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1.
刘学元  李德华  单伟  姜东 《山东医药》2012,52(4):49-51,122
目的探讨单独和联合应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与维甲酸(RA)对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向神经元分化的影响,为其进一步临床应用提供理论基础。方法 hUCMSCs由天津国家干细胞中心提供。取传至第3代的hUCMSCs,根据培养液中加入不同诱导剂分为4组:空白对照组,不加任何诱导剂;bFGF组,加入20 ng/mL bFGF;RA组,加入0.5μg/mL RA;RA+bFGF组,加入0.5μg/mL RA和20 ng/mL bFGF。细胞诱导培养后第12 d,观察细胞形态的变化;采用免疫细胞化学方法检测神经前体细胞标记物Nestin、神经元标记物β-TubulinⅢ、神经胶质细胞标记物胶原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,每组随机选择8个视野计算阳性细胞数,比较各组细胞阳性表达比例。结果空白对照组和bFGF组细胞诱导后形态变化不明显,Nestin和β-TubulinⅢ阳性表达率均较低,但两者之间无统计学差别。RA组和RA+bFGF组细胞诱导第12 d后,细胞胞质以胞核为中心收缩,部分胞质收缩形成细胞的突起,突起之间有网状连接,具有典型的神经元样形态;RA+bFGF组的β-TubulinⅢ阳性表达率比RA组显著增高(P<0.01)。实验各组GFAP表达阳性率均较低,但无统计学差异。结论 RA能促进hUCMSCs向神经细胞分化,单独使用bFGF并没有明显效果,而RA联合bFGF能显著促进hUCMSCs向神经元分化。  相似文献   

2.
大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的探讨大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经样细胞的作用。方法分离得到的MSCs在体外扩增、传代。用碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导后加入不同时间的臂丛神经损伤大鼠脊髓匀浆上清液诱导。免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以鉴定分化细胞的表型特征。结果细胞诱导后具有神经元或胶质细胞样细胞的形态,相应细胞表面标志NSE或GFAP阳性,以损伤后7d脊髓匀浆上清液诱导组NSE阳性和GFAP阳性率最高(P<0.05)。结论臂丛根性撕脱伤大鼠脊髓匀浆上清液在体外能够有效地诱导骨髓MSCs分化为神经样细胞,伤后1w可以作为MSCs移植的最佳时间。  相似文献   

3.
分别采用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和丹参注射液联合或2-巯基乙醇(2-ME)单种诱导骨髓间质干细胞(rMScs),免疫组化鉴定神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP).结果 显示,bFGF和丹参注射液联合或2-ME单种诱导剂诱导后,rMScs胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示,诱导出的神经元样细胞NSE、NF表达阳性,GFAP阴性.认为在体外用丹参注射液与bFGF联合诱导可以使成年Wistar大鼠rMSc8分化为神经元样细胞,并且存活时间明显延长.  相似文献   

4.
目的 寻找体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的良好方法.方法 分别采用β-巯基乙醇(BME)、脑源性神经营养因子(BDNF)和维A酸(RA)为诱导剂,体外诱导人MSCs分化为神经元样细胞.用免疫组化SP法对诱导后细胞进行鉴定.结果 两种方法诱导6 h后,MSCs均呈现神经元样细胞改变,伸出突起,类似树突和轴突.该细胞神经元特异性烯醇化酶(NSE)均呈阳性表达,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)均呈阴性表达.其中β BME诱导6 h后神经元样细胞分化率为68.32%±2.58%,BDNF+RA诱导6 h后神经元样细胞分化率仅为42.45%±3.26%,两组比较,P<0.05.但β BME诱导后分化细胞存活时间较短,而BDNF+RA诱导后分化细胞存活时间较长.结论 两种诱导方法均可在体外定向诱导人MSCs转化为神经元样细胞,神经元分化率及存活时间不同.  相似文献   

5.
目的观察壮通饮对脑梗死大鼠内源性神经干细胞(NSC)增殖分化表达的影响。方法将240只雄性大鼠随机分为模型组、假手术组、壮通饮治疗组、正常组,采用线栓法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别给予不同处理,于术后1d、3d、7d、14d、21d、28d6个时间点分批处死大鼠。用免疫组织化学方法检测各组大鼠梗死区域及相对应区域的神经元核心抗原(NeuN)、胶原纤维酸性蛋白(GFAP)标记的阳性细胞情况。结果模型组脑缺血区域相对应区域可见大量的NeuN、GFAP标记阳性细胞,差异均无统计学意义(P0.05),与假手术组相比,模型组和壮通饮治疗组大鼠GFAP标记阳性细胞数目增多,NeuN标记阳性细胞数目减少,差异均有统计学意义(P0.05),与模型组相比,壮通饮治疗组大鼠NeuN、GFAP标记阳性细胞数目均增多,第14天时NeuN、GFAP标记阳性细胞数目达到高峰,差异均有统计学意义(P0.05)。结论壮通饮可以促进脑梗死后内源性神经干细胞的增殖,并诱导分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等,但特异性不明显。新分化的神经元有正常的兴奋性,可以和其他神经元形成突触联系,表明壮通饮诱导的神经元可以发挥正常的神经功能。  相似文献   

6.
目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞能否分化为胆碱能样神经元.方法 分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),取2~4代MSCs,进行诱导其向胆碱能神经元分化.诱导方案:10% 胎牛血清诱导2 d; 换液为DMEM/F12培养基,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、巯基乙醇(ME)、维甲酸(RA)、神经生长因子(NGF),诱导8 d;加入表皮生长因子(EGF),肝素(Heparin)继续诱导8 d.空白对照组不作任何处理.观察诱导后的形态变化.采用RT-PCR检测巢蛋白(nestin),核受体相关因子(Nurr1),胆碱乙酰转移酶(ChAT)mRNA 的表达,间接免疫荧光法检测表达 nestin、ChAT、神经核蛋白(NeuN),乙酰胆碱酯酶(AchE) 的阳性细胞.结果 诱导后细胞形态逐渐由长梭形变为圆形或椭圆形,突起形成;RT-PCR显示,诱导后的细胞高表达 nestin、Nurr1、ChAT,且基因表达相对强度与未诱导的MSCs比较有显著差异(P<0.01).免疫荧光法检测显示,诱导后的细胞高表达nestin、ChAT、NeuN、AchE,且阳性细胞大于80%,而对照组除ChAT 阳性细胞为1%外,其他均为阴性.结论 大鼠MSCs可诱导为胆碱能样神经细胞.  相似文献   

7.
目的 观察单克隆培养法从人脑胶质瘤细胞系SHG44中分离、培养肿瘤干细胞的结果.方法 取对数生长期SHG44细胞,用无血清培养基进行肿瘤干细胞的分离培养及单克隆培养,免疫荧光染色法对分化前后的肿瘤球行CD133、神经巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)、小管蛋白3-Tubulin染色,MTT法检测肿瘤于细胞的增殖情况,流式细胞术检测CD133阳性细胞比例.结果 单克隆分离培养的细胞球表达CD133及Nestin干细胞标记物,分化后表达星形胶质细胞GFAP及神经元β-Tubulin标记物,细胞球生长约第5天增殖率达到峰值.结论 单克隆培养法可成功分离培养出胶质瘤干细胞,分化前后的细胞球可表达干细胞标记物、神经胶质细胞及神经元标记物,肿瘤球具有较强的增殖及分化能力,并含有一定数量的CD133阳性细胞.  相似文献   

8.
目的探讨香丹注射液体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化为多巴胺(DA)能神经元的效果。方法体外分离、扩增和鉴定大鼠骨髓MSCs。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后香丹注射液诱导3h,采用免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2表达。结果诱导后MSCs分化为具有典型神经元形态的细胞,NSE、MAP2和TH呈高表达,PCNA表达明显减弱。结论香丹注射液诱导大鼠MSCs分化为DA能神经元效果较好。  相似文献   

9.
目的探讨体外培养、扩增骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,诱导MSCs向神经元样细胞定向分化。方法取大鼠骨髓,采用贴壁培养筛选法分离MSCs,进行培养扩增,观察其生物学特性;用IBMX诱导MSCs向神经元样细胞分化,并通过细胞免疫化学法鉴定分化细胞。结果大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离,并可在体外大量扩增,经IBMX诱导,MSCs可向神经元样细胞分化,出现胞体和突起,细胞免疫化学染色神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白呈阳性。结论MSCs易分离和培养,体外培养条件下生长良好,可连续传代,诱导剂作用下可分化出神经元样细胞。  相似文献   

10.
目的 探讨细胞问黏附分子对胚胎癌P19细胞体外定向神经细胞分化的作用.方法 通过单层培养技术,采用视黄酸为诱导剂诱导P19细胞神经细胞分化,在浓度分别为0.1%明胶、2.5 mg/L和10 mg/L的N-钙黏素融合蛋白(N-cad-Fc)包被的培养板上进行培养,观察细胞形态的变化情况,用神经细胞特异标志蛋白β-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)抗体进行免疫荧光染色,反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测干细胞标志蛋白(oct3/4)、神经前体细胞标志蛋白巢蛋白(nestin)、神经元素1(ngn1)、微管相关蛋白(map2)和神经胶质细胞的特异性标志蛋白(gfap)的表达情况.结果 使用5×10-7mol/L的视黄酸成功诱导了P19细胞神经细胞分化,0.1%明胶组、2.5 mg/L N-cad-Fc组和10 mg/L N-cad-Fc组分化为神经元细胞的百分率分别为7.8%、28.6%和26.8%,在包被有N-cad-Fc的培养板上培养,神经标志性蛋白ngn1和map2的表达明显提前、增强,干细胞标志蛋白oct3/4表达提前减弱,未见神经胶质细胞的特异性标志蛋白gfap表达.结论 视黄酸可以诱导P19细胞向神经细胞分化,细胞间黏附分子对分化有促进作用.  相似文献   

11.
目的:观察生长因子分步诱导法在大鼠脂肪干细胞(ADSCs)向神经细胞分化中的应用效果。方法取SD大鼠腹股沟及腹膜后脂肪,体外分离培养ADSCs,取消化、离心的第3代ADSCs,首先以DMEM/F12+2%B27+20 ng/mL EGF+20 ng/mL bFGF的神经干细胞培养基诱导7 d,后以DMEM/F12+1μmol/L RA神经诱导培养基诱导7 d。免疫荧光法鉴定分化后神经细胞特异标志物中神经细胞特异标志物巢蛋白( Nestin )、微管相关蛋白2(MAP2)、神经元核抗原抗体(NeuN)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结果从大鼠脂肪组织中成功提取AD-SCs,其能够连续传代且稳定增殖;流式细胞检测显示CD34表达率为0.36%,CD73为99.17%,CD90为98.61%,CD105为96.20%。经生长因子诱导7 d后细胞聚集成球,Nestin高表达;14 d后MAP2、NeuN高表达,而GFAP低表达。结论 ADSCs能够稳定增殖传代,生长因子分步诱导可高效诱导ADSCs定向分化为神经细胞。  相似文献   

12.
目的:寻找生物人工肝和肝细胞移植需要合适的肝细胞来源,研究不同诱导方法对骨髓间充质干细胞(MSC)在体外分化为肝细胞样细胞的影响。方法:本研究应用贴壁法对MSC进行分离和培养后,应用胆汁化血清及肝细胞生长因子不同诱导方式对之进行诱导分化,研究MSC转化为肝细胞样细胞的可能性,并进行转化的鉴定。结果:经贴壁分离和培养的MSC在5%胆汁化血清诱导作用下,21 d后可分化为形态似肝细胞样的细胞,经免疫组织化学显示,该细胞可表达细胞角蛋白18(CK18)和甲胎蛋白(AFP),且原位杂交显示,在培养的第35天,部分细胞还可合成清蛋白,与肝细胞生长因子(HGF)有着相似的诱导效果。结论:在合适的条件下,MSC可向肝细胞方向转化,且本方法操作简捷,胆汁化血清易于获得,具有潜在的应用价值。  相似文献   

13.
目的探讨体外脐血间充质干细胞诱导分化成心肌细胞的可行性和最佳方法。方法收集获知情同意的健康产妇脐血细胞,分离单个核细胞,从中进一步分离间充质干细胞,传代培养至第3代,应用免疫荧光流式细胞仪标记间充质干细胞特异性抗原CD34、CD44和CD90。5-氮胞苷诱导分化4周后,免疫组织化学染色和RT-PCR法分别检测心肌细胞标记物肌钙蛋白Ⅰ、转录因子GATA 4和β-肌球蛋白重链。结果在第3代细胞中,可检测到CD44、CD90的表达,未检测到CD34的表达。脐血间充质干细胞经5-氮胞苷诱导分化后,呈现成纤维细胞样形态和克隆增殖特点。免疫组织化学染色和RT-PCR可检测到肌钙蛋白Ⅰ,GATA 4和β-肌球蛋白重链的表达。结论脐血间充质干细胞能够被诱导分化成心肌样细胞,可成为干细胞移植的细胞来源。  相似文献   

14.
目的 探讨人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外诱导分化为胰岛β样细胞的方法.方法 用含胰十二指肠同源框因子-1基因(pancreatic and duodenal homeobox factor 1,PDX1)重组腺病毒(Adxsi-CMV-PDX1)感染人脐带MSCs,再联合多种细胞因子进行诱导分化.应用RT-PCR、免疫荧光染色法检测诱导后细胞的PDX1、胰岛素(insulin)、神经元素3(ngn3)、葡萄糖转运体2(glut2)、NK转录因子6.1(NKX6.1)mRNA的表达;化学发光法检测诱导后细胞培养上清中胰岛素和C肽的分泌量;流式细胞仪检测胰岛素阳性细胞率.结果 Adxsi-CMV-PDX1感染脐带MSCs并联合细胞因子诱导后,细胞从短梭形变成长梭形,并聚集形成胰岛样细胞团,经双硫腙染成亮红色.诱导17 d后的细胞表达PDX1、ngn3、NKX6.1、insulin、glut-2的mRNA;细胞胞质内有胰岛素和C肽;细胞培养上清中胰岛素和C肽含量分别为(473.1±51.5)mU/L和(1.61±0.41)ng/ml,用25 mmol/L高糖刺激1 h后,胰岛素和C肽分泌量高达(964.4±68.1)mU/L和(3.72±1.52)ng/ml;胰岛素阳性细胞率达(11.6±4.8)%.结论 PDX1转入脐带MSCs后,联合细胞因子在体外能够诱导其分化为胰岛β样细胞,胰岛素和C肽分泌水平较高,且对高糖刺激有反应,但还不是完全成熟的β细胞.  相似文献   

15.
目的研究神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖和向神经元分化的影响,探讨转染NT-3基因的MSCs体内移植治疗脊髓损伤的可行性。方法体外培养稳定表达NT-3蛋白的MSCs,通过MTT法检测NT-3对MSCs增殖的影响;应用免疫细胞化学和免疫印迹方法检测转染NT-3的MSCs表达神经元标志物NeuN蛋白的情况。结果转染NT-3基因的MSCs生长曲线上移,细胞增殖率显著升高,与对照组相比,两者有显著差异(P<0.05),表明转染NT-3后细胞生长加快。免疫荧光染色结果显示转染NT-3的MSCs的NeuN阳性细胞数明显增多,与对照组比较有显著差异(P<0.05);Western印迹检测结果显示转染NT-3的MSCs内NeuN蛋白表达明显增多,与对照组比较有显著差异(P<0.05),表明NT-3促进MSCs向神经元方向分化。结论 NT-3基因转染可促进MSCs的增殖,并诱导其向神经元方向分化。  相似文献   

16.
骨髓间充质干细胞体外定向诱导内皮祖细胞的实验研究   总被引:2,自引:1,他引:2  
目的:研究兔骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cell,MSC)在体外定向诱导分化为内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)的状况。方法:取兔髂骨骨髓,经密度梯度离心法分离并培养骨髓间充质干细胞,实验组细胞在内皮细胞生长添加剂、血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子等诱导条件下定向分化为内皮祖细胞。对照组不干预,继续培养。结果:实验组细胞集落接近融合时形态呈现“鹅卵石”样或“铺路石”样外观,流式细胞仪检测发现实验组细胞较对照组高度表达CD133、CD34(P<0.05)。结论:体外诱导可使骨髓间充质干细胞分化为内皮祖细胞,并有效扩增。  相似文献   

17.
Patients with myocardial infarction reveal an altered number of circulating mesenchymal stem cells (MSCs). Recently, it was shown that MSCs are able to regenerate myocardial tissue and to differentiate into endothelial cells. The homing mechanisms of MSCs from the circulation into the target tissue, however, are not understood so far. In this study, we evaluated the impact of platelets on MSC recruitment, proliferation, migration and integration into the endothelium. MSCs expressing αvβ3 integrin were recruited to human arterial endothelial cells exposed to isolated platelets or IL-1β under high shear conditions. Furthermore, induction of vascular injury in vivo resulted in increased recruitment of injected MSCs as assessed by intravital microscopy and depletion of platelets significantly reduced this adhesion. The interaction of platelets and MSCs was inhibited by pre-incubation with the mAb 7E3 or an RGD protein both blocking β3 integrin mediated adhesion. Platelets had a chemotactic effect on MSCs, promoted a migratory MSC phenotype and dose- and activation-dependently enhanced migration of MSCs, a process, which was mediated by basic fibroblast growth factor (bFGF). Similarly, platelet derived bFGF increased proliferation of MSCs. Coincubation of MSCs with platelets facilitated integration into an endothelial monolayer, which was significantly reduced by pre-incubation with a blocking mAb to bFGF. We conclude that platelets may play a critical part in the recruitment of MSCs to the endothelium, influence MSC function and promote integration of MSCs into the endothelium.  相似文献   

18.
目的探讨以腺相关病毒(rAAV)为血管内皮细胞生长因子165基因(VEGIF165)载体,在体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并研究其相关特性。方法 (1)全骨髓培养法提取培养MSCs,利用免疫组化法检测MSCs表面标志CD34、CD44;流式细胞分析法检测CD90。(2)rAAV-VEGF165转染MSCs,采用ELISA及PCR检测VEGF的表达,比较转染前后细胞的变化情况,观察VEGF165基因转染对MSCs的影响。结果 (1)成功培养出MSCs,CD44阳性表达,CD34阴性表达,CD90阳性表达。(2)在转染rAAV-VEGF165后转染组上清中VFGF165分泌水平明显高于未转染组(p<0.05),5 d时达到高峰,此后表达开始下降。琼脂糖凝胶电泳可见高亮度条带。表明rAAv-VEGF165成功转染进MSCs细胞中,绘制生长曲线,显示rAAV-VEGF165基因转染后对MSC生长无影响。结论rAAV-VEGF表达载体可有效感染MSCs,并在体外高效表达,为MSCs联合基因治疗提供了实验依据。  相似文献   

19.
叶酸诱导骨髓基质干细胞分化为神经细胞的浓度探索   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨叶酸对骨髓基质干细胞诱导分化为神经细胞的最佳浓度.方法 MSCs由正常成年人骨髓经密度梯度离心加贴壁离心获得,取第5代MSCs以1 mmol/L二巯基乙醇(BME)预诱导24 h后,用羟基茴香醚(BHA)、2%二甲基亚砜(DMSO)和3种不同浓度的叶酸诱导分化,采用免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶原纤维酸性蛋白GFAP的表达,MTT(四唑盐比色)法检测不同时间段对BMSCs增殖的影响.结果 不同剂量叶酸组分化为NSE阳性神经元样细胞的百分率都较对照组高(P<0.01) ,但以40 mg/L中等浓度的叶酸神经细胞最多,且神经元比例高于其他组.结论 叶酸诱导BMSCs向神经元分化以40 mg/L浓度为最佳.  相似文献   

20.
Objective To compare the characterization and myocardial differentiation capacity of amniotic fluid-derived mesenchymal stromal cells (AF MSCs) and umbilical cord Wharton's Jelly-derived mesenchymal stromal cells (WJ MSCs). Methods The human AF MSCs were cultured from amniotic fluid samples obtained by amniocentesis. The umbilical cord WJ MSCs were obtained from Wharton's Jelly of umbilical cords of infants delivered full-term by normal labor. The morphology, growth curves, and analyses by flow cytometry of cell surface markers were compared between the two types of cells. Myocardial genes (GATA-4, c-TnT, α-actin, and Cx43) were detected by real-time PCR and the corresponding protein expressions were detected by Western blot analysis after myocardial induced in AF MSCs and WJ MSCs. Results Our findings revealed AF MSCs and WJ MSCs shared similar morphological characteristics of the fibroblastoid shape. The AF MSCs were easily obtained than the WJ MSCs and had a shorter time to reach adherence of 2.7 ± 1.6 days to WJ MSCs of 6.5 ± 1.8 days. The growth curves by MTT cytotoxic assay showed the AF MSCs had a similar proliferative capacity at passage 5 and passage 10. However, the proliferative capacities of WJ MSCs were decreased at 5 passage relative to 10 passage. Both AF stem cells and WJ stem cells had the characteristics of mesenchymal stromal cells with some characteristics of embryonic stem cells. They express CD29 and CD105, but not CD34. They were positive for Class I major histocompatibility (MHC I) antigens (HLA-ABC), and were negative, or mildly positive, for MHC Class II (HLA-DR) antigen. Oct-4 was positive in all the two cells types. Both AF MSCs and WJ MSCs could differentiate along myocardium. The differentiation capacities were detected by the expression of GATA-4, c-TnT, α-actin, Cx43 after myocardial induction. Conclusions Both AF MSCs and WJ MSCs have the potential clinical application for myogenesis in cardiac regenerative therapy.  相似文献   

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