牛膝及其炮制品中甾酮类和皂苷类成分的含量比较

目的建立牛膝中甾酮类和三萜皂苷类成分的含量测定方法,比较牛膝及其炮制品牛膝段和酒牛膝中甾酮类和皂苷类成分含量的变化。方法采用HPLC法,分别对牛膝及其炮制品中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、竹节参皂苷IVa和人参皂苷Ro的含量进行了测定。结果牛膝炮制成牛膝段后,β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮的含量略有下降,竹节参皂苷IVa和人参皂苷Ro的含量显著下降。牛膝段炮制成酒牛膝后,β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮的含量略有增加,竹节参皂苷IVa和人参皂苷Ro的含量则明显增加。结论本研究所建立的方法能准确测定牛膝中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、竹节参皂苷IVa和人参皂苷Ro的含量,可用于控制牛膝及其炮制品的质量。不同炮制方法对牛膝中甾酮类和三萜皂苷类化学成分的含量产生一定影响。     

HPLC法同时测定不同采收期珠子参中5种皂苷类成分含量

目的:建立不同采收期珠子参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa、姜状三七苷R1以及去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa 5种化学成分的含量测定方法。方法:采用Thermo C18 (5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱;以0.02%的磷酸水溶液和乙腈进行梯度洗脱;柱温30℃;流速1 m L·min~(-1);检测波长203 nm。结果:不同采收期中5种化学成分含量积累在7月份达到最高。结论:7月份可作为珠子参最佳采收期,用于珠子参的质量控制。     

珠子参饮片质量标准研究

目的:建立珠子参饮片质量标准。方法:采用性状、显微、TLC进行定性鉴别,高效液相色谱法测定人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa的含量。同时测定了水分、灰分和酸不溶性灰分等。结果:对四川、云南、贵州等省区所产珠子参饮片中人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量进行测定,结果显示,各样品中人参皂苷Ro平均含量为7.19%,竹节参皂苷Ⅳa的平均含量为3.16%。结论:本法操作简便、稳定性好,可用于珠子参饮片中人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量测定;制定的质量标准规范,结果准确。     

珠子参真空冷冻干燥工艺优化及体外抗凝作用比较

目的：优化珠子参真空冷冻干燥工艺,并探讨不同干燥方法对珠子参体外抗凝作用的影响。方法：以人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量为评价指标,在单因素试验的基础上,采用中心组合设计(CCD)结合响应面进行分析,并对珠子参饮片进行质量评价。通过测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)考察其体外抗凝作用。结果：真空冷冻干燥珠子参的最佳工艺为切片厚度3 mm,隔板温度45.44℃、真空压强60.00 Pa;测得的皂苷含量之和平均值为8.59%。与空白对照组比较,除阴干和晒干处理的珠子参外,真空冷冻干燥、蒸制、煮制、热风干燥珠子参干燥样品均能显著延长PT、APTT,其中只有真空冷冻干燥珠子参能显著降低FIB。结论：优选的真空冷冻干燥工艺稳定可靠,操作简单易行,其体外抗凝作用优于传统干燥工艺,该结果可为珠子参的质量评价、炮制工艺研究以及临床应用提供参考。     

6种人参属药材体外抗凝血活性与皂苷含量的相关性研究

目的分析不同功效的6种人参属药材提取物的体外凝抗血活性差异。方法采用凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)实验,探讨6种人参属药材提取物抗凝血活性的差异性;分析其抗凝血活性与皂苷含量的相关性。结果竹节参、珠子参及三七可显著延长PT、APTT,降低FIB水平,呈现明显的量效关系;而人参、西洋参及屏边三七无显著变化。竹节参、珠子参提取物的抗凝血活性明显强于三七提取物。6种人参属药材中人参皂苷含量与其抗凝血活性的相关性分析表明,PT与人参皂苷Rb2含量呈现显著的正相关;且人参皂苷Rb2可显著延长PT、APTT。结论 6种人参属药材抗凝血活性存在差异,且抗凝血活性与人参皂苷Rb2含量相关。     

移植珠子参质量分析研究

目的:建立珠子参的质量分析方法,为珠子参的栽培研究提供科学依据。方法:样品用60%乙醇超声提取40min,滤过,取续滤液作为供试品溶液;高效液相色谱法测定含量。结果:移植两年的珠子参中竹节参皂苷IVa的平均含量明显高于移植一年的;同一植株珠子参的串珠状根茎不同珠(颗)的根茎中竹节参皂苷IVa含量是不同的,其含量似呈正态分布。结论:本法操作简便,方法稳定性好,灵敏度高,可用于栽培珠子参的质量评价。     

基于主成分分析、正交偏最小二乘判别分析及加权逼近理想解排序-灰色关联度融合模型评价不同产地珠子参质量

目的 采用HPLC法对珠子参Panax japonicus中多指标成分进行定量检测,建立主成分分析（principal component analysis,PCA）、正交偏最小二乘判别分析（orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA）及加权逼近理想解排序-灰色关联度（technique for order preference by similarity to an ideal solution-grey relation analysis,TOPSIS-GRA）融合模型对不同产地珠子参进行质量评价,以提高珠子参药材整体质量控制水平。方法 采用外标法测定珠子参中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rd₂、竹节参皂苷V、楤木皂苷A、竹节参皂苷IVa、越南参皂苷R₄、齐墩果酸、镰叶芹醇、豆甾醇和β-谷甾醇含量,定量检测条件为Agilent Eclipse Plus C₁₈色谱柱,流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱,检测波长205 nm,柱温30 ℃。以珠子参中13种成分含量为变量,通过PCA降维获得主成分并实现对样品分组,在样品分组基础上采用OPLS-DA挖掘影响珠子参质量的差异性标志物。建立加权TOPSIS-GRA融合模型对不同产地珠子参综合质量进行评价。结果 珠子参中13种成分在各自范围内线性关系良好（r＞0.999）,平均加样回收率为96.76%～100.06%（RSD＜2.0%）,精密度、稳定性和重复性试验结果符合《中国药典》2020年版规定。PCA结果显示前2个主成分特征值分别为9.757和1.976,累积方差贡献率为90.255%,15批珠子参聚为3组,呈现一定产地差异;OPLS-DA结果显示竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、人参皂苷Rd₂、β-谷甾醇、楤木皂苷A和人参皂苷Re是影响珠子参质量的差异性标志物。加权TOPSIS-GRA融合模型结果显示15批珠子参样品的平均相对贴近度（γ_i）为0.261 3～0.743 2,珠子参产品质量存在一定产地差异,同一产地差异较小,不同产地产品质量差异较大,同时聚类结果与PCA结果一致。结论 建立的HPLC多指标成分定量控制方法操作便捷、结果准确,可用于珠子参中13种成分的同步检测;PCA、OPLS-DA及加权TOPSIS-GRA融合模型合理可靠,可用于不同产地珠子参质量评价。     

HPLC-ESI-MS/MS法同时测定珠子参中15种皂苷类化合物

目的建立了高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定珠子参中15种皂苷类化合物(人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh2、人参皂苷F2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rf、三七皂苷R1、姜状三七皂苷R1、竹节参皂苷IVa)的检测方法。方法采用Waters Sunfire TMC18色谱柱(150 mm×1.5 mm,5μm),以含0.05%甲酸的乙腈-水(10∶90)为流动相,梯度洗脱分离,HPLC-ESI-MS/MS多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量。优化了色谱分离条件、质谱去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和碰撞池出口电压(CXP)等参数,并考察了浓缩温度、提取时间等对提取率的影响。结果 15种皂苷类化合物在0.000 9~2 952.592 3μg/m L线性关系良好,r=0.999 6,检出限范围为0.003~626.554 ng/m L,定量限为0.075~1 762.150 ng/m L,平均加样回收率在98.15%~101.12%,RSD为0.82%~2.15%。结论该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可以对珠子参中多种皂苷类化合物进行分析鉴定。     

珠子参根状茎中不同部分的皂苷组成分析

目的:研究珠子参根状茎中不同部分的皂苷组成。方法:利用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)和HPLC法,分析根状茎中皂苷组成和含量差异。结果:珠子参根状茎的"膨大"和"细长"两个部分的皂苷种类不同,且含量存在显著差异。根状茎细长部分含有17种皂苷,而膨大部分仅含有其中的7种。HPLC结果表明,膨大部分中皂苷含量以齐墩果烷型皂苷(如竹节参皂苷Ⅳ和竹节参皂苷Ⅳa)为主;细长部分中含量以达玛烷型皂苷(如人参皂苷Rd和人参皂苷Malonyl-Rd)为主。结论:对珠子参根状茎两部分皂苷组成和含量差异等研究,可以为探讨两个部分的基因表达及人参属植物根状茎膨大相关基因的发现奠定物质基础。建立的HPLC方法可为珠子参药材质量控制提供参考。     

正交实验优选油炸三七炮制工艺

目的:优选油炸三七炮制工艺。方法:以浸出物,三七皂苷R1,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的质量分数为评价指标,采用正交设计法考察加油量、油炸时间、油炸温度对炮制工艺的影响,确定最佳三七油炸工艺。结果:最佳炮制工艺参数为药材与油量比值20∶40,油炸时间为7 min,油炸温度为120~130℃。浸出物,三七皂苷R1,人参皂苷Rg_1和人参皂苷Rb_1的质量分数依次为28.6%,0.88%,7.76%,3.02%。三七炮制品外观色泽为棕黄色,炮制品的质量稳定。结论:结合三七炮制品的质量及外观色泽,优选的三七炮制工艺稳定可行,为三七的炮制工艺规范提供参考。     

配伍对珠子参中4个皂苷类成分药代动力学的影响

目的:研究不同配伍对藤珠胃康方中臣药珠子参主要成分在大鼠体内的药代动力学影响,为该复方的研究与开发提供参考。方法:将SD大鼠随机分为珠子参组、珠子参-藤梨根组、珠子参-白术组、珠子参-黄精组、珠子参-三棱组、藤珠胃康方组,灌服给药剂量均为10.0 g·kg~(-1)(按生药量计算),采用HPLC检测0~24 h大鼠血浆中人参皂苷Re,人参皂苷Rb1,人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的血药浓度,流动相乙腈(A)-0.02%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~14 min,19%~26%A;14~22 min,26%~29%A;22~30 min,29%A;30~40 min,29%~35%A;40~55 min,35%A),检测波长205 nm,运用DAS 3.0软件计算药代动力学参数,比较不同配伍对珠子参中4个指标成分的药动学差异。结果:与珠子参组比较,珠子参-藤梨根组、珠子参-黄精组、珠子参-白术组、珠子参-三棱组中人参皂苷Re,人参皂苷Rb1,人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的药峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC0-t)大部分增加,清除率/生物利用度(CL/F)降低;而藤珠胃康方组中上述4个成分的Cmax和AUC0-t增加,CL/F降低。与珠子参组相比,藤珠胃康方中主要成分代谢显著减慢,4个皂苷类成分的血药浓度明显提高。结论:不同配伍会影响珠子参主要药效成分在体内的药代动力学参数,为藤珠胃康方的临床应用提供参考依据。     

土家族药物扣子七中三萜皂苷成分及抗肿瘤活性研究

目的研究土家族药物扣子七Panax japonicus var. major中三萜皂苷类成分,对其抑制肿瘤细胞增殖活性进行筛选,并初步探讨化合物结构与活性的关系。方法应用多种色谱方法对土家族药物扣子七正丁醇部位进行分离,所分离化合物运用核磁共振方法进行结构鉴定,应用MTT法测定分离化合物对体外培养人肿瘤细胞增殖的影响。结果从扣子七根茎正丁醇部位分离得到14个三萜皂苷,分别鉴定为竹节参皂苷IVa甲酯(1)、竹节参皂苷Ⅳa丁酯(2)、竹节参皂苷Ⅳ(3)、竹节参皂苷Ⅳa(4)、28-去糖竹节参皂苷Ⅳa(5)、齐墩果酸-3-O-β-D-(6′-甲酯)-吡喃葡萄糖醛酸苷(6)、(24R)-珠子参苷R_1(7)、(24R)-拟人参皂苷F11(8)、(20S)-三七皂苷R_2(9)、(20S)-人参皂苷Rg_2(10)、人参皂苷Rg_1(11)、人参皂苷Re(12)、人参皂苷Rd(13)、竹节参皂苷V甲酯(14)。活性研究结果显示,化合物5和6对胃癌BGC-823细胞、结肠癌HCT-116细胞、宫颈癌HeLa细胞及肝癌Hep G2细胞均显示了较强的活性,呈良好的剂量依赖关系,其中化合物5对BGC-823、HCT-116细胞的IC_(50)分别为9.94、14.17μmol/L,化合物6对肝癌HepG2细胞的抑制作用最强(IC_(50)=12.70μmol/L)。结论首次从扣子七中分离得到化合物6并报道了其光谱数据;其部分化学成分显示出抗肿瘤活性,其抗肿瘤活性与齐墩果烷型皂苷密切相关,且活性强弱可能与C-28取代基有关联,相关抗肿瘤机制值得进一步研究。     

不同炮制方法对人参皂苷及农药残留的影响

目的研究人参炮制过程中有效成分含量的变化和炮制加工对农药残留含量的影响。方法采用高效液相色谱法,考察红参和大力参炮制过程中人参皂苷含量的变化;采用气相色谱法,考察红参和大力参炮制过程中农药残留量的变化。结果炮制成红参和大力参后,人参皂苷含量有所增加,样品中人参皂苷Rbl由0．13％分别增加至1．13％、0．72％,人参皂苷Re、Rsl总量由0．31％分别增加至0．60％、0．95％,炮制前后人参农药残留量没有明显变化。结论人参经过炮制后人参皂苷含量有所增加,人参不同炮制品之间的皂苷含量差异也较为明显,对于考察人参药性的物质基础具有重要意义,但不同的炮制方法对人参中农药残留影响较小,并不能降低人参中的农药残留。     

三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的测量不确定度评定

目的：建立三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的测量不确定度评定方法.方法：采用HPLC法测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量,建立数学模型,分析不确定度来源,最后计算扩展不确定度.结果：按干燥品计算,三七中三七皂苷R1的含量为（0.815±0.020）％,k=2;人参皂苷Rg1的含量为（3.324±0.076）％,k=2;人参皂苷Rb1的含量为（2.931±0.008）％,k=2结论：本方法建立的数学模型合理、可靠,可用于三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的不确定度评定.     

参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含量测定

目的：建立参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含量测定的方法。方法：采用HPLc法测定本品中人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl、三七皂苷R1的含量。结果：人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、三七皂苷R1线性范围分别依次为O．0396～0．1584μg、0．04076—0．16304μg、0．0412-0．1648μg;平均回收率分别为100．20％、100．13％、99．68％。RsD分别为O．38％,0．39％、0．36％。结论：本方法简便可靠,结果稳定,可用于参芪二甲丸中三七和人参的有效成分的含量测定。     

中国红参化学成分研究

采用大孔吸附树脂、硅胶等柱色谱以及反相高效液相色谱等方法系统性分离、纯化中国红参的化学成分,根据MS、NMR等谱学数据鉴定其结构。从中国红参的水煎液中分离得到52个三萜皂苷类化合物,分别鉴定为20(S)-人参皂苷Rh1(1),20(R)-人参皂苷Rh1(2),人参皂苷Rg6(3),20(22)E-人参皂苷F4(4),人参皂苷Rk3(5),20(22)E-人参皂苷Rh4(6),人参皂苷Rg1(7),20(S)-人参皂苷Rf-1a(8),20(S)-人参皂苷Rf(9),20(R)-人参皂苷Rf(10),20(S)-三七皂苷R2(11),20(R)-三七皂苷R2(12),20(S)-人参皂苷Rg2(13),20(R)-人参皂苷Rg2(14),人参皂苷Rs2(15),人参皂苷Rs1(16),人参皂苷Rd(17),三七皂苷R1(18),人参皂苷Re2(19),人参皂苷Re(20),20-葡萄糖基人参皂苷Rf(21),西洋参皂苷R1(22),人参皂苷Ro-甲酯(23),人参皂苷Ro(24),人参皂苷Rb1(25),人参皂苷Rc(26),人参皂苷Rb2(27),人参皂苷Ra2(28),人参皂苷Ra3(29),人参皂苷Rb3(30),20(22)Z-人参皂苷Rh4(31),竹节参苷IVa丁酯(32),20(22)Z-人参皂苷Rs4(33),人参皂苷Rs5(34),20(22)E-人参皂苷Rs4(35),姜状三七苷R1-6'-丁酯(36),竹节参苷IVa甲酯(37),20(S)-人参皂苷Rs3(38),20(R)-人参皂苷Rs3(39),姜状三七苷R1-6'-甲酯(40),人参皂苷Rz1(41),人参皂苷Rk1(42),人参皂苷Rg5(43),23-O-甲基人参皂苷Rg11(44),12β,25-二羟基达玛-20(22)E-烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(45),20(22)Z-人参皂苷F4(46),3β,12β-二羟基达玛-20(22)E,24-二烯-6-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(47),20(S)-人参皂苷Rg3(48),20(R)-人参皂苷Rg3(49),20(22)E-人参皂苷Rg9(50),人参皂苷Ro-6'-丁酯(51),聚乙炔基人参皂苷Ro(52)。化合物8,12,31~33,36,37,44,45,47,51为首次从人参中分离得到;化合物19,23,46为首次从红参中分离得到。     

三七不同炮制品中皂苷类成分的含量比较

目的:建立一种RP-HPLC同时测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re含量的分析方法,并比较不同炮制品中这4种成分含量的异同。方法:采用高效液相色谱法。色谱条件:色谱柱:Ultimate XB-C18(250mm×4.6 mm,5μm);柱温:25℃;流动相:乙腈-水梯度洗脱;检测波长:203nm。.结果:蒸三七中三七皂苷R1的平均含量为0.806%、Rg1为3.18%、Re为1.00%、Rb1为0.998%,高于相应生三七和油炸三七中相应的成分;其中,生三七中上述成分的含量分别为0.747%、3.24%、0.961%、0.977%,油炸三七中分别为0.765%、2.84%、0.860%、0.847%。结论:三七不同炮制品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re的含量存在差异;炮制对三七皂苷类成分的含量有影响。     

正交试验-主成分分析法优选牛膝醋制工艺

目的基于"酸入肝"理论优选醋制牛膝的最佳炮制工艺,为炮制机理研究和质量控制提供参考。方法高效液相色谱(HPLC)法同时测定牛膝中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro、竹节参皂苷IVa的含量;采用紫外分光光度法测定总甾酮、总苷和总多糖的含量;采用正交试验法考察醋种类、加醋量、炒制时间和闷润时间对结果的影响,以主成分分析的综合得分为指标优选炮制工艺。结果最佳炮制工艺为牛膝加质量比为20%量的陈醋闷润30 min后炒制20 min。结论牛膝醋制工艺具有较好的可行性和可控性,适用于工业化生产。     

正交试验法优选七君颗粒提取工艺

目的:以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1的含量为指标,研究七君颗粒中三七、人参等10味中药的提取工艺。方法:采用正交试验设计法,对七君颗粒水提取工艺进行考察,用高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1含量。结果:加水量12倍,煎煮1次,煎煮时间每次90min,所得提取液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1的含量高。结论:此工艺对三七皂苷R1、人参皂苷Rg1的含量的提取率高,稳定性好,可作为七君颗粒的提取工艺。     

三七热压处理后皂苷类成分变化研究

目的：探讨热压灭菌对三七中皂苷类成分的影响。方法：采用RP-HPLC同时检测三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rd和人参皂苷Rg3在热压处理过程中的含量变化。结果：三七皂苷R1降低35.03%,人参皂苷Rg1降低39.41%、Re降低42.62%、Rb1降低34.94%、Rd降低23.71%,而稀有皂苷人参皂苷Rg2、Rh1、Rg3都有2～5倍的提高。结论：高温使三七中部分原生苷转化为相应的次级苷,增加了稀有皂苷的含量。