原癌基因c－fos和c－jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成、原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，３Ｈ－ＴｄＲ参入开始增加，２４小时达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性在３０分钟达到高峰，３／小时后恢复到原来水平。将可合成ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ的表达载体导入ＶＳＭＣ，外源性ｃ－ｊｕｎ基因在ＶＳＭＣ中大量表达并显著抑制细胞增殖。本文提示，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在ＶＳＭＣ增殖调控中起着重要作用。     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c—fos,c—myc异…

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达，结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成，胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均在着剂量－效应关系，这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生，发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c－fos，c－myc异常表达的实验研究

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程中原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达。结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ数目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成；胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均存在着剂量－效应关系。这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生、发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ增殖而实现的。这也许是某些基因治疗ＡＳ的基础。     

钙离子,血管紧张素Ⅱ受体在血管紧张素Ⅱ促心肌细胞蛋白质…

通过＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入量的测定与ＲＮＡ狭线杂交技术，初步探讨血管紧张素Ⅱ受体，Ｃａ＾２＋在血管紧张素Ⅱ刺激乳鼠心肌细胞蛋白质合成中的作用，并观察血管紧张素Ⅱ对原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达，结果发现培养液中加入钙通道阻断剂（ｖｅｒａｐａｍｉｌ），细胞外钙螯合剂（ＥＧＴＡ），肌浆网钙释放抑制剂（ｄａｎｔｒｏｌｅｎｅ）和细胞内钙螯合剂（Ｆｕｒａ－２／ＡＭ）可使血管紧张素Ⅱ介导的＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入量较单独加血管     

内源性阿片肽对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：观察内源性阿片肽Ｌ－Ｅｎｋ、吗啡对兔肺动脉平滑肌细胞增殖作用的影响并分析其作用机制．方法：离体培养新西兰兔肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ），采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）和３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＰＡＳＭＣ增殖和ＤＮＡ合成量的变化．结果：Ｌ－Ｅｎｋ对ＰＡＳＭＣ增殖及ＤＮＡ合成有抑制作用且呈剂量依赖效应．Ｌ－Ｅｎｋ（１×１０－３～１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成有显著的抑制作用，该作用可被阿片受体阻断剂纳络酮阻断．吗啡对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成无显著影响．结论：内源性阿片肽可能主要是通过δ亚型阿片受体对ＰＡＳＭＣ的生长、增殖起抑制作用的，而与μ亚型阿片受体无明显关系．阿片肽类递质抑制ＰＡＳＭＣ增殖作用的可能机制是通过抑制原癌基因ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ的表达从而抑制细胞从Ｇ１进入Ｓ期．     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因c—fo …

动脉平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）的形成过程中极其重要利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（Ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ＯＸ－ＨＤＬ）对培养的人主动脉ＳＭＣ原癌基因ｃ－ｆｏｓ及ＰＤＧＦ受体基因转录表达的影响。     

血管紧张素Ⅱ促心肌细胞蛋白质合成中信息传递途径的研究

体外研究表明：血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）可引起心肌细胞肥大，但其信息传递途径尚不清楚。本文通过＾３Ｈ－Ｌｅｕ掺入率的测定与ＲＮＡ狭线杂交技术，初步探讨了ＡｎｇⅡ受体、Ｃａ＾２＋及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在ＡｕｇⅡ刺激乳鼠心肌细胞蛋白质合成中的作用，并观察了ＡｎｇⅡ对原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达的影响。结果发现，培养液中加入钙通道阻断剂－Ｖｅｒａｐａｍｉｌ、细胞外钙螯合剂－ＥＧＴＡ、肌浆网钙释放抑制剂－Ｄａｎｔ     

莲心碱对内皮素促血管平滑肌细胞增殖及癌基因表达的影响

采用内皮素建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型。用＾３Ｈ胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）参入法,流式细胞术,免疫细胞化学及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ方法,观察了莲心碱对血管平 肌细胞增殖的作用及对原癌基因及抑癌基因的影响。结果发现：Ｌｉｅｎ能逆转内皮素所致的「＾３Ｈ」ＴｄＲ参入量增多,阻止血管平滑肌细胞由静止期进入ＤＮＡ合成期和有丝分裂期,并能逆转内皮素引起的ｃ－ｆｃｓ,ｃ－ｍｙｃ,ｃ－ｓｉｓ原癌基因相     

肝硬化组织中C—H—ras,C—fos,C—jun和P^53基因的表达

用原位杂交及免疫组化的方法检测１１例硬化肝脏、７例正常肝脏中Ｃ－Ｈ－ｒａｓ、Ｃ－ｆｏｓ、Ｃ－ｊｕｎ和Ｐ＾５３基因的表达。结果，正常肝脏均为阴性；１０例（９１％）肝硬化中Ｃ－Ｈ－ｒａｓ基因异常表达；５例检出Ｃ－ｆｏｓ基因的异常表达；１例检出Ｃ－ｊｕｎ基因表达；未检出突变型Ｐ＾５３蛋白在硬化肝脏中的表达。提示，Ｃ－Ｈ－ｒａｓ和Ｃ－ｆｏｓ基因在肝硬化组织中的异常表达构成肝癌发生早期事件中基因异常的一部分     

人c—fos原癌基因cDNA克隆及核酸序列分析

本研究应用逆转录ＰＣＲ方法从Ｊｕｒｋａｔ传代细胞株获得－３８０ｂｐ的人ｃ－ｆｏｓ原癌基因ｃＤＮＡ片段，并将其克隆到具有双向转录启动子的栽体质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）中。核酸序列分析表明，所克隆的ｃＤＮＡ片段包括人ｃ－ｆｏｓ基因外显子２的大部分，外显子３的全部及外显子４的一部分。该重组质粒可分别用于制备ｃ－ｆｏｓ ｃＤＮＡ探针和ＲＮＡ探针，为ｃ－ｆｏｓ基因结构，表达调控等方面的研究奠定了工作基础。     

大鼠脑损伤时神经细胞c—fos,c—jun和c—myc基因表达变化

目的 观察大鼠脑损伤不同时间皮质神经细胞早期快反应基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ表达变化。方法 应用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、原位杂交和免疫组织化学方法检测皮质神经细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ的表达。结果 脑损伤后１５ｍｉｎ,伤测皮质神经细胞出现上述３种基因ｍＲＮＡ的表达,随时间的延长,表达逐渐增加,于伤后３ｈ达高峰并持续至伤后２５ｈ伤后,伤后７２ｈ恢复至对照水平ｃ－ｆｏｓ、ｃ－     

^3H—TdR参入DNA技术在组织培养中的应用

探讨＾３Ｈ－ＴｄＲ参入ＤＮＡ技术在组织培养中的合理应用。测定１６周龄ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠培养的胸主动脉血管平滑肌细胞的自然增长曲线以及接种后６０ｈ期间，每隔４－６ｈ＾３Ｈ－ＴｄＲ参入的变化。ＳＨＲ大鼠ＡＳＭＣ分裂增殖能力比ＷＫＹ强，在１５％ＦＢＳ－１６４０培养基作用下，１－６０ｈ期间，ＳＨＲ ＡＳＭＣ ＾３Ｈ－ＴｄＲ高峰参入率在２０－２４，５０－５５ｈ之间，ＷＫＹ的高峰参入率在４０－５０ｈ之间。     

溶血磷脂酸刺激兔血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

目的：探讨溶血磷脂酸（ＬＰＡ）刺激兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的信号转导途径，方法：在培养的家兔血管平滑肌细胞上，测定＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＬＰＡ呈浓度依赖地刺激＾３Ｈ－ＴｄＲ参入，并平行地激活ＭＡＰＫ二间呈显正相关，乙二醇－双（氨基乙酯）－四乙酸（ＥＧＴＡ）尼卡地平，ｒｙａｎｏｄｉｎｅｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎｈｅｒｂｉｍｙｃ     

一氧化氮,内皮素和血管紧张素对VSMC中Cdk2基因表达的调控

目的：研究细胞周期依赖性激酶２（Ｃｄｋ２）在ＮＯ、内皮素１（ＥＴ－１）及血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ Ⅱ）促血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖中的作用。方法：应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ法测定样品Ｃｄｋ２水平；＾３Ｈ－ＴｄＲ参入方法测定细胞ＤＮＡ合成水平。     

肾上腺素能受体激动剂与阻断剂对血管平滑肌细胞增殖和c—fos,c—my…

研究肾上腺素能受体激动剂与阻断剂对血管平滑肌细胞增殖、ＤＮＡ合成和ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的影响。应用细胞培养、＾３Ｈ一胸腺嘧啶核苷掺入和斑点杂交的方法。肾上腺素能体激动剂可促进离全培养的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖、ＤＮＡ合成和原癌基因的表达，该效应可被其相应的阻断剂所抑制。     

小剂量NMDA对谷氨酸兴奋性神经毒性作用的拮抗及机制研究

目的观察小剂量ＮＭＤＡ对谷氨酸兴奋性神经毒性作用的拮抗作用及其机制。方法以体外培养的胚胎大鼠大脑皮层神经元为对象，利用细胞生物学、生物化学以及统计学（方差分析）等技术比较观察不同因素处理后细胞生物学及生化方面的改变。结果０５ｍｏｌ／Ｌ谷氨酸作用神经元３０ｍｉｎ后可引起细胞死亡及ＬＤＨ释放增加，预先２ｈ给予亚致死剂量的ＮＭＤＡ（１００μｍｏｌ／Ｌ）能明显阻断上述作用，如果在ＮＭＤＡ给予前５ｍｉｎ分别加入ＭＫ－８０１、ＣＣＫ抗血清、ＣＣＫＢ、Ａ受体拮抗剂Ｌ－３６５２６０、Ｌ－３６４７１８及联合给予ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ反义寡聚核苷酸，前３种药物能明显阻断ＮＭＤＡ的神经毒性保护作用，而Ｌ－３６４７１８及反义ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ抑制不明显。结论小剂量ＮＭＤＡ对谷氨酸兴奋性神经毒性作用具有拮抗作用，其机制可能与促进内源性ＣＣＫ释放或合成增加有关，ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ参与并介导了ＮＭＤＡ诱导ＣＣＫ合成过程。     

ET和IL－1对VSMC中NOS基因表达的调控及其生物学意义

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和３Ｈ－胸腺嘧啶核苷参入技术发现，在正常生理状态下，内皮素可与大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）上内皮素Ａ型受体、内皮素Ｂ型受体结合，通过调控一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ转录表达水平，从而调节ＶＳＭＣ的分裂和增殖。白细胞介素－１对ＶＳＭＣ中ＮＯＳ基因表达的促进作用和对ＶＳＭＣ分裂的影响，可能部分是通过内皮素及其受体这一途径完成的。     

急性应激诱导即时反应基因c—fos和c—jun的表达：I：c—fos和c—j …

目的 研究下丘脑和海马内ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ蛋白的表达与应激反应之间的时效关系。方法 采用特异性抗体的原位免疫细胞化学方法，对游泳应激后不同时间点的大鼠下丘脑和海马内ｆｏｓ和ｊｕｎ蛋白阳性神经元的分布进行观察，用图像分析技术对大鼠下丘脑室旁核（ＰＶＮ），视上核（ＳＯＮ）和海马齿状回（ＤＧ）内的ｆｏｓ和ｊｕｎ阳性细胞的相对切面面积比和平均目标灰度进行分析。结果 游泳应激结束后３ｈ，室旁核和视上核及