苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬及凋亡作用研究

目的:研究苦参碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞自噬及凋亡的作用,为苦参碱用于乳腺癌治疗提供理论依据。方法:苦参碱(终浓度为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 mg/mL)处理乳腺癌Bcap-37细胞24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)双染、流式细胞仪检测细胞凋亡率;用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态变化;运用Western-blot方法检测Cleaved PARP和Lc3b-Ⅰ/Lc3b-Ⅱ蛋白表达水平。苦参碱联合氯喹(chloroquine)(自噬抑制剂)处理Bcap-37细胞24 h后,运用MTT法检测细胞增殖抑制率的变化。实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计,计量资料用均数±标准差(x珋±s)表示,多组均数间比较用方差分析,两组均数比较用T检验,均以P<0.01为差异显著的检验标准。结果:苦参碱可显著抑制乳腺癌Bcap-37细胞增殖,作用呈浓度-时间依赖性;苦参碱诱导细胞凋亡,且凋亡率与苦参碱浓度成正比;经苦参碱处理后,Bcap-37细胞胞浆内出现大量囊性小泡,经透射电镜扫描证实细胞发生自噬;Western-blot法检测到Cleaved PARP和Lc3b-Ⅱ蛋白表达均上调。苦参碱联合氯喹作用于Bcap-37细胞后MTT法检测细胞增殖抑制作用明显加强(P<0.01)。结论:苦参碱可显著抑制Bcap-37细胞增殖;促进细胞凋亡;诱导细胞发生自噬现象;自噬抑制剂氯喹可增强苦参碱抑制细胞增殖的作用,提示自噬现象是一种细胞保护性反应。     

苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞增殖凋亡及JAK-STAT信号通路的影响

目的：观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡及JAK-STAT通路的影响。方法：苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，MW法检测对肝癌细胞增殖的影响，双荧光染色观察细胞凋亡率，RT-PCR法检测其对SMMC-7721细胞Stat3、Star5 mRNA的影响。结果：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制肝癌细胞增殖，促进其凋亡，并呈时间与剂量依赖性；二者均能下调Star3、Star5 mRNA表达水平。相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌细胞Stag、Star5 mRNA下调作用更显著。结论：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖、促进其凋亡，其机制可能与下调stat3、stat5的基因表达，抑制细胞信号转导通路有关。     

蒺藜皂苷对乳腺癌细胞Bcap-37的体外抑制作用

采用生长曲线法、MTT法、蛋白质含量测定以及形态学方法观察了蒺藜皂苷（STT）对于体外培养Bcap-37细胞抑制作用，结果显示：STT对于Bcap-37细胞增殖有较强的抑制作用，且呈明显的剂量与时间依赖关系，经STT作用后，细胞形态学表现为细胞变圆、皱缩，核固缩、浓聚。     

苦参碱和氧化苦参碱体外对肿瘤细胞增殖的影响

目的:比较研究苦参碱与氧化苦参碱体外抑制多种肿瘤细胞增殖的效果并初步探讨其构效关系。方法:不同剂量苦参碱与氧化苦参碱处理细胞,MTT法观察细胞增殖抑制,计算半数抑制浓度(IC₅₀)。结果:氧化苦参碱对大多数肿瘤细胞的IC₅₀均低于苦参碱,推测其抗肿瘤活性要大于苦参碱,原因可能与二者的分子构象差异有关。     

苦参碱对SiHa细胞增殖及其凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究苦参碱对宫颈癌Si Ha细胞增殖及其凋亡相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法:苦参碱作用于Si Ha细胞,倒置显微镜下观察其形态变化;MTT法检测苦参碱对Si Ha细胞增殖的影响,并筛选苦参碱作用的适当浓度及时间。Western blot法检测所筛选各浓度苦参碱对Si Ha细胞凋亡相关蛋白bcl-2与bax表达的影响。结果:同空白对照组相比,苦参碱作用后倒置显微镜下见Si Ha细胞出现皱缩、变圆,细胞质浓缩、水泡化等凋亡形态学改变。苦参碱能够抑制Si Ha细胞的增殖,且在一定时间、剂量范围内,呈时间-剂量依赖性。苦参碱能降低bcl-2蛋白表达量,增加bax蛋白表达量,差异具有显著统计学意义(P0.05)。结论:苦参碱对宫颈癌Si Ha细胞增殖具有抑制作用,可诱导其细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达从而降低Bcl-2/Bax比率可能是其机制之一。     

康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的观察康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞,分为对照组和康莱特不同浓度组(10、20、40μL/mL)。RPMI-1640培养基培养24 h后药物处理,采用MTT法检测康莱特注射液对MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Hochest荧光染色法检测细胞核变化,ELISA及Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果康莱特注射液作用12、24、48 h对MCF-7细胞增殖均有显著的抑制作用(P0.05,P0.01);与对照组比较,康莱特注射液作用48 h后G1/G0、G2/M期细胞比例增加(P0.001,P0.01),S期细胞比例下降(P0.01),细胞凋亡率升高(P0.05,P0.001),Bcl-2蛋白表达明显降低、Bax蛋白表达明显升高(P0.01,P0.001)。结论康莱特注射液能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制与降低Bcl-2蛋白表达和增加Bax蛋白活性有关。     

华蟾素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖迁移凋亡的影响

目的:研究华蟾素对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,用倒置显微镜观察不同浓度华蟾素对MDA-MB-231细胞形态的影响;CCK-8实验检测华蟾素对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;划痕实验检测华蟾素对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制作用;FITC/PI双染流式细胞术检测不同浓度华蟾素对MDA-MB-231细胞凋亡率的影响;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved capsase-3、Cleaved caspase-9和PTHrP的表达。结果:CCK-8结果显示华蟾素可以时间、浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞增殖;划痕实验结果表明华蟾素可抑制MDA-MB-231细胞迁移;流式细胞术结果表明华蟾素可浓度依赖性地诱导MDA-MB-231细胞凋亡;Western Blot结果表明,华蟾素可上调MDA-MB-231细胞中促凋亡蛋白Bax、Cleaved capsase-3、Cleaved caspase-9,下调抑凋亡蛋白Bcl-2。此外,华蟾素还可抑制MDAMB-231细胞中PTHrP的表达。结论:华蟾素通过线粒体途径诱导MDA-MB-231细胞凋亡可能是其抗三阴性乳腺癌的机制;华蟾素通过下调乳腺癌MDA-MB-231细胞中PTHrP进而抑制溶骨性骨转移的发生,有待于后续的动物实验来进行验证。     

氧化苦参碱对淋巴细胞增殖的影响

研究了氧化苦参碱对人扁桃体淋巴细胞和小鼠脾淋巴细胞在不同丝裂原存在时对增殖能力的影响。结果表明：根据人扁桃体淋巴细胞对ＰＨＡ，ＳＡＣ反应能力的不同，氧化苦参碱可使低反应性的人扁桃体淋巴细胞增殖能力提高，而对高反应性的人扁桃体淋巴细胞及正常小鼠脾细胞增殖则表现为抑制作用。提示氧化苦参碱对淋巴细胞增殖的影响和细胞状态密切相关。     

参芪扶正注射液对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究参芪扶正注射液对基底细胞样(basal-like型)乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖和凋亡的影响,探讨参芪扶正注射液对三阴性乳腺癌的治疗作用机制。方法:体外培养人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞,将其分为参芪扶正注射液组和空白组。采用噻唑蓝(MTT)比色法分别于24,48,72 h检测参芪扶正注射液对人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖的影响。采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期分布和凋亡情况。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blot)检测参芪扶正注射液对MDA-MB~(-2)31细胞p53正向细胞凋亡调控因子(PUMA)表达的影响。结果:参芪扶正注射液可抑制MDA-MB~(-2)31细胞增殖,高浓度者抑制作用强,即呈现浓度依赖性,体外培养48 h时抑制作用最显著。参芪扶正注射液将MDA-MB~(-2)31细胞阻滞于细胞周期的S期,进而诱导MDA-MB~(-2)31细胞凋亡。Real-time PCR和Western blot发现参芪扶正注射液可上调MDA-MB~(-2)31细胞PUMA蛋白和基因表达。结论:参芪扶正注射液可显著抑制人乳腺癌MDA-MB~(-2)31细胞增殖,导致细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调PUMA基因有关。     

红三叶总异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的研究红三叶总异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡的诱导作用。方法在体外细胞培养下,采用不同质量浓度红三叶异黄酮和5-Fu处理MCF-7细胞,MTT法测定红三叶总异黄酮抑制MCF-7细胞增殖的量-效关系;TUNEL法、流式细胞术分析其细胞凋亡率和周期分布。结果红三叶总异黄酮对MCF-7细胞增殖的抑制作用随药物质量浓度提高和作用时间延长而更加明显,而在低质量浓度时却出现轻微促细胞增殖现象。TUNEL法、流式细胞术分析结果表明,红三叶总异黄酮能诱导MCF-7细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,降低细胞增殖指数,且这种作用也存在剂量-效应关系。结论红三叶总异黄酮可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,具有抗肿瘤作用。     

苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的干预作用

目的：观察苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法：选择苦参碱为干预药物,以不同浓度梯度作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,采用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果：MTT结果显示,各干预组对HFL-1细胞生长均有显著抑制增殖作用,其强度呈时间-剂量依赖性。苦参碱作用于HFL-1细胞48 h后,各干预组细胞总凋亡率均明显高于对照组（P〈0.05）;与对照组比较,苦参碱各浓度组HFL-1细胞G0/G1期百分率显著上升（P〈0.05）。结论：苦参碱可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞增殖,并诱导其凋亡。     

苦参碱和氧化苦参碱对人肝癌细胞株 SMMC-7721凋亡的影响

目的：探讨苦参碱与氧化苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测SMMC-7721细胞增殖,并采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测SMMC-7721细胞凋亡。结果苦参碱与氧化苦参碱浓度为0.50～2.00 mg/ml时,细胞增殖抑制率均逐渐上升,呈药物浓度和作用时间的依赖性;同样浓度下（1.00 mg/ml）,苦参碱增殖抑制作用强于氧化苦参碱[24 h、48 h和72 h时苦参碱组分别为（42.39±0.04）%、（51.69±0.03）%、（78.98±0.05）%,氧化苦参碱组分别为（21.36±0.02）%、（36.16±0.02）%、（61.24±0.13）%;P均＜0.05]。苦参碱与氧化苦参碱浓度为0.25、0.50、1.00 mg/ml时SMMC-7721细胞凋亡率显著增高;同样时间点（48 h）,苦参碱对细胞凋亡的诱导强于氧化苦参碱[0.25、0.50、1.00 mg/ml时,苦参碱组凋亡率分别为（4.08±0.20）%、（4.32±0.19）%、（9.93±0.18）%,氧化苦参碱组分别为（2.20±0.18）%、（3.08±0.26）%、（9.01±0.20）%;P均＜0.05]。结论苦参碱和氧化苦参碱可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡。     

孕激素对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探索孕激素对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取2015年1月至2018年1月郑州大学第三附属医院收治的200例子宫肌瘤患者作为研究对象,标本均是在手术期间提取,且均进行原代细胞培养、Westem blot检测孕激素受体表达、原代肌瘤细胞的鉴定、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖和凋亡。结果:孕激素受体(PR)–M(+)在0 mol·L~(-1)巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、10~(-6) mol·L~(-1) MIF、10~(-5) mol·L~(-1) MIF、10~(-4) mol·L~(-1) MIF的增殖抑制率和凋亡率与PR–M(–)比较,差异具有统计学意义(P 0.05),同时随着MIF浓度增加,两组细胞的增殖抑制率逐渐增加,同时随着药物浓度的增加和作用时间延长,细胞凋亡率逐渐增加。结论:MIF对子宫肌瘤细胞具有抑制增殖和促进细胞凋亡作用,且可通过PR–M促进肌瘤发生发展。     

阿魏酸钠对人大肠癌Moser细胞和乳腺癌MCT7细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究大肠癌 Moser 细胞和乳腺癌 MCF7细胞对市售4种中药制剂(斑蟊酸钠、苦参素、华蟾素和阿魏酸钠)的敏感性,以及阿魏酸钠影响大肠癌细胞增殖的可能机理。方法:采用 MTT 法测定药物对细胞增殖的抑制率和药物间的协同抑制作用;酶联免疫法检测 CEA 表达水平;流式细胞法测定细胞周期。结果:4种中药对乳腺癌 MCF7细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,但只有阿魏酸钠可明显抑制大肠癌Moser 细胞的增殖;阿魏酸钠与5种化疗药物联合对 Moser 细胞有协同作用;阿魏酸钠对 Moser 细胞表达CEA 没有影响;阿魏酸钠可诱导 Moser 细胞凋亡。结论:斑蟊酸钠、苦参素和华蟾素对不同肿瘤细胞的抑制效果差异很大;阿魏酸钠不仅有抑制肿瘤细胞增殖的作用,还与化疗药物有协同效果;阿魏酸钠抑制 Moser 细胞增殖的机理似与转化生长因子信号传导途径无关。     

氧化苦参碱对结肠癌LOVO细胞增殖及凋亡的作用研究

目的:探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对人结肠癌LOVO细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用MTT法检测OM对LOVO细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测LOVO细胞凋亡率以及细胞周期分布;吉姆萨染色法观察用药前后细胞形态变化;荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测药物作用后p53 mRNA表达变化情况。结果:MTT法显示,OM在一定浓度范围(200μg/mL～5mg/mL)对人结肠癌LOVO细胞的生长有明显的抑制作用,对LPS诱导的LOVO细胞的过度增殖也具有明显的抑制作用。LOVO细胞经OM作用后光镜下可见细胞数量明显减少,细胞内空泡明显增多。流式检测表明OM可明显诱导LOVO细胞凋亡,使LOVO细胞周期停滞于S期。荧光定量PCR法显示,OM作用后LOVO细胞p53 mRNA表达明显下降。结论:OM能显著抑制人结肠癌LOVO细胞增殖,并诱导LOVO细胞凋亡,其机制可能与OM使LOVO细胞周期停滞于S期,下调LOVO细胞p53 mRNA表达有关。     

芦荟大黄素联用顺铂对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芦荟大黄素(AE)单用或联用顺铂(CP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,用5,10,20,30,40,50μmol·L-1AE,2,4,8,12,24,36μmol·L-1CP,或不同浓度AE联用CP处理乳腺癌MDA-MB-231细胞48 h,另设空白组,MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染和流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;Western blot分析Bcl-2相关X蛋白(Bax),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-x L蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,AE单用显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,半数抑制浓度(IC50)为22.21μmol·L-1,与CP联用时IC50为9.51μmol·L-1。联用指数CI501,表明两药物有协同作用;AE单用使细胞周期阻滞在G1期,并诱导细胞凋亡,联用CP则增强阻滞,凋亡率明显增加;两药联用显著抑制Bcl-2和Bcl-x L的表达,并上调Bax的表达,与空白组比较均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:芦荟大黄素抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞在G1期,并通过上调促凋亡蛋白和下调抗凋亡蛋白,诱导凋亡。与顺铂联用能增强其促凋亡作用,两药存在协同作用。     

苦参碱对NCI-N87胃癌细胞增殖凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨不同浓度苦参碱对体外培养的人胃癌细胞NCI-N87的增殖、凋亡及bcl-2蛋白表达的影响。方法:NCI-N87细胞经不同浓度苦参碱处理后,采用CCK-8法检测药物对肿瘤细胞的抑制作用,显微镜观察细胞形态学改变;应用流式细胞仪分析苦参碱对细胞凋亡和bcl-2蛋白的影响。结果:苦参碱浓度>3mg/mL,细胞毒作用较大;浓度在0.5～2.0mg/mL时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性;浓度在0.1mg/mL,对肿瘤细胞生长几乎无抑制作用。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,而bcl-2蛋白则随之下降。结论:苦参碱对人胃癌细胞NCI-N87增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡,下调bcl-2蛋白水平。     

苦参碱对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响

目的研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞的促凋亡作用。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,随机分组,实验组细胞加入苦参碱溶液,对照组细胞加入等量培养液。采用倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化,应用流式细胞术分别检测MCF-7细胞凋亡及线粒体跨膜电位。结果 苦参碱对MCF-7细胞有明显的凋亡促进作用,0.25～2 mg/m苦l参碱处理组细胞早期凋亡发生率介于(4.17±0.25)%～(19.63±0.17)%之间,与对照组自发早期凋亡率(1.10±0.08)%相比均有显著差异(P<0.05),并随药物浓度的提高,凋亡的发生率也相应增高,呈正相关;苦参碱能够使线粒体跨膜电位(△ψm)降低,与药物浓度呈负相关。结论 苦参碱对乳腺癌MCF-7细胞有明显的促凋亡作用,可能是通过某些途径引起线粒体跨膜电位的下降,进一步导致MMP通道开放的结果。     

苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及凋亡的影响,并分析其机制,探索二者之间潜在的关系。方法:采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测细胞增殖活力和凋亡率;自噬双标腺病毒法(mRFP-GFP-LC3)和透射电镜法检测细胞自噬水平;Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-3、cleavedCaspase-3、cleaved-Caspase-9的表达;运用自噬抑制剂(3-MA)和凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)对上述相关指标进行干预。结果:苦参碱在未加入抑制剂干预的情况下可显著抑制MCF-7细胞的增殖,提高凋亡率和自噬水平,可上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase9的表达(P<0.05或P<0.01)。加入自噬抑制剂(3-MA)后,细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05);加入凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)后,自噬水平显著升高(P<0.05)。结论:苦参碱可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞自噬,二者之...     

苦参碱对体外大鼠肝细胞凋亡的影响

苦参碱 (Ｍａｔｒｉｎｅ)是苦参、山豆根等中药中的主要药效成分 ,为四环喹嗪啶 (ｑｕｉｎｏｉｌｉｚｉｄｉｎｅ)类衍生物 ,属于生物碱类。临床上用于治疗病毒性肝炎等肝脏疾病[1] 。近年来 ,随着对细胞凋亡研究的不断深入 ,人们发现 :各种急、慢性肝病的发生、发展及肝脏恶性肿瘤的形成与肝细胞的异常凋亡密切相关。本研究即是从肝细胞凋亡的角度 ,观察ＭＴ对ＴＮＦ -α和ＡｃｔＤ所诱导的大鼠肝细胞凋亡的影响 ,以期探讨其治疗肝病的作用机制是否与抑制肝细胞凋亡有关。1　材料1 1　仪器　ＣＯ2 孵箱 (日本ＳＡＮＹＯ公司 ) ,流式细胞仪 (…