antibody and MAGE-A10 mRNA expression was detected by highly sensitive in situ hybridisation using a cRNA probe. Expressions of MAGE-A protein and MAGE-A10 mRNA in group A were detected in 65.9 and 80.5%, respectively. Both protein and gene showed significantly higher expression in group A than those in groups B (6.7, 26.7%) and C (0, 0%) (P=0.0003, P=<0.0001, respectively). MAGE-A10 mRNA expression in liver metastasis was found in eight (88.9%) out of nine patients. The concordant rate between MAGE-A family protein expression and MAGE-A10 mRNA expression in the primary sites was 81.7% (P<0.0001). MAGE-A10 gene expression was associated with reduced survival duration. The results of this study suggest that MAGE-A10 is a possible target in active immunotherapy for advanced stomach cancer.