醛固酮介导心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(FBs)增殖及对诱导型一氧化氮合成酶一氧化氮(iN-OS-NO)活性的影响。方法以培养的FBs为模型,用醛固酮剌激FBs增殖,螺内酯阻断醛固酮的作用,检测FBsNO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达,用3H-胸腺嘧啶掺入量作为反应FBs增殖的指标。结果醛固酮呈浓度依赖性的促FBs核酸合成速率明显增高,降低FBsNO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达;螺内酯能明显抑制醛固酮介导的FBs核酸合成速率增高,与醛固酮剌激组相比差异显著(P<0.01)。同时发现醛固酮剌激组NO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01)。螺内酯抑制醛固酮介导的FBs的上述作用。醛固酮干预下FBs核酸合成速率与NO含量及iNOS活性呈显著负相关(r分别为-0.932和-0.928,均P<0.01)。结论醛固酮通过降低iNOS-NO剌激FBs增殖,螺内酯能逆转上述作用。     

依那普利拉对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及NOS/NO系统的影响

目的：观察血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂（ACEI）依那普利拉（Ena）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（CFb）增殖及其对一氧化氮合酶/一氧化氮系统（NOS/NO）的影响，探讨Ena抑制心肌成纤维细胞增殖的初步机制。方法：培养的新生Wistar大鼠CFb，分为对照组、模型组和3个剂量Ena给药组，采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb，四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖；流式细胞仪测定细胞周期；硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFb培养液中NOS/NO活性。结果：Ena能够显著抑制AngⅡ诱导的CFb增殖，Ena 3个剂量组作用24、48和72 h时间点的MTT值与模型组比较，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，Ena能提高细胞周期G₀/G₁百分率，降低S期百分率，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较， Ena能够提高CFb上清液中NOS/NO 水平，且随着用药剂量和作用时间增加，NOS活性和NO含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：Ena抗CFb增殖的作用与提高CFb NOS/NO 系统活性，拮抗AngⅡ的生物效应有关。     

丹参抗成纤维细胞增殖作用的分子机制研究

目的 探讨丹参抗成纤维细胞增殖作用的有效成分及分子作用机制。方法 采用索氏提取法制备丹参多种提取物及萃取部位;以抗人增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）增殖的活性为导向,MTS法筛选活性部位,流式细胞仪检测细胞周期; UPLC-Q/TOF法分析丹参活性成分;通过反向对接预测试药抗细胞增殖的机制,RT-PCR检测caspase-3、MAP2K1、MAPK1增殖相关基因的表达水平。结果 丹参石油醚提取部位有较强的抗HSF增殖的活性,能显著增加G₀/G₁ 期细胞的比例,降低增殖指数（PI）,其主要活性成分为丹参酮类化合物;反向对接预测结果显示,丹参酮类化合物抗HSF增殖机制主要与调节caspase-3和MAP2K1等靶点及其相关通路有关;隐丹参酮能够上调caspase-3基因的表达,下调MAP2K1、MAPK1基因的表达,与预测结果相吻合。结论 丹参抗HSF增殖作用的机制与丹参酮类成分调节MAPK、VEGF等信号通路有关。     

靶向沉默SIRT1对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探究沉默信息调节因子1(SIRT1)对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响作用.方法 应用转化生长因子-β1处理乳鼠原代心肌成纤维细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测SIRT1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达水平;Western blot法检测SIRT1、α-SMA的蛋白表达水平;MTT法检测心肌成纤维细胞的细胞增殖活性;使用LipofectamineTM 2000 Reagent向乳鼠原代心肌成纤维细胞中转染siRNA-SIRT1.结果 转染siRNA-SIRT1的心肌成纤维细胞,SIRT1蛋白和mRNA 表达下降,同时α-SMA蛋白和mRNA表达下降;转染siRNA-SIRT1明显抑制心肌成纤维细胞的增殖活性.结论 siRNA-SIRT1对心肌成纤维细胞增殖活性有明显抑制作用,SIRT1可能成为心脏结构重构防治的新靶点,其调控剂的应用将为心肌纤维化的防治提供新的思路和方案.     

阿魏酸钠抑制心肌成纤维细胞增殖的作用及机制

目的:研究阿魏酸钠(SF)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用及其机制。方法:培养新生鼠心肌成纤维细胞分为3组:对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组和AngⅡ+SF组。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期改变;免疫荧光法检测TGFβ1蛋白表达。结果:AngⅡ作用24h后MTTOD值显著高于对照组(P<0.01)。不同浓度SF(0.04mg/ml,0.08mg/ml,0.16mg/ml)组MTTOD值均显著低于AngⅡ组(P<0.01),呈剂量依赖性。AngⅡ组S期细胞百分率明显高于对照组,G0/G1期细胞百分率则明显低于对照组(P<0.01)。AngⅡ+SF组S期细胞百分率显著低于AngⅡ组,G0/G1期细胞百分率显著高于AngⅡ组(P<0.01),且呈剂量依赖性。AngⅡ组TGFβ1蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),AngⅡ+SF组显著低于AngⅡ组(P<0.01)。结论:阿魏酸钠可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其效应呈现剂量依赖性,作用机制与降低TGFβ1蛋白表达有关。     

红景天总黄酮对大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用

目的:研究红景天总黄酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFB)增殖的抑制作用,探讨红景天总黄酮改善心肌纤维化的作用机制。方法:采用TGF-β1(5 μg·L^-1)诱导大鼠CFB增殖,构建心肌纤维化细胞模型。将正常培养的大鼠CFB分为对照组、模型组和25、50及100 mg·L^-1红景天总黄酮组。给药48 h后,MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ)的水平,检测上清液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的水平。结果:MTT法检测,与对照组比较,模型组细胞活力明显升高(P<0.01);与模型组,红景天总黄酮各剂量组细胞活力均明显下降(P<0.05)。T-SOD和MDA检测,与对照组比较,模型组细胞T-SOD活性下降(P<0.05),MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,50和100 mg·L^-1组细胞T-SOD活性明显升高(P<0.01),25和50 mg·L^-1红景天总黄酮组MDA水平明显下降(P<0.05)。GSH-Px和GSH检测,与对照组比较,模型组细胞GSH-Px活性及GSH水平均明显降低(P<0.01);与模型组比较,红景天总黄酮各剂量组细胞GSH-Px活性和GSH水平均升高(P<0.05)。ColⅠ和Col Ⅲ水平测定,模型组ColⅠ和Col Ⅲ水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,红景天总黄酮各剂量组细胞2种蛋白水平均明显下降(P<0.05)。结论:红景天总黄酮可以抑制大鼠CFB的增殖,并可能经抗氧化应激途径改善心肌纤维化。     

依那普利拉对再灌心肌超微结构的影响

血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）对再灌心肌有保护作用，可消除再灌损害（RI）所致的心律失常，使心肌乳酸脱氢酶（LDH）和磷酸肌酸激酶（CPK）记出减少[1]。本文用定性和定量的方法观察依那普利拉对再灌心肌超微结构的影响，从形态学证实依那普利拉对再灌心肌保护作用并探讨其机理，为临床防治心肌RI提供一定的理论依据。1材料与方法1．1动物模型制备：3月龄SD雌性大鼠22只，体重180－250g，3％戊巴比妥钠60mg／kg腹腔注射麻醉，气管切开机械通气，打开胸腔暴露心脏，于左心耳下缘约1mm处，用3／8Cr，3×6不锈钢圆针，3－0丝线穿过…     

心肌营养素-1在高静水压刺激心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的 探讨心肌营养素-1（CT-1）在高静水压刺激心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法 用160mmHg的高静水压刺激原代培养的心肌成纤维细胞，同时以CT-1的反义寡核苷酸进行干预。分别用MTT法检测心肌成纤维细胞的增殖，放免法检测血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的浓度，Western blotting检测CT-1蛋白的表达。结果 高静水压能明显促使心肌成纤维细胞增殖，AngⅡ分泌增加，CT-1合成上调，而CT-1的反义寡核苷酸能抑制高静水压诱导的细胞增殖和AngⅡ分泌。结论 CT-1参与高静水压的促心肌成纤维细胞增殖作用，且这一作用与肾素血管紧张素系统（RAS）有关。     

肾上腺髓质素对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:研究肾上腺髓质素(ADM)对幼年大鼠心肌成纤维细胞(FBC)增殖的影响,并探讨其可能的作用受体.方法:用差速贴壁分离法获得心肌成纤维细胞为材料,用免疫组化的方法鉴定细胞,并绘制生长曲线.用MTT比色法测定细胞增殖.结果:①ADM对基础状态下的FBC增殖无明显抑制作用,但能呈浓度依赖性地抑制Ang Ⅱ刺激的FBC增殖.②CGKP8-37和ADM22-52均能部分拮抗ADM对Ang Ⅱ的抑制作用,而二者合用几乎能完全拮抗.CGRP8-37对ADM的拮抗作用强于ADM22-52.结论:①M具有浓度(10-8M～10-5M)依赖性地抑制Ang Ⅱ介导的FBC增殖的作用.②心肌成纤维细胞上可能同时存在CGRP受体和ADM特异性受体,但其作用可能更多通过CGRP受体.     

粉防己碱对心肌成纤维细胞增殖、活化的影响

目的： 探讨粉防己碱（tetrandrine,Tet）对大鼠心肌成纤维细胞增殖、活化的影响。方法： 采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8C,CCK-8）的方法检测不同浓度Tet对心肌成纤维细胞增殖的抑制作用;采用蛋白质印迹（Western blot）法检测Tet对由转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β）诱导的心肌成纤维细胞 β-链蛋白（β-catenin）、波形蛋白（vimentin,Vm）、纤连蛋白（fibronectin,Fn）及平滑肌α 肌动蛋白（smooth muscle α-actin,SMA）的表达上调的影响作用;采用实时荧光定量PCR的方法检测Tet作用下,TGF-β诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原（collagen-1,Col-1）和Ⅲ型胶原（collagen-3,Col 3）的表达上调的变化。结果：CCK-8检测结果显示,分别用0.5、1、2、4、8 μmol/L的Tet处理心肌成纤维细胞,其增殖活力分别下降至对照组的94.4%、84.9%、74.9%、63.8%、50.3%,差异有统计学意义（所有P值<0.05;1、2、4、8 μmol/L处理组P值<0.001）。Western blot检测结果显示：5 μg/L 的TGF-β显著上调β-catenin、Vm、Fn及SMA的表达（P值分别为0.001、0.008、0.010、0.001）,而用0.5 μmol/L的Tet预处理心肌成纤维细胞后,可以阻断由TGF-β诱导的β-catenin、Fn、SMA的表达上调（P值分别为0.009、0.005、0.019）,但不改变Vm的表达变化（P>0.05）。荧光定量PCR检测结果表明：用0.5 μmol/L的Tet预处理心肌成纤维细胞,可以减弱由TGF β诱导的Ⅰ型及Ⅲ型胶原的表达上调,差异有统计学意义（P<0.001）。结论：Tet可以显著抑制心肌成纤维细胞的增殖,并阻断由TGF-β诱导的心肌成纤维细胞活化,据此推断,Tet可能具有抗心肌纤维化的作用,进而阻断心肌重塑。     

人肾间质纤维化成纤维细胞体外增殖过程中cyclinD1的表达及意义

目的 探讨细胞周期素D1（cyclinD1）表达与人肾间质成纤维细胞（hRIFs）体外增殖的关系。方法 采用组织块培养法获取hRIFs并鉴定;用免疫细胞化学SABC法和图像分析技术检测体外培养第1、3、5、7和9天hRIFs的细胞总量、cyclinD1表达阳性的细胞数量以及阳性细胞的平均光密度值。结果 体外培养1～9d,hRIFs细胞总量逐渐增加,生长曲线呈“S”形,第3～5天细胞数量增长最迅速为对数生长期,第7～9天细胞数量增长最平缓;表达cyclinD1阳性细胞的百分比在对数生长期内最多,第3、5天cyclinD1平均光密度值显著高于其他时间点。结论 cyclinD1表达量增加与hRIFs的体外增殖速度有密切关系,可能在肾间质纤维化形成过程中发挥重要作用。     

芍药苷对异丙肾上腺素诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原产生的影响及其机制研究

目的 观察芍药苷(PEF)对异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原产生的影响,并探讨其机制.方法 体外培养的心肌成纤维细胞,待细胞生长到融合状态时加入不同浓度的PEF(10或100 μ mol/L)预处理2h,然后加入ISO(10-5 mol/L)作用48 h.用四唑盐比色实验(MTT)检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原和心肌营养素-1(CT-1)mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量;Western blot和DCFH-DA荧光法分别检测CT-1蛋白和细胞内活性氧(ROS)的水平.结果 ISO能明显诱导心肌成纤维细胞的增殖,并能显著增加Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达和含量,同时CT-1的mRNA和蛋白表达以及细胞内ROS的水平也显著升高,而预先应用不同浓度的PEF处理后,上述效应明显减弱.结论 PEF能抑制ISO诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原产生,其机制可能与降低细胞内ROS的产生进而下调CT-1的表达有关.     

胱抑素C对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨胱抑素C（CysC）高表达对大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖能力的影响。方法 取出生1～3d的Sperague-Dawley（SD）清洁级大鼠10只,体质量10～15g,差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞;采用Gateway技术构建重组CysC腺病毒高效表达载体(Ad-CysC)并体外转染大鼠CFs;将对数生长期的大鼠CFs随机分成正常细胞组（PBS组）,携有绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒组（Ad-GFP组）及CysC腺病毒高表达组(Ad-CysC组)。采用蛋白免疫印迹技术（WB）检测CysC蛋白在CFs中的表达情况,通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法检测CysC高表达对CFs增殖能力的影响。结果 经DNA测序及WB结果分析,CysC腺病毒高效表达载体构建成功,转染CFs 24h后（MOI=200）,Ad CysC的转染效率高达90%以上;用重组CysC腺病毒转染CFs后, CysC蛋白在24h即有明显的表达上调（P<0.05）;与PBS组及Ad-GFP组相比,转染Ad-CysC的CFs在72h的 BrdU摄取率显著提高（P<0.05）。结论 大鼠CysC腺病毒高效表达能够促进CFs增殖,可能加速心肌纤维化进程。     

阿伐他汀对幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义

目的　探讨阿伐他汀对幼年大鼠心肌成纤维细胞 (CF)增殖和胶原合成的影响。方法　用消化法培养新生SD大鼠的CF ,采用3H 胸腺嘧啶核苷 ( 3H TdR)掺入法测定CF的DNA合成功能 ,四氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖 ,流式细胞分析仪技术检测细胞周期 ,3H 脯氨酸掺入法测定胶原合成 ,分别观察不同浓度阿伐他汀对CF增殖和胶原合成的影响。结果　 ( 1)阿伐他汀以浓度依赖的方式抑制CF的3H TdR掺入率。其中 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4 mol/L组的3H TdR掺入率分别为(cpm/ 5 0 0 0细胞 ) 314± 6 8、2 5 3± 5 2、2 0 1± 5 3和 170± 48,显著低于对照组 ( 378± 6 5 ) (F =16 912 ,P <0 0 0 1)。 ( 2 )随着阿伐他汀浓度的增高 ,CF的MTT比色法A4 90 值呈明显的递减趋势 ,其中 10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4 mol/L组的A4 90 值分别为 0 2 88± 0 0 0 8、0 2 5 2± 0 0 0 7、0 2 2 5± 0 0 0 8和 0 2 16± 0 0 13,与对照组 ( 0 311± 0 0 0 5 )相比 ,差异有非常显著意义 (P均 <0 0 1)。 ( 3)G0 /G1期细胞百分率随阿伐他汀浓度的增高而呈递增趋势 ,S期G2 /M期细胞百分率和增殖指数呈递减趋势 ,其中 10 -7、10 -6、10 -5和10 -4 mol/L组与对照组比较 ,差异有非常显著意义 (P均 <0 0 1)。 ( 4)CF的3H 脯     

川芎嗪对溶血磷脂酸诱导的心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对体外培养的心脏成纤维细胞(CF)增殖的影响,进一步研究中药川芎嗪单体对其的干预作用。方法:用消化法培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,用单四唑(MTT)比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成,分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响及川芎嗪的干预作用。结果:随着LPA浓度的升高,MTT比色法A490值呈上升趋势。CF分泌的胶原随着LPA浓度和作用时间的增加呈递增趋势。20μg/m l的川芎嗪作用48 h即能明显抑制LPA(10-6μmol/L)诱导的细胞增殖作用(P<0.05)。结论:LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成作用,而川芎嗪能对其产生明显的抑制作用,并呈浓度依赖性。     

化学合成 microRNA-21 inhibitors 对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的：探究 microRNA-21 inhibitors 对大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法应用 LipofectamineTM 2000 Reagent 向大鼠心肌成纤维细胞瞬时转染 microRNA-21 in-hibitors 24、48 h 后,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测 microRNA-21、I 型胶原前胶原 A1(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;Western blot 法检测 Col1A1和α-SMA 的表达水平;MTT 法检测 microRNA-21 inhibitors对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。结果转染 microR-NA-21 inhibitors 的心肌成纤维细胞中,microRNA-21表达下调,Col1A1和α-SMA 的表达下降;转染 microRNA-21 inhibi-tors 的心肌成纤维细胞增殖活性明显减弱。结论 microR-NA-21 inhibitors 可明显抑制心肌成纤维细胞增殖活性,提示microRNA-21是心肌成纤维细胞活化增殖的潜在靶向分子,有利于为干预和预防心肌纤维化的发生发展提供新思路。     

长链非编码RNA-ATB对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨被转化生长因子b激活的长链非编码RNA(lncRNA-ATB)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响,并分析其作用机制.方法 检测瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中ATB、microRNA-200c(miR-200c)和DNA甲基转移酶DNMT3B的表达水平,并分析其相关性.在成纤维细胞中分别转染sh-ATB、o/e-A...