乙型肝炎患者重叠感染HCV状况分析

ＨＢＶ、ＨＣＶ具有相同的传播途径 ,且与肝炎的慢性化、重症肝炎、肝炎后肝硬化以及肝癌的发生均有密切的关系。为了解乙型肝炎患者重叠感染ＨＣＶ的状况 ,并探讨二者之间的相互关系及对病情转归的影响 ,作者对 1992年 1月至1999年 6月收治的 5 6 1例乙型肝炎患者进行了ＨＢＶ、ＨＣＶ病毒标志物的检测并进行分析。1　临床资料1.1　病例　 5 6 1例乙型肝炎患者均为住院确诊患者 ,男 42 5例 ,女 136例 ,年龄 11～ 6 7岁 ,平均 35 8岁。按 1995年 5月全国第 5次传染病寄生虫病学术会议制定的病毒性肝炎诊断标准[1] ,其中急性肝炎 6 7例 ,慢…     

多重PCR检测HBV和HCV方法的建立

目的:建立可同时检测血清HBVDNA和HCVRNA的多重PCR。方法:利用已知的基因序列设计了对于不同亚型HBV保守的C基因区的一对引物HBV-P623及对于不同亚型HCV高度保守的位于5’端非编码区(5’-NCR)的两对引物HCV-P289和HCV-P174,扩增经基因释放剂(Genereleaser)处理的HBV和HCV阳性血清。结果:多重引物、逆转录套式PCR反应体系可同时扩增HBV DNA和HCV RNA,分别在623bp和174bp处出现特异DNA扩增带。该反应体系具有较高的特异和敏感性,受检血清中仅含有10fgHBV DNA和5CID HCV RNA即可检出。血清标本不需要提取核酸,可直接进行PCR。用此体系检测30例输血后病人血清,其中15例为HBV感染,8例为HCV感染,7例为阴性。结论:多重PCR检测HBV及HCV的方法具有简便性和实用性。     

巢式多聚酶链反应检测丙型肝炎病毒5′端非编码区基因

本文采用丙型肝炎病毒(HCV)基因中高度保守的5′端非编码区的两对引物,建立了检测 HCV 核酸(HCV-RNA)的巢式(两步法)多聚酶链反应(PCR),对其中标本 RNA的提取、互补 DNA(cDNA)合成时引物的浓度、PCR 的反应体积以及 PCR 时温度循环程序等进行了优化选择。用该法检测了67例非甲非乙型肝炎患者的血清标本,发现52例(78%)为HCV-RNA 阳性。在丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)阴性的27例非甲非乙型肝炎患者中检出16例(59%)HCV-RNA 阳性。这些结果再次证实 HCV 感染是非甲非乙型肝炎的重要病因,并提示仅检测抗-HCV 可能会低估 HCV 的感染率。     

HBV重叠HCV感染与其传染性的关系

为研究乙型肝炎病毒(HBV)重叠丙型肝炎病毒(HCV)感染与其传染性的关系,我们对146例HBsAg阳性者进行了HBV和HCV血清学标志的检测,现将结果报告如下。一、对象与方法 146例均为我院住院病人,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBe及抗-HCV.试剂盒均为兰州标佳生物制品厂生产,按所附说明书进行检测和判定结果。二、结果 146例的检测结果,HBV血清学标志的组合有9种模式,共检出重叠HCV感染者4例,详见附表。     

丙型肝炎与乙型肝炎病毒的重叠感染

自1989年国外建立了血清丙型肝炎病毒抗体(抗—HCV)检测方法以来,发现丙型肝炎病毒(HCV)与输血后肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌关系密切。某些研究表明,HCV与乙型肝炎病毒(HBV)存在重叠感染并影响肝病预后。为了解本地区HCV与HBV重叠感染情况,我们对387例乙型肝炎患者的血清进行了抗—HCV检测,并观察其对HBV复制、病情及预后的影响。1 材料与方法1.1 研究对象 1992年3月～1994年10月住院的不同临床类型HBV感染者387例,男284例,女     

丙型肝炎与乙型肝炎病毒的重叠感染

丙型肝炎病毒(HCV)是由10 kb核苷酸组成的单股正链RNA病毒,与输血后急、慢性肝炎、肝硬变、肝癌关系密切。丙型肝炎的特异诊断主要依据血清学特异抗体的检测,或进行反转录PCR直接检测丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)。Fattevich等曾报道慢性乙型肝炎患者中的 HCV感染(J Infect Dis1991;163:400)。现报道丙型肝炎与HBV的重叠感染情况及其临床后果。     

简化HBV-DNA抽提用于多聚酶链式基因扩增

采用异硫氰酸胍、柠檬酸钠、2-巯基乙醇、十二烷基肌氨酸钠作为变性裂解剂,结合水饱和酚、氯仿、异戍醇等进行快速程序式抽提血清HBV-DNA模板用于多聚酶链式(PCR)基因扩增。该提取法比一般方法简单、稳定、不易污染,抽提过程可在lh内完成。PCR应用结果表明敏感性高于地高辛素标记探针斑点杂交法。经酶切及a-~(32)标记放射自显影鉴定PCR产物具有良好的特异性。     

肝炎肝硬化患者血清病原学类型及HCV与HBV重叠感染临床意义

肝炎肝硬化患者血清病原学类型及ＨＣＶ与ＨＢＶ重叠感染临床意义常州市第三人民医院薛焕俊，白敬羽，葛其童，孙启源，查雁生，苏瑞福关键词肝炎；肝硬变；ＨＣＶ；ＨＢＶ；重叠感染中图法分类Ｒ５１２．６肝炎肝硬化多由ＨＢＶ引起，现已对ＨＣＶ引起的肝硬化引起了人们...     

各类肝病患者HCV与HBV重叠感染的临床研究

本文采用第二代抗-HCV ELISA及RT—PCR法对275例HBsAg阳性的各类肝病患者血清进行了抗-HCV、HCV—RNA检测。结果发现:急性肝炎、慢活肝、慢迁肝、肝硬化、慢重肝及肝细胞癌患者HCV标志物阳性率分别为10.8％、14.1％、17.1％、22.8％、69.2％及22.7％,平均阳性率18.5％。由HCV与HBV重叠感染患者肝功能损害更严重,HCV、HBV重叠感染所致的重型肝炎预后较差。未发现HCV感染对HBV复制的阻遏作用。     

PCR技术用于检测肝细胞癌石蜡包埋肝组织中的HBV DNA

用多聚酶链反应(PCR)技术检测了16例肝细胞性肝癌(HCC)患者癌灶和癌旁双份组织石蜡包埋标本中的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。以C基因引物扩增HBV-DNA,32份标本中检出率71.87％。以新鲜冷冻肝标本作对照检出率81.25％,二者相比无显著性差别(X~=0.57,P>0.05)。以质粒提取HBV-DNA作灵敏度测定,PCR-EB可达10fg,PCR-SBH可达lag。应用非放射性的地高辛素标记探针作杂交灵敏度达~32P标记探针的水平。     

Nested PCR检测HBV DNA技术的建立与应用

本研究建立一种Nested PCR技术检测HBV DNA,即采用内外两对引物分别进行连续两次扩增,使检测极限由一次PCR的10~(-2)Pg提高到10~(-5)Pg;经~(32)P标记寡核苷酸探针作Southern转移杂交以及BgIⅡ作酶切分析证实两次扩增均为特异性扩增。通过抗-HBe阳性、单项抗一HBc阳性和单项抗-HBs阳性三种血清的HBV DNA的检测,表明该方法确能检出标准PCR所不能检出的极低水平的HBV感染,对提高乙型肝炎的诊断水平及更准确地评价药物疗效有重要意义。     

应用聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中的乙肝病毒

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了４５例肺科病人的支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中乙肝病毒（ＨＢＶ），同时对其中２４例作血清ＨＢＶ检测，发现ＢＡＬＦ中ＨＢＶ阳性率为２６．６７％（１２／４５）、血清ＨＢＶ阳性率为４１．６７％（１０／２４）；血清ＨＢＶ阳性者其ＢＡＬＦ方有可能检出ＨＢＶ、血清ＨＢＶ阴性者其ＢＡＬＦ不能检出ＨＢＶ，ＢＡＬＦ中ＨＢＶ脱氧核糖核酸（ＨＢＶ－ＤＮＡ）可以复制、有传染性。     

二重RT-FCR同时测定HGV与HCV RNA方法学研究

本文对二重RT-PCR同时测定HGV与HCV RNA的反应条件进行了最佳化研究,发现在用于HGV扩增的三组引物中,NS5b区的L与S二组引物较5'NCR区的N组引物有更高的检测敏感度(P<0.01)。不同的样本贮存对HGV与HCV RNA检测结果影响较大,将逆转录与第一次扩增分开进行可使测定敏感度提高约100倍。本法在同一反应体系中可同时检测HGV与HCV RNA,减轻了实验人员的操作强度,可降低测定费用近50％。     

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果。这一技术用以检测经常规DNA提取的127例HBsAg阳性血清,结果HBV DNA检出率达88％,其中HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为97％,抗HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为82％。     

血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒检测比较

目的：了解慢性丙型肝炎患者的血浆及其外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｓ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）的存在及存在形式。方法：反转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴＰＣＲ）技术检测１２４例慢性丙型肝炎患者的血浆及ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ。结果：在７０例抗ＨＣＶ及血浆ＨＣＶＲＮＡ阳性的患者中有２１例（３０％）的患者其ＰＢＭＣ内存在ＨＣＶＲＮＡ正链，仅１例存在ＨＣＶＲＮＡ负链。在５４例抗ＨＣＶ阳性、血浆ＨＣＶＲＮＡ阴性的患者中，仅有２例（３．７％）检出ＨＣＶＲＮＡ正链，未检出ＨＣＶＲＮＡ负链，这２例患者均为干扰素治疗３～６个月的病人。结论：ＰＢＭＣ可作为肝外病毒复制场所。对慢性ＨＣＶ感染者来说，３～６个月的干扰素治疗时间可能是不够的，ＨＣＶ在ＰＢＭＣ内的存在可能是干扰素治疗后复发的原因之一。     

检测HCA-RNA的RT-PCR技术改进与应用

以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T_3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)技术。应用这一技术对121例非甲非乙型肝炎患者和45例抗HCV阳性的慢性乙型肝炎患者进行了血浆HCV-RNA检测,结果阳性率分别为66.1％(80/121)和66.7％(30/45)。本文对这一技术的方法学、HCV-RNA与抗HCV的关系、血液暴露史对HCV感染的意义以及HBV与HCV的重叠感染进行了讨论。     

聚合酶链反应检测132例乙肝感染者HBVDNA

本文运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）．可检出极微量的ＨＢＶ感染者，它对乙肝发病机理的研究、判断患者病变活动和传染性以及判定抗病毒药物疗效均具有重要意义。     

RT—PCR方法检测病毒性心肌炎病原体

应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），对１０４０例疑似病毒性心肌炎患者的静脉血进行检测，共检出各种病毒感染者６１２例（５８．８４％）。其中检出感染柯萨奇病毒３８０例（６２．０９％），埃可病毒１２９例（２１．０７％），柯萨奇与埃可病毒合并感染８２例（１３．３０％），脊髓灰质炎病毒２１例（３．４３％）。结果表明，柯萨奇病毒的检出高于其它种病毒（Ｐ〈０．０５）。心电图有异常改变的占２０％，主要是ＳＴ段     

逆转录聚合酶链反应检测Ⅲ型登革病毒的敏感性和特异性研究

本文应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测Ⅲ型登革病毒基因。所设计引物在E基因组,引物2位于核苷酸序列的1139～1158位,引物1位于1453～1471位,反应产物为333bp,内含1个HindⅢ限制性内切酶位点,酶切后有128 bp和199 bp两个片段。产物在含溴化乙锭的2％琼脂糖中电泳。采用RT-PCR法可测出少至5个半数组织细胞培养感染量(TCID_so)的病毒RNA。