续断含药血清对成骨细胞增殖的影响及其细胞毒性检测

目的:观察不同浓度续断含药血清的细胞毒性及其对成骨细胞增殖的影响。方法:实验于2001-01/07在中山医科大学附属第二医院脐血库、医学研究中心以及中山医科大学放免检测中心完成。①制备大鼠含药血清:取雌性SD大鼠18只,随机分为3组,续断组6只,空白对照组8只,雌激素组4只,按体质量分别给予续断生药、生理盐水、雌激素灌胃3d后取血,离心后取上清液。②根据文献方法分离、培养人的原代成骨细胞。③含药血清细胞毒性的观察:成骨细胞按1.0×108L-1密度接种培养24h,换成无血清培养液24h后,用含不同续断浓度(100%,50%,25%,12.5%,6.25%,3%)的大鼠血清处理细胞。采用直接计数法和四氮唑蓝法观察不同浓度续断含药血清的细胞毒性。④细胞增殖的定量分析:将培养人成骨样细胞用不同组大鼠血清稀释,分为5%,10%和20%续断组,5%,10%和20%雌激素1组,5%,10%和20%空白对照组,5%,10%和20%雌激素2组。采用氚-胸腺嘧啶和四氮唑蓝法检测细胞增殖能力。结果:①续断含药血清细胞毒性的观察结果:直接计数表明含续断血清浓度12.5%和25%时,细胞生长数量最多,四氮唑蓝法测定A值最高。②续断对成骨细胞增殖的影响:氚-胸腺嘧啶掺入法显示10%续断组,10%,20%雌激素1组,各浓度雌激素2组细胞增殖显著高于空白对照组、5%雌激素1组和5%续断组(P<0.01);四氮唑蓝法显示10%,20%续断组,10%,20%雌激素1组,10%,20%雌激素2组细胞增殖显著高于空白对照组、5%雌激素1组和5%续断组(P<0.01)。结论:高剂量续断对成骨细胞增殖产生抑制作用,低剂量无明显影响,中剂量续断对细胞增殖的刺激作用最强。     

续断含药血清对成骨细胞增殖的影响及其细胞毒性检测

目的：观察不同浓度续断含药血清的细胞毒性及其对成骨细胞增殖的影响。方法：实验于2001-01／07在中山医科大学附属第二医院脐血库、医学研究中心以及中山医科大学放免检测中心完成。①制备大鼠含药血清：取雌性SD大鼠18只，随机分为3组，续断组6只，空白对照组8只，雌激素组4只，按体质量分别给予续断生药、生理盐水、雌激素灌胃3d后取血，离心后取上清液。②根据文献方法分离、培养人的原代成骨细胞。③含药血清细胞毒性的观察：成骨细胞按1．0&;#215;10^8L^-1密度接种培养24h，换成无血清培养液24h后，用含不同续断浓度（100％，50％。25％，12．5％，6．25％，3％）的大鼠血清处理细胞。采用直接计数法和四氮唑蓝法观察不同浓度续断含药血清的细胞毒性。④细胞增殖的定量分析：将培养人成骨样细胞用不同组大鼠血清稀释，分为5％，10％和20％续断组，5％，lO％和20％雌激素1组，5％，10％和20％空白对照组，5％，10％和20％雌激素2组。采用氚-胸腺嘧啶和四氮唑蓝法检测细胞增殖能力。结果：①续断含药血清细胞毒性的观察结果：直接计数表明含续断血清浓度12．5％和25％时，细胞生长数量最多，四氮唑蓝法测定A值最高。②续断对成骨细胞增殖的影响：氚-胸腺嘧啶掺入法显示10％续断组，10％，20％雌激素1组，各浓度雌激素2组细胞增殖显著高于空白对照组、5％雌激素1组和5％续断组（P〈0．01）；四氮唑蓝法显示10％，20％续断组，10％，20％雌激素1组，10％，20％雌激素2组细胞增殖显著高于空白对照组、5％雌激素1组和5％续断组（P〈0.01）。结论：高剂量续断对成骨细胞增殖产生抑制作用，低剂量无明显影响，中剂量续断对细胞增殖的刺激作用最强。     

保妇康栓对宫颈癌细胞SiHa体外增殖和凋亡的影响

目的研究中药保妇康栓含药血清在细胞水平对宫颈癌SiHa细胞体外增殖及凋亡的影响,探讨保妇康栓抑制宫颈癌SiHa细胞生长可能的作用机制。方法中药保妇康栓含药血清培养液作用于SiHa细胞24、48、72h,并设立阴性及阳性(西药含药血清)对照组,采用CCK8及流式细胞分析技术进行细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡检测。结果保妇康栓对宫颈癌SiHa细胞增殖具有抑制作用,24h抑制作用最强。与阴性对照组比较,保妇康栓组SiHa细胞中G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论保妇康栓的作用可能是通过阻断细胞从G0/G1期向S期分化,从而抑制宫颈癌SiHa细胞增殖并诱导凋亡来抑制肿瘤生长。     

雷公藤甲素含药血清对大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及其巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的:雷公藤甲素是雷公藤抗炎、抗肿瘤、免疫调节和抑制细胞增殖的主要有效成分。观察雷公藤甲素、雷公藤及其与来氟米特配伍的含药血清对大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖及巨噬细胞移动抑制因子表达的影响。方法:实验于2006-12/2007-03在解放军白求恩国际和平医院中心实验室完成。①实验分组:雄性Wistar大鼠12只,体质量150～180g,随机数字表法分为6组,分别为雷公藤组、雷公藤甲素组、来氟米特组、雷公藤 来氟米特组、雷公藤甲素 来氟米特组和空白对照组,每组2只。②实验方法:雷公藤组、雷公藤甲素组、来氟米特组、雷公藤 来氟米特组、雷公藤甲素 来氟米特组,分别将雷公藤、雷公藤甲素、雷公藤 来氟米特、雷公藤甲素 来氟米特的含药血清以0.1、0.2、0.3的体积分数干预成纤维样滑膜细胞,空白对照组加入正常鼠血清。③实验评估:四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞增殖情况;免疫组织化学染色及细胞ELISA法检测滑膜细胞和细胞上清液巨噬细胞移动抑制因子的表达。结果:纳入大鼠12只,均进入结果分析。①四甲基偶氮唑盐比色法结果显示,含药血清对体外滑膜细胞增殖具有显著抑制作用,单药最佳作用体积分数为0.2。②雷公藤甲素组、雷公藤组、雷公藤甲素 来氟米特组、雷公藤 来氟米特组的含药血清对成纤维样滑膜细胞均具有显著抗增殖效应,以体积分数为0.1雷公藤甲素联合体积分数为0.3来氟米特的含药血清抑制作用最强,与空白对照组相比,差异具有显著性意义(P<0.05)。③对巨噬细胞移动抑制因子蛋白表达的抑制作用则以雷公藤甲素 来氟米特的含药血清最佳,与其他各组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论:雷公藤甲素是雷公藤抑制成纤维样滑膜细胞增殖和抗炎作用的主要有效成分,而雷公藤甲素 来氟米特组的含药血清在抑制成纤维样滑膜细胞增殖及其表达巨噬细胞移动抑制因子等方面显示出明显的协同/增效作用。     

健脾化瘀复方中药血清影响人肝癌BEL7402细胞增殖的作用

目的:观察健脾化瘀中药复方对人肝癌BEL7402细胞增殖的抑制作用,并与已知阳性药物5-氟尿嘧啶进行比较。方法:实验于2005-03/06在中山大学动物实验中心完成。①服药前及含药血清获得:健康志愿者1名(了解实验目的并签订知情同意书)空腹12h后按0.83,1.67,2.5mL/kg剂量口服健脾化瘀复方960合剂(由莪术、白术、苦参、白花蛇舌草等组成;广州市中医院提供;先将莪术、白术剪碎后用净水浸泡30min,提取挥发油和芳香成分,其渣再与用净水浸泡30min的苦参、白花蛇舌草等水煎提取水溶性成分,各种有效成分混匀制成口服液,每毫升相当于生药1.0g),分别于服药前、服药后1h抽取外周血液,得到服药前和含有健脾化瘀复方有效作用成分的含药血清。②观察服药前血清与小牛血清对BEL7402细胞的作用:分别将服药前血清和小牛血清(购于四季青公司)加入RPMI-1640培养液,血清终浓度50,100和200g/L。③观察药物血清对BEL7402细胞的作用:将人肝癌细胞BEL7402(引自中山大学动物实验中心)随机分为7组(每组细胞接种10孔):对照组(服药前血清加入RPMI-1640培养液,血清终浓度100g/L),5-氟尿嘧啶组[用含100g/L服药前人血清的RPMI-1640培养液配制,5-氟尿嘧啶(上海旭东海普药业有限公司,批号050106,规格10mL/支)终质量浓度为0.3,0.6,0.9mg/L]和健脾化瘀复方组(将按0.83,1.67和2.50mL/kg剂量服药后人血清加入RPMI-1640培养液,血清终浓度100g/L)。④人肝癌细胞增殖能力检测:用四甲基偶氮唑盐比色法检测人肝癌细胞增殖能力,以吸光度(A值)表示。计量细胞增殖抑制率[(观察组A值-对照组A值)/观察组A值]。结果:①相同质量浓度服药前血清与小牛血清对BEL7402细胞增殖能力影响比较,差异不明显(P>0.05)。200g/L服药前血清和小牛血清促进BEL7402细胞增殖能力最强,明显强于50g/L时(P<0.01)。②0.3,0.6,0.9mg/L5-氟尿嘧啶药物血清和1.67,2.50mL/kg健脾化瘀复方药物血清抑制人肝癌细胞增殖的能力和抑制率明显高于对照组(P<0.05～0.01),且药物血清浓度越高,对癌细胞增殖能力的抑制作用越强。1.67mL/kg健脾化瘀中药复方血清对人肝癌细胞增殖能力的抑制率与0.3mg/L5-氟尿嘧啶药物血清相近(30.0%,35.9%,P>0.05)。结论:①服药前人血清与小牛血清一样具有促进BEL7402细胞增殖的作用。②健脾化瘀中药复方具有抑制BEL7402细胞增殖作用,且呈剂量依赖性,其中中剂量(1.67mL/kg)含药血清对人肝癌细胞增殖抑制作用与小剂量(0.3mg/L)5-氟尿嘧啶相近。     

双龙接骨丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨中药复方制剂双龙接骨丸对成骨细胞增殖和细胞周期的影响。方法双龙接骨丸生药给大鼠灌胃,1次/d,共7d。于最后1次灌胃后2h处死,制备含药血清。以原代培养的大鼠成骨细胞为实验对象,采用不同浓度的含药血清刺激成骨细胞,四氮唑蓝法(MTT)检测细胞的增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期的构成。结果①双龙接骨丸30mL/L含药血清组细胞增殖率与空白对照组相比,差异无显著性意义(t=1.06,P>0.05);50,100,250,500,750,1000mL/L含药血清组均可明显促进细胞增殖,与对照组相比,差异有显著性意义(统计学数值分别为t=2.53,P<0.05;t=3.09,3.32,3.54,3.87,4.12,P<0.01)。②细胞周期构成分析发现,100mL/L双龙接骨丸含药血清增加S期细胞比率,促进细胞进入分裂增殖期。结论双龙接骨丸含药血清能有效促进成骨细胞的增殖。     

辛伐他汀含药血清对兔血管平滑肌细胞增殖及原癌基因表达的作用及意义

目的　探讨辛伐他汀对体外培养兔血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及机制。方法　 16只雄性新西兰兔随机分为空白血清对照组和 3个不同剂量的辛伐他汀组 (5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg) ,7d后采血并混合每组 4只兔血 ,无菌分离制备分组辛伐他汀含药血清。另采用内皮素 1刺激原代培养正常喂饲兔主动脉VSMC建立增殖模型 ,采用MTT及3 H TdR法检测分组辛伐他汀含药血清对VSMC增殖的作用 ,采用免疫细胞化学方法检测VSMCc myc、c fos抗原表达、RT PCR半定量检测c myc及c fosmRNA表达。结果　与对照组相比 ,不同分组辛伐他汀含药血清呈剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖 (P <0 0 5～ 0 0 1) ;免疫细胞化学及RT PCR结果表明 ,不同分组辛伐他汀含药血清呈剂量依赖方式抑制VSMCc fos和c mycmRNA表达(P <0 .0 5～ 0 .0 1)。结论　兔口服辛伐他汀后的血清抑制VSMC增殖 ,而辛伐他汀含药血清抑制c fos和c myc表达可能是其抑制VSMC增殖和抗动脉粥样硬化的机制之一。     

益气养阴解毒方含药血清对白血病K562细胞的影响

目的探讨益气养阴解毒含药血清对白血病K562细胞抑制作用的影响。方法采用血清药理学方法制备益气养阴解毒方含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT(四氮唑蓝)比色法观察益气养阴解毒方含药血清对K562细胞增殖的影响;镜下观察经益气养阴解毒含药血清处理后K562细胞形态学的变化。结果不同浓度益气养阴解毒方含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。经益气养阴解毒含药血清处理后K562细胞镜下观察发现有凋亡小体的产生。结论益气养阴解毒方含药血清具有一定的抑制白血病K562细胞增殖的作用,其作用强度与浓度呈正相关;可诱导白血病细胞K562发生形态学改变,形成凋亡小体。其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关。     

平瘤康方剂对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨中药方剂平瘤康含药血清对体外培养的C6胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。方法2.5%、5%、10%和20%平瘤康含药血清处理体外培养的C6胶质瘤细胞24h、48h和72h后,应用MTT比色法检测C6胶质瘤细胞增殖;PI染色后,应用流式细胞仪观测细胞周期时相。结果10%和20%的含药血清能抑制C6胶质瘤细胞的增殖;10%和20%的含药血清处理C6细胞48h、72h后,S期细胞百分率下降,呈剂量依赖性。结论平瘤康含药血清可能通过阻滞细胞周期而抑制胶质瘤细胞增殖。     

雷公藤甲素含药血清对大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及其巨噬细胞移动抑制因子表达的影响烛

目的：雷公藤甲素是雷公藤抗炎、抗肿瘤、免疫调节和抑制细胞增殖的主要有效成分。观察雷公藤甲素、雷公藤及其与来氟米特配伍的含药血清对大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖及巨噬细胞移动抑制因子表达的影响。方法：实验于2006—12／2007—03在解放军白求恩国际和平医院中心实验室完成。①实验分组：雄性Wistar大鼠12只，体质量150～180g，随机数字表法分为6组，分别为雷公藤组、雷公藤甲素组、来氟米特组、雷公藤＋来氟米特组、雷公藤甲素＋来氟米特组和空白对照组，每组2只。②实验方法：雷公藤组、雷公藤甲素组、来氟米特组、雷公藤＋来氟米特组、雷公藤甲素＋来氟米特组，分别将雷公藤、雷公藤甲素、雷公藤＋来氟米特、雷公藤甲素＋来氟米特的含药血清以0．1、0．2、0．3的体积分数干预成纤维样滑膜细胞，空白对照组加入正常鼠血清。③实验评估：四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞增殖情况；免疫组织化学染色及细胞ELISA法检测滑膜细胞和细胞上清液巨噬细胞移动抑制因子的表达。结果：纳入大鼠12只，均进入结果分析。①四甲基偶氮唑盐比色法结果显示，含药血清对体外滑膜细胞增殖具有显著抑制作用，单药最佳作用体积分数为0．2。②雷公藤甲素组、雷公藤组、雷公藤甲素＋来氟米特组、雷公藤＋来氟米特组的含药血清对成纤维样滑膜细胞均具有显著抗增殖效应，以体积分数为0．1雷公藤甲素联合体积分数为0．3来氟米特的含药血清抑制作用最强，与空白对照组相比，差异具有显著性意义（P〈0．05）。③对巨噬细胞移动抑制因子蛋白表达的抑制作用则以雷公藤甲素＋来氟米特的含药血清最佳，与其他各组相比，差异均有显著性（P〈0．05）。结论：雷公藤甲素是雷公藤抑制成纤维样滑膜细胞增殖和抗炎作用的主要有效成分，而雷公藤甲素＋来氟米特组的含药血清在抑制成纤维样滑膜细胞增殖及其表达巨噬细胞移动抑制因子等方面显示出明显的协同／增效作用。     

虫草肾茶胶囊对人肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β1及细胞外基质的影响

目的研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下系膜细胞(HMC)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞外基质(ECM)的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法应用血清药理学方法,制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定经体外培养的HMC在各种处理因素的作用下上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达情况,并以福辛普利为对照。结果高糖能明显促进HMC分泌TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白(P<0.05或P<0.01)。而虫草肾茶胶囊能抑制HMC分泌TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白,并呈一定量效关系(P<0.05或P<0.01),且某些方面明显优于福辛普利。结论高糖可促进HMC TGF-β1及ECM分泌,虫草肾茶胶囊能明显抑制高糖条件下HMC分泌TGF-β1及ECM,有助于预防糖尿病肾小球硬化的发生和发展。     

金乌骨通胶囊对成骨细胞分泌白细胞介素1,6的影响

背景：课题组以往研究发现,金乌骨通胶囊对绝经后骨质疏松症具有明显的治疗作用,但其具体的机制尚不十分清楚。目的：观察金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞分泌白细胞介素1,6的影响。方法：切除雌性SD大鼠双侧卵巢制备去卵巢血清,灌胃给予去卵巢大鼠金乌骨通胶囊制备去卵巢含药血清。取第3代生长状况良好的出生24h内SD大鼠的成骨细胞,分别加入正常雌性SD大鼠血清、去卵巢血清和去卵巢含药血清培养72h。结果与结论：酶联免疫吸附法检测显示,与正常血清组比较,去卵巢血清组成骨细胞白细胞介素1、白细胞介素6的表达明显升高（P〈0.01）;与去卵巢血清组比较,去卵巢含药血清组白细胞介素1和白细胞介素6的表达明显降低（P〈0.05）,与正常血清组比较,则无明显差异。提示金乌骨通胶囊可能通过抑制成骨细胞骨白细胞介素1和白细胞介素6的表达来实现治防治骨质疏松症的目的。     

雷公藤内酯醇对高糖时人肾小球系膜细胞MC P-1表达的影响

目的探讨高糖及雷公藤内酯醇（TP）对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法将培养的人肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组（5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L 葡萄糖）、甘露醇组（5 mmol/L 葡萄糖＋25 mmol/L甘露醇）、TP甲组（30 mmol/L 葡萄糖＋5μg/L TP）、TP 乙组（30 mmol/L 葡萄糖＋10μg/L TP）、TP丙组（30mmol/L 葡萄糖＋15μg/L TP）,分别在24 h、48 h、72 h采用 RT-PCR法检测TP对高糖条件下系膜细胞内 MCP-1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果高糖组人肾小球系膜细胞 MCP-1 mRNA及蛋白较正常对照组增加,且差异有显著性（P＜ 0.01）;TP各组比高糖组有明显下降（P＜ 0.01）;不同浓度的TP对高糖诱导的系膜细胞 MCP-1的表达抑制程度不同（P ＜ 0.05）。结论 TP可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞 MCP-1的表达,且呈时间、剂量依赖关系,其可能对延缓糖尿病肾病中肾小球硬化有一定作用。     

枸杞多糖对Aβ1~40诱导大鼠学习记忆功能减退的影响

目的：探讨枸杞多糖（LBP）对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆功能减退的影响。方法 SD健康大鼠随机分为5组：AD模型组,LBP高、中、低剂量干预组,空白对照组,每组24只。通过双侧海马注射Aβ1-40,建立AD大鼠模型。采用LBP连续灌胃6周作用于AD大鼠,观察各组大鼠行为学、海马SOD、GSH-Px活性和MDA含量以及BrdU标记阳性细胞表达的变化。结果（1）与AD模型组比较,LBP低、中、高剂量组潜伏期明显缩短、过平台次数明显增加（P〈0.05）。（2）与AD模型组比较,LBP低、中、高剂量组海马SOD、GSH-Px活性明显升高、MDA含量明显降低（P〈0.05）。（3）与AD模型组比较,LBP低、中、高剂量组齿状回BrdU阳性细胞表达明显增多（P〈0.05）。（4）LBP中、低剂量组比较,上述各指标均有明显差异（P〈0.05）。LBP高、中剂量组比较,上述各指标均无明显差异（P〉0.05）。结论 LBP可能通过提高海马SOD、GSH-Px活性、降低MDA含量以及增强齿状回BrdU阳性细胞表达,改善AD大鼠学习记忆功能。     

壮筋续骨汤含药血清体外培养大鼠成骨细胞的增殖

背景：壮筋续骨汤具有促进胫骨骨折愈合的作用。目的：观察壮筋续骨汤含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：大鼠灌胃给予壮筋续骨汤后制备含药血清。取第2代生长状况良好出生48h内的SD大鼠成骨细胞,对照组和壮筋续骨汤组分别加入5%,10%,20%的正常SD大鼠血清和含药血清培养72h。结果与结论：MTT法检测发现壮筋续骨汤含药血清对成骨细胞的增殖有明显的促进作用,以10%壮筋续骨汤组作用最明显（P〈0.05）。流式细胞仪检测各组细胞DNA合成期（S期）的比例,发现壮筋续骨汤组处于S期的细胞比例明显大于对照组（P〈0.05）。说明壮筋续骨汤含药血清能促进成骨细胞DNA的合成,使更多的细胞进入S期,促进体外培养的成骨细胞增殖。     

索拉非尼防治大鼠肝癌肝移植术后肿瘤转移复发的研究

目的 探讨索拉非尼防治大鼠肝癌肝移植术后肿瘤转移复发的作用.方法 Walker-256 癌细胞于Wistar 大鼠门静脉注射,模拟大鼠肝癌肝移植术后肿瘤转移复发模型,术后随机分为4 组(每组16 只):A 组(对照组);B 组(索拉非尼低剂量组);C 组(索拉非尼中剂量组);D 组(索拉非尼高剂量组),另选取E 组(n ＝8)正常大鼠作为正常组.实验组、对照组分别于术后20 d 各处死8 只,并同时处死正常组8 只大鼠,取大鼠肝脏、肺组织,常规甲醛固定、制作石蜡切片,常规进行镜下观察;免疫组织化学方法检测肝脏、肺组织血管内皮生长因子(VEGF)及微血管密度(MVD),并对大鼠肝脏VEGF 阳性率及MVD 值行双变量相关性分析;对索拉非尼各剂量组及对照组剩余8 只大鼠,观察其生存时间.结果 索拉非尼各剂量组及对照组大鼠肝脏均出现了肿瘤转移复发,肺内均未见肿瘤转移,但索拉非尼各剂量组大鼠肝脏癌灶坏死程度较对照组轻,癌灶周边肝脏细胞受累坏死程度较对照组轻;索拉非尼各剂量组大鼠肝脏VEGF 阳性率、MVD 计数小于对照组(P ＜0.01),肝脏VEGF 与MVD 高度相关(rp ＝0.84,P ＜0.01);对照组、索拉非尼各剂量组大鼠肺组织VEGF、MVD 差异无统计学意义(P ＞0.05);索拉非尼中、高剂量组大鼠生存时间长于对照组(P ＜0.05).结论 索拉非尼可以抑制肝癌肝移植术后大鼠肝脏内VEGF 合成,降低了肝脏内癌灶MVD、抑制癌灶微血管生成,同时减轻了癌灶对正常肝细胞的损害作用,延长了肝癌肝移植术后大鼠生存时间,对防治大鼠肝癌移植术后肿瘤转移复发起到一定作用.     

益气养阴活血方对肾小球系膜细胞增殖及ERK通路的影响

目的 观察益气养阴活血方含药血清对高糖条件培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响.方法 制备益气养阴活血方和福辛普利含药血清.将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖培养组、高糖培养+福辛普利含药血清组和高糖培养+三个不同浓度益气养阴活血方含药血清组.培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的表达进行半定量分析,用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 与正常对照组相比,高糖组早期(24 h、48 h)能显著促进系膜细胞增殖,福辛普利和高浓度中药含药血清组均可抑制高糖引起的系膜细胞增殖(P<0.05),两组间无统计学差异(P>0.05).高糖刺激6 h后系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达即明显增高,24 h达到高峰,后逐渐减弱,福辛普利和不同浓度中药含药血清干预后,pERK1/2蛋白水平显著下降(P<0.05),中药组和西药组间无统计学差异(P>0.05).结论 益气养阴活血方能抑制肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,这可能是其临床肾脏保护作用机制所在.     

体外培养APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞对结肠癌细胞增殖的影响

背景：积极探索结肠癌相关基因及抑癌基因已成为新的研究热点,人肿瘤坏死因子α是一个重要的促炎因子和免疫调节因子,对肿瘤的免疫治疗具有一定的疗效。目的：观察体外培养海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine-alginate,APA）微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞对结肠癌细胞增殖的影响。方法：采用前期建立的制备方法,用APA微囊分别包裹人肿瘤坏死因子α/293细胞,APA微囊化0/293细胞。取对数生长期结肠癌（Lovo）细胞,配制成所需浓度的细胞悬液,接种24孔板培养,分别加入低、中、高剂量稳定转染的APA微囊化肿瘤坏死因子α/293,即分为5个实验组,APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞低剂量组、中剂量组、高剂量组、阴性组为APA微囊化0/293细胞组,阳性组加入肿瘤坏死因子α,MTT法检测490nm吸光度;通过对人肿瘤细胞增殖抑制实验,观察对结肠癌细胞（Lovo）增殖的抑制作用。结果与结论：体外培养中,加入APA微囊化0/293细胞组对结肠癌细胞增殖无抑制作用;而APA微囊化肿瘤坏死因子α/293细胞中、高剂量组和阳性组,在24,48,72h的A值低于APA微囊化0/293细胞组（P〈0.05）,提示APA微囊化人肿瘤坏死因子α/293细胞所分泌肿瘤坏死因子α对结肠癌细胞有增殖抑制效应,均呈现出良好的数量依赖关系。     

高纯度CD3~-CD56~+CD16~+NK细胞体外扩增技术的研究

本研究探索高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞体外扩增技术。应用免疫磁珠分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+NK细胞,置于含10%人AB血清的造血干细胞培养基(SCGM)中,加入细胞因子IL-2、IL-15、SCF组成不同培养体系进行体外扩增。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析和CCK-8试剂盒检测对K562细胞的杀伤率等方法比较不同培养体系对NK细胞增殖前后的数量、纯度及杀伤活性的影响;并采取相同方法对IL-2的浓度与NK细胞增殖效率及杀伤活性之间的关系进行探讨。结果发现,经免疫磁珠分选法所得的高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞扩增18天后,IL-2/IL-15/SCF组扩增倍数显著高于其他组(p0.05);含细胞因子组的NK细胞对K562细胞的杀伤活性显著提高,尤其是IL-2/IL-15组和IL-2/IL-15/SCF组在效靶比10∶1时杀伤活性均高达90%以上。低、中、高浓度IL-2组扩增倍数之间比较差异无显著性(p0.05),而在对K562细胞杀伤率的比较上,高浓度组明显高于低、中浓度组(p0.05)。结论:在10%人AB血清的SCGM中加入IL-2/SCF/IL-15细胞因子组合,可使经MACS纯化的NK细胞在体外高效地活化及增殖;本培养体系中IL-2浓度较低(1 000U/ml)时,NK细胞的扩增效率及对K562细胞的杀伤率与IL-2的浓度高低无相关性;而高浓度的IL-2(≥1 000U/ml)可进一步激活纯化后NK细胞的体外杀伤活性。     

百令对慢性肾衰竭大鼠模型肾纤维化治疗机制研究

目的观察百令对慢性肾衰竭大鼠模型24h尿蛋白定量、血肌酐、肾脏组织病理及细胞因子表达的影响,探讨其对肾纤维化的治疗作用。方法80只SD大鼠随机分为假手术组（20只）和手术组（60只）,手术组行5／6。肾切除术,模型制作成功后分为手术未治疗组15只、百令低剂量组（1．0g／（kg·d））15只、百令中剂量组（2．0g／（kg·d））15只和百令高剂量组（3．og／（kg·d））15只。假手术组随机分为假手术组未治疗组10只和假手术百令组（2．0g／（kg·d））10只。假手术百令组和百令低、中、高剂量组于手术4周后开始给药,每日灌胃,假手术组未治疗组、手术未治疗组每日生理盐水灌胃。治疗4周后检测24h尿蛋白定量、血肌酐,取残肾检测肾小球系膜基质面积／肾小球囊面积及肾小管-间质损伤指数,免疫组织化学法检测肾组织转化生长因子-β1表达。结果手术组24h尿蛋白定量、血肌酐、肾小球系膜基质面积／肾小球囊面积及肾小管-间质损伤指数、肾组织表达转化生长因子-β1较假手术组升高（P〈0．01）,百令各治疗组上述指标较手术未治疗组下降（P〈0．01）,百令高剂量组较中、低剂量组上述指标下降,两两比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论百令可保护残肾功能,通过下调转化生长因子-β1表达延缓肾纤维化进展。