PCR试验中的污染及对策

<正> 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)就是由特异引物启动的对特异基因序列的体外酶促扩增技术,它可在一至数小时内使某一基因序列复制数百万份,从而达到肉眼可见的水平。因而其卓越的优点很快在人类疾病研究和诊断中得到广泛的应用。但也正由于这一方法具有极大的扩增能力、高度的特异性和检测的灵敏性,使得极微量的污染即可导致假阳性结果。因此,PCR污染问题已引起人们极大的     

人巨细胞病毒的PCR检测

①目的 寻找早期快速检测人类巨细胞病毒（HCMV）感染的敏感方法。②方法 用HCMV即刻早期（IE）基因和晚期（LA）基因的7对待异性引物分别进行普通聚合酶链的反应（PCR），套式PCR（nPCR)和双重PCR，检测血清中的HCMV DNA，比较不同引物及不同PCR方法的灵敏度。③结果 同一基因的不同引物扩增HCMV DNA灵敏度差别无显著意义；LA基因的引物扩增灵敏度高于IE基因的引物；3种方法中以nPCR灵敏度最高，其次为双重PCR，普通PCR最低。④结论 用LA基因的特异性引物进行nPCR是早期快速检测HCMV感染的敏感方法。     

如何作好PCR技术实验课的准备工作

聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术是医学分子生物学技术中的 1项革命性创举。随着分子生物学的创立和发展 ,ＰＣＲ扩增作为 1门崭新的技术已经在遗传性疾病的诊断 ,临床标本中病原体核酸序列的检测、激活癌基因中突变情况的分析 ,法医学上的遗传学鉴定以及克隆诸方面得到越来越广泛的应用。ＰＣＲ实验技术的教学是我院 1项新开展起来的实验课 ,本实验耗费时间、试剂昂贵 ,实验器材多 ,技术操作对大多数学生来说比较陌生复杂 ,所以实验课准备工作的好坏 ,直接影响到实验课的质量 ,在这样一个繁琐、复杂、精细的工作中 ,即使是微小的疏忽也会造成实…     

应用PCR技术检测小儿肺炎支原体的体会

应用ＰＣＲ技术检测小儿肺炎支原体ＤＮＡ，结果表明ＰＣＲ技术具有灵敏、快速、特异的特点，克服了血清学检查著多的影响，值得应用与研究。     

结核菌PCR检测的临床实验室研究

本文讨论了４种测结核菌不同引物ＰＣＲ盒敏感生为：ＤＮＡ１￣１０ｐｇ，菌数１２￣２５个／ｍｌ。以２４５ｂｐ盒为标准，其中２４０ｂｐ盒测试符合率最好。实测标本可产生假阴性，原因之一为尿素干扰，洗涤可消除之。对造成假阳性的污染源及尿苷酸盒防污染作用进行了研究。临床实测９０例结核菌痰检阳性率１１％，ＰＣＲ阳性率４３．３％，后者高于前者。结合病历对测试结果还进行了初步临床评估。     

多重半套式PCR检测细菌16srRNA基因方法的建立

（1）目的 设计并建立多重半套式聚合酶链反应（PCR）快速检测临床标本中感染病原菌DNA方法。（2）方法 通过对多数病原菌16srRNA基因保守区和变异区序列分析,设计通用引物和革兰阴性菌及革兰阳性菌的特异性引物分别作为外侧和内侧引物,分两步先后加入同一反应体系中对不同细菌的DNA进行扩增。（3）结果金黄色葡萄球菌和大肠无纪律希菌经扩增后均有长度为1032bp的DNA片段产生;金黄色葡萄球菌另有一长度为336bp的特异性产物,大肠埃希菌另有一长度为127bp的特异性产物。（4）结论 该方法可以特异、敏感、快速检测出临床感染的病原菌。     

庚型肝炎病毒RT—PCR检测

目的：调查石家庄地区庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染状况。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法对５８例病毒性肝炎进行了ＨＧＶ－ＲＮＡ检测。结果：证实了石家庄地区有ＨＧＶ感染存在，在非甲型￣戊型肝炎中，ＨＧＶ－ＲＮＡ的阳性率为２０％。在乙型、丙型肝炎病毒所致的慢性肝炎、肝炎肝硬化中，分别有１６．６７％、１４．２９％的病例重叠有ＨＧＶ感染。结论：严格掌握输血指征，筛查献血员，杜绝医源性感染，将对控制ＨＧＶ感染     

RT－PCR检测HCV RNA假阳性结果分析

ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ假阳性结果分析宋燕斌，崔晓红，潘卫，王锦红，戚中田丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是新近认识的一种单股正链ＲＮＡ病毒，在感染者外周血中的含量低［１］，目前认为逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ是诊断ＨＣＶ感染的最敏...     

结核菌PCR检测的临床实验室研究

本文讨论了４种测结核菌不同引物ＰＣＲ盒敏感性为：ＤＮＡ１～１０ｐｇ，菌数１２～２５个／ｍｌ。以２４５ｂｐ盒为标准，其中２４０ｂｐ盒测试符合率最好。实测标本可产生假阴性，原因之一为尿素干扰，洗涤可消除之。对造成假阳性的污染源及尿苷酶盒防污染作用进行了研究。临床实测９０例结核菌痰检阳性率１１％，ＰＣＲ阳性率４３．３％，后者高于前者。结合病历对测试结果还进行了初步临床评估。     

PCR技术在检测HBV中的应用

乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)作为病毒复制的指标,随着聚合酶链反应(Polymerasechainreaction,PCR)技术的问世,其检验变得简易、快速。本文通过242例标本用酶联免疫吸附试验(ELISA)与PCR检验进行对比检验,对HBV—DNA的存在与乙肝病毒免疫标记物(HBVm)的关系进行分析。研究对象     

PCR检测慢性淋球菌感染的临床应用

<正>近年来国内淋病的发病率明显上升,据报道,淋球菌感染约占男性秘尿系感染的30.1％,急性淋病的实验室诊断,分泌物常规涂片及淋病奈瑟氏菌培养大多能正确诊断,但慢性淋病的诊断颇为困难,分泌物涂片不可靠(尤其女性),可造成假阳性;细菌培养阳性率偏低,常会引起漏诊,且繁琐费时,不利于快速诊断,我们采用PCR技术与培养法和涂片法同时对58例可疑慢性淋病患者的分泌物进行淋球菌检测,旨在探讨聚合酶链反应对慢性淋病的诊断价值。     

用PCR方法检测脆弱类杆菌

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测５株脆弱类杆菌。结果显示，标准菊株２５２８５Ｂｒ出现有２条明显的特异性条带，而多型类杆菌标本在相应位置未出现。表明ＰＣＲ检测特异笥强，敏感性高，操作简便，快速，且无放射性这虞，可在临床疾病的检测诊断中推广。     

多重PCR技术检测病毒性肝炎相关病毒的研究

目的建立一种快速、特异的可同时检测血中多种病毒性肝炎相关病毒的多重PCR方法。方法参照各病毒特异性核酸序列,按多重PCR引物设计的特殊要求设计引物,以核酸测序确证扩增产物,用标准病毒株及临床阳性血清样本DNA、RNA为模板优化PCR反应体系和反应条件,建立病毒性肝炎相关病毒多重PCR检测方法。应用建立的多重检测方法对120例ALT升高的血清标本进行多重检测,并将检测结果与单一PCR检测结果进行比较。结果采用多重PCR技术可同时对EBV、TTV、HBV、HSV 4种DNA病毒进行扩增;采用多重RT-PCR技术可同时对Cox-V、HEV、HCV 3种RNA病毒进行扩增。各病原体单一及多重扩增条带均清晰、均一,无非特异性扩增条带,片段长度与理论值一致;核酸测序证实各扩增产物属各病原体特异性基因片段。临床标本检测多重感染率为19.2%,与单一检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法稳定可靠,敏感度、特异度好,适用于病毒性肝炎相关病毒的实验室诊断与临床筛查。     

丙型病毒逆转录套式多聚酶链反应检测技术假阳性结果分析

丙型病毒逆转录套式多聚酶链反应检测技术假阳性结果分析高广甫关琦苏英郑州市第六人民医院（４５００５２）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ逆转录套式多聚酶链反应技术（ＨＣＶ—ＲＮＡ—ＲＴ—ｎｅｓｔｅｄ—ＰＣＲ）已成为丙型肝炎，诊断上不可缺少的直接检测ＨＣＶ及观...     

PCR对非细菌性前列腺炎的检测研究

非细菌性前列腺炎 ( NBP)又称前列腺病 ,其病因十分复杂。我们采用多聚酶链反应 ( PCR)检测患者前列腺液 ( EPS)中的沙眼衣原体 ( CT)和单纯疱疹病毒 ( HSV)。证实了 CT和 HSV是 NBP的主要病原体。现报告如下。1　临床资料本组 10 4例 NBP,年龄 2 2～ 73岁 ,平均 37.6岁。诊断标准 :1膀胱刺激征和排尿困难 ,尿常规正常 ;2腰骶部、腹股沟、外阴等处酸痛不适 ,但无局部阳性体征 ;3肛门下坠、便后或尿后有稀薄清亮或白色分泌物自尿道口溢出 ;4性功能障碍或神经衰弱 ;5直肠指检前列腺表面肿胀或压痛 ;6EPS常规镜检 WBC>10个 /HP,…