冬凌草甲素衍生物的制备和评价

目的 为研究冬凌草甲素的构效关系,对冬凌草甲素进行结构修饰,合成其衍生物,并评价其细胞毒活性.方法 经常规提取分离得到冬凌草甲素(Ⅰ);通过氧化和酰基化,制备冬凌草甲素衍生物,所获产物采用NMR和MS确证结构;采用MTT法观察衍生物的细胞毒活性.结果 制备了6个冬凌草甲素的衍生物,分别为14-乙酰基冬凌草甲素(Ⅱ)、1,14-二乙酰基冬凌草甲素(Ⅲ)、14一对甲苯磺酰基冬凌草甲素(Ⅳ)、1-氧代冬凌草甲素(Ⅴ),14-乙酰基-1-氧代冬凌草甲素(Ⅵ)、14-对甲苯磺酰基-1-氧代冬凌草甲素(Ⅶ),其中化合物Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ为3个新化合物.初步药理实验表明部分衍生物细胞毒活性高于冬凌草甲素.结论 首次评价了1-氧代冬凌草甲素衍生物的细胞毒活性,其活性高于冬凌草甲素.     

14-O-取代冬凌草甲素衍生物的合成及抗肿瘤活性(英文)

目的:探索14-O-取代冬凌草甲素衍生物的合成及其抗肿瘤活性。方法:将二酸酐与冬凌草甲素14位羟基缩合,再与氨基酸酯进行酰胺化反应,合成14-O-取代冬凌草甲素衍生物;采用MTT法测试所有目标化合物体外对肿瘤细胞株(BGC-7901,SW-480,HL-60,BEL-7402,A549和B16)的细胞毒性以及化合物2c和2d对小鼠H22肝癌在体抗肿瘤活性。结果:合成了10个新的目标化合物,其结构均经IR,MS及1HNMR确证;生物活性初筛结果显示,化合物2c,2d和3e有较强的细胞毒活性;化合物2c和2d在体抗肿瘤活性大于环磷酰胺和冬凌草甲素。结论:14-O-取代冬凌草甲素衍生物2c,2d和3e作为潜在的抗肿瘤候选化合物值得进一步深入研究。     

姜黄素与呋咱氮氧化物偶联物的合成及抗肿瘤活性研究

目的设计合成姜黄素与呋咱氮氧化物的偶联物并考察其抗肿瘤活性。方法以肉桂醇为起始原料通过3步反应合成了姜黄素与呋咱氮氧化物的偶联物,并分别通过griess法与MTT法测定目标化合物的体外一氧化氮(NO)释放及抗肿瘤活性。结果产物经1H-NMR和ESI-MS确认为姜黄素与呋咱氮氧化物偶联物,该偶联物24h体外释放NO达39. 7μmol/L,抗肿瘤活性比单纯的姜黄素、呋咱氮氧化物及姜黄素与呋咱氮氧化合物的混合物更强。结论姜黄素与呋咱氮氧化物的偶联物表现出显著的协同效应。     

冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制的研究

目的:研究冬凌草甲素(oridonin)诱导HepG2凋亡的分子机制。方法:MTT法、Hoechst33258荧光染色、流式细胞分析法和Western blot分析法。结果:冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生死亡呈时间和浓度依赖性,其作用24h的半数有效抑制浓度IC50=(29.7±1.5)μmol.L-1。Hoechst33258荧光染色证明冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生了凋亡;30μmol.L-1冬凌草甲素作用于HepG2细胞使之产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),p53抑制剂PFTα显著地抑制了ROS的产生,从而抑制了细胞凋亡的发生;在HepG2细胞中,30μmol.L-1冬凌草甲素促进了Bax的表达,抑制了Bcl-2的表达,同时线粒体下游蛋白caspase-9,-3的抑制剂明显地抑制了30μmol.L-1冬凌草甲素诱导的HepG2细胞凋亡。结论:冬凌草甲素通过p53蛋白诱导ROS的产生,从而导致HepG2细胞凋亡,除此之外冬凌草甲素还通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

冬凌草甲素抗肿瘤活性及构效关系研究进展

对近年来国内外有关冬凌草甲素抗肿瘤活性及其构效关系作一综述，供新型抗癌药物开发借鉴。     

40种香豆素类化合物对人表皮癌细胞系A432细胞株和人乳腺癌细胞系BCAP细胞株增殖抑制活性的筛选

目的从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物、类药或先导化合物。方法应用人表皮癌细胞系A432细胞株和人乳腺癌细胞系BCAP细胞株筛选40种香豆素类化合物对其增殖的抑制活性。结果花椒毒素、前胡素、虎耳草素、牛防风素和甘草香豆素对人表皮癌细胞系A432细胞株增殖具有弱的抑制作用,且呈浓度-效应关系;其IC50值分别为8.40×10-4、5.00×10-5、7.30×10-5、1.00×10-5、5.00×10-5mol.L-1。蛇床素、欧前胡素、香柑内酯、羌活烯醇、紫苜蓿酚和考迈斯托醇对人乳腺癌细胞系BCAP细胞株增殖具有弱的抑制作用,且呈浓度-效应关系;其IC50值分别为6.70×10-5、2.11×10-4、2.77×10-5、6.62×10-5、4.16×10-5、2.26×10-4mol.L-1。结论某些香豆素类化合物具有潜在的抗肿瘤活性,可能发展成为类药或先导化合物。     

产冬凌草甲素菌株筛选鉴定及其抗肿瘤活性研究

目的对冬凌草内生真菌进行筛选鉴定,并研究其体外抗肿瘤活性,以期得到冬凌草甲素高产抗肿瘤活性菌株。方法采用TLC法和HPLC法对前期从冬凌草中分离出的256株内生真菌进行筛选,HPLC-MS测定菌株发酵液中的冬凌草甲素。结合形态学特征、ITS序列对筛选出的菌株进行鉴定。MTT法测定筛选菌株的体外抗肿瘤活性。结果从冬凌草中分离出的256株内生真菌经筛选,获得1株冬凌草甲素高产菌株M-J-5,鉴定为青霉属草酸青霉菌Penicillium oxalicum Currie et Thom,其对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞活性具有一定抑制作用。结论从冬凌草内生真菌中筛选得到产冬凌草甲素且具抗肿瘤活性的菌株M-J-5。     

稀土元素对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响

目的:探讨稀土元素镧、铈对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响.方法:冬凌草均匀愈伤组织在添加不同浓度La3或Ce3的培养基中培养,通过质量法测定愈伤组织鲜质量、绘制生长曲线,HPLC测定甲素、乙素含量.结果:CeCl3·7H2O浓度为1μmol·L-1时,愈伤生物量最高,是空白条件下的2.4倍.空白及对照条件下甲素含量均为0;空白条件下乙素含量最低为0.11％,随着Ce3+浓度升高而升高,当浓度为10 μmol· L-1时高达0.58％;乙素随着La3+浓度升高而降低,当浓度为0.1 μmol· L-1时含量高达0.44％.结论:0～ 10 μmol·L-1的La3+及Ce3+均有利于冬凌草愈伤生物量的积累及乙素的合成,对甲素的合成无影响,将CeCl3 ·7H2O浓度10 μmol· L-1作为最佳条件选择.     

槲皮素-3-O-酰胺类衍生物的合成及其抗癌活性研究

目的设计并合成槲皮素酰胺类衍生物,并对该系列化合物进行体外抗肿瘤活性研究。方法以廉价的芦丁为原料,经苄基选择性保护、Williamson成醚反应,再经Pd/C催化加氢脱苄基得到目标产物,采用DPPH法考察目标化合物的抗氧化活性,MTT法考察目标化合物对人食管鳞癌细胞EC109、人食管鳞癌细胞EC9706、人胃癌细胞SGC7901及小鼠黑色素瘤细胞B16-F10的增殖抑制作用。结果合成的15个槲皮素酰胺类衍生物结构均经~1H-NMR、~(13)C-NMR、ESI-MS确证。抗氧化活性结果显示大部分目标化合物的半数清除率(SC_(50))小于槲皮素或与槲皮素相当,这提示3-OH不是槲皮素抗氧化活性的必需基团。抗肿瘤实验结果显示,通过化学方法对槲皮素进行结构修饰后,其体外抗肿瘤活性显著增强。其中,化合物7-6对EC109细胞的抑制作用(IC_(50)=10.25μmol/L)明显优于母药槲皮素(IC_(50)=31.884μmol/L)和5-FU(IC_(50)=41.738μmol/L),是一个很有潜力的新型抗肿瘤候选化合物。结论 15个槲皮素-3-O-酰胺衍生物均为新化合物,其中化合物7-6具有较好的抗肿瘤活性,值得进一步研究。     

鄂西香茶菜化学成分研究

采用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及半制备型高效液相色谱等多种色谱分离技术从鄂西香茶菜干燥地上部分水提液中分离得到10个化合物,综合运用UV,IR,MS,NMR等光波谱学技术鉴定了10个化合物的结构,分别为毛叶酯(1),毛栲利素(2),毛叶香菜醇(3),四川香茶菜丙素(4),毛叶香菜素(5),河北冬凌草素(k)(6),冬凌草丙素(7),延命草醇(8),冬凌草甲素(9),延命草醇-1-β-葡萄糖苷(10),其中化合物1～8和10均为首次从鄂西香茶菜中分离得到。活性测试结果表明,化合物2和9对4种肿瘤细胞均有较强的抑制作用,IC50为2. 25～9. 32μmol·L-1。     

木犀草素对Aβ25-35损伤大鼠大脑微血管内皮细胞的保护作用

目的：研究木犀草素对Aβ25-35损伤大鼠大脑微血管内皮细胞的保护作用。方法：取3周龄Wistar大鼠制备大脑微血管内皮细胞,经过纯化,将细胞随机分为对照组、Aβ25-35损伤组、0.1、1.0及10μmol·L^-1不同浓度木犀草素实验组。采用MTS法、DCFH-DA染色法、SOD抑制率实验分别检测细胞存活率、细胞内活性氧含量及SOD活力。通过测定跨内皮细胞电阻抗、γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、TXA2及PGI2稳定代谢产物含量,观察微血管内皮细胞的功能及屏障特性。结果：木犀草素在0.1、1.0及10μmol·L^-1浓度时,可显著提高Aβ25-35作用后微血管内皮细胞存活率,并抑制细胞内活性氧产生,提高细胞内SOD活性。木犀草素亦可改善Aβ25-35作用后微血管内皮细胞的功能和屏障特性,表现为提高跨内皮细胞电阻抗,增加特征性酶含量,缓解TXA2及PGI2分泌失衡。结论：木犀草素对Aβ25-35损伤大鼠大脑微血管内皮细胞具有保护作用。     

南川斑鸠菊中的抗肿瘤倍半萜内酯（英文）

目的：研究南川斑鸠菊中的抗肿瘤活性成分方法：采用层析柱和制备高效液相进行化合物分离,运用1H和13CNMR及MS等波谱分析技术鉴定化合物结构;采用MTT法进行7个化合物对人骨髓白血病细胞（HL-60）的体外细胞毒实验。结果：分离得到6个倍半萜内酯[8α-（4-hydroxymethacryloyloxy）-10α-hydroxy-13-methoxyhirsutinolide（1）,8α-methacry-loyloxy-10α-hydroxy-13-O-methylhirsutinolide（2）,piptocarphin A（3）,8α-[4-hydroxymethacryloyloxy]-10α-hydroxyhisutinolide-13-O-acetate（4）,piptocarphin F（5）以及8α-acetoxy-10α-hydroxy-13-O-methylhirsutinolide（6）]和1个inone苷saussureosides B（7）;6个倍半萜内酯（1-6）具有抑制人骨髓白血病细胞（HL-60）的活性（IC503.87-12.5μmol·L-1）,但inone苷saussureosides B（7）对HL-60没有抑制活性。结论：化合物1,2,6和7首次从该植物中得到;南川斑鸠菊中的倍半萜内酯类化合物具有抗肿瘤活性。     

番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用及作用机制

目的：研究番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用及作用机制。方法：采用组织块法体外培养牛胸主动脉平滑肌细胞,以含10%小牛血清的培养基制备牛胸主动脉平滑肌细胞增殖模型。细胞分为正常组、阴性对照组、模型组及1、0.1和0.01μmol·L^-1三个不同浓度的番茄红素实验组。实验采用MTT法测定牛胸主动脉平滑肌细胞的增殖活性,采用流式细胞术测定细胞周期分布,并测定了细胞内的SOD活性和MDA含量。结果：番茄红素在三个实验浓度下都能显著抑制血管平滑肌细胞的增殖。一方面,番茄红素抑制了G1期细胞进入S期;另一方面,番茄红素在1和0.1μmol·L^-1的浓度下,能明显增强细胞中的SOD活性,同时,在三个给药浓度下,细胞内的MDA含量都显著降低。这些作用都具有浓度依赖性,并且与模型组比较均有统计学差异。结论：番茄红素对牛胸主动脉平滑肌细胞的增殖有抑制作用,并且这种抑制作用可能与它能够抑制细胞进程和它的强抗氧化性能够抑制细胞中的脂质过氧化和氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）的形成有关。它有望成为防治动脉粥样硬化的一种新的药物。     

黄芩苷铜和铝配合物的合成及其生物活性研究

目的:合成黄芩苷铜和铝配合物,并研究其抗菌抗肿瘤活性和对巨噬细胞抗肿瘤作用的影响。方法:将黄芩苷在弱碱条件下与金属盐反应得到黄芩苷铜和黄芩苷铝配合物,倍比稀释法考察黄芩苷及其配合物对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌和白色念珠菌的抑制作用;MTT法测定化合物对A549,HepG2的IC50和对小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤作用的影响;中性红法测定化合物对巨噬细胞吞噬作用的影响。结果:反应所得黄芩苷铜和黄芩苷铝的产率分别为73.93%,91.08%,黄芩苷铜(黄芩苷铝)对上述菌的MIC(mol.L-1)分别为0.000 4(0.001 1),0.000 9(0.001 1),0.000 4(0.001 1),0.000 9(0.001 1),0.000 4(0.000 5),黄芩苷铜(黄芩苷铝)对A549,HepG2的IC50(μmol.L-1)分别为89.6(138.8),22.6(97.2),巨噬细胞经160μmol.L-1的黄芩苷、黄芩苷铜和黄芩苷铝作用后对A549的抑制率分别为43.52%,80.89%,52.66%。结论:小鼠急性毒性试验表明配合物无毒,抗菌抗肿瘤活性及对巨噬细胞抗肿瘤作用均为黄芩苷铜>黄芩苷铝>黄芩苷。     

气滞血瘀证大鼠NO/NOS体系的变化

目的：观察气滞血瘀证大鼠一氧化氮／一氧化氮合成酶（NO／NOS）的体系变化。方法：将Wistar大鼠随机分成4组,对照组、模型组、血府逐瘀汤低、高剂量组。采用多因素联合刺激法建立气滞血瘀模型。运用分光光度法测定血浆和肝组织中NO含量以及肝组织中NOS活性,利用RT—PCR法测定肝组织中NOS基因表达。结果：模型组血浆NO含量（0．52±0．33）μmol／L显著低于对照组（2．77±1．73）μmol／L（P〈0．01）,低剂量组NO含量（2．37±0．53）μmol／L显著高于模型组（0．52±0．33）μmol／L（P〈0．01）;模型组肝组织NO含量（0．52±0．24）μmol／mg显著低于对照组（5．87±1．72）μmol／mg（P〈0．01）,低剂量组NO含量（3．72±1．53）μmol／mg显著高于模型组（0．52±0．24）μmol／mg（P〈0．01）;模型组肝组织eNOS基因表达水平显著低于对照组（P〈0．01）,低剂量组肝组织eNOS显著高于模型组（P〈0．05）。结论：气滞血瘀证大鼠NO／NOS体系下调,为进一步研究治疗血瘀症类疾病提供了借鉴和思路。     

人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞钠、钾离子通道的影响

目的：观察人参皂苷Re对大鼠心室肌细胞电压依赖性的钠、钾离子通道的影响,揭示其抗心律失常的作用机制。方法：采用酶分法获得单个大鼠心室肌细胞,在全细胞膜片钳技术模式下,记录电压依赖性钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流,并观察不同浓度的人参皂苷Re对电流幅度的影响。结果：给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）后钠通道电流幅度呈现减小的趋势,对通道电流幅度的抑制率分别为（25.5±5.7）%（n=3）和（46.2±18）%（n=4）。给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）对瞬时外向钾电流幅度略有抑制,洗脱后电流恢复,其中100μmol·L-1人参皂苷对电流的抑制率为（13±9）%（n=3）。给予人参皂苷Re（10,100μmol·L-1）后内向整流钾电流幅度呈现逐渐减小的趋势,药物洗脱后电流完全恢复,（10,100μmol·L-1）对通道电流幅度的抑制率分别为（16.3±8.7）%（n=5）和（35.4±11.2）%（n=5）。结论：人参皂苷Re能够抑制心室肌细胞电压依赖性的钠通道、瞬时外向钾通道和内向整流钾通道电流发挥抗心律失常的作用。     

苦楝皮中5个柠檬苦素化合物的细胞毒活性以及构效关系（英文）

目的：研究柠檬苦素化合物1-5的细胞毒活性以及阐明其构效关系。方法：从苦楝皮中分离获得化合物1-5,采用MTT法进行3种肿瘤细胞株的体外细胞毒活性实验。结果：化合物1-5均表现出潜在的抗肿瘤活性。尤其是化合物1对人肝癌BEL7402细胞的IC508.57μg·mL-1,对人肺癌H460细胞的IC506.29μg·mL-1,对人胃癌SGC-7901细胞的IC506.08μg·mL-1,较其他化合物表现出更强的细胞毒活性。结论：化合物1-5的构效关系研究显示16位羟基为柠檬苦素化合物具备细胞毒活性的重要基团。     

HPLC测定益母草片中盐酸水苏碱含量

目的：建立益母草片中盐酸水苏碱含量的测定方法。方法：运用HPLC对盐酸水苏碱含量进行测定,色谱柱：强酸型阳离子交换色谱柱（200mm×4．6mm,5μm）,流动相：0．1％三乙胺的0．05mol·L^-1磷酸二氢钾溶液,用磷酸调节pH值2．3,检测波长：192nm,流速1．0mL·min^-1,柱温：室温。结果：盐酸水苏碱的量在25～300μg·mL。浓度同峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率为100．92％,RSD=0．43％。结论：所建立的方法可靠,可用于益母草片的质量控制。     

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??OBJECTIVE To synthesize and evaluate of antihypertensive activity of novel nitric oxide-releasing N-phenyl-1H-pyrrole derivatives. METHODS By connecting key structural elements present in an AT1 receptor antagonist irbesartan with N-phenyl-1H-pyrrole carboxylic acid, a novel AT1 antagonist compound 4 was designed and synthesized, and a series of novel NO-donating derivatives (IN 1-10) were obtained by introducing NO donor. The amount of NO production in vitro of the target compounds were determined by Greiss assay. And the antagonism of Ang II induced vascular contraction assay was used to value the inhibition rate. RESULTS The antagonism of Ang ?? induced vascular contraction assay indicated that the novel compound exhibited similar activity as losartan. The NO derivative, compound IN9, found to release the maximum amount of NO during the NO releasing assay, was more potent than the lead compound 4 and positive control losartan. CONCLUSION These date indicate that the improved activities of these hybrid molecules contribute to the NO donor and the protection ability of NO donor make them promising candidates as antihypertensive agents.     

儿茶素对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用

目的 本实验研究儿茶素对重症急性胰腺炎模型大鼠肠黏膜屏障功能损伤的保护作用及其机制,从而为重症急性胰腺炎的临床防治提供新的药物及思路.方法 80只清洁级SD大鼠按随机数字表分为正常对照组（8只）、假手术组（24只）、重症急性胰腺炎模型组（24只）和儿茶素（EGCG,24只）组.正常对照组不做任何处理;假手术组在开腹后仅翻动胰腺后关腹;急性胰腺炎模型组采用逆行十二指肠胰胆管注射5％牛黄胆酸钠溶液制备重症急性胰腺炎大鼠模型;儿茶素组在模型制备成功后即刻经尾静脉注射30mg/kg的儿茶素单体成分EGCG.各组大鼠分别在建模成功后6h、12h、24 h采集血液、肠道标本;检测血浆二胺氧化酶（DAO）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量;采用免疫组织化学法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达水平.结果 ①急性胰腺炎模型组术后6h、12 h、24 h血浆DAO浓度分别[（4.23±0.51）μ/L、（5.13±0.32）μ/L、（7.83±0.76） μ/L]、血淀粉酶浓度[（3158.64±218.25） μ/L、4277.24±231.35） μ/L、5842.76±248.18） μ/L]均明显高于正常对照组[DAO：（2.32±0.48）μ/L;血淀粉酶：（2074.11±101.56） μ/L]、假手术组[DAO：（2.24±0.43） u/L、（2.27.53） μ/L、（2.33±0.41） μ/L;血淀粉酶（1885.27±103.89）μ/L、（1778.57±98.94）u/L、（1935.24±105.87） μ/L].儿茶素组血浆DAO[（3.59±0.57） μ/L、（3.98±0.67） μ/L、（6.44±0.71）μ/L]、血淀粉酶浓度[（2576.70±123.43） μ/L、（2783.77±155.53）μ/L、（2902.32±176.25）μ/L]高于正常对照组、假手术组,但低于模型组.②与正常对照组、假手术组相比较,模型组肠道MDA、NO水平3个时间点依次升高[MDA：（2.28±0.35） μmol/g、（3.02±0.41） μmol/g、（3.78±0.48） μmol/g; NO：（16.80±0.60） μmol/g、（18.23±0.78） μmol/g、（20.14±0.82） μmol/g];儿茶素组MDA：（1.67±0.14） μmol/g、（1.75±0.16） μ.mol/g、（1.84±0.22） μmol/g; NO：（9.09±0.31） μmol/g、（9.32±0.44）μmol/g、（10.15±0.52） μmol/g较急性胰腺炎模型组肠道MDA、NO水平均明显降低.③重症急性胰腺炎组肠道iNOS表达水平（1.86）均高于正常对照组（0.10）、假手术组（0.25）;儿茶素治疗组肠道iNOS表达水平（0.66）低于模型组,但高于正常对照组、假手术组（P＜0.05）.结论 儿茶素对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能损害具有保护作用,机制与抗氧化、清除氧自由基及下调iNOS表达有关.