动物狂犬病中和性抗体竞争ELISA检测试剂盒的研制

目的研制一种能够定量检测狂犬病血清中和抗体的直接竞争ELISA试剂盒,以满足我国动物狂犬病免疫监测的需要。方法以表达狂犬病病毒糖蛋白的真核细胞培养物为包被抗原,捕获抗体为具有病毒中和活性的酶标单克隆抗体,标准血清为经荧光抗体病毒中和试验（FAVN）准确定量的犬血清。结果本试剂盒的最低检测限为0.25U/ml,线性检测范围为0.25～8U/ml,标准曲线的平均板内变异系数为2.8%,板间平均变异系数为4.9%,在4℃下至少可以存放6个月。结论本研究提供了一种操作安全、定量准确的动物狂犬病中和抗体检测试剂盒,具有良好的实际应用前景。     

重组人TSHR片段蛋白建立人TRAb ELISA及临床应用

目的建立2种检测人血清促甲状腺激素受体抗体（TRAb）酶联免疫吸附测定（ELISA）方法,分别以测定刺激性抗体（TSAb）和阻断性抗体（TSBAb）为主,并用于甲状腺疾病检测。方法分别以重组人促甲状腺激素受体（TSHR）膜外区氨基端（N端）蛋白和羧基端（C端）蛋白作为抗原建立N法和C法,各检测健康人229名,初诊Graves病（GD）451例、初诊慢性淋巴细胞性甲状腺炎（HT）伴甲状腺功能减退症（简称甲减）104例、单纯性甲状腺肿35例、非毒性结节性甲状腺肿47例、亚急性甲状腺炎38例。组间比较采用方差（ANOVA）分析,组间阳性率比较用χ^2检验。结果N法：（1）与商品TSAb试剂盒检测法明显相关（r=0．7422,P〈0．05）。（2）批内、批间CV分别为3．96％～4．67％和7．32％～8．33％。（3）健康人405nm处吸光度（A405）值为0．44±0．15,阳性切点（x＋2s）为0．74。（4）初诊GD A405为0．93±0．28,高于健康人（F=2．0341,P=0．001）,阳性率82．8％。（5）初诊HT伴甲减A405,为0．64±0．23,高于健康人（F=1．7822,P=0．003）,阳性率62．1％。C法：（1）批内、批间CV分别为3．24％～4．72％和7．22％-8．55％。（2）健康人A405为0．56±0．11,阳性切点（x＋2s）为0．78。（3）初诊HT伴甲减A405为1．17±0．26,明显高于健康人（F=3．0333,P=0．002）,阳性率93．4％。（4）初诊GD A405;为0．74±0．23,明显高于健康人（F=1．8339,P=0．03）,阳性率66．3％。N法、C法检测单纯性甲状腺肿、非毒性结节性甲状腺肿、亚急性甲状腺炎患者与健康人差异均无统计学意义（N法：F=1．6134,1．5772和1．6208,C法：F=1．5910,1．5369和1．6055,P均〉0．05）。结论N法以检测人血清TSAb为主,C法以检测TSBAb为主;其为临床GD诊断、HT辅助诊断、疗效观察提供了新型、特异、稳定、可靠、操作简便的方法     

重组人TSHR片段蛋白建立人TRAb ELISA及临床应用

Objective Thyrotropin receptor antibodies(TRAb)include thyroid stimulating antibody (TSAb) and thyroid stimulating blocking antibody(TSBAb).It is very helpful to detect seFum TSAb and TSBAb levels in patients with thyroid diseases.The aim of this study was to establish two enzyme linked immunosorbent assay(EUSA)methods(N method and C method)that may determine serum TSAb and TSBAb levels respectively.The initial clinical application in thyroid diseases was also investigated.Methods Recombinant human thyroid stimulating hormone receptor(TSHR)-ecd N-terminal fragment was used in N method and C-terminal fragment was used in C method as antigens respectively.Two ELISA methods for detection of TSAb and TSBAb were established and evaluated.The absorbance value A405 was used as the quantitative parameter to reflect the level of TRAb.The serum TSAb and TSBAb levels were measured in 229 healthy controls,and 675 patients.They were 451 untreated Graves disease(GD),104 untreated chronic lymphocytic thyroiditis(Hashimoto disease,HT)complicating hypothyroidism,35 simple goiters,47 nodular goiters and 38 subacute thyroiditis.The ANOVA and X2-test were used for statistic data analysis.Results N method:(1)the serum TRAb levels measured with N method were positively correlated with commercial TSAb kit(r=0.7422.P＜0.05).(2)The intra-assay coefficient of variation(CV)and the inter-assay CV were 3.96%-4.67% and 7.32%-8.33%,respectively.(3)A405 (x-±s)value in healthy group was 0.44±0.15 with a cut-off value(x-+2s)of 0.74.(4)In untreated GD group,A405 was 0.93±0.28,which was significantly higher than that in healthy group(F=2.0341,P=0.001).The positive rate was 82.8%.(5)In untreated HT complicating hypothyroidism group,A405 was 0.64±O.23,which was significantly higher than that in healthy group(F=1.7822,P=0.003).The positive rate was 62.1%.C method:(1)intrs-assay CV and inter-assay CV were 3.24%-4.72% and 7.22%-8.55%,respectively.(2)The measured A405 value in healthy group was 0.56±0.11 with a cut-off valRe(x-+2s) of 0.78.(3)In untreated HT complicating hypothyroidism group,A405(x-±s) was 1.17±0.26,which was significantly higher than that in healthy group(F=3.0333,P=0.002).The positive rate was 93.4%.(4)In untreated GD group,A405 was 0.74±0.23,which was significantly higher than that in healthy group(F=1.8339,P=0.03).The positive rate was 66.3%.There were no significant difierences among simple goiter,nodular goiter,subacute thyroiditis and healthy groups(N method:F=1.6134,1.5772,1.6208,C method:F=1.5910,1.5369,1.6055,all P＞0.05)assayed with both N method and C methods.Conclusions The present novel N method may mainly measure TSAb level and C method mainly measure TSBAb levels.The two ELISA methods showed to be accurate,stable and convenient.It may be helpful for clinical evaluation in GD,HT and other thyroid diseases.     

染色体结构维持蛋白4在原发性肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 研究染色体结构维持蛋白4(SMCA)在原发性肝癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集2009年9月-2010年1月原发性肝癌组织和正常肝脏组织各36份,原发性肝癌患者和健康人血清各36份,通过免疫组化、酶联免疫吸附实验分别检测原发性肝癌组织、正常肝脏组织及血清中SMC4蛋白的表达情况,分析检测结果 及其与临床参数之间的关系.结果 SMC4在原发性肝癌组织中呈较强染色,其中88.9%(32/36)的肿瘤组织表达阳性,仅11.1%(4/36)的肿瘤组织表达呈阴性.而在正常肝脏组织中未见其染色反应,阴性表达率100%(36/36).原发性肝癌患者血清中SMCA浓度(255.75±26.59ng/L)远高于健康人(205.89±18.55ng/L,P＜0.05).统计学分析显示,SMC4的表达与患者肿瘤组织的细胞分化、TNM分期及血管浸润相关(P＜0.05),而与患者的年龄、性别无关(P＞0.05).结论 SMC4在原发性肝癌患者中表达增高,测定其水平有助于原发性肝癌的诊断,并可作为判断肿瘤恶性程度和预后的重要指标.     

人血清TRAb酶联免疫吸附试验检测在甲状腺疾病患者中的临床应用

目的 探讨促甲状腺激素受体抗体（TRAb）水平对健康人和不同甲状腺疾病患者的临床意义.方法 分别以重组人促甲状腺激素受体（TSHR）膜外区氨基（N）端蛋白和羧基（C）端蛋白作为抗原建立N法和C法,分别检测89名健康者（正常对照组）和254例各种甲状腺疾病患者的血清TRAb水平,组间血清TRAb水平比较采用方差分析,组间阳性率比较采用x2检验.结果 应用N法检测发现：89名健康者405 nm处的光吸收值（（x）±s）为0.511±0.135,阳性切限值（（x）±2s）为0.789,阳性率为4.5％（4/89）;初发Graves病（毒性弥漫性甲状腺肿）患者及Hashimoto甲状腺炎伴甲状腺功能减退症（简称甲减）患者405 nm处的光吸收值（（x）±s）分别为：0.95±0.30、0.61±0.22,高于健康者（F=2.4851和2.0763,P均＜0.05）;N法对初发Graves病患者、治疗中的Graves 病患者、Graves病治疗恢复期患者、Hashimoto甲状腺炎伴甲减患者检测的阳性率分别为73.2％、55.9％、32.1％、45.0％,与正常对照组阳性率之间的差异均有统计学意义（x2=68.55、56.45、20.71和25.51,P均＜0.05）;初发Graves病患者阳性检出率高于Hashimoto甲状腺炎伴甲减患者（x2=4.63,P＜0.05）,初发Graves病患者与Graves病治疗恢复期患者阳性率之间的差异有统计学意义（x2=15.94,P＜0.05）.应用C法检测发现：89名健康者405 nm处的光吸收值（（x）±s）为0.507±0.142,阳性切限值（（x）＋2s）为0.791,阳性率为3.4％（3/89）;Hashimoto甲状腺炎伴甲减患者及初发Graves病患者405 nm处的光吸收值（（x）±s）为1.18±0.25、0.78±0.25,明显高于健康者（F=3.8164和2.4539,P＜0.05）;C法对Hashimoto甲状腺炎伴甲减患者、初发Graves病患者、治疗中的Graves病患者、Graves病治疗恢复期患者检测的阳性率分别为：75.0％、46.3％、23.6％、16.1％,与正常对照组阳性率之间的差异均有统计学意义（x2=66.34、36.87、15.79和7.30,P均＜0.05）;Hashimoto甲状腺炎伴甲减患者阳性检出率明显高于其他患者（x2=4.48、19.70和23.68,P均＜0.05）.结论 应用N法和C法检测Graves病和Hashimoto患者血清TRAb水平均有重要意义,可用于临床Graves病和Hashimoto甲状腺炎伴甲减患者的诊断、治疗及疗效的评估.     

CD40／CD40L在慢性淋巴细胞白血病治疗中的生物学意义

慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia．CLL）是一种主要源于B淋巴细胞的低度恶性小淋巴细胞疾病，其特征是成熟的小淋巴细胞在外周血、骨髓、淋巴结和脾脏中累积。大量研究表明．CLL细胞和其他B细胞恶性肿瘤一样．不能表达或弱表达共刺激分子，以致不能有效地递呈抗原及激发T细胞抗肿瘤的免疫反应，使得肿瘤细胞逃避免疫监视并不断增殖。     

乙型肝炎病毒聚合酶片段的表达及其在血清学检测中的应用

目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并与HBV-DNA实时荧光定量检测结果比较。结果成功将HBV-Pol基因插入原核表达载体pQE30,并在大肠埃希菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,在检测的274例乙型肝炎患者中,HBsAg+/HBeAg+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBe+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBc+患者血清中的抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率58.8%,而正常人血清抗-HBp均为阴性。运用此法测得的血清抗-HBp阳性率和实时定量PCR检测结果无统计学差异(P=0.359)。结论成功表达了HBV-Pol片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究乙型肝炎患者血清HBV-Pol抗体的血清学意义奠定了基础。     

抵抗素研究进展及其在肿瘤核医学中的应用

抵抗素是脂肪细胞分泌的一种多肽类细胞因子,是肥胖与胰岛素抵抗和糖尿病联系的纽带,其在体内分布广泛,但现阶段研究还存在很大的争议.目前,抵抗素的检测方法主要是酶联免疫吸附分析、相对定量实时聚合酶链反应技术、放射免疫分析和蛋白质印迹法.乳腺癌患者血清抵抗素水平为(5.23±6.90)mg/L,明显高于对照组的(1.46±2.00)mg/L.通过对抵抗素在肿瘤核医学中的应用研究,可进一步研究其与乳腺癌在分子水平上的关系.     

尿液小分子物质检测及其应用前景

尿液小分子物质检测因其具有采样方便、无创等优点,在疾病筛查中受到关注。但有关尿液疾病标志物的报道十分有限,究其原因是尿液中小分子有机物含量低、抗原性弱而难以检测。近年来,随着各领域检测技术的进步,这一难题有望得到解决。本文系统介绍几种具有前景的检测技术,如间接竞争酶联免疫吸附测定、实时定量免疫聚合酶链反应、气相色谱-质谱联用仪等,以及尿样检测中的注意事项。     

化学发光免疫分析技术(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)在乙肝病毒血清学检验中的应用价值

目的:探究化学发光免疫分析技术(CLIA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)在乙肝病毒血清学检验中的应用价值.方法:选取126例本院收治疑似乙肝病毒感染患者作为本次研究对象,分别采用CLIA与ELISA两种方法检测患者的血清中的HBsAg、HBeAg、HBsAb、HBcAb、HBeAb,分析对比两组检出率,并与最终确诊结果展开对比.结果:HBeAb与HBsAg的检出率中,CLIA显著高于ELISA;两组患者HBeAg、HBsAb与HBcAb检出率的对比上均无明显的差异(P＞0.05).对比最终确诊结果,CLIA的敏感性与诊断符合率均高于ELISA.结论:乙肝病毒的血清学检验中,应用化学发光免疫分析技术(CLIA)具有着较高特异性和敏感性,其对于疑似乙肝病毒感染患者血清中的HBeAb与HBsAg的检出率更高,可作为一种有效标记的免疫检测技术在临床上进行推广与应用.     

CD40L和基质金属蛋白酶在冠脉斑块形成中的作用机制临床研究

 目的 探讨CD40L和基质金属蛋白酶在冠心病患者冠脉斑块形成中的作用机制.方法 根据冠状动脉造影证实有冠状动脉狭窄 ,根据冠状动脉狭窄评分(CSA)标准对86例冠心病患者按照冠脉病变支数分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3 个组,男51例,女35例,平均年龄59.4岁.采用酶联法测定 CD40L、CRP、MMP-2、MMP-9 .结果 CD40L、CRP,MMP-2、MMP-9随病情加重而升高,多支病变高于单支病变,Ⅱ型病变高于Ⅰ、Ⅲ型病变.MMP-2、MMP-9与CD40L呈正相关性(r=0.69)( r=0.75).结论 CD40L和MMPs在冠脉斑块形成中有一定联系,CD 40 L可能通过MMPs对冠脉损伤,从而导致斑块形成.而CD40L和MMPs增高有助于研究易损性冠脉斑块.     

可溶性血小板糖盏蛋白免疫放射分析法的建立及其在冠心病诊断中的应用

目的建立可溶性血小板糖盏蛋白(sGC)免疫放射分析法(IRMA),并用于临床检测.方法用氯胺T标记法制备125I-2D4-IgG,建立IRMA法测定sGC,检测50例健康人、15例不稳定心绞痛(UA)患者、37例急性心肌梗死(AMI)患者血浆sGC水平.结果 sGC IRMA测量范围为31.25～2000μg/L;灵敏度为15μg/L;精密度批内低、中、高值变异系数分别为6.25%、4.35%和3.99%(n=6),批间分别为8.55%、4.82%和4.48%(n=6);准确度平均回收率为101.88%.sGC正常值范围为(824.50±225.11)μg/L,UA和AMI组患者血浆sGC水平明显高于对照组(P＜0.01).sGC与P-选择素呈明显正相关性(r=0.652,P＜0.01).结论人血浆sGC可作为血小板活化和破坏的分子标志物.