单抗C225致人肺鳞癌H-520细胞生长抑制和凋亡增加的研究

目的：观察表皮生长因子受体单克隆抗体C225对人肺鳞癌细胞系（H-520）生长、凋亡和周期分布的影响。方法：流式细胞检测H-520细胞EGFR表达比例,将鼠抗人EGFR一抗和FITC标记的羊抗鼠二抗加入细胞悬液中,孵育、漂洗重悬细胞后流式检测。MTT法测定C225抑制H-520细胞生长最佳浓度和最佳时间,将不同浓度C225加入指数生长的细胞培养液中,继续培养一定时间（48h）,检测细胞生长抑制率。流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期。结果：H-520细胞中EGFR表达比例高达82.25%。C225抑制H-520细胞生长的最佳浓度是40nmol/L,最佳作用时间是72h。细胞凋亡实验结果显示,H-520细胞自然凋亡率为5.56%±0.62%,C225可使其凋亡百分率上升到13.75%±0.83%（P〈0.05）。细胞周期分布显示40nmol/L C225可使细胞阻滞于G0＋G1期,S期细胞比例下降。结论：C225对H-520细胞生长抑制作用,可能与细胞G0＋G1期阻滞后凋亡有关。     

表皮生长因子受体单克隆抗体C225对肺鳞癌细胞系放射增敏作用研究

目的 观察表皮生长因子受体单克隆抗体C225与60Co γ线对人肺鳞癌细胞系(H-520)的杀伤作用,探讨C225联合照射治疗非小细胞肺癌的可行性.方法 细胞成克隆实验中单纯照射(对照组)和照射+100 nmol/L C225组(实验组)给予0、1…2 4 6、8、10 Gy照射,培养10 d后计数≥50个细胞克隆.采用多靶单击模型进行数据处理,拟合细胞存活曲线,计算增敏比(D.值比).细胞凋亡实验均照射0、2、4、8 Gy后继续培养72 h,收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡.细胞周期检测设对照组(不处理)、C225组(100 nmol/L)、照射组(8 Gy照射)和C225联合照射组(100 nmol/LC225+8 Gy),照后48 h收集细胞,流式细胞仪检测周期分布.结果 细胞克隆存活实验结果表明,扣除C225毒性影响后实验组存活分数比对照组低(F=6.36,P＜0.05),增敏比为1. 35.细胞凋亡实验结果显示,C225组4个剂量点凋亡百分率分别为13.75%±0.83%、25.12%±1.60%、46.12%.4-2.60%、50.51%±4.06%,对照组的分别为5.56%±0.62%、13.86%±0.80%、25.36%±1.02%、29.89%±2.09%(F=4.72,P＜0.05).细胞周期分布显示100 nmo//L C225可使细胞阻滞于G0+G1期,单纯照射阻滞于G2+M期,两者联合后同时出现G0+G1、G2+M期阻滞,三者均使S期细胞比例下降.结论 C225对H-520细胞具有放射增敏作用,其机制可能与细胞G0+G1期阻滞和诱发凋亡有关;结果 为临床上二者联合治疗非小细胞肺癌提供了理论基础.     

西妥昔单抗增强放疗对人胃癌细胞株MGC803及BGC823的作用及其机制

目的 观察西妥昔单抗（C225）联合放疗对人胃癌细胞株MGC803及BGC823增殖的影响,并探讨其机制。方法 （1）采用MTT法观察C225联合放疗对细胞生长增殖的影响,评价两者联合效应;（2）采用FCM检测C225联合放疗对细胞周期分布及细胞凋亡的影响;（3）通过Western blot法检测C225联合放疗对EGFR细胞信号蛋白及其下游信号蛋白AKT、MAPK磷酸化的影响。结果 （1）当C225联合三种不同剂量放疗时,均可显著抑制细胞的增殖,两者具有协同作用。（2）单用C225可使细胞阻滞于G0/G1期,并减少S期细胞比例。在C225作用后,G0/G1期及S期MGC803细胞比例分别为67.3％及24.8％,BGC823细胞则分别为71.9％及18.8％。单用放疗可使细胞阻滞于G2/M期。在放疗作用于MGC803细胞及BGC823细胞后,G2/M期比例分别为18.2％及19.5％。当C225与放疗联合作用时,G2/M期MGC803细胞及BGC823细胞比例进一步升高,分别为25.7％及26.4％,而S期细胞比例进一步下降,分别为18.6％及13.5％。（3）在C225处理后MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为4.9％及9.9％,放疗处理后MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为11.7％及19.8％,与对照组相比差异均具有统计学意义。当C225与放疗联合作用时,MGC803细胞及BGC823细胞的凋亡率分别为20.1％及47.3％,与单用放疗组相比差异均具有统计学意义。（4）C225与放疗联合应用时,可使细胞EGFR信号蛋白表达下降,并能使其下游信号蛋白AKT、MAPK磷酸化活性降低。结论 （1）西妥昔单抗可增强放疗对MGC803和BGC823细胞株的生长抑制作用;（2）其增敏作用的机制可能与抑制EGFR信号转导通路、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡增加等有关。     

抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela细胞的影响

目的 研究抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela细胞的生长抑制作用.方法 采用MTT法检测抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、A549、NCI-H520、Hela细胞的生长抑制作用;采用流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期分布及凋亡率.结果 抑瘤宁可明显的抑制MDA-MB-231、NCI-H520、Hela、A549细胞的生长.流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期分布及凋亡率结果显示,各实验组S期细胞百分率明显升高,G0-G1期细胞百分比明显下降,细胞被阻滞于S期,细胞凋亡率升高.结论 抑瘤宁对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和凋亡有关,对NCI-H520、A549细胞及人宫颈癌Hela细胞有明显的生长抑制作用.     

西妥昔单抗对乳腺癌MDA-MB-231细胞放射敏感性影响的研究

目的:探讨西妥昔单抗(C225)对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的放射增敏作用及其机制。方法:体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞。使用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测浓度分别为1、5、25、125和625nmol/L C225对乳腺癌MDA-MB-231细胞株的增殖抑制率,计算C225的半数抑制浓度(IC50),并将20%IC50作为后续实验的浓度;观察C225联合X射线照射对MDA-MB-231细胞株增殖抑制的影响,并评价两者的联合效应。采用克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞存活率,观察C225对细胞放射增敏性的影响,按多靶单击模型拟合细胞存活曲线,计算反映放射敏感性指标的细胞存活分数(SF2)、平均致死剂量(D0)、准阈剂量(Dq)和放射增敏比(SER)。流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况。结果:1)1、5、25、125、625nmol/L C225对细胞的增殖抑制率分别为(3.66±0.26)%、(16.48±1.78)%、(35.41±2.46)%、(47.84±1.67)%和(62.49±2.94)%,C225作用于细胞48h的IC50为(151±2.98)nmol/L。2、4、6和8Gy的照射对细胞的增殖抑制率分别为31.12%、47.95%、59.12%和68.54%;当30nmol/L的C225与上述剂量的照射联合使用,细胞增殖抑制率分别为66.27%、82.03%、89.86%和93.03%,两者表现出协同作用,P<0.05。2)克隆形成实验显示,C225+照射组与单纯照射组相比,克隆形成能力下降,SF2、D0及Dq均下降(P<0.05),放射增敏比(SERD0)为1.41。3)细胞凋亡实验结果显示,C225+0、2、4、6、8Gy照射组凋亡率分别为(11.76±0.81)%、(21.46±1.40)%、(38.23±1.76)%、(44.01±1.23)%和(50.41±1.87)%,均高于单独照射组相应剂量点的凋亡率,分别为(2.94±0.58)%、(10.72±0.34)%、(21.14±1.08)%、(24.12±0.98)%和(30.05±2.64)%,P<0.05。C225联合照射明显增强了照射诱导的细胞凋亡。4)细胞周期分布显示,单独使用C225使细胞阻滞于G0/G1期,并减少S期细胞比例,C225作用后G0/G1期及S期细胞比例分别为(58.35±1.66)%和(31.12±0.23)%,P<0.05;单独照射使细胞阻滞于G2/M期,G2/M期细胞比例为(28.25±1.55)%,P<0.05;C225与照射联合作用后,G0/G1期细胞比例进一步升高,为(59.90±2.21)%,S期细胞比例进一步降低,为(13.67±1.34)%,P<0.05。结论:C225对MDA-MB-231细胞具有放射增敏作用,其机制可能与C225增强放射线对细胞的生长抑制作用、抑制肿瘤细胞亚致死性损伤的修复、增加细胞凋亡和诱导细胞G0/G1期阻滞有关。     

重组人内皮抑素对肺鳞癌细胞抑制作用的体外实验

 目的 探讨重组人内皮抑素（恩度）对肺鳞状细胞癌细胞系H-520细胞生长的影响及其机制。 方法 应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测恩度不同浓度和作用时间对H-520细胞的生长抑制作用;Hoechst33258染色观察恩度处理后 细胞凋亡形态并通过流式细胞术对凋亡细胞进行定量及检测细胞周期分布。采用划痕修复实验检测内皮抑素处理后H-520细胞的 迁移能力。 结果 恩度可以抑制H-520细胞的生长,且呈时间-剂量依赖性;恩度可以促进H-520细胞的凋亡,随时间延长,凋亡率显著增加,与 对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.01）;恩度可以引起H-520细胞周期分布变化,细胞发生G₀/G₁ 期阻滞。划痕实验表明,恩度可以使H-520细胞体外迁移能力显著下降,与对照组相比,24h划痕修复率差异具有显著意义。 结论 恩度对H-520细胞增殖具有明显抑制作用;其主要机制为促进细胞凋亡,调整细胞周期分布和减弱细胞迁移能力。     

紫杉醇对p53突变型肺癌细胞株H322的生长抑制作用

目的:通过体外实验评价紫杉醇对p53突变型肺癌细胞株H322的生长抑制作用. 方法: 紫杉醇不同作用浓度不同作用时间处理H322细胞后,应用MTT法检测紫杉醇对肺癌细胞生长抑制作用,通过流式细胞术分析细胞周期及凋亡的变化,荧光显微镜观察细胞核形态的变化. 结果: 紫杉醇对H322的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),(10-1000)nmol/L的浓度对H322生长抑制差异不显著(P>0.05).浓度≤100nmol/L时,G2-M期比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡比例在低浓度范围内(0.1-10)nmol/L呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低.时间依赖性实验中,10nmol/L作用时,凋亡发生呈时间效应;G2-M期所占比例在12h达最高.1000nmol/L作用时,G2-M期阻滞程度和持续时间均高于10nmol/L,但不如低浓度诱导凋亡出现得早.典型凋亡细胞出现浓缩、成片的染色质.紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05).结论: 体外实验中,紫杉醇对H322细胞有明显生长抑制作用,并且这种作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞影响较小,却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的.     

西妥昔单抗联合化疗药物的方案优化及其机制研究

目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）的单克隆抗体西妥昔单抗（Cetuximab,C225）与化疗药物联合作用于大肠癌和肺癌细胞的最佳联合方案及其联合机制。方法：采用MTT法测定不同药物单药、两药及三药联合分别对大肠癌细胞LoVo和肺腺癌细胞A549的IC50值;计算不同联合方案的联合指数（combination index,CI）,以确定最佳联合方案;Western blot法检测不同给药方案对EGFR下游信号通路的关键分子AKT、MAPK磷酸化表达的影响;流式细胞仪检测不同联合方案对细胞周期分布及凋亡比例的影响。结果：C225与化疗药物联合可增强其对细胞的杀伤作用,且以先化疗药物、后C225的序贯方案协同作用最强。先化疗药物、后C225的序贯方案对AKT、MAPK磷酸化的抑制明显强于其它联合方案,并且能诱导更多肿瘤细胞发生凋亡以及产生G2/M期阻滞。结论：C225与化疗药物联合存在最佳联合方案,其机制可能与药物对EGFR下游信号通路关键分子的磷酸化抑制及促进细胞凋亡和影响细胞周期分布有关。     

GW843682X对鼻咽癌细胞周期和凋亡的影响

[目的]研究GW843682X对鼻咽癌5-8F细胞周期和凋亡的影响。[方法]培养鼻咽癌5-8F细胞,0、6.25、12.5、25、50、100、200和400nmol/L的GW843682X处理后,用CCK8试剂检测药物对细胞增殖的影响。分别以0、250,500,1000nmol/L的GW843682X处理5-8F细胞48h后,用PI单染流式细胞仪检测药物对5-8F细胞周期的影响。用Annexin V-FITC双染细胞后,经流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。[结果]CCK8比色结果显示,GW843682X能抑制鼻咽癌5-8F细胞的增殖,当药物浓度大于50nmol/L时,细胞增殖显著受抑。细胞周期检测结果显示,与阴性对照组比较,GW843682X增加了G2/M期细胞阻滞,减少了G0/G1期细胞比例（P〈0.05）。细胞凋亡检测结果显示,与对照组相比,随着GW843682X浓度的增加,凋亡细胞所占比例逐渐增大,当药物浓度达到500nmol/L和1000nmol/L时,凋亡细胞所占比例显著增加（P〈0.05）。[结论]GW843682X能够显著抑制鼻咽癌5-8F细胞的增殖,可以诱导细胞阻滞于G2/M期,其诱导5-8F细胞凋亡呈一定的剂量依赖性。     

重组人内皮抑素对肺鳞癌放射增敏作用的体外实验研究

目的 探讨国产重组人内皮抑素是否对肺鳞癌细胞系H-520具有放射增敏作用.方法 取指数生长期的人肺鳞癌细胞系H-520细胞,用成克隆实验检测内皮抑素的细胞毒性和各实验组的克隆形成能力,计算各组细胞存活分数,利用多靶单击模型拟合细胞存活曲线.流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期分布变化及活化的Caspase蛋白片段水平.结果 成克隆实验中内皮抑素联合照射组较照射组D0、Dq、D10、SF2值均低,放射增敏比为1.50(D0值之比).流式细胞术检测细胞凋亡示内皮抑素+照射组细胞凋亡率分别为22.38%±1.61%、35.01%±1.16%、46.83%±2.06%、64.08%±4.28%,照射组分别为4.27%±0.29%、14.3%±1.15%、28.49%±1.58%、54.79%±1.89%,两组凋亡率差异有统计学意义(t=19.17、17.79、25.64、3.44,P值均<0.05).内皮抑素可诱导H-520细胞G0+G1阻滞,而照射则诱导G2+M期阻滞.内皮抑素+照射组活化Caspase蛋白片段表达增加(62.7%±1.9%)较对照组(12.1%±0.1%)、内皮抑素组(54.6%±1.0%)和照射组(34.1%±1.2%)显著增高(t=46.69、6.55、22.54,P值均<0.05;).结论 内皮抑素可通过抑制H-520细胞牛长、促进凋亡、细胞周期重分布来达到放射增敏作用.     

非小细胞肺癌组织中低表达microRNA表达谱

  目的  检测非小细胞肺癌患者手术标本组织中低表达microRNA的表达谱,为进一步阐述肿瘤的发生发展机制和提供诊断或治疗的新策略提供基础,积累以国内患者为数据来源的microRNA资料。  方法  利用芯片技术初步筛选在非小细胞肺癌组织中低表达microRNA,进而利用实时荧光定量PCR验证癌组织和正常肺组织表达水平的差异。  结果  芯片结果发现有20种microRNA在非小细胞肺癌组织中发生明显下调。实时荧光定量PCR验证发现其中的13种microRNA表达量显著降低,分别是hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-143、hsa-miR-519a、hsa-miR-223-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-520c-3p、hsa-miR-489、hsa-miR-27a、hsa-miR-373、hsa-miR-125b、hsa-miR-27b、hsa-miR-142-5p、hsa-miR-206。  结论  在非小细胞肺癌组织中发现一些表达水平显著下调的mciroRNA,这些microRNA可能与肿瘤的发生发展或某些功能相关。      

西妥昔单抗对肺腺癌ＳＰＣ-Ａ-１细胞放射增敏作用研究

目的　探讨西妥昔单抗（Ｃ２２５）联合放射治疗对肺腺癌ＳＰＣ-Ａ-１细胞的放射增敏作用。方法　成克隆细胞形成实验分为对照组（６ＭＶ-Ｘ线照射）和实验组（６ＭＶ-Ｘ线照射＋Ｃ２２５）,分别给予０、１、２、４、６、８Ｇｙ照射后培养１０天,计数≥５０个细胞的克隆数。采用多靶单击模型进行数据处理,拟合细胞存活曲线,计算细胞增敏比（ＳＥＲ）。用Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色观察细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果　成克隆细胞形成实验结果显示,扣除Ｃ２２５毒性影响后实验组的存活分数比对照组低（Ｐ＜０.０５）,ＳＥＲＤ０为１.４２。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色荧光显微镜下观察,实验组细胞核呈波纹状,染色质浓缩。细胞凋亡实验结果显示,对照组和实验组０、２、４、８Ｇｙ的凋亡率分别为（４.４５±０.４５）％、（１１.０９±１.０３）％、（２０.３０±０.７０）％、（２３.９１±０.３７）％和（１１.００±１.４２）％、（２０.１０±１.５８）％、（３６.９０±１.８８）％、（４０.４１±１.１５）％（Ｐ＜０.０５）。结论　Ｃ２２５对ＳＰＣ-Ａ-１细胞系有放射增敏作用,其机制可能与诱发细胞凋亡有关,该结果为临床综合治疗肺癌提供了理论基础。     

Overcoming Osimertinib Resistance in Advanced Non-small Cell Lung Cancer

Osimertinib is used as a first-line treatment for metastatic non-small cell lung cancer with positive epidermal growth factor receptor mutations based on the results of the FLAURA trial. However, as with any other epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor, resistance also develops for osimertinib. Various genetic aberrations associated with the molecular heterogeneity of cancer cells contribute to osimertinib resistance. It is also important to choose an appropriate subsequent treatment for osimertinib-resistant non-small cell lung cancer. In this overview, we discuss the underlying mechanisms of osimertinib resistance and the efficacy of possible subsequent treatment measures.     

重组腺病毒TRAIL基因联合抗EGFR靶向药物对肺癌细胞增殖的影响

目的:观察重组腺病毒TRAIL基因制剂联合抗EGFR靶向药物对H460肺癌细胞株及裸鼠移植瘤增殖的影响。方法:重组腺病毒TRAIL基因治疗制剂分别与EGFR信号通路靶向治疗药物Iressa、Tarceva、以及C225联合应用于H460肺腺癌细胞株,采用MTT法以及流式细胞仪检测不同用药方案的抗肿瘤作用;在裸鼠H460肺癌模型中验证重组腺病毒TRAIL制剂与C225的协同抗肿瘤作用。结果:在体外实验中发现Iressa和Tarceva可以增加重组腺病毒TRAIL基因制剂对H460肺癌细胞的抗肿瘤作用(P<0.05);重组腺病毒TRAIL基因制剂在体外实验中与C225并不存在协同效应(P>0.05),但在裸鼠H460肺癌模型中重组腺病毒TRAIL基因制剂与C225有明显的协同抗肿瘤作用(P<0.05)。结论:本研究初步探讨了基因治疗与靶向治疗的联合抗肿瘤作用,实验发现EGFR信号通路上的靶向治疗药物包括小分子酪氨酸激酶抑制剂以及EGFR单克隆抗体均可以增加重组腺病毒TRAIL基因制剂抗肺癌作用。     

多西紫杉醇对非小细胞肺癌细胞株生长及对COX-2蛋白表达的影响

目的：在体外研究不同浓度的多西紫杉醇（泰索帝）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株生长及对胞内环氧化酶-2（COX-2）蛋白表达的影响。方法：采用人NSCLC细胞株A549和NCI-H460作为研究对象,体外药物敏感试验（MTT）检测不同浓度和作用时间的泰索帝对细胞增殖的抑制效应;应用免疫细胞化学的方法观察分别经泰索帝1、2、4nmol／L作用48小时后,细胞内COX-2蛋白的表达情况。结果：泰索帝住体外对NSCLC细胞株A549的生长抑制作用在药物浓度加大到10nmol／L后处于平台期,对NCI-H460存浓度加大到4nmol／L后处于平台期;两株细胞分别经泰索帝1、2、4nmol／L作用48小时后,细胞内COX-2蛋闩的表达同对照组（不加药物组）无统计学差异（P〉0．05）。结论：泰索帝住体外对NSCLC细胞株A549和NCI-H460的生长有明显的抑制作用,但不影响细胞内环氧化酶-2蛋白的表达。     

KCTD10抑制非小细胞肺癌中Hippo通路活性

目的:检测KCTD10在非小细胞肺癌中的表达水平及其对Hippo通路的影响。方法:采用免疫组化方法检测KCTD10在非小细胞肺癌组织标本中的表达;采用Western blot检测YAP、P-YAP、P-LATS1、MMP7、CyclinE在非小细胞肺癌细胞中的表达;采用集落形成实验和Transwell实验检测细胞增殖和迁移。结果:KCTD10在非小细胞肺癌组织及细胞系中高表达;KCTD10过表达促进A549细胞增殖和迁移;过表达KCTD10的A549细胞系YAP的表达总量未见明显变化,但抑制了P-YAP、P-LATS1的表达,促进了MMP7、CyclinE的表达。结论:KCTD10抑制了非小细胞肺癌中Hippo通路活性;KCTD10可能作为非小细胞肺癌防治的一个潜在靶向分子。     

Cetuximab治疗非小细胞肺癌的进展

表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中存在过表达.Cetuxumab(C225,erbitux)是一种单克隆抗体,可竞争性结合EGFR细胞外配体区,抑制肿瘤生长,与放化疗有协同作用.本文综述cetuxumab联合放化疗治疗晚期NSCLC的临床前和临床资料,显示出cetuxumab具有良好耐受性.