寡核苷酸探针在法医学上的应用研究

采用寡核苷酸探针（ＣＡＣ）_５对河南汉族５０名无关个体和两个家系１０名成员进行了ＤＮＡ指纹检验。结果：得到了清晰可辨的寡核苷酸指纹图谱。经统计学处理，无关个体的相关机率为９．８×１０~（－１０）。家系调查表明，亲代与子代之间，杂交片段的遗传符合孟德尔法则。提示：寡核苷酸探针（ＣＡＣ）_５在法医学个人识别和亲权鉴定中具有重要的实用价值。     

利用寡核苷酸探针构建DNA指纹图

利用人工合成的寡核苷酸（ＣＡＣ）５串连重复序列探针构建ＤＮＡ指纹图。结果表明，每个个体平均显现出２３．５条可分辨的杂交带，呈现高度多态性及个体特异性。文中对其优势与应用前景进行了讨论。     

成都地区β地中海贫血基因突变型及产前基因诊断初步分析

我们通过ＤＮＡ扩增和等位特异寡核苷酸探针杂交，检测了成都地区可疑β地中海贫血（简称地贫）患者３３个家系，９５人。共检出５８例、７３条染色体的β珠蛋白基因突变。其中，Ｃｏｄｏｎ１７（Ａ→Ｔ）突变２８例（３８．４％）ｌｃＯｄｏｎ４１－４２（－ＴＴＣＴ）突变２１例（２８．８％）；ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）突变１４例（１９．０％）；ｎｔ－２８（Ａ→Ｇ）和ｎｔ－２９（Ａ→Ｇ）突变分别是６例（８．２％）和４例（５．５％）。在测知双亲β地贫突变类型的基础上，对两例β地贫风险胎儿采羊水细胞分离ＤＮＡ，用相同方法进行了产前基因诊断，获满意结果。     

脑梗塞与HLA—I,Ⅲ单体型关联性的初步研究

采用微量细胞毒技术和高压电泳后免疫固定方法检测了２５个脑梗塞病人家系和２５个正常家系各成员的ＨＬＡ－Ａ、Ｂ、Ｃ、ＢＦ＇Ｃ４Ａ，Ｃ４Ｂ抗、通过家系分析和对比，发现病人组ＨＬＡ－Ｉ单体型Ａ２４－Ｃ１０－Ｂ４８频率及ＨＬＡ－Ａ１１、Ｂ４８、Ｃ７、Ｃ１０基因频率增高（Ｐ＜０．０５或＜０．０１），ＨＬＡ－Ｂ３５，Ｃ８基因频率减低（Ｐ均＜０．０１）。     

地高辛标记探针原位杂交在人巨细胞病毒感染鼠脑神经元研究中的应用

目的　建立一种适用于检测人巨细胞病毒（ Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ）感染新生乳鼠大脑皮质神经元原代培养物中病毒 Ｄ Ｎ Ａ 的原位杂交法。方法　制备和培养新生乳鼠大脑皮质神经元并进行病毒感染;在感染后的第３ ,５ 天及第１ ～４ 周连续取样用地高辛标记的 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 即刻早期抗原（ Ｍ Ｉ Ｅ） 和晚期抗原（ Ｌ Ａ） 寡核苷酸特异性探针分别进行核酸原位杂交,检测受染神经元内相应病毒核酸及分布。结果　 Ｍ Ｉ Ｅ 寡核苷酸探针可在 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 感染后第４ ～７ 天检出神经元核内 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ;而 Ｌ Ａ 寡核苷酸探针则可稳定地检出感染后第７ ～２８天细胞培养物中的相应病毒核酸;并显示： Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 杂交阳性信号在感染的早期主要分布在核内,呈灶性;而在感染的晚期,杂交阳性信号均匀分布于受染神经元的核内及胞浆内。结论　地高辛标记的 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ Ｍ Ｉ Ｅ 和 Ｌ Ａ 寡核苷酸探针在病毒感染机制研究以及临床诊断等方面,具有广泛的应用前景。     

应用PCR结合ASO探针斑点杂交技术检测β地中海贫血家系

应用聚合酶链反应和等位基因特异寡核苷酸斑点杂交技术时１例β地中海贫血家系进行基因诊断，确定先证者基因型为ＣＤ４１－４２（－ＴＴＣＴ）／ＣＤ１７（Ａ－Ｔ）双重杂合子，先证者父母的基因型分别为ＣＤ４１－４２（－ＴＴＣＴ）／β＾Ａ和ＣＤ１７（Ａ－Ｔ）／βＡ杂合子。     

人体结直肠癌Ki－ras基因点突变检测

采用ＰＣＲ和寡核苷酸探针杂交技术检测了３５例结直肠癌和５例息肉活检组织ｋｉ—ｒａｓ基因第１２位密码子的点突变。发现１０例结直肠癌具有点突变，其中ＧＧＴ→ＧＴＴ（Ｇｌｙ→Ｖａｌ）突变３例，ＧＧＴ→ＧＡＴ（Ｇｌｙ→Ａｓｐ）突变７例；１例息肉有突变（ＧＧＴ→ＧＴＴ）。     

氨基甙类抗生素致聋的遗传流行病学研究

目的明确氨基甙类抗生素致聋（ＡＡＩＤ）有无遗传基础及其遗传方式。方法调查测出上海市闸北区ＡＡＩＤ的患病率并绘制谱系图。结果ＡＡＩＤ患病率为３．５／万；具有阳性家族史的ＡＡＩＤ患病率为９．７／１０万，分析其３６个家系显示，对抗生素耳毒性的敏感性全部由女性遗传；重复分析了１５个由其他学者已发表的家系也证实了这个结论。结论ＡＡＩＤ属线粒体遗传，对具有ＡＡＩＤ家族史的个体（尤其是母系亲属），应当避免使用氨基甙类抗生素。     

视黄酸对淋巴细胞膜转铁蛋白受体mRNA水平影响的研究

在本研究中观察了一定剂量范围（２．５０×１０~（－４）～２．５×１０~（－７）ｍｏｌ／Ｌ）视黄酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ．ＲＡ）对淋巴细胞膜上的转铁蛋白受体（ＣＤ７１）ｍＲＮＡ的影响。结果显示：大剂量ＲＡ（２．５×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ）显著抑制ＣＤ７１ｍＲＮＡ产生，且这种抑制作用不能被加入的外源性人重组白介素２（ｒｈＩＬ－２）所逆转；２．５×１０~（－５）～２．５×１０~（－６）ｍｏｌ／ＬＲＡ则能增加ＣＤ７１ｍＲＮＡ含量，２．５×１０~（－７）ｍｏｌ／ＬＲＡ作用不明显（与二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）溶剂对照比）。提示大剂量ＲＡ可能直接在基因转录水平上抑制了ＣＤ７１ＤＮＡ转录为ｍＲＮＡ。     

遗传因素对高血压病人群靶器官损害发生的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ１型受体（ＡＴ１Ｒ）Ａ／Ｃ１１６６多态性、纤溶酶原激活物抑制剂－１（ＰＮ－１）４Ｇ／５Ｇ多态性与高血压病人群肾脏损害（ＲＤ）和脑梗死（ＣＩ）发生的关系。方法 以高血压病人群为随机研究对象,采用等位基因特异性寡核苷酸探针杂交分析ＡＴ１Ｒ基因型和ＰＡＩ－１基因型。结果 （１）ＡＴ１Ｒ基因型与肾脏功能显著相关,ＡＣ基因型肾脏功能显著差于ＡＡ基因型,ＰＡＩ－１基因型与肾脏功能无显著性     

反义c-myc、增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑肌细胞相关基因表达

目的研究有效的防治血管术后再狭窄的方法，以及应用反义ｃｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法设计并合成ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ正义、反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸，经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后，分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法，观测其对ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果设计合成的寡核苷酸在血清培养基中１～５天未被完全降解；寡核苷酸能顺利进入ＶＳＭＣｓ内；１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的反义ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ作用于ＶＳＭＣｓ后１～５天，其相应的ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ基因表达减弱，计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比差异有显著意义（Ｐ＜０．０５），而正义和错配反义寡核苷酸无此效应（Ｐ＞０．０５）。结论反义ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ寡核苷酸可通过抑制其相应基因表达来实现阻遏血管平滑肌细胞增殖     

用微卫生DNA多态性进行血友病甲基因诊断的研究

目的：研究ＦⅧ基因１３内含子（ＣＡ）ｎ重复序列（ＣＡ－１３）、２２内含子（ＣＡ）ｎ重复序列（ＣＡ－２２）及基因旁微卫星ＤＮＡＤＸＳ１５位点的多态性在血友病甲基因诊断中的应用价值。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（测序胶）的方法，检测了三个血友病甲家系共１２名成员Ｘ波色体ＣＡ－１３、ＣＡ－２２、ＤＸＳ１５的长度变化，并进行连锁分析。结果：三个家系均得到诊断，并俭出一名携带者。结论：     

多巴胺对实验小鼠免疫功能的影响

研究利用体外淋巴细胞培养和噻唑蓝（ＭＴＴ）比色分析法，检测了两种深度多巴胺（ＤＡ，１０＾－５和１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）对大鼠肠系膜淋巴结细胞皿刀豆素Ａ（Ｃｏｎ ）诱导的增殖反应的影响；并动用高效液相色谱（电化学检测法（ＨＰＬＣ－ＥＣＤ），测定了大鼠在注身抗原绵工细胞（ＳＲＢＣ）后的２￣７天，胸腺和脾脏中Ｄ芩 变化。结果说明：（１）１０＾－５和１０－＾６ｍｏｌ／Ｌ ＤＡ都能显著增强Ｔ细胞增殖。（２）     

乙肝病毒前C基因突变株感染者细胞免疫功能的观察

目的 检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ基因突变体感染者的细胞免疫水平,探讨细胞免疫与前Ｃ基因突变的关系。方法 用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术从６０名慢性乙肝患者中筛选出ＨＢＶ前Ｃ基因突变株感染者,ＨＢＶ野毒株感染者及ＨＢＶ已清除者各５人,用血源性ＨＢｓＡｇ和ＣＤ＾４＋Ｔ辅助细胞识别的抗原表位ＨＢｃＡｇ５０－６９合成多肽进行特异性淋巴结转移转化实验,结果 ＨＢＶ前Ｃ基因突     

人体结直肠癌Ki—ras基因点突变检测

采用ＰＣＲ和寡核苷酸探针杂交技术检测了３５例结直肠癌和５例息肉活检组织Ｋｉ－ｒａｓ基因第１２位密码子的点突变，发现１０例结直肠癌具有点突变，其中ＧＧＴ－ＧＴＴ（Ｇｌｙ－Ｖａｌ）突变３例，ＧＧＴ－ＧＡＴ突变７例；１例从有突变（ＧＧＴ－ＧＴＴ）。     

聚合酶链反应检测载脂蛋白E表型及其临床应用的研究

用人工合成的寡核苷酸引物，进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），体外扩增合成载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因的特异性ＤＮＡ片段，用此引物检测１０４例健康成人和３５例冠心病人（ＣＨＤ）载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）的表型，共检出５种常见的ＡｐｏＥ表型，健康成人与ＣＨＤ患者比较，ＣＨＤ患者的ＡｐｏＥ３／３型频率明显降低，而含Ｅ２或Ｅ４异构体的频率增加．等位基因频率分布，ＣＨＤ患考与健康成人比较，其ε明显减少，而ε２和ε４有升高趋势，故对人群进行ＡｐｏＥ表型普查，确定不同ＡｐｏＥ表型个体，并寻找其与脂类代谢之间的关系，在动脉粥样硬化（ＡＳ）和ＣＨＤ的防治中有重要意义．     

中国人肢带型肌营养不良相关遗传标记多态性研究

目的：寻找中国人肢带型肌营养不良（ＬＧＭＤ）的致病基因。方法：应用ＰＣＲ技术对５０名正常无关个体和２２ 名来自３ 个肢带型肌营养不良症家系的成员，进行了１３ｑ１２ 区的Ｄ１３Ｓ１２０，Ｄ１３Ｓ１４１ 以及１７ｑ２１ 区的ａｄ－ＣＡ遗传标记基因型分析，对此３ 个标记的杂合度和多态性信息含量（ＰＩＣ）进行了计算。结果：发现Ｄ１３Ｓ１２０ 和ａｄ－ＣＡ标记的杂合度较高，ＰＩＣ为０．６６ 和０．７３，１３ｑ１２区的Ｄ１３Ｓ１４１ 的ＰＩＣ＜ ０．２５。结论：Ｄ１３Ｓ１２０和ａｄ－ＣＡ 标记是中国人群开展ＬＧＭＤ产前诊断的有价值的遗传标记，Ｄ１３Ｓ１４１ 不宜选用做中国人群连锁分析的遗传标记     

中国人遗传性脊髓小脑型共济失调患者三核苷酸突变频率的分布

目的评价ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ／ＳＣＡ３ＣＡＧ三核苷酸扩增突变（ＣＡＧ）ｎ在中国人遗传性脊髓小脑型共济失调（ＳＣＡ）患者的分布频率。方法应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和变性聚丙烯胺凝胶电泳技术，检测分析了５０名中国人常染色体显性遗传ＳＣＡ家系（其中患者７９例）的ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ／ＳＣＡ３（ＣＡＧ）ｎ。结果在５０个ＳＣＡ家系中，１个ＳＣＡ家系有ＳＣＡ１（ＣＡＧ）ｎ突变，３个ＳＣＡ家系有ＳＣＡ２（ＣＡＧ）ｎ突变，２４个ＳＣＡ家系有ＭＪＤ／ＳＣＡ３（ＣＡＧ）ｎ突变，阳性率分别为２．０％、６．０％、４８．０％。２例ＳＣＡ１患者ＣＡＧ三核苷酸重复数为５３和６２次，而正常人为１２～３６次。７例ＳＣＡ２患者ＣＡＧ三核苷酸重复数４３～４７次，而正常人为２２～３０次。４２例ＭＪＤ／ＳＣＡ３患者ＣＡＧ三核苷酸重复数６３～７８次，而正常人为１５～３８次。另有２２个ＳＣＡ家系２８例患者，ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ／ＳＣＡ３（ＣＡＧ）ｎ突变检测在正常范围内。结论中国ＳＣＡ主要为ＭＪＤ／ＳＣＡ３型，属于非葡萄牙型ＭＪＤ；而ＳＣＡ１型、ＳＣＡ２型少见。     

复发尖锐湿疣皮损内HPVDNA的PCR的检测

目的：检测复发光湿疣皮损表皮和真皮内的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ，探讨其反复复发的原因。方法：对取自１６例复发尖锐湿疣（ＲＣＡ）患者的１６个皮损组织，用溴化的钠溶液分离表皮和真皮，从组织中提取的ＤＮＡ和溴化钠分别用聚合酶链反应ＨＰＶＤＮＡ，阳性病例采用地高辛标记的型特异性寡核苷酸探针斑点杂交法进行盼型。结果：１６例ＲＣＡ表皮内均检出了ＨＰＶＤＮＡ，ＨＰＶ。阳性占６２．５％，ＨＰＶ１１阳生占２５．     

钩端螺旋体CPL5x、BMD－3A、BMD－10基因转录表达的初步研究

经氯化锂—脲提取ＲＮＡ的方法提取钩端螺旋体（钧体）赖型０１７株的总ＲＮＡ，用生物素标记的钩体保护基因ＢＭＤ－３Ａ、ＢＭＤ－１０、问号钩体种特异性基因ＣＰＬ５ｘ及赖型钩体０１７株总ＤＮＡ作为探针，分别与所提取的总ＲＮＡ进行斑点杂交。结果显示：以上探针均出现了不同强弱的杂交信号，证明了ＢＭＤ－３Ａ、ＢＭＤ－１０、ＣＰＬ５ｘ三个特异性基因片段在０１７株钩体中得到了转录表达，提示其可能分别在钩体免疫保护及钩体种特异性鉴定中具有重要作用。