6MV X射线对体外培养9L胶质瘤细胞增殖的影响

目的:探讨不同剂量6MV X射线单次放疗对体外培养9L脑胶质瘤细胞的影响,寻找对胶质瘤增生有抑制作用的较低放射剂量.方法:对体外培养脑胶质瘤细胞以不同剂量进行放疗,并通过MTT法进行敏感性检测.结果:0.5 Gy剂量的单次放疗和1.0 Gy以上剂量的单次放疗对肿瘤的抑制作用有显著性差异;而1.0 Gy的单次放疗剂量和2.0 Gy的单次放疗剂量对肿瘤的抑制作用没有显著性差异.在1.0～2.0 Gy的放疗量下出现明显的平台期.结论:为防止发生放射性脑损伤,在1.0～2.0 Gy区间内采用较低单次放疗剂量可产生相似的治疗作用.     

逆转录病毒介导的野生型p53基因转入对慢粒多药耐药细胞恶性表型的影响

以Ｋ５６２／ＨＨＴ 细胞为模型,采用重组逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ转入该细胞系,研究外源性野生型ｐ５３ 基因在白血病多药耐药细胞表达的意义。结果显示,外源性野生型ｐ５３ 基因抑制细胞增殖,一般形态学观察见细胞明显向成熟型分化。流式细胞仪分析还显示ｐ５３ 基因诱导Ｋ５６２／ＨＨＴ细胞死亡且伴有细胞周期Ｇ１ 期的生长阻滞。结果表明,野生型ｐ５３ 基因对多药耐药的白血病细胞能部分降低其恶性表型     

心血管疾病基因治疗的基础研究Ⅰ．重组质粒pN2－LacZ在体外的表达

构建了带有标记基因ＬａｃＺ的逆转录病毒质粒ｐＮ２－ＬａｃＺ。用磷酸钙共沉淀的方法，将ｐＮ２－ＬａｃＺ转染培养的大鼠血管平滑肌细胞，Ｇ４１８筛选得到抗性集落。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，ＬａｃＺ基因已整合到细胞染色体上并转录出相应的ｍＲＮＡ。组化染色和酶活力测定结果表明，外源基因ＬａｃＺ可在血管平滑肌细胞中表达出有活性的蛋白质产物。提示，血管平滑肌细胞可作为心血管疾病基因治疗的靶细胞。     

体外受精与胚胎移植研究进展

作者综述我院自１９９０年建立体外受精与胚胎移植技术应用于治疗不育的研究。目前本技术已处于国内领先地位，技术的改进着重于如下几方面：①改进治疗周期超排卵方案，提高卵子受精率；②改良选择性减胎术，达到准确、简便、安全，减少多胎妊娠；③应用体外受精与胚胎移植（ＩＶＦ－ＥＴ）技术为卵巢早衰患者及遗传病夫妇提供赠卵、赠胚胎治疗的方法；④建立第２代ＩＶＦ－ＥＴ技术，应用卵母细胞单精显微注射技术（ＩＣＳＩ）治疗严重男性因素与不明原因不育，同时展望人工辅助破‘壳’（ａｓｉｓｔｅｄｈａｔｃｈｉｎｇ）和提高子宫内膜对胚胎的接受性及提高种植率和妊娠率，利用显微注射操作技术发展种植前的诊断。     

妊娠高血压综合征与血管紧张素转化酶关系的研究

为探讨血管紧张素Ⅰ转化酶（ＡＣＥ）基因第１６内含子插入／缺失多态性与妊娠高血压综合征的关系,应用聚合酶链反应技术,检测６０例妊高征患者及３８例正常妊娠妇女ＡＣＥ基因的插入／缺失状态。６０例妊高征患者中,ＡＣＥ基因Ｉ型和ＤＤ型频率分别为１５％（９／６０）和６５％（３９／６０）,而３８例正常晚妊妇女中则分别为５０％（１９／３８）和１０．５％（４／３８）。提示Ｉ型基因是妊高征的保护性基因,ＤＤ型基因是妊高征的易感基因     

血管紧张素转化酶基因I/D多态性与藏、汉民族高原低氧适应的关系

目的 分析血管紧张素转化酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性在世居高原藏族与汉族人群中的基因分布频率及与肺动脉压、动脉血氧分压、血浆ACE水平的关系,探讨藏族人群高原低氧适应的机制.方法 筛选世居高原的青海地区藏族、汉族健康男性青年各30例,采用多聚酶链反应(PCR)法检测两组人群ACE基因的I/D多态性;用动脉血气分析仪测动脉血氧分压、彩色多普勒超声仪测定肺动脉压;用酶联免疫吸附试验测血浆ACE水平.结果 藏、汉两组ACE基因的II、ID、DD三种基因型的频率为0.700、0.233、0.067和0.300、0.467、0.233,差异有显著性(x2=9.725,P=0.006);两组I/D等位基因频率分别为0.816、0.184和0.534、0.466,差异有显著性(x2=10.227,P=0.001);两组人群肺动脉压差异无统计学意义(P=0.41);动脉血氧分压比较差异无统计学意义(P=0.56);血浆ACE水平差异有统计学意义(P=0.011).结论 动脉血氧分压、肺动脉收缩压与ACE基因I/D多态性无相关性.ACE基因L/D多态性在藏、汉民族间存在差异,致血浆ACE水平差异,这种差异与藏族人群适应高原低氧可能相关.     

内蒙古包头地区汉族人血管紧张素转换酶基因与糖尿病肾病的相关性研究

目的：探讨血管紧张素转换酶（ACE）基因与糖尿病肾病（DN）发病的关系。方法：用PCR方法检测100例NIDDM病人及63例正常对照的ACE基因型。结果：ACE基因型及等位基因构成比在正常时照组和NIDDM组间无统计学差异；DD基因型及D等位基因频率在DN组（0．06）与非DN组（0.02）之间无显著性差异。结论：ACE基因多态性与DN发病无关。     

中国人G6PD基因EcoRI酶切位点研究

应用DNA Southern印迹杂交技术,以G6PD cDNA为探针,研究了16种限制酶的限制性片段长度多态,结果表明除EcoRⅠ外,其余15种限制酶均无多态改变,分析39例正常人与38例G6PD缺乏者G6PD基因ECO RⅠ酶切位点时,发现约20％的人出现7·0 kb的片段,1例G6PD患者出现6.0 kb片段,国外并无类似报道,并对这些片段来源及意义进行初步探讨。     

MEK AND p38 MAPK-DEPENDANT PATHWAYS ARE INVOLOVED IN THE POSITIVE EFFECT OF INTERLEUKIN-6 ON HUMAN GROWTH HORMONE GENE EXPRESSION IN RAT MtT/S SOMATOTROPH CELLS

Objective To investigate the effect of interleukin-6（IL-6） on the human growth hormone （hGH） gene expression in a rat somatotropic pituitary cell line MtT/S. Methods The plasmids containing various lengths of hGH gene 5＇-promoter fragments were constructed. Stably transfected MtT/S cells were created by cotransfecting the above plasmids and pcDNA3.1 （＋） with DMRIE-C transfection reagent. After the administration of these cells with IL-6 and/or various inhibitors of signaling transduction path-ways, the luciferase activities in MtT/S cells lysis were assayed to demonstrate the effects of IL-6 on hGH gene promoter activity and possibly involved mechanism. Results The 10^3U/mL IL-6 stimulated GH secretion and synthesis, and promoted the 5＇-promoter activity of GH gene in stably transfected MtT/SGL cells with the action of 1.69 times above the control. Among inhibitors of signaling transduction pathways, mitogen-activated protein kinase kinase （MAPKK/MEK） inhibitor PD98059 （40μmol/L） and p38 mitogen-activated protein kinase （MAPK） inhibitor SB203580 （5μmol/L） completely blocked the stimulatory effect of IL-6. Western blot analysis further confirmed the activation of phosphorylated MEK and p38 MAPK in MtT/SGL cells. Neither over-expression of Pit-1 nor inhibition of Pit-1 expression affected IL-6 induction of hGH promoter activity. A series of deletion constructs of hGH promoter were created to identify the DNA sequence that mediated the effect of IL-6. The results showed that the stimulatory effect of IL-6 was abolished following deletion of the - 196 to - 132 bp fragment. Conclusions IL-6 promotes GH secretion and synthesis by rat MtT/S somatotroph cells. The stimulatory effect of IL-6 on hGH gene promoter appears to require the activation of MEK and p38 MAPK, and a fragment of promoter se- quence that spans the - 196 to - 132 bp of the gene, but may be unlinked with Pit-1 protein.     

bcl-2/bax基因在铁诱导肝细胞凋亡中的作用

目的：研究bcl-2,bax基因在铁负荷诱导肝细胞凋亡中的作用。方法：右旋糖酐铁复制大鼠高铁负荷模型，以CCl4攻击，观察各实验组（高铁组，CCl4组，CCl4 高铁组）和空白对照组的血清铁（serum iron ,SI)，肝组织铁及丙二醛（malondialdehyde,MDA)含量变化，流式细胞仪检测肝细胞DNA含量，bcl-2,bax表达量，计算凋亡指数（apoptotic index,AI)和增殖指数（poliferation index,PI)，结果：高铁组不仅大鼠SI，肝组织铁及MDA含量增加，而且AI升,.bax水平上调，PI无明显变化，CCl4 高铁组与高铁组相比，MDA，AI,bax均有显著增加。结论：高铁负荷诱导肝细胞亡的机制可能为：上调促凋亡基因bax水平，催化脂质过氧化反应，促进氧自由基产生，铁负荷与CCl4有引起肝细胞凋亡的作用。     

腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素6在真核细胞中的表达效率

目的：构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率。方法：利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素６（ＩＬ６）真核表达载体ｐＡｄＣＩＩＬ６和ｐ３３５ＣＩＬ６。将它们瞬时转染ＣＯＳ７细胞后，利用ＩＬ６依赖株７ＴＤ１对上清中的ＩＬ６进行检测。结果：两种新建载体分别能提高ＩＬ６在真核细胞中的表达效率５．５和３．４倍。结论：腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡＲＮＡ（ｖｉｒｕｓａｓｏｃｉａｔｅｄⅠａｎｄⅡＲＮＡ，ＶＡⅠａｎｄＶＡⅡ）和腺伴随病毒（ａｄｅｎｏａｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）的倒转末端重复序列（ｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ，ＩＴＲ）能提高细胞因子在真核细胞中的表达     

C57BL/6j小鼠骨髓CD34+造血干细胞来源的iDC的体外培养与鉴定

目的:探讨以恰当的体外定向诱导和培养小鼠骨髓CD34 造血干细胞以获得足够数量的未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,iDC)的方法.方法:采用自健康C57BL/6j小鼠骨髓中分离CD34 造血干细胞,进而于含rmGM-CSF和rmIL-4的RPMI-1640完全培养液中定向诱导和扩增,收集悬浮生长细胞后,予以流式细胞学检测其CD80、CD86和CD11c等表面分子的表达,扫描电镜观察悬浮细胞的形态.结果:去除红细胞的骨髓细胞培养4 h后,10%左右细胞贴壁生长.加rmGM-CSF和rmIL-4培养,逐渐呈集落样悬浮生长,有树枝状突起.第6天时,细胞集落呈密集的葡萄串状,细胞体积增大,毛刺状或根须状突起更明显.流式细胞学显示:体外培养第7天的iDC的表面分子CD11c的表达率为75%～81%[(78.4±8.36)%],表面分子CD80的表达率为32%～51%[(38.26±8.77)%],而表面分子CD86的表达率为18%～53%[(27.5±8.30)%].扫描电镜见细胞有典型的树枝状突起.结论:联合使用rmGM-CSF和rmIL-4定向诱导培养骨髓CD34 造血干细胞,可大量扩增出iDC.     

异普复合静脉麻醉对IL-6,CD18,SOA的影响

目的 :研究异丙酚或 /和普鲁卡因对佛波酯 (PMA)刺激下离体中性粒细胞 (PMN)表面粘附分子CD18表达、超氧化物阴离子 (SOA)释放及内毒素 (LPS)刺激下全血中IL - 6生成的影响。方法 :提纯PMN并用磷酸盐缓冲液 (PBS)制成悬液 ,样本随机分为 5组 :空白组 (PMN PBS) ,损伤组 (PMN PBS PMA 10 0ng/ml) ,异丙酚组 (PMN PMA 10 0ng/ml propofol 4 μg/ml) ,普鲁卡因组 (PMN PMA10 0ng/ml procaine 15μg/ml)及异普复合组 (PMN PMA 10 0ng/ml 2 μg/mlpropofol 8μg/mlprocaine)。另设相应浓度药物组。流式细胞仪检测CD18表达 ,细胞色素C还原法测定SOA释放 ,放免法测定全血中IL - 6生成。结果 :异丙酚、普鲁卡因单独或联合应用均可抑制中性粒细胞表面粘附分子CD18表达及SOA释放 ,异丙酚抑制效应强于普鲁卡因。异普复合组效应与异丙酚临床浓度组接近 ,强于普鲁卡因临床浓度组。异丙酚促进全血中IL- 6的生成 ,普鲁卡因抑制全血中IL - 6的生成 ,异普复合组作用接近普鲁卡因组。结论 :异丙酚普鲁卡因复合应用对抑制中性粒细胞粘附功能 ,减轻组织损伤作用具有明显的互补性 ,这为两种麻醉药物在临床实践中复合应用的合理性给予基础实验支持