压力对体外培养髁突软骨细胞增殖、凋亡的影响

【目的】观察压力对体外培养SD大鼠髁突软骨细胞增殖、凋亡以及合成蛋白多糖的影响，探讨压力与软骨退变之问的相互关系。【方法】在一个大气压基础上，分别对3组体外培养髁突细胞进行加压-10kPa、10kPa，20kPa(5％CO2)，以未加压组作为对照，用四唑盐法(MTY法)和流式细胞技术分别检测各组标本在加压3h和加压24h后细胞增殖、凋亡的情况：应用硫酸-咔唑法检测各组标本在加压3h和加压24h后蛋白多糖的含量。【结果】加压3h后，各加压组与对照组相比，细胞的增殖、凋亡以及蛋白多糖含量无明显变化；加压24h后，压力值为20kPa时可以明显拟制增殖，并诱导髁突软骨细胞发生凋亡增加，蛋白多糖含量明显减少。【结论】长时间的异常压力负荷可使髁突软骨细胞增殖减缓、凋亡增加，蛋白多糖含量减少，诱发或加重关节软骨退变。     

静压力对新生SD大鼠髁状突软骨细胞增殖影响的体外实验研究

目的：探讨不同静压力对髁状突软骨细胞增殖的影响。方法：对培养到第三代的新生SD大鼠髁状突软骨细胞加载0、12、24、36kPa的静压力1h后立即收集样本，用流式细胞仪分析各样本各增殖周期DNA含量变化，计算细胞增殖活性指数。结果：12、36kPa静压力能降低髁状突软骨细胞的增殖活性，24kPa静压力能增加髁状突软骨细胞的增殖活性。结论：静压力对髁状突软骨细胞的增殖活性具有双重效应，即压力过大过小均不利于软骨细胞的增殖，适当静压力能促进软骨细胞的增殖。     

压力对体外培养髁突软骨细胞增殖、凋亡的影响

[目的]观察压力对体外培养SD大鼠髁突软骨细胞增殖、凋亡以及合成蛋白多糖的影响,探讨压力与软骨退变之间的相互关系.[方法]在一个大气压基础上,分别对3组体外培养髁突细胞进行加压-10kPa、10kPa,20kPa(5%CO2),以未加压组作为对照,用四唑盐法(MTT法)和流式细胞技术分别检测各组标本在加压3 h和加压24 h后细胞增殖、凋亡的情况;应用硫酸-咔唑法检测各组标本在加压3 h和加压24 h后蛋白多糖的含量.[结果]加压3 h后,各加压组与对照组相比,细胞的增殖、凋亡以及蛋白多糖含量无明显变化;加压24 h后,压力值为20kPa时可以明显拟制增殖,并诱导髁突软骨细胞发生凋亡增加,蛋白多糖含量明显减少.[结论]长时间的异常压力负荷可使髁突软骨细胞增殖减缓、凋亡增加,蛋白多糖含量减少,诱发或加重关节软骨退变.     

单侧髁突切除对非手术侧髁突软骨细胞凋亡的影晌

目的研究兔单侧髁突切除对非手术侧髁突软骨细胞凋亡活性的影响．方法24只5-6月龄的日本大耳白兔被随机分为两组：对照组和手术组．手术组通过手术切除-侧髁突建立动物模型,分别于术后2个月、4个月采用TUNEL染色,观察非手术侧髁突软骨中凋亡细胞数的表达．结果对照组相比,手术组单侧髁突切除2月和4月后非手术侧髁突软骨凋亡细胞数均增加（P〈0.05）,但物手术组4月较2月增加明显（P〈0.05）．结论单侧髁突切除可导致非手术侧髁突软骨凋亡细胞数量增加．     

压力对髁状突软骨细胞胰岛素样生长因子-1 表达影响的研究

目的：观察体外培养的髁突软骨细胞加载机械压力后胰岛素样生长因子-1（IGF-1）表达在不同时点的变化。方法：对第三代细胞加载强度为120g／cm^2的持续压力1h，分别于加力后0、6、12、18、24h收集细胞爬片，用免疫组织化学技术检测压力作用后细胞IGF-1的表达，以彩色病理图像分析仪分析软骨细胞IGF-1的阳性强度。结果：加力停止后0h和6h，体外培养的髁突软骨细胞IGF-1的表达较对照组增强；加力停止后12、18h和24h，IGF-1表达与对照组相比无显著性差异。结论：压力促进了髁突软骨细胞合成IGF-1，表明IGF-1在压力致髁突软骨细胞功能改变中发挥着积极作用。     

IGF-Ⅰ对体外培养的大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性的影响

为探讨矫形治疗中髁突软骨增殖活性变化的机理,本研究采用流式 细胞术 检测胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对体外培养的大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性的 影响。结 果显示,IGF-Ⅰ直接作用于培养的髁突软骨细胞24小时及96小时后,实验各组细胞的增殖 指 数（PI）均大于对照组（42.0±0.29及11.4±0.37）,其中以100ng/ml组增大最多（48.9± 0.29及23.6±0.29）;而作用96小时后各实验组的PI较对照组增高 幅度更大。以上提示,IGF-Ⅰ是大鼠下颌髁突软骨细胞的促有丝分裂因子,其作用存在延 迟效应。     

静压力对髁突软骨细胞形态和IGF-I及其受体表达影响的研究(摘要)

目的 观察体外单层培养的髁突软骨细胞加载机械压力后细胞形态IGF-I及IGF-IR表达在不同时点的变化.通过对IGF-I及IGF-IR表达变化的研究,对IGF-I及IGF-IR在应力介导的髁突软骨增生改建过程中的作用进行初步探讨.通过对加力后细胞面积的观察,进一步明确细胞形态在应力刺激导致的髁突软骨改建过程中的作用机制.方法 选用新生SD大鼠的髁突软骨作为原代培养的组织来源.应用静压力加载装置对第3代细胞加载强度为120g/cm2的持续压力,加力时间1 h.分别于加力后0、6、12、18、24h收集细胞爬片,用免疫组织化学技术检测压力作用后细胞IGF-I及IGF-IR的表达,以彩色病理图像分析仪分析软骨细胞面积和IGF-I及IGF-IR的阳性强度.对照组细胞除不加力外,其它培养条件和检测方法与实验组相同.结果 强度为120g/cm2的持续压力作用1 h,加力停止后0h和6h,体外培养的髁突软骨细胞IGF-I及IGF-IR表达较对照组增强,加力停止后12、18 h和24 h,表达与对照组相比无显著性差异;加力停止后0 h,实验组细胞面积较对照组增大,其后实验组细胞面积与对照组相比无显著性差异.结论 强度为120g/cm2压力持续作用1 h,力解除后6 h内,显示软骨细胞面积增大和IGF-I及IGI;I-IR表达增强;之后,髁突软骨细胞面积和IGF-I及IGF-IR表达逐渐恢复.提示压力促进了髁突软骨细胞合成IGF-I及IGF-IR,表明IGF-I在压力致髁突软骨细胞功能改变中发挥着积极的作用.     

静压力对髁突软骨细胞形态和IGF-I及其受体表达影响的研究

目的 观察体外单层培养的髁突软骨细胞加载机械压力后细胞形态IGF-I及IGF-IR表达在不同时点的变化.通过对IGF-I及IGF-IR表达变化的研究,对IGF-I及IGF-IR在应力介导的髁突软骨增生改建过程中的作用进行初步探讨.通过对加力后细胞面积的观察,进一步明确细胞形态在应力刺激导致的髁突软骨改建过程中的作用机制.方法 选用新生SD大鼠的髁突软骨作为原代培养的组织来源.应用静压力加载装置对第3代细胞加载强度为120g/cm2的持续压力,加力时间1 h.分别于加力后0、6、12、18、24h收集细胞爬片,用免疫组织化学技术检测压力作用后细胞IGF-I及IGF-IR的表达,以彩色病理图像分析仪分析软骨细胞面积和IGF-I及IGF-IR的阳性强度.对照组细胞除不加力外,其它培养条件和检测方法与实验组相同.结果 强度为120g/cm2的持续压力作用1 h,加力停止后0h和6h,体外培养的髁突软骨细胞IGF-I及IGF-IR表达较对照组增强,加力停止后12、18 h和24 h,表达与对照组相比无显著性差异;加力停止后0 h,实验组细胞面积较对照组增大,其后实验组细胞面积与对照组相比无显著性差异.结论 强度为120g/cm2压力持续作用1 h,力解除后6 h内,显示软骨细胞面积增大和IGF-I及IGI;I-IR表达增强;之后,髁突软骨细胞面积和IGF-I及IGF-IR表达逐渐恢复.提示压力促进了髁突软骨细胞合成IGF-I及IGF-IR,表明IGF-I在压力致髁突软骨细胞功能改变中发挥着积极的作用.     

SD大鼠髁状突颈部骨折对大鼠髁状突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的研究发育期SD大鼠髁状突颈部骨折对下颌髁状突软骨细胞增殖和凋亡活性的影响.方法18只4周龄SD大鼠,分为髁状突骨折组及空白对照组,分别于术后1周、3周、5周时脱颈处死,取骨折组手术侧、非手术侧及空白对照组髁状突软骨,分别采用免疫组织化学染色和TUNEL染色,观察髁状突软骨细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数和凋亡细胞数.结果在各时间点,手术侧、非手术侧的PCNA阳性细胞数存在统计学差异(P<0.01).术后3、5周,空白组与手术侧PCNA阳性细胞数有统计学差异(P<0.01);术后3周,非手术侧大鼠髁突软骨中凋亡细胞数明显增多,手术侧凋亡细胞数随时间推移明显降低;术后1周,手术侧的凋亡细胞数明显多于非手术侧(P<0.01);术后3周,非手术侧的凋亡细胞数明显多于手术侧(P<0.01);术后1、5周,空白组与手术侧凋亡细胞数有显著性差异(P<0.01).结论一侧髁状突颈部骨折导致两侧髁状突所受应力失衡,影响两侧髁状突软骨细胞增殖与凋亡的平衡,进而影响下颌骨及颌面部的发育.     

BMP/Smads信号传导通路在兔下颌持续前导后髁突的表达

目的：探讨免下颌持续功能前导后髁突软骨中BMP／Smads信号传导通路表达与髁突改建的关系。方法：60只8周龄的日本大耳白兔，随机分成实验组（n=36）和对照组（n=24），实验组动物每日24h戴用咬合前导矫正器。实验动物分别在第3天、1周、2周、4周、8周及12周时处死并取材，用免疫组化方法观测髁突组织内BMP-2和Smad1／5、4、6的分布和表达，并对其表达进行灰度测定。结果：BMP-2和Smad1／5、4、6主要在髁突软骨过渡层和肥大层软骨细胞中表达，钙化层的软骨细胞和成骨细胞中也可见BMP-2和Smad1／5、4、6的表达。实验组兔髁突软骨BMP-2和Smad1／5、4、6的表达强度在早期高于同期对照组（P〈0．05），与髁突骨组织改建的活跃程度同步。结论：下颌持续前导后，Smad1／5、4、6作为BMP-2的细胞内信号传导分子，与下颌髁突适应性生长改建关系密切。     

低渗作用对人成骨样细胞MG63功能的影响

目的 本试验通过研究低渗透压的静牵张作用对成骨样细胞MG63的增殖能力、碱性磷酸酶活性以及[Ca2 ]i的影响,探讨该应力形式下成骨样细胞MG63的力学响应特征.方法 用不同渗透压的低渗透液,对成骨样细胞MG63分别进行2 h、4 h、8 h、12 h、24 h和48 h持续牵张作用后,用MTT法检测细胞增殖情况,用ALP试剂盒检测ALP活性的变化,用钙试剂盒检测[Ca2 ]i含量波动情况.结果 随着作用时间的延长,成骨样细胞MG63在277 mmol/L和240 mmol/L低渗透液的持续性膨胀作用下,其细胞增殖能力增强,[Ca2 ]i、ALP活性缓慢增高;而细胞在163 mmol/L低渗液作用下,细胞增殖受到抑制,8 h时出现[Ca2 ]i急剧升高,ALP活性明显高于其对照组.结论 低渗膨胀对MG63的增殖分化、ALP活性以及Ca2 -ATPase都有一定的影响作用,且Ca2 内流与ALP活性之间存在一定的相关性.     

淫羊藿对小鼠成骨细胞增殖、功能及凋亡的影响

目的:观察淫羊藿提取液对体外培养的小鼠成骨细胞增殖、功能及凋亡的影响.方法:利用序列酶消化法从新生小鼠颅盖骨中分离和培养成骨细胞,用组织化学和免疫组化染色进行细胞鉴定.用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测淫羊藿对成骨细胞增殖的影响,通过检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性反映淫羊藿对细胞功能的作用.建立地塞米松诱导的成骨细胞凋亡体系,并利用流式细胞仪观察淫羊藿对这一凋亡体系的影响.结果:分离和获得的大量单一多角形细胞,经碱性磷酸酶组织化学染色呈强阳性,经Ⅰ型胶原、骨桥蛋白、骨涎蛋白免疫组化染色呈阳性,证实获得的细胞为成骨细胞.淫羊藿提取液不影响成骨细胞的增殖,但可以显著提高成骨细胞碱性磷酸酶的活性,其中相当于生药1 g/L组的作用最明显.100 nmol/L和1 000 nmol/L地塞米松可以显著增加成骨细胞凋亡率,但同时加入相当于生药1 g/L的淫羊藿提取液,并不引起细胞凋亡率的明显变化.结论:淫羊藿对成骨细胞的增殖和凋亡没有明显作用,但却显著增加了成骨细胞碱性磷酸酶的活性.淫羊藿防治骨质疏松症的重要机制之一可能是促进成骨细胞的成骨功能.     

A novel alkaline phosphatase positive granule in rat neutrophils

Neutrophilsplayanimportantroleindefendingthebodyagainstinvadingmicrobesandcanbeactivatedbyanumberofagentssuchaschemoattractantsandcytokines.Theiractivationresultsinavarietyofresponses,includingchemotaxis,phagocytosis,degranulationandtherespiratoryburstllj.Ithasbeenshowninrecentyearsthattheneutrophilsarecapableofcommunicatingwiththeirenvironmentsbymobilizingdifferenttypesofintracellulargranulesandvacuoles[ZJ.Ithasbeenalsosuggestedthatincorporatingofgranulemembraneintothecellplasmamembraneisone…     

传代人皮肤成纤维细胞凋亡与不同压力和作用时间的关系

目的 观察不同压力与作用时间下皮肤成纤维细胞的增殖情况,为减少即时皮肤软组织扩张术后皮瓣坏死提供一些理论依据。 方法 取23岁男性内踝皮肤成纤维细胞培养、传代后,取第6代皮肤成纤维细胞分空白组、40 kPa组(持续40 kPa压力)、60 kPa Ⅰ组(间断60 kPa压力)、60 kPa Ⅱ组(持续60 kPa压力)进行压力试验,试验后培养至第7天,检测各组培养液中IL-6含量,使用透射电镜、光镜观察各组内踝皮肤成纤维细胞线粒体、细胞核的变化,使用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件对照片中的线粒体、细胞核进行勾勒,计算线粒体、细胞核平均累积光密度(integrated optical density,IOD),并进行比较。 结果 60 kPa Ⅱ组成纤维细胞IL-6的分泌增加,在透镜下可见线粒体减少,40倍光镜下可见细胞增殖受到抑制,与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。40 kPa组与60 kPa Ⅰ组成纤维细胞,在透镜下可见线粒体受到了损伤,但40倍光镜下可见成纤维细胞的增殖与空白组相近(P＞0.05)。 结论 间断60 kPa压力不会增加皮瓣坏死的几率,更适合在即时皮肤软组织扩张术使用。      

维生素C和高压氧对快速减压大鼠肺组织SOD活性的影响

目的：观察快速减压大鼠肺组织SOD活性的变化以及维生素C和高压氧对SOD的保护作用。方法;SD大鼠在600kPa空气中暴露60min,于减压后第90min和180min分别测定快速减压组、缓慢减压组、常压纯氧组、高压氧组、维生素C处理组以及正常对照组动物肺组织的SDO活性。结果：缓慢减压的动物肺内SOD活性与对照组无明显差异;快速减压后90min和180min时SOD活性都明显低于对照组（P＜0．05）;维生素C处理组织和HBO组90min时的SOD活性都恢复到对照水平,180min时,只有维生素C处理组的维生素C结合HBO组的SOD恢复至对照水平。结论：维生素C和高压氧都能防止快速减压引起的SOD活性下降。     

IL-1beta induces alkaline phosphatase in human phagocytes

BACKGROUND: Alkaline phosphatase (ALPase) is found in blood plasma or serum and leukocytes and regulates intercellular processes, maintaining phosphoryl metabolites in a steady state, as well as synthesizing and hydrolyzing phosphate esters on membranes. ALPase supervises the active transport of inorganic phosphates, fats, proteins, carbohydrates and the sodium/potassium pump mechanisms. The formed elements of blood such as polymorphonuclear (PMNs) leucocytes, macrophages (MP) and some lymphocytes are high in ALPase concentrations. METHODS: In this study we have tested whether the interleukin-1 receptor antagonist (IL-lra) could influence ALPase generation in IL-1beta or lipopolysaccharide (LPS)-stimulated neutrophils and MP. Human neutrophils were isolated from heparin-anticoagulated blood drawn from healthy individuals by centrifugation in a two-step gradient, Ficoll-Hypaque. ALPase activity was assessed spectrophotometrically in test tubes containing isolated neutrophils and adherence PBMCs treated with LPS, IL-1beta and IL-1ra, alone or in combination. RESULTS: IL-lbeta or LPS enhanced ALPase in both PMNs and MP, whereas IL-1ra could not inhibit ALPase activity. We performed time course experiments at 0 min, 5 min, 1 h, 24 h, and 43 h (LPS 20 microg/mL, IL-1beta 10 ng/mL). No significant increase in ALPase activity was seen until 1 h; however, there was a rapid rise over the next few hours. In another set of experiments using IL-1ra (500 ng/mL), there was no difference between treated cells and control cells. The combination of IL-1beta plus IL-1ra did not reduce the ability of IL-1beta to induce ALPase activity. CONCLUSIONS: These data suggest that IL-1beta stimulates ALPase through other mechanisms than the release of arachidonic acid products, which are inhibited by IL-lra.     

内毒素性休克早期猕猴肾脏超微结构的改变及酶细胞化学观察

目的：探讨内毒素休克早期猕猴肾脏的损伤.方法：11只猕猴随机分成2组：对照组5只,静脉注射生理盐水;内毒素组6只,静脉注射LPS,剂量为2.8 mg/kg.内毒素攻击后120 min,处死动物,取肾脏标本采用光镜、电镜铅离子捕获法做超微结构碱性磷酸酶（ALPase）及酸性磷酸酶（ACPase）细胞化学检查.结果：组织学观察显示肾髓质、皮质结构完整,肾小球结构完好;透射电镜可见模型组肾小球血管内皮和足突细胞损伤、血液成分渗出;肾小管上皮细胞损伤.肾实质细胞内溶酶体破坏;电镜酶细胞化学可见：模型组酸性磷酸酶活性增强,溶酶体颗粒增多.肾小管上皮细胞碱性磷酸酶活性急剧增强,在细胞器内弥散分布.对照组无明显病变.结论：在猕猴内毒素性休克早期,溶酶体增多和损伤引起了肾小球和肾小管损伤.在此同时,肾脏实质细胞内中和内毒素的作用也增强.     

富血小板血浆诱导脂肪干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的探讨富血小板血浆（PRP）在体外定向诱导脂肪干细胞向成骨细胞增殖分化的可行性。方法体外分离培养兔脂肪干细胞,传至第3代分为两组：对照组加入含10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50mg/L抗坏血酸、1×10^-8mol/L地塞米松;实验组在此基础上加入10ml/L富血小板血浆进行诱导培养。观察细胞形态学变化,免疫组织化学染色测定细胞碱性磷酸酶活性,von Kossa染色和茜素红染色检测矿化结节的形成。结果实验组脂肪干细胞经成骨诱导培养后,形态规则、多角型细胞增多,细胞倍增时间明显短于对照组。诱导7、10、14d细胞碱性磷酸酶活性均显著高于对照组（P〈0.01）。诱导21d与对照组比较,实验组形成的矿化结节数量增多,结节增大。结论在体外PRP能诱导并促进兔脂肪干细胞向成骨细胞方向分化。     

FTY720-P对成骨细胞分化成熟的作用

目的 以FTY720-P作用于成骨细胞后,分析相关蛋白和基因表达的变化,明确FTY720-P对成骨细胞的作用机制.方法 取Wistar大鼠乳鼠颅盖骨进行成骨细胞原代培养.将不同浓度的FTY720-P(0、200、300、400 ng/mL)作用于成骨细胞,MTT试验和流式细胞术进行生长速率和细胞周期的检测,碱性磷酸酶(ALP)染色和钙化结节染色对比FTY720-P用药前后对细胞形态学功能的影响,并分别采用ELISA、Western blot和Real Time RT-PCR检测相关蛋白和基因的表达.结果 MTT显示FTY720-P对细胞生长影响不大.流式细胞术结果提示,细胞阻滞在G2期,对周期影响不大.ALP染色显示对照组蓝紫色颗粒更加明显;茜素红染色可见数量较多和更加明显的钙化结节.PCR结果中ALP的表达是下调的,骨钙素(OCN)和胰岛素样生长因子(IGF)的表达是上调的;而在ELISA实验中,OCN和IGF的分泌是增加的,Western blot检测中,胞外胶原蛋白I型分泌也增加,而在ALP活性实验中,胞内ALP活性是降低的.结论 FTY720-P可以促进成骨细胞细胞外基质的成熟和矿化,但对细胞增殖和周期没影响.