虹膜色素上皮细胞培养及移植

视网膜色素上皮细胞（ＲＰＥ）移植在技术上已趋完善，但免疫排斥反应的发生大大限制了移植物的长期存活。自体ＲＰＥ移植虽可避免排斥反应，但操作困难、并发症多，难以广泛应用。虹膜色素上皮细胞（ＩＰＥ）与ＲＰＥ具有相同的胚胎发育来源，可望替代ＲＰＥ用于自体移植。本文就近年来ＩＰＥ细胞培养移植及ＩＰＥ细胞生理功能等方面的研究进展进行了综述。     

虹膜色素上皮细胞培养及移植

视网膜色素上皮细胞移植在技术上已趋完善，但免疫排斥反应的发生大大限制了移植物的长期存活。自体ＲＰＥ移植虽可避免排斥反应，但操作困难，并发症多，难以广泛应用。虹膜色素上皮细胞与ＲＰＥ具有相同的胚胎发育来源，可望替代ＲＰＥ用于自体移植。     

兔视网膜色素上皮细胞移植后白细胞介素2活性变化

目的：探讨ＲＰＥ移植后排斥反应发生的免疫指标。方法：以经巩膜移植方法行同种异体家兔间视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞移植术，术后定期检测外周血中白细胞介素２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ＩＬ－２）活性变化及免疫抑制剂的影响。结果：单纯移植组血中ＩＬ－２活性术后第１天开始升高，第３天时达到峰值，至７、１０天时持续高值、１４天时仍明显高于对照组，而加用免疫抑制剂组手术后第１天时与对照组无明显差别，第３天时略有升高，第７天时基本恢复正常。结论：ＲＰＥ移植后检测外周血中ＩＬ－２活性变化，可作为判定及监测排斥反应发生的重要指示。     

兔视网膜色素上皮细胞移植及长期形态学的研究

视网膜色素上皮（ＲＰＥ）功能失调或发生病理改变，可导致许多视网膜疾病，包括年龄相关性黄斑变性，青年性遗传性黄斑变性及视网膜色素变性等，严重危害人类视力。能否通过移植正常、健康的ＲＰＥ细胞治疗这类视网膜疾病，是当前眼科界关注的重要研究课题。我们采用了改良式玻璃体密闭式移植术，术中增加了玻璃体切割，应用带有色素标记的兔ＲＰＥ细胞移植于无色素性兔的视网膜下间隙。结果显示，移植长达１年后的ＲＰＥ细胞不但存活，结构形态正常，并且与邻近的ＲＰＥ细胞（包括移植的与自体的）建立了闭锁小带。移植的ＲＰＥ细胞与受体的感光细胞紧密结合，受体眼的神经外节盘正常脱落，被移植的ＲＰＥ细胞吞噬，且未发生排异反应。上述结果显示，本实验兔ＲＰＥ细胞移植的成功，为临床治疗某些视网膜疾病开辟了新的治疗途径，提供了可靠的实验室根据和应用前景。     

视网膜色素上皮细胞移植的研究

视网膜色素上皮细胞（RPE）是位于视网膜感光器细胞和和脉络膜之间的一层单层细胞。本文介绍了RPE细胞的分离、培养和内、外路两种不同的手术方法。从术后活体和组织学检查表明，视网膜下腔是一免疫赦免区域。通过对首次异体移植培养的胎儿RPE细胞病例的临床随访显示，所移植的RPE细胞在黄斑区均能存活，并且具有注视功能。术后囊样黄斑水肿是最主要的并发症，是宿主免疫排斥反应的结果。因此预防和处理移植物的免疫排斥，是手术成功的关键。     

兔RPE细胞培养及传代的几点体会

采用视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞进行体外实验时，人眼理所当然是最佳实验材料。近年来，由于角膜供眼的增多，人眼ＲＰＥ培养的细胞来源并不困难。并且，关于人眼ＲＰＥ细胞培养的文献也较多，方法比较成熟。但是，一些尚处动物实验阶段的研究，如有关ＲＰＥ细胞移植、ＲＰＥ在增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）发病中的作用等研究，需要将培养的动物ＲＰＥ细胞再放回动物体内进行观察，此种情况下兔眼成为最适宜的实验材料。我们在兔ＲＰＥ细胞培养的实际操作中，发现兔眼在许多方面与人眼不同。并且，有关兔ＲＰＥ细胞培养的文献也较少…     

视网膜色素上皮移植的实验研究

通过内路法将分离后的有色兔ＲＰＥ细胞移植到无色兔眼的视网膜下腔，共完成１０只兔（２０只眼）的实验手术，分术后２天（２只眼）、１０天（６只眼）、２０天（６只眼）、４０天（４只眼）及９０天（２只眼）５个不同观察组，结果表明移植的ＲＰＥ细胞２天后未完全贴伏于Ｂｒｕｃｈ膜上，术后１０天则紧密贴伏其上并形成单细胞层。术后４０天移植的ＲＰＥ细胞与视网膜神经层形成相嵌结构。术后９０天移植细胞内有吞噬消化的外节盘膜，提示移植细胞正在行使其新陈代谢的功能。ＲＰＥ移植成功，为进一步研究移植ＲＰＥ细胞的生长、功能及免疫反应，并为临床应用奠定基础。     

人视网膜色素上皮细胞对色素颗粒的吞噬作用

为检测培养的人视网膜色素上细胞对色素颗粒的吞噬活性,将从原代培养的ＲＰＥ细胞中提取的色素颗粒加入到培养的第８代ＲＰＥ细胞培养中,２４小时后,可见色素颗粒出现于细胞浆中,４天后,ＲＰＥ细胞胞浆中布满大量的色素颗粒。表明培养的ＲＰＥ细胞具有吞色素颗粒的活性。同时,该方法也为细胞移植提供了大量的细胞来源。     

人胚眼色素上皮细胞的培养

准备可供植入的人色素上皮细胞。方法将１２－２４周人胚眼的视网膜色素上皮细胞自脉络膜毛细血管床上撕离,置入培养皿中作贴壁培养。结果培养的ＲＰＥ细胞可在培养皿中存活２－３个月。顺极性和反极性培养不影响细胞的形态和存活时间。培养的ＲＰＥ细胞具有吞噬视细胞外节的功能。结论培养的胚眼ＲＰＥ上皮片可作为同种异体ＲＰＥ移植的良好供体。     

上皮生长因子在家兔视网膜色素上皮细胞培养中的作用

本研究对有色家兔视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞进行体外培养，结果显示：低浓度上皮生长因子ＥＧＦ对ＲＰＥ细胞无刺激作用，而达到适当浓度时对ＲＰＥ细胞有明显刺激作用，但高浓度与适当浓度的作用相同。本文认为适当浓度的ＥＧＦ可促进ＲＰＥ培养细胞生长，缩短传代周期，细胞增殖速度快，细胞数量明显增多，且细胞形态不受影响。ＥＧＦ对体外培养ＲＰＥ细胞的最佳浓度为１０ｎｇ／ｍｌ，这为在体外大量培养ＲＰＥ细胞提供了新的实验数据     

关于视网膜色素上皮细胞培养和移植的研究

关于视网膜色素上皮细胞培养和移植的研究中国医科大学第一临床学院眼科刘哲丽，吴景天随着现代医学的发展，器官移植已成为临床上治疗某些不治疾病的重要手段之一。近年随着对ＲＰＥ在视网膜病变修复中作用的不断被认识，许多学者开始探索应用体外培养的ＲＰＥ细胞进行移...     

缺氧对牛视网膜色素上皮细胞增殖的促进作用

目的研究缺氧对视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞的影响。方法采用细胞计数及免疫组织化学的方法，将ＲＰＥ细胞接种于２４孔培养板，分别放入正常和缺氧环境中，３７℃进行培养。不同时间后进行计数及抗ＦＯＳ蛋白抗体染色。结果缺氧组的细胞计数均高于正常组（Ｐ＜０．０５），抗ＦＯＳ蛋白抗体染色，缺氧组明显强于正常组。结论缺氧可以明显促进ＲＰＥ细胞的增殖，其机理是通过诱导ｃ－ｆｏｓ癌基因的表达而起作用。     

增殖细胞核抗原与bc1-2在培养的人视网膜色素上皮细胞的表达

目的观察培养的人视网膜色素上皮细胞（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ，ＲＰＥ）的增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）和ｂｃ１－２的表达。方法用ＳＡＢＣ法对培养的人ＲＰＥ作鼠抗人ＰＣＮＡ单抗及兔抗人ｂｃ１－２抗体免疫组织化学染色。结果ＲＰＥ在接种后２４小时和４８小时，ＰＣＮＡ的阳性率分别为３１．２％和５０．６％，阳性染色位于细胞核内，斑块状。ｂｃ１－２的表达为７６％～９０％，阳性染色在细胞浆，细颗粒状。结论培养中一半ＲＰＥ有ＰＣＮＡ抗原表达，提示这些细胞处于Ｓ期；ｂｃ１－２抗原在大多数ＲＰＥ表达阳性。这些生物标记物可能与培养的ＲＰＥ生长活性有关。     

外伤眼视网膜色素上皮细胞的核型变化

目的：增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）是眼外伤及网脱术后最常见的并发症，也是手术失败的主要原因。视网膜色素上皮是ＰＶＲ形成的关键细胞。本实验培养ＰＶＲ眼的ＲＰＥ细胞，以探讨ＰＶＲ形成的机制，方法：本实验采用眼杯和组织片二种消化方法。对正常眼、新鲜外伤眼及ＰＶＲ眼的ＲＰＥ细胞进行培养。结果：ＰＶＲ眼的ＲＰＥ细胞分裂及增殖速度明显高于正常及新鲜外伤眼，同时发现ＰＶＲ眼的ＲＰＥ细胞发生基因突变，形成了三倍体核型。结论：ＰＶＲ眼的ＲＰＥ细胞的核型变化是细胞增殖的主要原因，但与外伤本身无关其基因突变机制有待于进一步探讨。     

RPE细胞的损伤修复及药物对RPE细胞功能的影响

ＲＰＥ细胞损伤的病因包括氧化损伤，脉络膜血管损伤和Ｂｒｕｃｈ氏膜的改变等。ＲＰＥ细胞的损伤可使其发生形态上的改变并引起ＲＰＥ细胞的增殖和迁移。实验表明，自由基清除剂、牛磺酸、及某些中草药可以保护ＲＰＥ细胞的正常生理功能；抗肿瘤药物如５－ＦＵ、免疫抑制剂ＣｓＡ等药物则能有效地抑制ＲＰＥ细胞的功能，从而为药物预防和治疗与视网膜色素上皮损伤相关的疾病提供了良好的前景。     

兔视网膜色素上皮细胞的体外标记

目的 建立兔视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞的体外标记方法。方法 兔ＲＰＥ细胞经传代培养并鉴定后,掺入溴脱氧嘧啶（ＢｒｄＵ）对细胞进行体外标记,通过免疫组织化学方法来显示标记的细胞。结果 ＢｒｄＵ标记后,所有的细胞核呈阳性染色。结论 提供一种简便易行的ＲＰＥ细胞标记方法,提示ＢｒｄＵ掺入法适用于所有培养细胞的体外标记。     

视网膜色素上皮细胞培养技术及其应用

细胞培养技术已在生物学和医学各研究领域得到广泛应用。本文简要介绍这一技术，重点阐述视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞的分离、收集和培养等方法。对培养ＲＰＥ细胞的生物学特征进行了描述。强调ＲＰＥ细胞培养技术在研究眼生理和眼疾病等方面的应用价值。     

人视网膜色素上皮细胞的培养及鉴定

目的：进行人ＲＰＥ细胞的体外培养，为研究其生理功能、生化特征和病理过程提供细胞模型。方法：用改良的眼杯缝线固定法，将其固定在眼球托上，通过消化获取人ＲＰＥ细胞，作细胞形态学、组织化学和电镜鉴定。结果：ＲＰＥ细胞培养早期生长活跃、胞核透明、胞浆含丰富黑色素颗粒，Ｇｉｅｍｓａ染色见染色体，ＤＯＰＡ氧化酶呈阳性反应，透射电镜见细胞微绒毛及紧密连接。结论：ＲＰＥ细胞经体外培养及短期传代后，仍具有与体内细胞相似形态特征。可为ＲＰＥ的深入研究提供丰富的实验研究材料。     

Mechanisms of apoptosis in retinal pigment epithelial cells

目的了解诱导视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞在体外发生凋亡的因素，以推测该细胞凋亡在体内发生的可能机理。方法培养的人ＲＰＥ细胞分别给予低氧（３％），肿瘤坏死因子（ＴＮＦ），蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂及抗Ｆａｓ抗体处理２４～７２ｈ，同时也观察了纤维母细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对体外凋亡诱导因子所致ＲＰＥ细胞凋亡的保护作用。以琼脂糖ＤＮＡ电泳及流式细胞计数法检测细胞凋亡，采用免疫组化染色及流式细胞计数法决定Ｆａｓ在ＲＰＥ细胞的表达。结果所用的细胞凋亡诱导剂均可使ＲＰＥ细胞发生典型的凋亡（ＤＮＡ片段形成），ｂＦＧＦ具有较强的抑制ＲＰＥ细胞凋亡发生的作用。３Ｈ胸腺嘧啶摄入表明，所有细胞凋亡诱导剂均能抑制ＲＰＥ细胞的生长。结论不同的诱导因子可诱导ＲＰＥ细胞在体外发生凋亡，其发生与多种凋亡信号系统调控和交互反应有关，因此，调节ＲＰＥ细胞凋亡可能会给某些视网膜变性类疾病提供新的治疗手段。     

培养RPE细胞吞噬功能的定量研究

探讨定量研究视网膜色素上皮细胞吞噬杆菌外节膜盘和纤维连接蛋白方法。方法体外培养胎儿ＲＰＥ细胞，以荧光标记的聚苯乙烯微球、ＲＯＳ、ＦＮ和ＦＮ包被的我微球作为吞噬标记物，建立ＲＰＥ细胞吞噬模型，使用流式细胞仪定量检测ＲＰＥ细胞的吞指数。结论该研究建立的吴噬模型及定量检测方法简单，易行，可靠，可进一步用于ＲＰＥ细胞噬ＲＯＳ和ＦＮ的机理的研究。