益肾解毒汤对UUO实验性大鼠肾功能及CTGF、α-SMA蛋白表达的影响

目的:探讨益肾解毒汤对UUO实验性大鼠肾血清肌酐、血清尿素氮及血清CTGF、α-SMA的影响。方法:采用单侧输尿管结扎术(UUO)建立大鼠肾纤维化模型。90只Wistar大鼠分为假手术组、模型组、益肾解毒汤低、中、高剂量组及贝那普利组。在7天、14天、21天不同时间点,观察实验大鼠治疗前后肾功能变化情况;采用免疫组化二步法检测肾组织中CTGF、α-SMA蛋白表达水平。结果:益肾解毒汤各治疗组大鼠血肌酐、血尿素氮水平均有所降低,与模型组比较有显著性差异(P0.05);益肾解毒汤高剂量组能减少肾间质中CTGF、α-SMA的过度表达,效果明显,与贝那普利组比较有显著性差异(P0.05)。结论:益肾解毒汤能下调肾间质组织CTGF、α-SMA蛋白表达水平,保护肾功能,对UUO模型大鼠肾间质纤维化进程有显著的干预作用。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响,初步探讨其抗纤维化分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后7、14天处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和胶原Ⅰ(col Ⅰ)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠α-SMA mRNA表达量.用Westemblot检测大鼠α-SMA蛋白表达量.结果:与假手术组相比,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,α-SMA、FN和col Ⅰ表达显著增高(P<0.05);AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的α-SMA、FN和col Ⅰ明显降低(P<0.05).结论:黄芪可能通过抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的拮抗作用及对结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,初步探讨其可能的分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后第7、14 d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中CTGF和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠CTGF mRNA和α-SMA mRNA表达量.用Western blot检测大鼠CTGF蛋白表达量.结果:与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾脏病理损害进行性加重,CTGF和α-SMA mRNA和蛋白表达随梗阻时间延长逐渐增高;黄芪治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的CTGF和α-SMA降低(P<0.05).结论:黄芪可能从核酸和蛋白水平抑制CTGF的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

补阳还五汤对肾间质纤维化大鼠模型胶原纤维和TGF-β1的作用

目的:观察补阳还五汤对单侧输尿管结扎肾间质纤维化大鼠模型胶原纤维和TGF-β1的作用。方法:将SD大鼠随机分为假手术对照组和单侧输尿管结扎造模组(UUO),造模大鼠再被随机分为模型组、补阳还五汤治疗组(12g/kg)和依那普利组(10mg/kg)。大鼠分别在第7、14、28天进行肾功能、Masson染色和免疫组化检测。结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾功能显著下降;依那普利和补阳还五汤干预后,肾功能显著提高。光镜显示模型组大鼠出现显著间质纤维化,依那普利和补阳还五汤干预显著减轻了肾小管损害。各个时间点,模型组肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达与假手术组相比,显著升高。通过依那普利和补阳还五汤干预在第7天时,显著降低肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达(P<0.05);用药第14、28天后,可进一步降低肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达(P<0.01)。结论:补阳还五汤治疗后,可改善单侧输尿管结扎大鼠肾功能和肾小管间质纤维化,降低胶原纤维和TGF-β1的表达,对拮抗肾间质纤维化有一定的作用。     

软肾散对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β_1及α-SMA的影响

目的:观察软肾散对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型肾间质纤维化(RIF)的影响及可能的作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利治疗组和软肾散治疗组,后3组建立UUO大鼠模型。治疗结束后测定大鼠肾功能、行HE染色观察肾组织病理变化,计算肾小管间质病理积分,用免疫组化方法测定肾TGF-β1、α-SMA的表达情况。结果:两治疗组大鼠BUN、SCr低于模型组(P<0.01),两治疗组组间差异无统计学意义(P>0.05);肾间质病理积分显示两治疗组显著低于模型组(P<0.01),两治疗组组间差异无统计学意义(P>0.05);免疫组化结果表明,两治疗组TGF-β1和α-SMA的表达均低于模型组(P<0.01),两治疗组组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:软肾散能一定程度上减轻UUO大鼠RIF程度,其作用机制可能与下调TGF-β1和α-SMA表达有关。     

黄芪当归合剂肾脏保护作用的有效部位筛选

目的:以肾间质纤维化模型大鼠的肾功能及肾小管间质损伤指数改善为药理活性指标,对黄芪当归合剂(AA)进行分离和筛选,获得其肾脏保护作用的药物有效部位。方法:应用溶剂法和色谱法逐级对AA进行追踪分离,分别获得11个不同部位。同时将Wistar大鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)模型组、AA组及不同部位治疗组。灌胃给药后观察AA各部位对UUO大鼠肾损伤的疗效。治疗10 d后经腹主动脉取血检测血清肌酐(Scr)和尿素(Urea)水平;同时观察梗阻侧肾脏的病理变化,并对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化等病理损伤的程度(PI-Ⅰ)进行半定量评分,以PI-Ⅰ改善作为主要疗效、肾功能改善作为次要疗效,筛选获得具有最佳药理活性的有效部位。结果:在溶剂法分离获得的7个不同极性部位中,组分I和IC均具有改善肾功能、减轻肾小管间质损伤的疗效,其肾脏保护作用与AA疗效相近;而色谱法分离IC得到的4个部位对Scr,Urea及PI-I均无改善作用。结论:在UUO大鼠模型中,源自复方中药AA的组分I和IC具有与原方剂相似,具有抑制肾间质纤维化的作用,可确认为AA肾脏保护作用的有效部位。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子β1表达的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的拮抗作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,初步探讨其可能的分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组和黄芪治疗组.在造模后3,7,14 d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠TGF-β1 mRNA和α-SMA mRNA表达量.用westem blot检测大鼠TGF-β1蛋白表达量.结果:与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾脏病理损害进行性加重,TGF-β1和α-SMA mRNA和蛋白表达随梗阻时间延长逐渐增高:黄芪治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及.肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的TGF-β1和α-SMA降低(p<0.05).结论:黄芪可能通过从核酸和蛋白水平抑制TGF-β1的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

红花黄色素对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的影响

目的：探讨红花黄色素对大鼠肾间质纤维化的影响。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为假手术（SO）组、单侧输尿管梗阻（UUO） 组、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦组（IRB组） 和红花黄色素组（SY组） 。大鼠肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,计算肾间质纤维化的相对面积。免疫组化技术检测I型胶原（Col I）和纤维连接蛋白（FN）在肾组织中的表达。结果：SY治疗组和IRB治疗组能有效改善UUO大鼠的肾脏间质纤维化,SY组和IRB组中各时间点Col I和FN蛋白的表达均低于UUO组（P0.05）。结论：红花黄色素可减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度,延缓肾脏间质纤维化。     

丹参酚酸B盐对大鼠肾纤维化的影响

目的:观察丹参酚酸B盐(SA-B)对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组(12只)、模型组(12只)和治疗组(12只).模型组大鼠行单侧输尿管结扎(UUO)建立肾小管间质纤维化模型.治疗组在UUO基础上给予SA-B水溶液(12.5 mg·kg~(-1))灌胃,各组于造模后第14,21天分2批处死.用苏木精-伊红(HE)染色观察肾组织病理学改变,用免疫组织化学方法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织中角蛋白19 mRNA的表达.结果:SA-B能够显著改善梗阻侧肾脏的病理改变,显著减少肾组织α-SMA的表达,增加角蛋白的表达.结论:SA-B可明显改善UUO所致的大鼠肾间质纤维化,其作用可能是通过阻止小管上皮-成肌纤维细胞转分化和抑制成肌纤维细胞的增生和活化而实现的.     

清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠COL4及FN影响

目的:探讨清化固肾排毒方对肾间质纤维化大鼠的Ⅳ型胶原(COL4)及纤维连接蛋白(FN)的影响,从而为其对肾间质纤维化提供防治依据。方法:将大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、洛丁新组,及清化固肾排毒方高、中、低剂量组,每组9只,建立大鼠UUO模型,通过Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组织化学染色观察COL4及FN在肾间质的阳性染色表达。结果:与假手术组比较,各造模组胶原纤维蓝染部分明显增多、肾纤维化程度显著增加。与模型组相比,清化固肾排毒方(中药)各组和洛丁新组肾纤维化程度缓解,COL4及FN阳性表达显著下降(P0.05)。结论:清化固肾排毒颗粒可能通过下调COL4、FN改善肾功能,从而达到改善肾纤维化的作用。     

和络泄浊方对肾间质纤维化大鼠MMP-9 TIMP-1基因表达的影响

目的:探讨和络泄浊方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)后大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响。方法:采用UUO大鼠模型,将48只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组、中药灌胃组。在术后第1天开始,中药灌胃组给予中药15mL/kg,分早晚2次灌胃,假手术组和模型组每天给予等量生理盐水灌胃。在术后3、10、20、30天每组各取4只处死,左肾组织行HE染色,评定各组大鼠肾小管间质损害程度,采用RT-PCR法检测肾脏MMP-9、TIMP-1mRNA的变化。并分析TIMP-1mRNA与肾小管间质损伤指数的相关性。结果:模型组的肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA的表达明显高于假手术组(P<0.01),中药灌胃组的肾小管间质损伤指数及TIMP-1mRNA表达低于模型组(P<0.05或P<0.01)。MMP-9在模型组UUO术后明显升高,第10天时达到高峰,继之出现下降;在中药灌胃组第10天后下降幅度较小,在20天、30天时间点高于模型组(P<0.01)。结论:和络泄浊方通过调节MMP-9/TIMP-1的基因表达,促进了ECM的降解过程,从而减轻肾间质纤维化。     

糖肾方颗粒不同制备工艺治疗UUO小鼠肾间质纤维化的药效学研究

目的:利用单侧输尿管梗阻模型小鼠筛选糖肾方颗粒的最佳制备工艺。方法:根据大孔树脂富集、醇提、水提方法设计糖肾方制备工艺1、2、3组。选用C57BL/6小鼠,随机分为假手术组,模型组,工艺路线1、2、3组,阳性药福辛普利组,连续给药6 d后,进行单侧输尿管结扎手术。手术后再连续给药7 d,检测小鼠血清肌酐和尿素氮,根据MASSON染色半定量分析各组小鼠的肾间质纤维化,根据HE染色进行肾间质细胞浸润评分。结果:各工艺路线组均对UUO引起的小鼠肾病理损伤有一定的改善作用,均显著改善肾间质纤维化,差异有统计学意义(P0.05),其中工艺路线1、3组作用更佳。工艺路线3组能显著改善小鼠UUO后的血肌酐和尿素氮水平,显著减少肾间质细胞浸润,差异有统计学意义(P0.05)。结论:糖肾方颗粒的制备工艺确定为水提工艺。     

抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）mRNA和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1受体（TβRⅠ及TβRⅡ）及肝细胞生长因子受体（C-Met）蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRI、TβRⅡ、C-Met蛋白袁达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。结论抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能。     

当归对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中黏附分子ICAM-1表达的影响

目的:观察当归对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管间质纤维化过程中黏附分子P-选择素(P-selectin)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)等细胞因子的表达和CD68单核/巨噬细胞浸润的影响。方法:采用大鼠模型,52只SD大鼠分为:假手术组、UUO组、当归组。术后第7d和第14d留取标本处死大鼠,用免疫组化方法检测肾组织内P-selectin、ICAM-1、CD68、TGF-β1的表达。结果:与假手术组相比,UUO组大鼠第7d和第14d肾组织内ICAM-1、P-selectin、CD68、TGF-β1的表达均显著上调(P<0.05)。与UUO组相比,当归组两个时间段肾小管间质病变减轻,且肾组织内ICAM-1、CD68、TGF-β1的表达受到显著抑制(P<0.05)。结论:当归可能是通过抑制ICAM-1的表达和炎细胞的组织浸润,从而降低了肾小管间质TGF-β1的水平和纤维化的进展。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织NF-κB表达的影响

目的:探讨温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型,将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组20只;于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予等量生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦[10 mg/(kg·d)],温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方汤剂[9.8 mg/(kg·d)]。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织NF-κB的表达。结果:第7、14、21天UUO组中NF-κB表达较假手术组高(P0.05),治疗组在第7天较UUO组低(P0.05)。结论:温肾活血化湿方可能通过抑制NF-κB的过度表达从而延缓肾间质纤维化的进程。     

加味黑地黄汤超微饮片对UUO大鼠肾脏纤维化的影响

目的:观察加味黑地黄汤超微饮片对单侧输尿管结扎(Unilateral Ureteral Obstruction,UUO)大鼠肾脏纤维化的影响。方法:采用单侧输尿管结扎法复制单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化模型,将其随机均分为空白组、假手术组、模型对照组、超微饮片组、尿毒清颗粒组,每组10只。加味黑地黄汤超微饮片组和尿毒清颗粒剂组分别予加味黑地黄汤超微饮片和尿毒清颗粒剂溶于4 mL蒸馏水灌胃,空白组、假手术组和模型组均予等体积蒸馏水灌胃。在UUO术后第14 d,将各组大鼠处死,分别取肾组织以TUNEL法检测各组大鼠肾组织细胞凋亡,并检测各组大鼠血液流变学,以及血肌酐和尿素氮。结果:经过TUNEL法检测,超微组和尿毒清颗粒组对于肾间质纤维化大鼠的肾组织细胞的凋亡均有改善作用(P0.01),且2者作用相近(P0.05);尿毒清颗粒剂对UUO大鼠血液流变学的改善优于超微饮片组(P0.05);而超微饮片组和尿毒清颗粒剂组血肌酐和尿素氮均下降,与模型组比较有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论:加味黑地黄汤超微饮片能改善UUO大鼠肾组织的细胞凋亡和血液流变学指标,改善肾组织的纤维化。     

苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎（UUO）建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。     

温阳活血方对大鼠肾间质TIMP-1、MMP-3、FN的影响

目的观察温阳活血方对实验大鼠肾间质纤维化的保护作用并探讨其作用机理.方法实验采用单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型,将其随机分为温阳活血组、福辛普利组、模型组,并设假手术组.观察梗阻侧肾脏组织形态学改变,免疫组化半定量分析各组的基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、纤维连接蛋白(FN)的表达水平并与假手术组比较.结果模型组及各治疗组与假手术组相比均呈不同程度的病理损害.模型组的MMP-3、TIMP-1、FN表达水平均高于假手术组(P＜0.05),且TIMP-1的表达明显高于MMP-3的表达.两个治疗组与模型组相比,MMP-3的表达水平高于模型组(P＜0.05);但TIMP-1、FN的表达水平低于模型组(P＜0.05);MMP-3、TIMP-1、FN在两个治疗组间的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论温阳活血方可能通过抑制TIMP-1的表达,恢复MMP-3表达,以此来调节MMP-3/TIMP-1的比例,从而保护肾小管功能,减轻间质纤维化的进展.     

刺芒柄花素对单侧输尿管梗阻大鼠ASK1、JNK蛋白表达的影响

目的探讨刺芒柄花素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠凋亡信号调节激酶1(ASK1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达的影响。方法制备单侧输尿管梗阻诱导肾间质纤维化动物模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及刺芒柄花素高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组;术后14 d处死大鼠并采集血清检测血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平;采用HE染色观察大鼠肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积;采用Western blotting免疫印迹法检测肾组织ASK1、JNK蛋白表达水平;采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞的凋亡。结果与模型组比较,各治疗组大鼠血清Scr、BUN水平均显著降低(P0.05、0.01);肾小管损伤指数、肾间质胶原分布相对面积均显著降低(P0.05、0.01);肾组织ASK1、JNK蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01);肾小管上皮细胞凋亡指数显著降低(P0.05、0.01)。刺芒柄花素高剂量组各项指标优于依那普利组。结论刺芒柄花素能够抑制UUO模型大鼠ASK1、JNK蛋白表达水平,阻止细胞凋亡,从而减缓梗阻性肾病病理进程的发生和发展。