安徽省114株EHECO157∶H7菌株毒力因子基因的初步分析

目的　对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHECO157∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力特征和致病特性。方法　采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO157∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论　检测结果显示 ,有 63.2%的EHECO157∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33.3% ,说明分离的EHECO157∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中,有 14.0%的菌株在 24h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18.8% ,显著低于不发酵菌株的 70.4% ,显示出山梨醇发酵特性变异与毒力因子基因缺失之间具有一定的关联性。     

一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的鉴定

目的 对一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株进行血清生化特征及毒力基因鉴定.方法 对154菌株进行常规血清生化鉴定,使用聚合酶链反应(PCR)方法检测该菌的志贺毒素基因及其他毒力因子,同时以southern杂交、Hela细胞毒实验进行证实.结果 菌株154的志贺毒素PCR检测、shouthern杂交为阴性,Hela细胞毒定量结果显示该菌株不产生志贺毒素,毒力因子eae,hly检测为阳性.结论 菌株154是不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株,且具有O157:H7菌株特异性的毒力因子.     

江苏省徐州市1999年大肠杆菌O_(157)∶H_7感染性腹泻并急性肾衰的临床研究

目的 :了解徐州市大肠杆菌O1 57∶H7感染性腹泻的流行情况及并发急性肾衰的临床表现。方法 :将 1999年收治的 14 7例大肠杆菌O1 57∶H7感染性腹泻并发急性肾衰的临床资料进行总结。结论 :1999年夏季 ,徐州市铜山县、丰县及与接壤的安徽萧县发生了大肠杆菌O1 57∶H7感染性腹泻的大规模爆发性流行 ,病人除以腹泻为主要表现外 ,还以急性肾衰、呼吸系统及中枢神经系统损害为特征。病情来势凶猛 ,病程进展迅速 ,预后严重 ,死亡率高达 80 %。由于菌株的变种 ,2 0 0 0年发病率明显下降     

肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7质粒 pO157 上毒力因子的研究进展

肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7是一种重要的致病菌,可以引起不同程度人类疾病。目前已知的O157 ∶ H7的致病因子有3个,志贺毒素、粘附抹平效应毒力岛和特异性质粒pO157。其中pO157在致病过程中的作用并不十分清楚。本文结合近年来的研究进展,介绍了pO157上与细菌致病性有关的毒力因子。     

秦皇岛市O157∶H7出血性大肠杆菌腹泻疫情监测分析

通过对 2 75例腹泻病人监测 ,在 2例腹泻病人粪便中分离出 2株O15 7∶H7出血性大肠杆菌 ,并经中国预防医学科学院流研所鉴定 ,检出率为 0 73%。首次查明了本地区人群中有O15 7∶H7出血性大肠杆菌肠炎病人的存在。通过病例调查 ,感染因素可能为个人卫生差和生食蔬菜。     

秦皇岛市O157∶H7出血性大肠杆菌腹泻疫情监测分析

通过对 2 75例腹泻病人监测 ,在 2例腹泻病人粪便中分离出 2株O15 7∶H7出血性大肠杆菌 ,并经中国预防医学科学院流研所鉴定 ,检出率为 0 73%。首次查明了本地区人群中有O15 7∶H7出血性大肠杆菌肠炎病人的存在。通过病例调查 ,感染因素可能为个人卫生差和生食蔬菜。     

浙江省衢州市柯城区检出带毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7

目的　了解浙江省衢州市柯城区肠出血性大肠埃希菌O157∶H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况。方法　采集腹泻患者粪便、动物粪便以及各类食品、蝇类等标本，MEC肉汤增菌后，用特异性免疫磁珠集菌，以科玛嘉显色平板分离，纯化的菌株经生化鉴定、血清分型及毒力基因检测。结果　2007年采集动物粪便标本300份，共检出O157∶H7菌16株，总带菌率为5.33%，其中牛、羊、猪带菌率较高，分别为20.83%、12.70%和3.61%，腹泻患者、食品和媒介昆虫中均未检出。毒力基因检测所有分离株Istx/I2、hly、eaeA 3种毒力基因均呈阳性，而stx1均呈阴性。结论　衢州市柯城区部分动物中存在O157∶H7感染，且为产毒株，应加强O157∶H7的综合监测。     

昆明市首次检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7

为了解昆明市是否存在肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7及流行情况 ,了解蔬菜、食物、水等的污染情况 ,2 0 0 1年 10月采集昆明市鸡、鸭、牛 3个养殖场、西式快餐店 2个和市区 9个农贸市场的鸡、鸭、牛粪 ,生牛奶 ,生、熟肉馅 ,生蔬菜 ,生、熟猪、牛肉 ,海产品 ,以及猪、鱼、鸡内脏等 14种共 15 5份样品。按照大肠杆菌O15 7∶H7的常规分离鉴定方法和分子生物学和血清学试验鉴定 ,结果共发现 19株大肠杆菌O15 7∶H7,并且 19株菌株均含有志贺样毒素VT2的致病基因。其中从蔬菜 (33份 )分离到 9株、鸡内脏 (9份 )分离到 3株、生猪肠 (17份 )和卤猪肉 (12份 )各分离到 2株 ,发干菜 (6份 )、鱼内脏 (6份 )、海产品 (6份 )各分离到 1株大肠杆菌O15 7∶H7。食品中检出阳性菌株数之多在全国尚属少见。特别是蔬菜 ,其检出O15 7∶H7大肠杆菌阳性数 ,占总检出数的 4 3 37% ,与国内其它地区有所不同。昆明市存在发生肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7感染暴发或流行的潜在危险     

非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株的志贺毒素基因变种及黏附相关基因分析

目的 了解我国部分地区非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株的志贺毒素基因变种及其黏附相关基因,为进一步研究致病机制提供依据。 方法 采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对29株分离菌株的stx1、stx2基因全长扩增并测序,通过与GenBank中已公布的变种序列比对确定菌株stx1、stx2基因的变种类型。对位于LEE毒力岛上的eaeA、escF、escC、tir、espA、espB、espD基因及LEE以外其他黏附相关基因iha、toxB、efa1、sfpA、lpfAO157/OI-141、 lpfAO157/OI-154、saa、lpfAO113、eibG进行PCR检测。 结果 25株stx1阳性菌株中有13株携带stx1a原毒素,12株携带stx1c变种;10株stx2阳性菌株中,7株携带stx2d变种,1株为stx2a原毒素,1株携带stx2g变种,1株携带与stx2e A亚单位、stx2d B亚单位最接近的stx2变种。LEE岛上的7个基因检测结果均为阴性,黏附相关基因iha阳性率为89.7%(26/29),saa阳性菌株3株、eibG阳性菌株1株,其余6个黏附相关基因均为阴性。 结论 我国部分非O157 STEC菌株的志贺毒素基因以stx1c、stx2d变种为主,LEE毒力岛不存在,而黏附相关基因iha广泛存在于不同血清型的产志贺毒素大肠杆菌菌株中。     

来自腹泻合并急性肾衰病人疫区的99株E.coli O157∶H7的鉴定结果分析

目的调查研究河南省2000年3月17日-7月6日发生的腹泻合并急性肾衰病人的致病菌。方法采集病人、外环境、家畜和家禽标本620份,采用免疫磁珠集菌法、CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基分离及营养肉汤增菌、rfbO157、rfbO111引物多重PCR扩增等方法进行病原菌的检测。结果分离出99份E.coli O157∶H7菌株,其中rfbO157、志贺氏样毒素2(stx2)、溶血素(hlyA)、肠上皮细胞纤毛消除素(eaeA)基因和vero细胞毒性试验均阳性的有56株,其它基因组合7株,36株无毒力基因。结论99株E.coli O157∶H7在CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基生长形态、颜色,生化反应及毒力基因表现等方面出现多样化,对于今后在制定对该菌的诊断标准、传染源的控制及细菌毒力学等方面的研究提供了依据。     

从进口冷冻海鱼中检出O157∶H7大肠杆菌的报告

本文报道了９８年１２月,我们采用快速抗原检测方法和Ｖｉｄａｓ－酶联免疫荧光方法等方法,从进口的冷冻海鱼中分离检出一株Ｏ１５７∶Ｈ７大肠杆菌。该菌株与许多资料报道的Ｏ１５７∶Ｈ７大肠杆菌存在明显不同之处,其快速发酵山梨醇、发酵鼠李糖,不发酵棉子糖、卫茅醇,ＭＵＧ试验阳性。因此,我们在日常的检验工作中应结合血清学等多种检测方法综合作出判断。     

从进口冷冻海鱼中检出O157∶H7大肠杆菌的报告

本文报道了９８年１２月,我们采用快速抗原检测方法和Ｖｉｄａｓ－酶联免疫荧光方法等方法,从进口的冷冻海鱼中分离检出一株Ｏ１５７∶Ｈ７大肠杆菌。该菌株与许多资料报道的Ｏ１５７∶Ｈ７大肠杆菌存在明显不同之处,其快速发酵山梨醇、发酵鼠李糖,不发酵棉子糖、卫茅醇,ＭＵＧ试验阳性。因此,我们在日常的检验工作中应结合血清学等多种检测方法综合作出判断。     

2008-2010年浙江省衢州市动物粪便O157∶H7监测及其意义

目的 动态了解浙江省衢州市家禽、家畜肠出血性大肠埃希菌O157∶H7带菌情况和菌型分布特征,以制定相应的防制对策。 方法 6、7月肠道传染病高发季节,采集动物粪便标本,对O157∶H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。 结果 共采集动物粪便标本914份,检出O157∶H7菌2株,总带菌率为0.22%,其中羊、牛各检出1株,带菌率分别为0.62%和0.71%。经PCR检测,其中1株携带stx2+ hly+ eaeA毒力因子,1株hly+eaeA阳性,stx1均为阴性。 结论 衢州市再次分离到带有毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7,对人群健康构成了威胁,应加强O157∶H7的综合监测。     

不同地区人群血浆标本中大肠杆菌O157∶H7的抗体谱差异分析

目的分析来自不同地区、具有不同遗传背景的献血浆者血浆抗体谱差异。方法收集血型、年龄、性别相匹配的来自巴马长寿地区有家族长寿背景和无家族长寿背景的血浆以及某东部地区的血浆各22份、即为3个大组,共66份血浆标本。每大组设置2个生物学重复,共6个小组,每个小组均为11份血浆各50μL等体积混合而成。以肠出血性大肠杆菌O157∶H7蛋白质组作为抗原库,利用蛋白质双向电泳技术和蛋白免疫印迹杂交技术获得不同血浆标本IgG的抗体谱,采用双向电泳图像分析软件进行差异分析。结果通过建立的方法获得了较高质量的血浆标本IgG抗体谱,3组标本中的IgG分别识别198、190和149个大肠杆菌蛋白质点;巴马地区有家族长寿背景和无家族长寿背景的血浆标本IgG抗体谱未见明显差异;但二者与东部地区血浆标本IgG抗体谱相比差异较为明显,如识别抗原数量不同,目标抗原点分布也不同。结论 3组血浆标本均含有针对大肠杆菌O157∶H7的广谱抗体;来自同一地区的血浆标本IgG抗体谱较为一致,来自不同地区人群的血浆标本IgG抗体谱差异明显,提示生活环境及遗传背景可能会影响人血浆中针对外来抗原的抗体的种类与多样性。     

江苏省徐州市出血性大肠埃希菌O157∶H7 感染性腹泻的监测研究

目的 系统监测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(O157∶H7)感染并发肾衰(HUS)、腹泻患者、宿主动物、蝇类、食品携带O157∶H7的状况,为预警监测体系建立提供参考依据。 方法 采集徐州市疫情暴发点和监测点腹泻患者粪便、蝇类和食品标本分离菌株。应用PCR技术检测志贺毒素基因stx。 结果 1999-2011年徐州市累计报告O157∶H7引起的感染性腹泻并发HUS 132例。腹泻患者带菌率1.2%、蝇类带菌率0.5%、食品带菌率1.0%、宿主动物带菌率3.1%。菌株带毒由stx1和stx2共存发展为以不带毒为主。 结论 江苏省徐州市O157∶H7感染自1999年、2000年暴发流行后,该市疫情一直稳定。腹泻患者带菌率、宿主动物带菌率、蝇类带菌率、食品带菌率及菌株带毒情况发生了改变。     

非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型鉴定及主要毒力基因分析

目的 了解中国不同来源非O157产志贺毒素大肠埃希菌分离株血清型及主要毒力基因的流行情况。方法 采用O抗原基因簇特异性聚合酶链反应（PCR）结合全套O抗血清凝聚法确定O血清群,以PCR扩增和测序fliC基因确定H型;采用PCR方法对所有菌株进行stx1、stx2、eae及ehxA基因检测。结果 434株非O157 STEC分离株中,除不可分型菌株外,共检测出82种O血清群和28种H型,其中O20:H30、O2:H32和O2:H45为优势血清型。stx1、stx2和stx1+stx2 3种志贺毒素基因型的检出率分别为25.35%、64.98%和9.68%,而eae和ehxA基因的阳性率分别为3.92%和32.95%。仅15株菌同时携带3种毒力基因,且主要为血清型O26:H11的腹泻患者分离株。结论 我国非O157 STEC分离株血清型复杂多样,同时检测eae和ehxA基因对于发现高致病潜力的菌株具有重要参考价值。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7检测技术进展

肠出血性大肠杆菌O157：H7（E.coli O157：H7）是肠出血性大肠杆菌（EHEC）的一个血清型,主要引起人的食源性疾病,以突发性腹痛、腹泻、血便为主要症状,严重时并发肾衰竭,病死率高。E.coli O157：H7广泛分布于自然界,其引起的疾病与食用未烘烤的饼干面团[1]、生菜有关[2],在猪、牛粪便及猪肉、牛肉中分离率极高,对公众健康构成严重威胁[3]。因此,     

江苏省建湖地区大肠埃希菌O157:H7毒力基因分析

目的对检测出的17份肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株进行毒力基因分析。方法收集江苏省建湖地区2008年5月～9月监测出的17株肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株,利用单一和多重PCR法检测不同来源菌株0157抗原编码（rfbE）、H7鞭毛抗原编码（fliC）、志贺样毒素（stx1和stx2）、溶血素（hly）和黏附抹平因子（eaeA）。结果通过血清学方法确定的17株肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株,再通过PCR法检测,其中15株大肠埃希菌rfbE和fliC基因检测为阳性,确认为EHEC O157：H7,其中9株菌株扩增出全部毒力基因,5株菌株扩增出除stxl外其它全部毒力基因,1株仅检出stx2,hly毒力基因;2株大肠埃希菌rfbE基因检测阳性、fliC基因检测为阴性,确认为O157：H7-大肠埃希菌,无毒力基因检出。结论该地区存在O157：H7大肠埃希菌强毒株污染,从流行病学角度看具潜在的流行性危险,当地疾控部门应加强O157：H7的综合监测。     

酶标记鸡卵黄抗E.coli O157∶H7抗体的制备与特性研究

目的研究制备特异性抗E.coliO157∶H7鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)及酶标记抗体(IgY-HRP)的工艺条件。方法分别用灭活菌体、脂多糖及O抗原多糖抗原免疫临产母鸡,水稀释法结合离子交换色谱分离提取IgY,再用过碘酸钠法和戊二醛法进行HRP标记,各种制品的分析用电泳及ELISA法。结果可获得纯度为79.6%~85.3%的IgY,提取率74%~77%;过碘酸钠氧化法标记效果较好,IgY-HRP(1mg/ml)最高效价640。结论免疫制备IgY方法可行,过碘酸钠法标记IgY-HRP取得良好效果。     

气单胞菌与肠出血性大肠杆菌O157∶H7对3种消毒剂抗力的实验观察

气单胞菌、大肠杆菌(8099)与肠出血性大肠杆菌O157∶H7对醋酸氯己定的抗力依次减小,对二氧化氯的抗力无明显差别,对过氧戊二酸的抗力以大肠杆菌(8099)为强.