人甲状腺肿瘤组织中c-Met mRNA和蛋白的表达

目的:检测甲状腺良恶性肿瘤组织中c-Met mRNA和蛋白的表达.方法:应用原位杂交技术和免疫组织化学SP法检测50例甲状腺腺癌(甲状腺乳头状腺癌20例,滤泡状腺癌20例和嗜酸细胞腺癌10例)、50例甲状腺腺瘤(甲状腺乳头状腺瘤20例, 滤泡状腺瘤20例和嗜酸细胞腺瘤10例)及10例瘤旁上皮组织中c-Met mRNA及蛋白的表达.结果:甲状腺腺癌组织中c-Met mRNA(78%)和蛋白(84%)阳性表达率均明显高于腺瘤组织(48%,60%)(P＜0.01),且滤泡性腺癌组织中(70%)均明显高于滤泡性腺瘤组织(30%)(P＜0.05).结论:甲状腺癌组织中c-Met基因在mRNA和蛋白表达水平均增强,检测c-Met基因的表达有助于阐明甲状腺肿瘤的发病机制,并为甲状腺肿瘤的鉴别诊断、治疗及预后判断提供参考.     

甲状腺滤泡上皮性肿瘤中MMP2、MMP7蛋白及mRNA表达及意义

目的:研究基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMP)MMP2、MMP7在甲状腺滤泡上皮性肿瘤中表达及其与病变的关系.方法:应用免疫组化及原位杂交方法检测78例甲状腺滤泡上皮性肿瘤(腺癌38例,腺瘤40例)标本中MMP2、MMP7表达.结果:MMP2及MMP7蛋白在各甲状腺肿瘤组织表达中,腺癌表达显著高于腺瘤(P＜0.01); MMP2及MMP7蛋白表达与腺癌转移有相关性(P＜0.05),肿瘤间MMP2及MMP7的mRNA与蛋白表达呈正相关性(P＜0.01).结论:MMP2、MMP7的表达与甲状腺肿瘤显著相关,它们在甲状腺癌病变中高度表达,检测MMP2及MMP7蛋白或mRNA水平对于鉴别甲状腺滤泡上皮性肿瘤良恶性具有重要参考意义.     

甲状腺癌ret、ras、p53基因的表达及意义

目的通过对甲状腺癌ret、ras、p53基因研究,揭示其在甲状腺癌发病中的意义,为进一步进行甲状腺癌的防治奠定基础。方法用免疫组织化学方法检测66例甲状腺癌和102例甲状腺良性病变中ret、ras、p53基因的表达并进行比较。结果ret在甲状腺乳头状癌、滤泡状癌、未分化癌、结节性甲状腺肿、桥本病及甲亢中均有表达,在髓样癌和滤泡状腺瘤中未检测到;ras在各型甲状腺病中均有表达,但在乳头状癌、滤泡状腺瘤及桥本病中的阳性率明显高于其他类型,差异有统计学意义（P〈0．05）;p53在各型甲状腺癌中的表达率为20％～50％,良性病变中仅在1例滤泡状腺瘤和3例结节性甲状腺肿中呈阳性。ret、p53在甲状腺癌中的表达显著高于甲状腺良性病变,差异有统计学意义（P=0．001）;ras在甲状腺良恶性病变中均有较高表达,差异无统计学意义（P=1．000）。结论甲状腺癌的发病与癌基因ret、ras及抑癌基因p53的突变有密切联系。ret、p53在甲状腺癌中的表达显著高于甲状腺良性病变;ras在甲状腺良恶性病变中均有较高表达,但在乳头状癌、滤泡状腺瘤及桥本病中的阳性率明显高于其他类型。因此,甲状腺癌的防治除考虑高碘因素外,也应充分注意遗传因素的影响。     

甲状腺肿瘤中垂体肿瘤转化基因-1与微血管密度表达关系

目的 研究垂体肿瘤转化基因-1(pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG)与微血管生成在原发性甲状腺肿瘤中表达及与病变的关系.方法 对于87例原发性甲状腺肿瘤(乳头状腺癌38例,滤泡性腺癌21例,未分化癌5例,腺瘤23例)分别应用免疫组化方法检测PTTG及CD34表达情况.结果 PTTG及CD34在各甲状腺肿瘤及间质组织均存在表达,PTTG在腺癌组表达高于腺瘤(P＜0.01),微血管密度(MVD)在腺癌组表达显著高于腺瘤组(P＜0.01);PTTG及MVD有正相关性(r=0.43,P＜0.01).结论 PTTG及MVD的表达与甲状腺肿瘤显著相关,检测PTTG及MVD水平对于鉴别原发性甲状腺癌具有重要参考意义.     

Polo样激酶和Ki-67在甲状腺癌中的表达及其病理意义研究

目的 分析Polo样激酶1(Plk1)的表达与甲状腺癌临床病理特征的关系及其与肿瘤增殖活性的相关性,探讨Plk1在人类甲状腺癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组织化学SP法检测87例甲状腺癌组织、20例甲状腺腺瘤和10例正常甲状腺中Plk1和Ki-67的表达情况.结果 Plk1在87例甲状腺癌组织中的阳性表达率为50.57%,20例腺瘤组织中阳性表达率为5.00%,10例正常甲状腺组织中均未见Plk1阳性表达,甲状腺癌组织中Plk1的阳性表达率明显高于正常甲状腺组织和腺瘤组织(χ2值分别为4.320和9.414,P＜0.01).Ki-67在87例甲状腺癌组织中标记指数为(8.98±10.51);20例腺瘤中偶见Ki-67的表达,标记指数为(1.07±0.34);10例正常甲状腺组织几乎不表达Ki-67;癌组织中Ki-67的标记指数明显高于正常甲状腺组织和腺瘤组织,差异有统计学意义(t值分别为8.059和7.080,P=0.000).Plk1在甲状腺癌中的阳性表达与肿瘤直径、是否存在淋巴结转移、甲状腺是否有包膜侵犯相关(P＜0.05).Plk1与Ki-67的表达无相关性(r=0.242,P=1.000).结论 甲状腺癌组织中Plk1的表达明显高于腺瘤组织和正常甲状腺组织.Plk1表达可能参与甲状腺癌的发生发展过程.     

趋化因子受体CCR6/CCL20信号转导通路与胃癌淋巴结转移

目的 探讨趋化因子受体CCR6/CCL20信号转导通路在胃癌组织、远处正常黏膜以及转移淋巴结中的表达情况,分析CCR6/CCL20在胃癌淋巴结转移中的作用.方法 应用Westem blot检测40例胃癌患者标本中肿瘤组织、远处正常黏膜以及转移淋巴结中CCR6/CCL20通路成员的表达情况.结果 胃癌组织中CCR6/CCL20表达水平明显高于正常胃黏膜(P＜0.05);32例淋巴结转移癌组织中20例CCR6/CCL20蛋白表达高于原发瘤;CCR6/CCL20表达水平与淋巴结转移呈正相关(P＜0.05).结论 趋化因子受体CCR6/CCL20在原发胃癌及淋巴结转移癌组织中呈高表达.CCR6/CCL20转导通路可能在胃癌淋巴结转移过程中起重要作用.     

甲状腺肿瘤的CDFI表现与VEGF、p16表达的研究

目的 探讨VEGF、p16蛋白与CDFI在甲状腺肿瘤中的表达.方法 应用免疫组化SP法检测90例甲状腺肿瘤组织中VEGF和p16的蛋白表达情况及采用彩色多普勒检测宏观血流情况.结果 VEGF在甲状腺癌组织中的阳性表达率(73.8%)明显高于甲状腺瘤组织(24.0%),差异有显著性(P<0.01).VEGF在甲状腺滤泡状癌和甲状腺乳头状癌中的表达差异有显著性.甲状腺癌与甲状腺瘤中p16蛋白阳性表达率差异有显著性(P<0.01).CDFI显示:甲状腺腺瘤与甲状腺癌的血管结构之间差异有显著性;甲状腺乳头状癌与甲状腺滤泡状癌之间差异无显著性.结论 p16蛋白与VEGF在甲状腺肿瘤的发生、发展中可能起协同作用,并可作为判断甲状腺肿瘤生物学行为的有用指标.CDFI在甲状腺肿瘤的诊断中有明显应用价值.     

血清与组织glactin-3联合检测在甲状腺癌早期诊断中的价值

目的探讨甲状腺癌患者血清与组织中半乳凝素-3（galectin-3, gal-3）的表达水平及意义。方法收集河北北方学院附属第
一医院就诊甲状腺肿瘤患者159例,正常对照组16例。采用酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清gal-3浓度,免疫组织化学SP和
原位杂交技术法检测甲状腺手术标本中gal-3蛋白和mRNA的表达。结果Gal-3蛋白和mRNA均表达于胞浆,呈棕黄色颗粒。
66 例乳头状癌gal-3 表达阳性率96.97%;6 例滤泡癌阳性率83.33%;36 例乳头状增生阳性率16.67%;51 例腺瘤gal-3 阳性率
11.74%;Gal-3mRNA阳性率略低于其蛋白,且与蛋白表达呈正相关。甲状腺癌组血清gal-3浓度明显高于良性乳头状增生组、
腺瘤组和正常对照组（均为P<0.001）。血清gal-3浓度在甲状腺癌组织阳性组明显高于阴性组P<0.05。结论检测血清gal-3浓
度及组织表达可以提高甲状腺癌的诊断率。
     

雌、孕激素受体检测在甲状腺疾病中的诊断价值

目的探讨雌、孕激素受体(ER,PR)在甲状腺肿瘤中的诊断价值.方法采用酶联亲和组化法对手术切除的甲状腺标本112例进行ER及PR检测,其中甲状腺癌39例,甲状腺腺瘤22例,结节性甲状腺肿25例,瘤旁正常甲状腺组织26例.结果ER及PR的阳性率分别为:甲状腺癌48.7%和82.1%:甲状腺腺瘤36.4%和40.9%;结节性甲状腺肿16%和24%;正常甲状腺组织3.8%和11.5%.甲状腺癌和腺瘤组织中ER及PR的阳性率,均明显高于正常甲状腺组织(P＜0.01,0.05).年龄＜40岁组的甲状腺癌ER阳性率,明显高于＞40岁组(P＜0.05).女性甲状腺癌PR的阳性率明显高于男性(P＜0.05).结论甲状腺良、恶性病变及正常组织中均可检测到ER及PR,以甲状腺癌组织中含量最高,甲状腺腺瘤次之.雌激素很可能是诱发甲状腺癌的重要因素,分化型甲状腺癌可能是雌激素依赖性肿瘤,ER及PR的检验为甲状腺癌的临床诊断和治疗提供了新的途径.     

PCNA、VEGF在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨PCNA、VEGF在甲状腺乳头状癌等组织中的表达及临床意义。方法用免疫组化S-P法,检测30例甲状腺乳头状癌、30例甲状腺滤泡状腺瘤和30例癌旁正常甲状腺组织中PCNA、VEGF表达。结果PCNA、VEGF在甲状腺乳头状癌中的表达率显著高于甲状腺滤泡状腺瘤及癌旁正常甲状腺组织（P〈0.01）。且两者在甲状腺乳头状癌中表达率呈正相关。结论PCNA、VEGF表达可作为甲状腺癌的协助诊断指标,对临床治疗和预后判断具有重要的指导意义。     

CCL4损伤原代培养大鼠肝细胞模型的实验研究

1材料和方法 1.1材料 1.1.1实验动物:清洁级SD大白鼠,体重150克左右,雌雄不限,由江汉大学医学院动物室提供. 1.1.2试剂:1640液与胎牛血清(Gibco公司),胶原酶Ⅱ(Boehringer mannheim公司)、CCL4(中国医药上海化学试剂公司),MTT与DMSO(Sigma公司),MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所).其他试剂均为分析纯试剂.     

IL-1受体拮抗剂联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎患者血清趋化因子CCL5的影响及疗效初步评定

目的 探讨白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)联合甲氨蝶呤(MTX)对中重度类风湿关节炎(RA)患者血清中趋化蛋白CCL5及RA活动度相关指标的影响,并对疗效进行初步评价.方法 40例中重度RA患者随机双盲分为IL-1Ra+MTX组和安慰剂+MTX组,IL-1Ra 80 mg/d皮下注射qd×12周,MTX 10 mg/周一次口服×12周,并以20例健康体格者为正常对照,观察用药前后的血清CCL5浓度和RA活动度相关指标类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、关节肿胀个数、晨僵时间、关节触痛个数以及骨侵蚀度的变化,并用美国风湿学会评分(ACR)、健康问卷评估评分(HAQ)评价药物疗效.结果 RA患者CCL5的浓度明显高于正常对照组.用药12周后,IL-1Ra+MTX组患者血清CCL5浓度低于安慰剂+MTX组,CCL5浓度与ESR、CRP、RF、关节肿胀个数、关节触痛个数、晨僵时间及骨侵蚀度均成正相关,P值均<0.05,IL-1Ra+MTX组与安慰剂+MTX组在用药12周后,ACR20分别为40%、25%,ACR50分别为20%、10%,ACR70分别为35%、5%(P<0.05);HAQ评分IL-1Ra+MTX组低于安慰剂+MTX组(P<0.001).结论 IL-1Ra+MTX组较安慰剂+MTX组可使血清中CCL5浓度下降更为明显.IL-1Ra联合MTX治疗类风湿关节炎较单用MTX治疗类风湿关节炎有着更好的ACR缓解率和病情改善.     

广西巴马小型猪构建肝硬化门脉高压症动物模型的实验研究

目的:构建肝硬化门脉高压症动物模型,为该模型建立一种新术式应用于临床治疗的可行性提供理论基础和科学依据.方法:①45头健康广西巴马小型猪分为对照组15头,实验组分成A、B两组,每组各15头;②采用CCL4腹腔注射法和口服饲喂法构建肝硬化门脉高压症动物模型.结果:①实验A、B组成模时间分别为70 d和140 d,成模率分别为100%和80%;②动物模型的门脉压力,对照组为(1.96±0.06)kPa, 实验A组为(2.90±0.27)kPa,实验B组为(2.90±0.28)kPa,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论:CCL4 腹腔注射法构建的肝硬化门脉高压症动物模型优于口服饲喂法,造模时间短,成模率高,动物死亡率低,是一种理想的造模方法.     

幼年特发性关节炎患儿趋化因子CCL5的检测及其意义

目的探讨趋化因子CCL5在幼年特发性关节炎（JIA）发病机制中的作用。方法采用定量PCR、流式细胞术及胞内染色的方法检测外周血及关节液单个核细胞CCL5的表达。结果JIA患者关节液单个核细胞高表达CCL5,而外周血中仅有少量表达,正常人外周血单个核细胞中未见CCL5的表达。CCL5主要表达于T细胞（CD3^＋CCL5^＋）。活化T细胞高表达CCL5,尤其以关节液中的T细胞表达水平增加更为明显。结论局部T细胞异常表达趋化因子CCL5可能参与了幼年特发性关节炎的发生。     

谷胱甘肽-S-转移酶人趋化因子CCL3L1的表达

目的克隆人趋化因子CCL3L1基因,表达并初步纯化谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-CCL3L1融合蛋白。方法从乳腺癌细胞MCF7中提取总RNA,采用RT-PCR扩增CCL3L1cDNA基因,克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,重组载体经酶切和测序鉴定后,在BL21大肠杆菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-CCL3L1融合蛋白,采用SDS-PAGE和Westernblotting分析表达产物。结果经测序、酶切鉴定证明CCL3L1基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为34000的新生GST-CCL3L1融合蛋白。结论GST-CCL3L1融合蛋白可被成功表达。     

小鼠CCL21真核表达载体构建及趋化活性检测

目的:构建趋化因子CCL21的真核表达载体并表达蛋白,初步检测其趋化活性.方法:RT-PCR方法扩增CCL21 cDNA片段,并将扩增的片段插入pcDNA3.1真核表达载体,构建重组载体pcDNA3.1-mCCL21,将其转染到小鼠前胃癌细胞(mouse forestomach carcinoma,MFC).利用趋化小室法,检测表达产物针对树突状细胞(DC)趋化活性.结果:基因测序结果证实克隆产物为CCL21基因scya21b型,pcDNA3.1-mCCL21载体构建成功,Western印迹法检测到CCL21蛋白表达,转基因细胞的培养上清对树突状细胞具有显著趋化活性.结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-mCCL21,其表达产物具有针对DC的趋化活性.     

卡介菌多糖核酸对哮喘小鼠CCL1/CCR8表达的影响

目的:探讨卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)抗哮喘机制。方法:设立正常组、哮喘组和治疗组,应用卵白蛋白(OVA)致敏激发小鼠建立哮喘模型。治疗组给予腹腔注射卡介菌多糖核酸,对支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类、计数,酶联免疫法(ELISA)检测肺泡灌洗液中的白细胞介素4(IL-4)含量,逆转录-聚合酶链半定量(RT-PCR)检测肺组织CCR8mRNA和CCL1mRNA表达的水平。结果:哮喘组BALF中嗜酸性粒细胞(EOS)淋巴细胞占细胞总数百分比、IL-4浓度、肺组织中CCL1 mRNA和CCR8 mRNA表达较正常组增高,治疗组EOS、淋巴细胞百分比,IL-4浓度、CCL1 mRNA和CCR8 mRNA表达较哮喘组均降低。结论:卡介菌多糖核酸能够减少哮喘肺组织CCL1/CCR8的表达,减轻气道炎症。     

CCL27 CCL28及 CCR10在癫痫小鼠急性期表达增高

目的：探讨趋化因子 CCL27、CCL28及其受体 CCR10在小鼠癫痫急性期外周血中的表达变化。方法取正常及癫痫小鼠急性期不同时间点(10 min、30 min、1 h、2 h)外周血利用实时荧光定量 PCR(Real-time PCR)法检测毛果云香碱致癫痫发作小鼠急性期外周血中 CCL27、CCL28 mRNA 水平;同期取正常及癫痫急性期不同时间点(10 min、30 min、1 h、2 h)肝素抗凝外周血,提取淋巴细胞层后利用 FACSsort 型流式细胞仪检测外周血淋巴细胞 CCR10蛋白水平的表达变化。结果癫痫小鼠发作急性期外周血中 CCL27、CCL28 mRNA 水平、淋巴细胞中 CCR10蛋白表达水平均在癫痫发作2 h 高于对照组(P <0.05)。结论癫痫发作早期已出现外周血免疫功能紊乱,该病理变化可能与癫痫发病过程中的炎性反应和神经细胞的凋亡相关。     

CCL_4诱导大鼠肝纤维化过程中IL-18的表达及临床意义

目的检测IL-18在CCL4诱导大鼠肝纤维化形成过程中表达水平的变化,探讨IL-18是否可以作为肝硬化早期的预警信号或重要的血清学指标,为临床诊断和治疗提供理论依据。方法将48只雄性SD大鼠随机分为试验组（n=24）和正常对照组（n=24）。试验组用40%的CCL4油溶液皮下注射（0.3ml/100g）,以10%的酒精为唯一饮用水;正常对照组用等剂量蒸馏水皮下注射,普水做饮用水。在给药（蒸馏水）前（即0周）及给药（蒸馏水）后2、4、6、8周将大鼠断尾采血后离心取血清用ELISA法检测IL-18的水平。结果试验组与正常对照组相比差异明显（P〈0.05）,有统计学意义;试验组IL-18在4周、6周与0周、2周相比（P〈0.05）有统计学意义;正常对照组给蒸馏水前后IL-18的差异不显著（P〉0.05）,没有统计学意义。结论 IL-18对肝纤维化有预测价值。     

大鼠急性呼吸道损伤时白细胞介素13及嗜酸性趋化蛋白-2的mRNA水平变化

目的:研究通过气管内滴注葡聚糖诱导大鼠气道炎症反应发生时白细胞介素-13(IL-13)及嗜酸性趋化蛋白-2(CCL-24)mRNA的水平变化,了解其在支气管炎症过程中的作用。方法:由葡聚糖G200(5mg/kg)气管内滴注制成大鼠气道炎症模型,然后用逆转录PCR法,检测大鼠气道炎症时肺组织中IL-13和CCL24mRNA的表达情况。同时进行支气管肺泡灌洗,观察此时白细胞、淋巴细胞的含量变化。结果:葡聚糖G200所致大鼠肺损伤后IL-13和CCL24的mRNA表达水平因葡聚糖G200刺激明显升高(P<0.05),同时血液及支气管肺泡灌洗液中白细胞数、淋巴细胞也随之升高(P<0.05)。结论:用葡聚糖G200进行气管内滴注所致气道炎症过程中,IL-13和CCL24可引起肺泡灌洗液中淋巴细胞及嗜酸细胞的聚集。