荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用

目的 比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术与痰涂片抗酸染色、改良罗氏培养法在检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值.方法 对240例临床确诊的肺结核病患者和107例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本分别应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌;另用FQ-PCR法检测14例非结核分枝杆菌DNA以评价该方法对非结核分枝杆菌检测的特异性.结果 FQ-PCR检测结核分枝杆菌的敏感性分别为52.1％ (125/240),明显高于抗酸染色法的24.2％ (58/240)和改良罗氏培养法的35.4％ (85/240),x2=39.36,P＜0.01;FQ-PCR法对14例非结核分枝杆菌检测结果全部为阴性,特异性为100％.结论 FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,并且可以有效地鉴别非结核分枝杆菌感染,在肺结核的临床实验室诊断上有重要的应用价值.     

PCR（FQ-PCR）检查在肺结核诊断中的临床价值

目的了解实时动态荧光定量PCR（FQ-PCR）监测在肺结核诊断中的临床价值。方法采用前瞻性的方法用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术对继发性肺结核患者的痰和结核性胸膜炎患者的胸水作DNA（TB-DNA）定量监测,同时对非肺结核患者的痰作DNA（TB-DNA）定量监测。结果继发型肺结核147例,痰涂片阳性率为21.09%,痰TB-DNA阳性例次率为36.73%;痰涂片抗酸染色阳性例次率为15.04%;在痰涂片TB阳性34例次中,痰菌TB-DNA阳性例次率为23.53%。在痰涂TB阴性的192例次中,TB-DNA阳性例次率为39.06%。结核性膜炎胸水检查TB-DNA108例次,阳性例次率为12.03%;非肺结核患者112例。假阴性率为70.21%,假阳性率为9.60%,灵敏度为29.8%,特异度为90.3%。结论荧光定量PCR（FQ-PCR）TBDNA监测结果与国内报到不一致,其假阴性高,假阳性亦高,灵敏度低,特异度亦不高,且痰涂片抗酸杆菌阳性病人的痰TB-DNA阳性例次率亦低,对临床诊断帮助不大,不作为疑似肺结核病人的常规检查。     

实时荧光聚合酶链反应和结核培养仪法对非痰液标本结核杆菌检测的比较

目的评估比较实时荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)和结核培养仪(BACTEC960)法在检测非痰液标本中结核分支杆菌的特异性和灵敏度。方法对34例临床可疑患者用BACTEC960法和FQ-PCR技术2种方法作阳性检出率比较。结果FQ-PCR诊断肺外结核病的特异度为95%,灵敏度为14·3%。BACTEC960法诊断肺外结核病的特异度为100%,灵敏度为21·4%。结论BACTEC960法诊断结核病的特异性和灵敏度与国内外文献报道较一致,而实时荧光PCR技术诊断结核病的特异性和灵敏度与国内外文献报告有较大差异,明显低于平均阳性检出率。     

结核抗体与痰涂片检验在诊断肺结核患者中的临床价值

目的 分析结核抗体与痰涂片检验在诊断肺结核患者中的应用价值。方法 选取福建省龙岩市新罗区疾病预防控制中心2021年8月至2022年7月接收的90例疑似肺结核患者作为研究对象,对其实施结核杆菌特异性蛋白抗体检测、痰涂片抗酸染色镜检,以结核杆菌生长培养检测结果作为诊断金标准,比较两种检查方法单一及联合检测对肺结核诊断的准确率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。采用受试者工作特征（ROC）曲线评估结核抗体与痰涂片检验对肺结核的诊断价值。结果 结核杆菌特异性蛋白抗体对肺结核诊断的灵敏度、特异度、准确率、阴性预测值高于痰涂片检验,差异有统计学意义（P <0.05）。结核杆菌特异性蛋白抗体联合痰涂片检验诊断肺结核的约登指数、ROC曲线下面积均大于结核杆菌特异性蛋白抗体检测、痰涂片检验,结核杆菌特异性蛋白抗体检测约登指数、ROC曲线下面积大于痰涂片检验（P <0.05）。结论 相比于痰涂片检验,结核抗体检测可提高肺结核阳性检出率,诊断效能较高,但对于无法确诊的情况,应选择结核抗体联合痰涂片检验的诊断方法提升诊断准确率。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的应用价值

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与抗酸染色、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法对311例临床确诊的肺结核病患者和40例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌。结果FQ-PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为47.0%(146/311)、28.3%(88/311)、35.4%(110/311),特异性分别为100.0%、100.0%、95.2%,以FQ-PCR检测的阳性率最高。结论FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

两种结核分枝杆菌快速检测方法的比较

目的比较荧光定量PCR检测和直接扩增检测两种方法对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性,及在国境口岸卫生检疫工作中的应用前景。方法应用结核分枝杆菌荧光定量PCR和直接扩增检测47份疑似或确诊活动性肺结核空腹痰标本,并与液体培养结果进行比较。结果荧光定量PCR法与直接扩增法对结核分枝杆菌检测敏感性分别为46.7%和100%,特异性分别为81.2%和84.4%。结论结核分枝杆菌直接扩增检测是一种较为敏感而特异的快速检测方法,在国境口岸卫生检疫部门具有重要的应用价值。     

乡镇查痰点发现涂阳肺结核病人方式的探讨

[目的]通过设置结核痛乡镇查痰点,方便肺结核可疑症状者和疑似肺结核病人的就诊查痰,提高涂阳肺结核病人的发现率. [方法]乡镇卫生院对所辖区有肺结核可疑症状者和疑似肺结核病人免费进行痰涂片抗酸染色镜检初筛,凡痰涂片阳性病人或痰涂片阴性但高度怀疑肺结核者转至县级结防机构进一步检查确诊.县市(区)级结防机构对确诊肺结核病人经予免费抗结核治疗.建立激励机制:每例查痰的疑似肺结核病人经市、县两级结核病防治机构验收后给予工作人员补助9元. [结果]二年工作实施:登记疑似肺结核病人3973例,查痰2 844例,检出涂阳病人130例,检出涂阳病人率4.57%. [结论]方便了边远的农村地区群众肺结核病人和肺结核可疑症状者就诊;是提高涂阳肺结核病人发现率的一条重要途径.     

不同时间痰标本直接厚涂片镜检结果分析

分析了 1 4 79例可疑肺结核症状者 3种时间的痰标本直接厚涂片检查结果 ,即时痰、清晨痰、夜间痰的阳性检出率分别为 8 60 %、1 2 31 %、1 6 58% ;在确诊为涂片阳性肺结核的病例中 ,镜检阴性及可疑阳性在即时痰、清晨痰和夜间痰中分别占 52 0 9%、31 84%和 8 2 4 %。说明夜间痰在肺结核病细菌学诊断中最为重要 ,不但阳性检出率高 ,而且镜检阳性的数量分级也高 ,可作为肺结核诊断必查痰标本     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA阴性结果的比较

目的：为了解实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）不同试剂间的假阴性差异,分析其原因,寻找消除办法。方法：用深圳匹基基因诊断技术有限公司的FQ-PCR试剂（A方法）检测2 333份血清病毒学标志为HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc阳性病人血清中的HBV-DNA,对HBV-DNA阴性标本,用2种试剂盒进行复核。结果：2 333份HBeAg阳性标本A方法检出48份HBV-DNA阴性标本,阴性率为2.06%,经广州中山大学达安基因股份有限公司试剂（B方法）复核,有28份转为HBV-DNA阳性;上海申友基因技术诊断公司试剂（C方法）复核,有31份转为HBV-DNA阳性。结论：FQ-PCR不同试剂检测HBV-DNA存在假阴性,且假阴性率较高,其原因可能与试剂引物设计保守序列与HBV某些变异造成不相匹配有关,可以采用多种试剂进行复核的方法弥补。当FQ-PCR检测HBV-DNA低于检测值时,应用其他试剂进行复核,以减少假阴性错误的发生,为临床诊断提供可靠的依据。     

结核病病例细菌学86例检验结果分析

目的:探讨结核病病例细菌学检验的应用价值.方法:选择2015年1月—2016年4月我院收治的结核病病例86例为研究对象,比较分析痰培养与痰涂片的检查结果.结果:痰涂片检测阳性例数为35例,占比40.7%;痰培养检测阳性例数为42例,占比48.8%;痰培养阳性检测率明显高于痰涂片阳性检测率(P<0.05).结论:结合结核病病例细菌学原理进行分析结核病病原菌具有比较大的应用价值,痰培养诊断效果优于痰涂片的诊断效果,在临床上可结合实际选择使用痰培养的检查方法,以提高结核病病原菌的检测效果.     

GeneXpertMTB/RIF和Hain技术对痰涂片阴性肺结核诊断价值及利福平耐药性的评估

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpertMTB/RIF)、线性探针(Hain)技术对痰涂片阴性肺结核的诊断价值及利福平耐药性的评估价值。方法选择2018年3月至2019年6月上海市浦东新区肺科医院收治的3次痰涂片阴性的疑似肺结核患者254例,对其行痰GeneXpertMTB/RIF、痰Hain技术、痰罗氏培养、绝对浓度法药敏试验。以痰罗氏培养结果为金标准,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析GeneXpertMTB/RIF、Hain技术检测痰涂片阴性肺结核的效能;以绝对浓度法药敏试验结果为金标准分析GeneXpertMTB/RIF、Hain技术检测利福平耐药的效能。结果GeneXpertMTB/RIF诊断痰涂片阴性肺结核的敏感度、特异度、准确度分别为82.18%、86.93%、83.52%;Hain技术诊断痰涂片阴性肺结核的敏感度、特异度、准确度分别为67.33%、77.12%、73.23%;GeneXpertMTB/RIF评估利福平耐药性的敏感度、特异度、准确度分别为73.33%、98.84%、95.05%;Hain技术评估利福平耐药性的敏感度、特异度、准确度分别为86.67%、82.56%、83.17%。结论GeneXpertMTB/RIF对痰涂片阴性肺结核的诊断价值及利福平耐药性的评估价值优于Hain技术,GeneXpertMTB/RIF对痰涂片阴性肺结核的快速诊断及治疗具有较好的应用价值。     

TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测痰结核分枝杆菌异烟肼耐药效果的评价

目的评价通过检测结核分枝杆菌katG基因突变以诊断异烟肼耐药并检测结核分枝杆菌的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。方法收集临床诊断为肺结核病的患者痰样本,用已建立的荧光PCR方法进行检测,与常规痰涂片抗酸染色、分枝杆菌培养和传统比例法药敏试验比较,评价检测结核分枝杆菌敏感性和特异性及异烟肼耐药的特异性和敏感性。统计学分析采用χ2检验,P值<0.05为差异有统计学意义。结果荧光定量PCR共检测186份痰液样本,敏感性为84.47%,特异性为100.00%。在确诊病人的痰液中阳性检出率84.47%,明显高于痰涂片40.99%(χ2=46.44,P<0.01),痰培养40.37%(χ2=47.89,P<0.01),且差异有统计学意义。其中荧光PCR在菌阳痰液中检出率94.44%,涂阴培阴的痰液中检出率75.28%。与常规药敏试验结果比较,培养阳性的61份痰样本的药敏符合率96.72%(59/61),敏感性33.33%(1/3),特异性100.00%(58/58)。结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速诊断痰液中的结核分枝杆菌及其异烟肼耐药性。     

环介导等温扩增法诊断初诊肺结核病研究

目的:初步评价环介导等温扩增法(Lamp)检测痰中结核分枝杆菌的准确性,探讨临床诊断初诊肺结核病人的应用价值。方法:选取249例初诊疑似肺结核病人的痰标本,同时进行Lamp、直接涂片抗酸染色法和改良罗氏培养基培养法检测。结果:剔除培养失败和非结核杆菌的标本,共检测了739份痰标本,其中直接涂片抗酸染色法检出阳性标本70份,阳性率9.47%;培养检出阳性标本118份,阳性率15.97%;Lamp检出阳性标本99份,阳性率13.40%。以培养法为标准,涂片法的灵敏度57.63%,特异度99.68%,符合率为94.30%;Lamp的灵敏度77.12%,特异度98.71%,符合率为96.61%。结论:Lamp在检测初诊疑似肺结核病人中有较高的灵敏度和特异性,适用于基层结核病工作中初诊肺结核病人的诊断。     

GenoType MTBDRplus VER 2.0试剂盒检测痰标本中结核分枝杆菌复合群的效果评价

目的评价GenoType? MTBDRplus VER 2.0试剂盒检测痰标本中结核分枝杆菌复合群(MTBC)的检测效能。方法对177例疑似肺结核患者的痰标本同时进行涂片,MGIT液体培养和GenoType? MTBDRplusVER 2.0检测。对培养阳性菌株进行菌种鉴定。使用SPSS 22.0统计软件对结果进行统计学分析,计数资料的一致性比较使用Kappa检验。K值≥0.75认为一致性很好。对MTBC检测的效能比较分析用敏感度、特异度进行效果评估。结果以MGIT液体培养结果为判断标准,GenoType? MTBDRplusVER 2.0检测痰标本中MTBC的敏感度为91.67%,特异度为95.58%,阳性预测值为91.67%,阴性预测值为95.58%,总符合率为94.22%。对两种方法进行一致性Kappa检验,K=0.872(P<0.001)。结论GenoType? MTBDRplus VER 2.0试剂盒检测痰标本中MTBC具有较高的敏感度和特异度,对于结核病的早期诊断有很好的应用价值。     

荧光定量PCR和FISH技术诊断肺结核的价值比较

目的比较荧光定量PCR和FISH技术对肺结核诊断的敏感性和特异性。方法共收集300例明确诊断为肺结核的患者作为阳性对照组,以及收集300例健康志愿者(明确排除肺结核患者)做为阴性对照组。收集800例新收临床疑似肺结核患者做为研究组。收集该800例患者的肺活检标本以及同期的痰液标本,其中痰液进行涂片、结核杆菌分离培养以及结核杆菌DNA荧光定量PCR检测和FISH检测。比较荧光定量PCR和FISH技术对肺结核诊断阳性符合率和阴性符合率。结果 1FISH技术检测结核杆菌阳性符合率为99.3%;荧光定量PCR检测结核杆菌阳性符合率为97.3%。两者阳性符合率存在统计学差别(p=0.015)。2FISH技术检测结核杆菌阴性符合率为98.2%,荧光定量PCR技术检测结核杆菌阴性符合率为96.9%。两者阴性符合率存在统计学差别(p=0.007)。结论与荧光定量PCR比较,FISH对肺结核诊断具有较高的阳性符合率和阴性符合率。     

核酸扩增检测结核杆菌DNA方法在肺结核诊断中的临床价值

目的确定核酸扩增结核杆菌DNh检测与抗酸杆菌涂片镜检两种方法在临床诊断上的应用价值。方法选取2009年11月至2011年5月肺结核病例208例为结核组,同期36例非结核病患者作为非结核组,对两组患者晨起痰液进行核酸扩增荧光定量聚合酶链反应（polyerasechainreaction,PCR）和涂片抗酸杆菌镜检,对痰检结果阳性率进行,检验。结果208例结核病患者的痰液中,FQ—PCR法和涂片抗酸染色法检出的阳性率分别为51．92％和25．96％,FQ—PCR法痰检患者结核杆菌DNA的阳性率明显高于涂片法,两种方法相比差异有统计学意义（x2=29．48,p〈0．01）：对两组方法的特异性及敏感性进行分析,两种方法特异性无统计学差异（x2=2．35,p〉0．05）,敏感性有统计学差异（J2=9．447,p〈0．01）。结论荧光定量PCR检测技术对临床上肺结核病的诊断和鉴别诊断有较高的应用价值。     

荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变研究

目的对荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐利福平突变方法进行临床研究,评价检测能力及在国境口岸的应用价值。方法应用荧光PCR熔解曲线法检测结核病人临床分离结核分枝杆菌,以传统药物敏感性试验为标准,获得该方法的灵敏性、特异性。结果对347例结核病人临床分离培养样本,传统药物敏感性试验检出271例利福平敏感标本,76例利福平耐药标本。荧光PCR熔解曲线法检出269例利福平敏感标本,78例利福平耐药标本,灵敏性为93.42%,特异性为97.42%,符合率为96.54%。结论荧光PCR熔解曲线法检测速度快速、灵敏度高、特异性强,可用于结核分枝杆菌利福平耐药突变的快速检测,适于国境口岸对耐多药结核病的快速筛查。     

三种结核抗体检查诊断活动性肺结核比较

目的 比较3种常用结核抗体检测试剂盒的临床价值.方法 用SD结核杆菌抗体检测试剂盒、TB-CHECK诊断试剂盒、TB - DOT诊断试剂盒检测232例部队活动性肺结核和50例非结核患者,对比分析敏感性、特异性.痰涂片和培养按常规实验室操作.结果 232例肺结核患者中SD的敏感性为16.38％,特异性为100％;TB-CHECK的敏感性为49.57％,特异性为98％;TB - DOT的敏感性最高为78.45％,特异性为92％.3种检测方法的敏感性差别有统计学意义(P＜0.01);3种试剂盒联合检测敏感性可达到86.21％,特异性92％,高于单项试剂盒检测灵敏度(P＜0.01).其中201例肺结核患者同时进行痰菌检查,痰菌阳性率为23.88％.结论 3种检测试剂盒在活动性肺结核中的诊断价值不同,SD试剂盒和痰涂片敏感性较低,3种试剂盒联合检测综合分析可提高结核病诊断和鉴别诊断价值,是敏感、特异、快速、简便和低廉的方法.     

荧光定量PCR技术检测结核杆菌临床应用分析

目的 探讨荧光定量PCR技术在检测结核杆菌的临床应用价值. 方法 将本院临床诊断确诊为肺结核的68例患者为研究对象,采用荧光PCR技术测定两组痰液及外周血中的结核杆菌,以临床诊断结果为金标准,采用x2检验对结果进行分析比较. 结果 68例结核病患者中痰涂片、痰定量PCR、外周血定量PCR检测的阳性率为14.7％、41.2％、44.1％,定量PCR检测的阳性率显著高于痰涂片(P＜0.05).痰涂片阴性的58例患者中痰及外周血定量PCR检测阳性率为31.0％、41.3％.痰及外周血定量PCR配对检测两种标本同时检测的符合率为44.1％. 结论 荧光PCR技术检测结核杆菌的效果要显著优于传统涂片,其可证实、鉴定涂片阳性结果,同时对痰和外周血进行定量PCR检测,可.增强互补作用,提高检测的准确率.