盐酸戊乙奎醚对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞通透性的影响

为探讨盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)诱导的肺微血管内皮细胞通透性的影响,将Wistar大鼠肺微血管内皮细胞随机分为对照组、LPS组和LPS+PHC预处理组,测定内皮单层滤过系数(Kf)和蛋白质渗透压反射系数(σ),MTT法测定细胞存活率,免疫印迹法测定水通道蛋白-1(AQP-1)表达。与对照组比较,LPS组Kf增加、σ减少,存活率降低;PHC预处理可减少LPS组的变化,提高存活率,上调AQP-1表达。     

黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响

目的观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80%后随机分组,加入TNF-α(10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子κB(NF-κB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达。结果在TNF-α组和TNF-α+CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA表达量,NF-κB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P<0.05)。结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-κB的激活。     

Toll样受体-2和Toll样受体-4、单核细胞趋化蛋白-1与绒毛膜羊膜炎的相关性研究

目的考察Toll样受体-2(Toll likereceptor-2,TLR-2)和Toll样受体-4(Toll likereceptor-4,TLR-4)、单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein,MCP-1)在绒毛膜羊膜炎的表达及其意义。方法随机选取2016年1月-2018年1月海南医学院第二附属医院收治的绒毛膜羊膜炎早产患者45例,无绒毛膜羊膜炎早产患者45例,绒毛膜羊膜炎足月患者45例,无绒毛膜羊膜炎足月孕妇40例。采用定量双抗体夹心酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定宫颈分泌物MCP-1水平,免疫组织化学法测定羊膜组织TLR-2和TLR-4蛋白表达情况,RT-PCR法测定羊膜组织TLR-2和TLR-4 mRNA表达情况。结果 TLR-2和TLR-4表达于羊膜上皮细胞、绒毛膜细胞和蜕膜细胞中;早产绒毛膜羊膜炎组MCP-1和TLR-2高于早产无绒毛膜羊膜炎组(P<0.05),足月绒毛膜羊膜炎组MCP-1和TLR-2高于足月无绒毛膜羊膜炎组(P<0.05);早产绒毛膜羊膜炎组MCP-1 mRNA和TLR-2 mRNA高于早产无绒毛膜羊膜炎组(P<0.05);足月绒毛膜羊膜炎组MCP-1 mRNA和TLR-2 mRNA高于足月无绒毛膜羊膜炎组(P<0.05);TLR-2 mRNA和MCP-1 mRNA呈正相关(r=0.473,P<0.05)。结论 TLR-2和MCP-1参与了绒毛膜羊膜炎的发生、发展,病原微生物可能通过激活TLR-2,诱导MCP-1的产生。     

p115RhoGEF/RhoA信号通路在高糖致脑微血管内皮细胞通透性异常中的作用

目的探讨p115RhoGEF/RhoA信号通路在高浓度葡萄糖(Glucose)致小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3通透性异常中的作用。方法体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),构建单层血脑屏障体外模型。通过ESR电阻仪测定跨内皮细胞间电阻(TEER),分光光度法检测碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷胺酞胺转移酶(γ-GT)活性以评估其屏障功能;对照组(5.6mmol/L葡萄糖)、高糖诱导组(15.6、25.6、35.6、45.6mmol/L葡萄糖)处理细胞48h,MTT检测细胞相对存活率,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平,评估高糖对脑微血管内皮细胞通透性的影响;Western blot检测不同浓度葡萄糖处理细胞后p115RhoGEF蛋白表达水平,体外蛋白与蛋白结合试验(Pull-Down)检测RhoA活性。转染p115RhoGEF-siRNA建立p115RhoGEF基因沉默的bEnd.3细胞模型,检测不同处理组RhoA活性及p115RhoGEF、TJ蛋白表达水平。结果细胞TEER值随培养时间延长逐渐升高,ALP、γ-GT活力均随时间延长逐渐升高;与对照组比较,35.6、45.6mmo/L葡萄糖诱导组的细胞活力出现明显下降作用,且诱导时间越长,细胞存活率越低(P0.05);35.6mmol/L葡萄糖诱导组的LDH水平明显升高(P0.05);随着葡萄糖浓度升高,ZO-1、Occludin蛋白表达下降而p115RhoGEF蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05);Pull-down结果显示,25.6、35.6mmol/L葡萄糖组的RhoA活性较对照组明显升高(P0.05)。细胞转染p115RhoGEF-siRNA后,p115RhoGEF蛋白表达较对照组明显下降;高糖诱导48h后,与NCsiRNA组比较,p115RhoGEF-siRNA组的GTP-RhoA活性下降、 ZO-1、 Occludin表达水平明显上调(P0.05)。结论高糖通过诱导p115RhoGEF/RhoA信号通路活化,下调紧密连接蛋白表达,引起脑微血管内皮细胞通透性增加。[营养学报,2019,41(2):154-162]     

表没食子儿茶素没食子酸酯对微囊藻毒素LR所致肝细胞氧化损伤及细胞色素P450 2E1表达的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对微囊藻毒素LR(microcystin-LR,MC-LR)诱导小鼠肝细胞氧化损伤的化学拮抗作用及细胞色素P450 2E1(eytochrome P450 2E1,CYP2E1)表达的影响.方法 24只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级雄性BALB/c小鼠数字表法随机分为对照组、MC-LR染毒组、EGCG低剂量拮抗组、EGCG高剂量拮抗组,每组6只,持续暴露14 d.第15天处死小鼠,对肝脏脏体比、病理改变、抗氧化酶及脂质过氧化物水平、CYP2E1基因和蛋白表达进行检测和分析.结果 (1)EGCG可拮抗MC-LR所致小鼠体重下降,减轻MC-LR造成的肝脏病理损伤.(2)MC-LR染毒组小鼠脂质过氧化物丙二醛(malonaldehyde,MDA)水平[(2.87±0.03)nmol/mg prot]、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平[(168.18±2.86)U/mg prot]与EGCG两处理组相比,差异均有统计学意义[低、高剂量组MDA值分别为(2.37±0.05)、(1.44±0.05)nmol/mg prot,F=906.63,P<0.01;SOD值分别为(176.55±2.98)、(184.89±1.53)U/mg prot,F=32.32,P<0.01].(3)MC-LR可显著上调CYP2E1mRNA和蛋白表达平均吸光度值(CYP2E1 mRNA表达水平:MC-LR染毒组为1.41±0.26,对照组为0.86±0.13,t=-4.22,P=0.003;蛋白表达水平:MC-LR染毒组为0.24±0.03,对照组为0.12±0.02,t=-9.21,P<0.05),EGCG可显著降低该表达(低、高剂量组CYP2E1 mRNA表达水平分别为1.09±0.08、0.99±0.09,与MC-LR染毒组比较,F=9.03,P=0.004;蛋白表达水平分别为0.21 ±0.03、0.14±0.02,与MC-LR染毒组比较,F=24.76,P<0.05).结论 EGCG可抑制MC-LR诱导CYP2E1的表达,对MC-LR诱导的肝细胞氧化损伤有一定拮抗作用.     

晚期糖基化终产物对内皮细胞血管生成样蛋白-4的影响

目的 观察晚期糖基化终产物(AGEs)对血管内皮细胞血管生成样蛋白-4(Angptl-4)的影响,为心血管疾病的防治提供依据.方法 不同浓度(0、20、40、80、160 μg/ml)的AGEs与内皮细胞共培养24 h,分别以实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测Angptl-4 mRNA和蛋白的表达,通过检测异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖漏出率来检测内皮细胞的通透性.结果 与空白对照组比较,AGEs(80 μg/ml)可明显上调Angptl-4 mRNA(分别为100％和260％± 18％)和蛋白的表达(分别为100％和250％±32％),增加内皮细胞通透性(分别为0.15±0.08和0.46±0.09),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 AGEs可能通过上调Angptl-4的表达增加内皮细胞的通透性.     

明日叶查尔酮对胰岛素抵抗细胞PI3K-Akt-GLUT4信号通路的影响

目的研究明日叶查尔酮(Angelica keiskei chalcones,AC)对胰岛素抵抗L6细胞磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶-葡萄糖转运体4(PI3K-Akt-GLUT4)信号通路的影响。方法采用高浓度胰岛素诱导的胰岛素抵抗L6细胞,分别加入5、10、20μmol/L终浓度的明日叶查尔酮共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测细胞PI3K和Akt的mRNA表达水平,蛋白印迹法检测GLUT4和Akt的蛋白表达水平。结果胰岛素抵抗组细胞培养液的葡萄糖含量显著高于空白对照组(P0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则降低(P0.05);中、高剂量AC组细胞培养液葡萄糖含量均低于胰岛素抵抗组(P0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则升高(P0.05)。结论明日叶查尔酮可上调L6细胞胰岛素抵抗模型PI3K-AktGLUT4信号通路的表达水平,增强其对葡萄糖的摄取利用,改善胰岛素抵抗。     

葡萄籽原花青素对H_20_2诱导的脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的用葡萄籽原花青素(GSP)研究对H2O2诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其机制。方法建立氧化损伤的细胞模型,体外培养HUVEC分为正常对照组、氧化损伤组以及高、中、低剂量(100,50,10μg/ml)GSP组;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测GSP对H2O2诱导的内皮细胞氧化损伤的保护作用;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测单核细胞趋化蛋白(MCP-1)mRNA的水平;流式细胞术Annexin V/PI检测细胞凋亡以及定量检测各实验组细胞间粘附分子(ICAM-1)、血管细胞粘附分子(VCAM-1)的表达。结果内皮细胞氧化损伤后吸光度(OD)低于正常对照组;GSP预处理后OD值增加,高剂量GSP组的OD值与正常组相比无显著性差异;损伤组MCP-1 mRNA表达水平与内参照灰度值之比高于正常组;药物预处理氧化损伤后明显减弱。损伤组中细胞凋亡率显著增高、表达ICAM-1、VCAM-1的阳性细胞数均多于正常组;预处理后,凋亡细胞数以及两种粘附分子阳性细胞数明显减少,且呈剂量依赖性效应。结论葡萄籽原花青素可通过抑制内皮细胞粘附分子与细胞因子的表达而抑制炎症性损伤及其凋亡,达到保护内皮细胞的目的。     

替米沙坦对噪声暴露大鼠心肌NADPH氧化酶表达水平的影响

目的探讨替米沙坦对噪声暴露大鼠心肌NADPH氧化酶表达的影响,为研究噪声损伤心肌的机制提供依据。方法雄性SD大鼠随机分为正常组(C)、噪声组(N)、替米沙坦干预组(T),每组6只。N组和T组暴露于100 d B(SPL)白噪声,6 h/d,连续12周。T组每日盐酸替米沙坦水溶液灌胃〔10 mg/(kg·d)〕。采用比色法检测心肌丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化力(T-AOC),采用实时荧光定量RT-PCR法测定心肌组织NADPH氧化酶亚基p47phox、p22phox、gp91phox mRNA表达,采用western blot法检测p47phox蛋白表达。结果与C组相比,N组心肌MDA含量、p47phox mRNA、p22phox mRNA、gp91phox mRNA表达水平均明显升高(P0.05,P0.01),T-AOC明显降低(P0.01);与N组相比,T组心肌MDA含量、p22phox、gp91phox mRNA表达水平明显降低(P0.05,P0.01),SOD活性明显升高(P0.01)。结论替米沙坦可降低NADPH氧化酶的表达,减小氧化应激,从而减轻噪声对心肌的损害。     

大气颗粒物暴露对高脂高糖饮食大鼠心肌组织Nrf2信号通路分子和炎症因子的影响

【目的】研究大气颗粒物暴露对高脂高糖饮食大鼠心肌组织与氧化应激相关的核转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路关键分子和炎症因子表达的影响。【方法】将48只SD雄性大鼠随机分成对照组(CC组)、高脂高糖组(HC组)、大气颗粒物组(CP组)及高脂高糖大气颗粒物组(HP组),每组12只。采用独立通气笼盒(IVC)饲养大鼠,CC组和HC组饲养于装有过滤大气颗粒物装置的IVC,CP组和HP组饲养于拆除大气颗粒物过滤装置的IVC,且其内空气成分接近室外空气成分,染毒3个月和6个月后分别处死24只大鼠,取心肌组织。用RT-qPCR法和Western blot法分别测定Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、血管细胞黏附因子(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA和VCAM-1、MCP-1的蛋白表达水平。【结果】与CC组比,HC组、CP组和HP组的Nrf2、HO-1、NQO1、VCAM-1和MCP-1 mRNA表达水平和VCAM-1、MCP-1的蛋白表达水平升高(P0.05);与HC组和CP组相比,HP组的Nrf2、HO-1、NQO1、VCAM-1、MCP-1 mRNA和VCAM-1、MCP-1的蛋白表达水平升高(P0.05);与3个月相比,6个月CP组和HP组的Nrf2 mRNA水平降低(P0.05)。【结论】大气颗粒物、高脂高糖饮食及其联合暴露可引起心肌组织炎症反应,激活Nrf2通路通过抗氧化作用达到保护心肌组织的目的。     

HIF-1α、VEGF、sFlt-1在子痫前期患者胎盘组织中的表达及临床意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、靶基因血管内皮细胞生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)在子痫前期(PC)患者胎盘组织中的表达及临床意义。方法:将2016年6月-2018年6月本院收治的子痫前期患者120例作为观察组,选取同期正常妊娠妇女100例作为对照组。采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP)检测HIF-1α、VEGF、sFlt-1等水平,使用RT-PCR技术检测HIF-1α、VEGF、sFlt-1 mRNA水平并分析相关性。结果:观察组HIF-1α蛋白(+++)表达率(45.0%)高于对照组(12.0%),VEGF蛋白(+++)表达率(14.2%)低于对照组(47.0%),sFlt-1蛋白(+++)表达率(52.5%)高于对照组(20.0%)(均P0.05);两组VEGF mRNA表达无差异(P0.05);观察组HIF-1αmRNA、sFlt-1 mRNA高于对照组,VEGFm RNA/sFlt-1 mRNA比值低于对照组(均P0.05);观察组HIF-1αm RNA与sFlt-1 mRNA呈正相关(r=0.578,P0.05),与VEGF mRNA/sFlt-1mRNA比值呈负相关(r=-0.382,P0.05)。结论:HIF-1α、VEGF、sFlt-1与PC病理生理改变有关,可能参与了PC的发生发展。     

EGCG改善油酸诱导的SW872脂肪细胞胰岛素抵抗作用及机制

目的观察植物化学物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对胰岛素抵抗SW872脂肪细胞葡萄糖转运、胰岛素敏感性及炎症因子表达作用。方法利用油酸处理脂肪细胞诱导胰岛素抵抗模型,给予不同剂量EGCG(25、50、100μmol/L)处理24 h,利用激光共聚焦显微镜检测2–脱氧葡萄糖标记的葡萄糖摄取、Western–blot检测葡萄糖转运因子4(GLUT4)蛋白表达、实时荧光定量逆转录多聚酶联反应(RT–q PCR)检测肿瘤坏死因子α(TNF–α)、白细胞介素6(IL–6)、C反应蛋白(CRP)mRNA表达,酶标记免疫吸附测定法(ELISA)检测培养液中TNF–α、IL–6、CRP蛋白含量。结果与对照组比较,模型组脂肪细胞葡萄糖摄取和GLUT4蛋白表达明显降低(P<0.05),TNF–α、IL–6、CRP mRNA明显升高(P<0.01),TNF–α、IL–6、CRP蛋白分泌量[分别为(161.3±14.2)、(121.6±13.6)、(1.82±0.17)]明显升高(P<0.01);与模型组比较,EGCG组脂肪细胞葡萄糖摄取和GLUT4蛋白表达明显增加(P<0.05),TNF–α、IL–6、CRP mRNA明显下降(P<0.01),低、中、高剂量EGCG组脂肪细胞TNF–α、IL–6、CRP蛋白分泌量[分别为(148.8±13.3)、(93.3±10.4)、(1.74±0.12)pg/m L,(131.4±11.3)、(85.5±14.1)、(1.53±0.15)pg/m L和(119.5±12.1)、(73.9±11.3)、(1.36±0.12)pg/m L]明显降低(P<0.01),呈剂量效应关系。结论 EGCG可促进脂肪细胞葡萄糖摄取和增强胰岛素敏感性,进而改善胰岛素抵抗,其机制可能与降低脂肪细胞炎症因子表达有关。     

丹参川穹嗪对尿酸肾损伤模型大鼠FOXO3α表达影响

目的探讨丹参川穹嗪对尿酸性肾病大鼠肾脏损伤的保护作用及作用机制。方法设对照组,模型组,丹参川穹嗪低、中、高剂量组(10、20、40mg/kg)和别嘌呤醇(5mg/kg)阳性药物组。干预6周后采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白免疫印迹(Western blot),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠肾组织或血清中FOXO3α、TLR4、NLRP3和MCP-1的mRNA和蛋白水平。结果模型组FOXO3αmRNA和蛋白水平低于正常组,而TLR4,NLRP3和MCP-1高于正常组(P<0.05)。模型组FOXO3α的m RNA和蛋白水平低于丹参川芎嗪组和别嘌醇组,而TLR4,NLRP3和MCP-1高于丹参川芎嗪组和别嘌呤醇组(P<0.05)。结论丹参川穹嗪可上调FOXO3α的表达,抑制TLR4,NLRP3和MCP-1的表达,这可能是丹参川穹嗪改善高尿酸血症介导的免疫炎症肾损伤的分子机制。     

香烟烟雾提取物对A549细胞MUC5AC分泌影响的机制研究

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)所致人气道上皮细胞黏液高分泌的分子机制及血红素加氧酶-1(HO-1)对该分子机制的阻断作用。方法通过CSE刺激人肺A549细胞,构建气道黏液高分泌的细胞模型,给予HO-1诱导剂氯化高铁血红素(Hemin)及HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPPIX)干预,观察HO-1、双功能氧化酶1(Duox1)、黏蛋白5AC(MUC5AC)、表皮生长因子受体(EGFR)及磷酸化EGFR(p-EGFR)的表达。将A549细胞分为对照组、CSE刺激组、Hemin干预组和ZnPPIX干预组。用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定Hemin及ZnPPIX对细胞活性的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组HO-1、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA水平;Western blot法检测p-EGFR、EGFR、Duox1及HO-1的蛋白水平;并用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组上清液及细胞裂解液中的MUC5AC蛋白含量。结果 CSE刺激组MUC5AC的mRNA积分吸光度值、培养上清液及细胞裂解液中MUC5AC蛋白水平分别为(0.660±0.044)、(62.80±6.85)μg/mg及(157.00±3.26)μg/mg,EGFR mRNA和蛋白的积分吸光度值分别为(0.596±0.061)和(0.620±0.051),均较对照组明显升高(P0.05),p-EGFR蛋白水平亦明显升高,且HO-1及Duox1的mRNA和蛋白水平也较对照组增高(P0.05)。给予Hemin预处理后,与CSE刺激组相比,HO-1mRNA及蛋白明显增多,p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平降低(P0.05)。给予ZnPPIX预处理后,与对照组相比,HO-1mRNA及蛋白水平无明显增高(P0.05),而p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平明显增高(P0.05)。结论 HO-1可通过下调Duox1的表达,阻断香烟烟雾诱导的EGFR活化上游的配体依赖信号途径,减少EGFR活化,从而抑制黏蛋白MUC5AC的合成及分泌,此结果为研究香烟烟雾诱导的气道黏液高分泌的信号机制提供了新的线索。     

姜黄素对心力衰竭大鼠心脏AT_1受体表达的影响

目的研究姜黄素对大鼠慢性心力衰竭心脏血管紧张素Ⅰ型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)的表达作用。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心肌梗死后心衰模型,32只Wistar大鼠随机分为假手术组,假手术姜黄素处理组,心衰对照组及心衰姜黄素处理组。超声心动图检测各组大鼠心功能,放射免疫法测定血浆肾素(plasma renin actvity,PRA)及血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)水平,qRT-PCR检测各组大鼠心脏AT1受体的mRNA表达,Western印迹法测定各组大鼠心脏AT1受体的蛋白表达。结果与假手术组相比,心衰对照组左心室射血分数显著降低(P0.05),而血浆PRA及AngⅡ水平升高(P0.05),同时心脏AT1受体mRNA及蛋白的表达水平也显著上调(P0.05)。给予姜黄素处理4周后,可明显改善心衰大鼠上述指标的异常(P0.05)。而姜黄素对假手术组无相应作用。结论姜黄素通过降低心衰大鼠心脏AT1受体的表达,改善慢性心衰大鼠心功能。     

不同有氧运动时间对小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的比较不同有氧运动时间对小鼠心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法 80只2月龄雄性清洁级BALB/c小鼠随机分为短期静止组、长期静止组、短期运动组和长期运动组各20只。短期静止组和短期运动组小鼠饲养和有氧训练3个月,长期静止组和长期运动组小鼠饲养和有氧训练6个月。分别采用TUNE法、RTPCR法和蛋白印迹法测定心肌细胞凋亡情况以及Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达。结果长期运动组小鼠心肌细胞凋亡指数较其他三组小鼠明显下降(P0.05),并且心肌Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平、Bcl-2/Bax比值较长期静止组及短期静止组小鼠显著上升(P0.05),而Bax mRNA及蛋白表达水平较长期静止组、短期静止组显著下降(P0.05)。与短期运动组比较,长期运动组Bcl-2/Bax mRNA比值及蛋白比值得到明显改善(P0.05)。短期运动组小鼠的心肌细胞凋亡指数以及心肌Bcl-2、Bax表达较短期静止组有所改善,但差异无统计学意义。结论 6个月有氧运动训练可有效阻止小鼠心肌细胞凋亡,改善心肌细胞Bcl-2、Bax表达和Bcl-2/Bax水平是其重要的作用途径。     

microRNA-23a对氟暴露大鼠成骨肉瘤细胞成骨活性的影响及靶基因验证

目的探讨miR-23a对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞成骨活性的影响并验证其靶基因。方法体外培养UMR-106细胞,分别转染miR-23a的激动剂(mimics)和抑制剂(inhibitor),再以0、80μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23a、Ⅰ型胶原(COL1)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达水平;培养96 h后利用免疫蛋白印记法(Western blot)检测COL1、OPN、Runx2蛋白的表达水平;体外培养人胚胎肾细胞(293T),利用双荧光素酶报告基因法验证miR-23a可能的靶基因。结果与空白对照组相比,NaF组UMR-106细胞miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达水平明显升高(P0.05);与激动剂对照组比较,过表达组miR-23a mRNA表达水平明显上升、COL1 mRNA表达明显降低(P0.05),Runx2、OPN mRNA表达变化不显著(P0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组miR-23a、COL1、OPN、Runx2 mRNA表达明显降低(P0.05)。与激动剂对照组比较,过表达组Runx2、OPN蛋白表达水平明显升高(P0.05),COL1蛋白表达水平变化不显著(P0.05);与抑制剂对照组相比,抑制组COL1、OPN、Runx2蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。与过表达组比较,过表达+NaF组OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05),COL1、Runx2变化不显著;与抑制组比较,抑制+NaF组COL1、OPN、Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05)。过表达miR-23a后的293T细胞中双特异性磷酸酶5(DUSP5 mRNA)和蛋白表达水平均明显降低(P0.05),抑制mi R-23a后DUSP5表达水平均明显升高(P0.05);双荧光素酶报告确定DUSP5为miR-23a的靶基因。结论miR-23a能促进染氟UMR-106细胞中成骨活性基因的表达;DUSP5是miR-23a的靶基因。     

母胎界面MCP-1表达异常与不明原因早期复发性流产的关系

目的:探讨绒毛、蜕膜组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达异常与不明原因早期复发性流产(UERSA)的关系。方法:选取UERSA患者30例(UERSA组)以及同孕龄正常早孕妇女30例(正常早孕组),应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测两组绒毛、蜕膜组织中MCP-1mRNA的表达水平,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测两组血清中MCP-1蛋白的含量。结果:早孕绒毛、蜕膜组织均有MCP-1mRNA的表达;UERSA组绒毛、蜕膜组织中MCP-1mRNA的表达量(1.96±0.39,3.67±0.98)均较正常早孕组(1.42±0.28,1.90±0.85)显著升高(P<0.01);UERSA组血清MCP-1蛋白含量为85.74±12.31pg/ml,较正常早孕组(59.41±9.70pg/ml)显著升高(P<0.01);血清MCP-1蛋白的含量与绒毛、蜕膜组织中MCP-1mRNA的水平分别呈正相关(r=0.595,0.655)。结论MCP-1表达于早孕母胎界面,绒毛、蜕膜组织MCP-1mRNA高表达可能与UERSA的发病机制有关,提示血清MCP-1升高在胚胎停育的早期诊断中具有重要的临床意义。     

蛋氨酸胆碱对铅染毒大鼠CaMKⅡ和CREBmRNA及蛋白表达的影响

目的 研究蛋氨酸胆碱对铅暴露大鼠海马CaMKⅡ和CREB mRNA和蛋白表达的影响.方法 将断乳健康SPF级雄性SD大鼠分为空白对照组、染铅组(0.4 g/L乙酸铅饮水染毒)、蛋氨酸胆碱组(1:1,400 mg/kg)、铅+低剂量蛋氨酸胆碱组和铅+高剂量蛋氨酸胆碱组.铅+低、高剂量蛋氨酸胆碱组在染铅的同时,经灌胃分别给予低、高剂量(100、400 mg/kg)蛋氨酸胆碱混合溶液(1:1),8周后取大鼠海马组织,用实时聚合酶链反应(PCR)法测定CaMKⅡ和CREB mRNA的表达水平,免疫印迹(Western blot)法测定CaMKⅡ、CREB和pCREB蛋白含量.结果 染铅组大鼠海马CaMKⅡI和CREB mRNA的表达水平(0.743±0.185,0.729±0.199)均明显低于空白对照组(0.950±0.238,0.901±0.232),CREB和pCREB蛋白表达量( 0.271±0.045,0.212±0.058)低于空白对照组(0.319±0.058,0.506±0.125),差异均有统计学意义(P＜0.05);给予低、高剂量蛋氨酸胆碱后染铅大鼠海马CaMKⅡ mRNA表达水平(1.014±0.210,1.126±0.379)和CREB mRNA表达水平(1.029±0.335,0.932±0.251)均明显高于染铅组,差异有统计学意义(P＜0.05),铅+高剂量蛋氨酸胆碱组CREB和pCREB蛋白表达量(0.407±0.951,0.563±0.178)明显高于染铅组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 蛋氨酸胆碱可以拮抗铅对海马CaMKⅡ和CREB mRNA和蛋白表达的抑制作用.     

2型糖尿病合并骨质疏松症患者外周血中MCP-1表达水平及意义

目的检测2型糖尿病合并骨质疏松症患者外周血中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达水平,探讨MCP-1与骨密度的相关性。方法入组80例2型糖尿病合并骨质疏松症患者(实验组)及100例2型糖尿病未合并骨质疏松症患者(对照组),测量骨密度;分别收集实验组、对照组患者的外周血,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中MCP-1蛋白质表达水平,比较两组患者外周血中MCP-1表达水平;用Pearson相关性分析方法分析MCP-1表达水平与骨密度的相关性。结果 2型糖尿病合并骨质疏松症组外周血中MCP-1表达高于对照组,两组之间差异有统计学意义(P0.05);MCP-1表达水平与骨密度呈负相关(r=-0.364,P0.05)。结论 2型糖尿病合并骨质疏松症患者外周血中MCP-1表达增高,MCP-1可能参与骨质疏松的发病。