亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆成分及白细胞残留量的影响

目的探讨亚甲蓝光化学法（methylene blue photochemistry,MB-P）病毒灭活前后血浆有效成分及残留白细胞含量的变化,为其临床应用提供数据参考。方法应用去白细胞四联血袋采集全血分离制备成新鲜血浆,加入1μmol/L亚甲蓝,置4℃、光照度30 000～35 000Lx的可见光下左右摆动照射30min。留取白细胞滤过前和亚甲蓝光照处理后新鲜血浆各10ml,分别计数白细胞并检测血浆中凝血因子活性、纤维蛋白原和血浆总蛋白含量,同时计算有效成分回收率。结果经MB-P病毒灭活后新鲜血浆中Ⅷ因子和Ⅴ因子活性明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;但总蛋白含量无明显变化,其他凝血因子活性减少不明显（P〉0.05）;残留白细胞计数由（5.72±1.56）×106个/U下降到（1.14±0.37）×104个/U（n=30）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学灭活病毒法对新鲜血浆处理前后的主要成分影响不大,可以满足临床安全输血的需求。     

亚甲蓝光化学病毒灭活法对血浆质量指标的影响

<正>血浆输注在临床输血中占有重要的地位,主要用于治疗各种凝血因子缺乏引起的凝血功能障碍。由于血浆传播病毒的危险比较大,因此,用适合于血浆病毒灭活的方法处理临床输注的血浆,对于提高输血的病毒安全性有重要意义。本站于2007年8月起对血浆进行亚甲蓝光化学病毒灭活法处理后才供应于临床。为探讨本灭活处理对血浆FⅧ因子、纤维蛋白原和总蛋白几个质量指标的影响,笔者对病毒灭活后的血浆FⅧ因子、纤维蛋白原和总蛋白的抽样进行检测,现报道如下。     

亚甲蓝光病毒灭活血浆的研究进展

随着输血医学的发展,血液安全得到了显著改善,但仍受到新发传染病病原体和未知病原体的威胁。免疫介导的反应是输注血浆最常见的不良反应。血浆输注的两大风险是感染风险和免疫风险。亚甲蓝光化学法是目前我国用于血浆病毒灭活的主要方法之一,能有效灭活大多数脂质包膜病毒。为探讨亚甲蓝光病毒灭活血浆应用的安全性,本文对其灭活病毒的有效性、对凝血因子的影响、输注的不良反应及血浆残余亚甲蓝的安全性作一综述。     

亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒的研究进展

提高血液制备技术,可有效地减少经血传播传染性疾病的发生。亚甲蓝（methylene blue,MB）光化学法灭活病毒技术能提高血浆输注的安全性,本文针对该技术的研究进展进行系统综述。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆技术及应用

随着医学技术的发展,血液的安全性越来越受到重视。为提高输血安全性,在血液检测项目增加的同时,血液检测技术也在不断改进。但这些都无法完全杜绝输血传播病毒的可能性。近年来发展起来的亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活技术对于提高输血安全性有很大潜力,本文就该技术的研究进展,以及在我国血站开展后的应用情况进行综述。     

亚甲蓝/光化学灭活病毒方法对血浆成分的影响

亚甲蓝／光化学法可有效地灭活血浆中的病毒。为进一步观察该法对灭活血浆中诸成分的免疫活性及生化指标的影响，本研究用灭活病毒的条件处理单采血浆。将合有1μmol/L亚甲蓝的血浆置于照度为40000lux的可见光下，在室温条件下处理1小时。结果表明，除凝血因子调，PT和APTT有一定程度降低外，其它血浆蛋白活性未见明显变化，血浆中的白蛋白、葡萄搪、多种无机盐含量及血浆pH值未受影响。处理后的血浆经不同电泳及免疫化学技术分析，未见新的抗原产生，电泳迁移率与未处理组相同。结论：亚甲蓝／光化学法对大多数血浆成分的影响不明显。     

滤除白细胞与MB—P法病毒灭活对血浆凝血因子的影响

目的探讨滤除白细胞及MB—P病毒灭活两项技术对血浆相关凝血因子成份的影响。方法随机采集无偿献血合格者血液标本2,1份,400ml／每份。将每份新鲜血浆在制备过程中平均分为滤自与灭活实验组与对照组。所有标本同时进行相关凝血因子检测。结果经滤除白细胞后,实验组APTT延长,凝血因子X1下降较快,与对照组比较有统计学意义。经病毒灭活后,实验组PT、APTT、TT明显延长,凝血因子Ⅺ下降较快,与对照组及病毒灭活后比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论滤除白细胞及病毒灭活后血浆制作,对部分凝血因子的活性有一定的影响,但可满足临床治疗需要。有效、安全、无毒技术对于提高输血安全水平具有重要意义。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆主要质量指标的影响

目的探讨亚甲蓝（MB）／光化学法病毒灭活对血浆主要质量指标的影响。方法随机抽取新鲜血浆192袋,分别于病毒灭活前和病毒灭活后无菌留取血浆标本各1ml,对凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ）的活性及血浆纤维蛋白原（Fg）和血浆总蛋白（TP）的含量进行测定。结果采用MB／光化学法对血浆进行病毒灭活后,凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ的活性及Fg和TP的含量均有一定程度的降低,但仍然符合国家要求。结论采用MB光化学法进行血浆病毒灭活,对血浆主要质量指标无显著影响。临床输注病毒灭活冰冻血浆,疗效可靠,无不良反应。     

亚甲蓝光化学法灭活病毒的分子生物学机制

用模型病毒进行的基本反应机制研究表明．亚甲蓝（Methylene blue,MB）光化学法灭活病毒时形成的病毒RNA-蛋白交联是导致病毒灭活的主要损伤。此外,氧．特别是亚甲蓝被光激活后通过Ⅱ型途径所产生的单线态氧。对亚甲蓝光化学法灭活病毒也起到重要作用。     

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对凝血因子的影响

目的:探讨亚甲蓝(methylene blue,MB)光化学法病毒灭活血浆对凝血因子的影响.方法:制备过程中随机抽取新鲜血浆120人份,根据新鲜血浆进行病毒灭活情况分为对照组和试验组,分别对上述两组标本进行PT、APTT、TT、Fg、FⅤ、FⅧ、TP测定.对照组,即新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)组,不进行病毒灭活,直接进行检测;试验组,即病毒灭活血浆组,先对其进行MB法病毒灭活,后再检测.结果:试验组中APTT、FⅤ、FⅧ水平与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),PT、TT、Fg、TP较对照组无显著变化(P＞0.05).结论:MB法病毒灭活对于新鲜血浆中内源性凝血因子,特别是不稳定因子FⅤ、FⅧ有显著影响,对外源性凝血因子及血浆蛋白成分影响不大.     

亚甲兰光化学法对FFP中凝血因子及总蛋白含量的影响

目的探讨亚甲蓝光化学法(MB-P)对新鲜冰冻血浆(FFP)中Fg、FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅧ∶C、FⅩ∶C、FⅫ∶C及总蛋白含量的影响,为制定病毒灭活血浆标准及其临床应用提供数据参考。方法随机抽取88份FFP分成灭活组(n=40)及过滤组(n=48),分别对2组样本处理前后的FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅧ∶C、FⅩ∶C、FⅫ∶C、Fg及总蛋白含量进行检测。结果灭活组FⅤ∶C、FⅧ∶C处理后含量显著低于灭活前(分别为t=3.40,P<0.01;t=2.57,P<0.01),但Fg、FⅡ∶C、FⅩ∶C、FⅫ∶C及总蛋白灭活前后的含量无明显差异(P>0.05),过滤组处理前后FⅤ∶C、FⅧ∶C无明显差异(P>0.05)。结论 MB-P对FFP中不稳定的凝血因子FⅤ∶C和FⅧ∶C含量有明显影响,均在可接受的范围内,对其他凝血因子及总蛋白的含量无影响。     

FFP经亚甲蓝光化学法灭活病毒并直接冻干于血袋的冻干血浆研制

目的探索制备冻干血浆的新工艺,研制适合在艰苦环境下储运和方便使用的新型冻干血浆。方法采用亚甲蓝光化学技术对新鲜冰冻血浆(FFP)做病毒灭活处理,再将FFP直接冻干于血袋中,观察不同条件下的保存效果。结果亚甲蓝光化学技术(终浓度为1μmol/L)能有效灭活血浆中的Sindbis病毒、PRV和VSV等指示病毒,处理30min后灭活效果>4.75LgTCID50,经细胞3代盲传证明灭活病毒效果可靠。新型冻干血浆外观成淡黄色疏松体,残水量为2.2%—2.5%,室温下<2min完全溶解;储存稳定性试验表明,新型冻干血浆中的FⅡ、FⅤ、FⅧ、FⅨ和FⅪ在25℃和4℃比较稳定,高温(40℃)保存对其活性有一定影响。结论采用亚甲蓝光化学灭活病毒技术和袋装血浆冻干技术制备新型冻干血浆是可行的。     

亚甲兰光化学法红细胞病毒灭活的初步探讨

目的　探讨择定条件下亚甲兰光化学方法对红细胞悬液的病毒灭活效果及其对红细胞质量指标的影响。　方法　在国产 PVC储血袋内的 GMA红细胞悬液中预置 VSV和 Sindbis病毒 ,加入终浓度为 5μmol/L的亚甲兰后用380 0 0 lx荧光照射 60分钟 ,测定处理后红细胞悬液及其匀浆中的病毒滴度及保存 2 1天内各时间段的红细胞 ATP、2 ,3-DPG、上清 K+ 和游离血红蛋白等质量指标。　结果　经上述方法处理后 ,红细胞悬液上清和红细胞匀浆中的 VSV病毒滴度分别降低 8.87± 0 .4 2 lg TCID50 和 7.79± 0 .90 lg TCID50 ;Sindbis病毒滴度则分别降低 6.5 8± 1 .67lg TCID50 和 5 .0 8±1 .4 2 lg TCID50 :处理后保存 2 1天内的各时间段红细胞主要质量指标未发生明显不良变化。　结论　亚甲兰光化学方法能有效灭活红细胞悬液及红细胞匀浆中与细胞相关的脂质包膜模型病毒 ,对红细胞体外质量指标无明显不良影响     

1年保存期内病毒灭活新鲜血浆中凝血因子的质量调查

目的 探讨亚甲蓝光化学法(MB-P)灭活处理新鲜血浆后对1年保存期内部分凝血因子活性的影响.方法 随机抽取30(人)份全血(400 ml/份),按照标准操作规程将每份制备成新鲜血浆和病毒灭活新鲜血浆(100ml/份),分成未灭活组和灭活组,分别检测保存0(制备期＜1个月检测)、6、8、10、12个月后的2组各自的FⅡ∶C、FⅤ:C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ:C及Fg含量变化.结果 与未灭活组相比,灭活组除FⅦ∶C含量无明显变化外,其他6种凝血因子含量在保存期内均明显下降(尤其FⅧ∶C和Fg下降最为明显);0、6、8、10、12个月保存时间的FⅧ∶C含量(％)分别为灭活前58.7±20.1、59.6±34.0、52.0±35.3、57.5±34.7、54.1±31.2和灭活后45.8±13.9、49.3±23.5、44.6±21.7、49.7±22.9、43.9±20.7(均为P＜0.05),Fg含量(mg/dl)分别为灭活前225.3±72.3、277.9±64.2、272.3±74.9、262.6±70.8、287.55±83.0)和灭活后188.8±54.7、205.8±54.0、205.8±54.0、220.2±66.7、202.2±56.8(均为P＜0.05).保存0和12个月相比,FⅩ:C含量(％)分别为93.0±30.5 vs 83.1±18.0(P ＜0.05).结论 新鲜血浆经MB-P病毒灭活处理后,1年冰冻保存期内起7种凝血因子含量相对稳定;MBP对凝血因子活性造成了一定损伤(尤其是Fg和FⅧ:C),但除FⅧ∶C外,其他凝血因子含量在可接受的范围内.     

亚甲蓝光化学灭活对血浆丙型肝炎病毒基因组核酸降解的研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)基因组核酸在亚甲蓝光化学法(methelene blue photochemistry,MB-P)灭活病毒前后的变化,在全基因组水平分析MB-P对基因组各结构区段的降解作用。方法含HCV的血浆中加入终浓度为1.0μmol/L的MB,经约30000Lux强度的荧光照射后,在不同作用时间点取样;将HCV全基因组序列分为互相重叠的8个区段,分别进行RT-PCR,分析基因组核酸的完整性;同时运用实时定量PCR(real time-PCR,RT-PCR)技术观察核酸降解的动力学变化。结果基因组各区段RT-PCR结果发现,经过不同的光照时间,HCV基因组各区段的稳定性不同,第2、4、5、6区段对MB-P作用较敏感,基因组5’端区段和3’端区段经MB-P作用后的稳定性高于基因组其它区段;RT-PCR结果显示,随着光照时间延长,可被检测到的病毒核酸拷贝数逐渐下降。结论MB-P灭活过程中HCV基因组核酸被降解,而且基因组不同区段对光化学作用的反应性不同,提示RNA降解可能是病毒灭活的重要机制;检测病毒核酸稳定性以监测病毒灭活具有一定临床实用价值。     

Main Properties of the THERAFLEX MB-Plasma System for Pathogen Reduction

Methylene blue (MB) treated plasma has been in clinical use for 18 years. The current THERAFLEX MB-Plasma has a number of improved features compared with the original Springe methodology. This overview embodies: the biochemical characteristics of MB, the mechanism of the technology, toxicology, pathogen reduction capacity, current position in clinical setting and status within Europe. The THERAFLEX MB (TMB) procedure is a robust, well standardised system lending itself to transfusion setting and meets the current guidelines. The pathogen kill power of the TMB system, like the other available technologies, is not limitless, probably in order of 6 log for most enveloped viruses and considerably less for non-enveloped ones. It does not induce either new antigen or grossly reducing the function and life span of active principle in fresh frozen plasma (FFP). The removal of the residual MB at the end of the process has the beneficial effect of reducing potential toxic impacts. Clinical haemovigilance data, so far, indicate that cell-free MB plasma is effective in all therapeutic setting requiring FFP, besides inconsistent thrombotic thrombocytopenia purpura data, without serious side-effects or toxicity. The current system is in continuous improvement e.g. regarding virus reduction range, illumination device, software used, and process integration in the blood bank setting.     

A potentially improved approach to methylene blue virus inactivation of plasma: the Maco Pharma Maco-Tronic system

Plasma was subjected to methylene blue (MB) photochemical virus inactivation using the Maco Pharma Maco-Tronic system which allows three units to be illuminated together, thus reducing processing time. The plasma bag system used incorporates an integral membrane plasma filter and a dry MB pill which dissolves in the plasma to give a 1-microM concentration. There is computer-controlled processing and datalogging. In an assessment of 10 pools of Group A plasma, the losses of coagulation factors, following MB/light treatment, were 23% fibrinogen, 10% FV, 26% FVIII, 11% FIX and 13% FXI. Group O, Group B and Group AB plasmas were not tested. Von Willebrand factor (vWf) multimers showed no substantial change when treated with MB, and no losses were seen for antithrombin III (ATIII), protein C and vWf:Ag. Measurements of C3a, C5a, prothrombin fragment 1+2 and FXIIa indicated that there was no activation as a result of filtration.     

亚甲蓝／光照法病毒灭活血浆的制备及应用评价

目的探讨亚甲蓝／光照法病毒灭活血浆的制备及其临床应用评价。方法随机抽取200份病毒灭活血浆,检测灭活前后的血浆容量、总蛋白、凝血因子及亚甲蓝的残余量;选取15756人份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV酶联免疫吸附法检测阴性者的血浆,在病毒灭活前后分别进行HBV、HCV、HIV的核酸检测;临床随机抽取200例输注病毒灭活血浆的患者,观察病毒灭活血浆输注后是否出现输血不良反应。结果经亚甲蓝／光照法进行灭活处理的血浆,血浆容量达到（227．34±5．21）g,回收率达到（96．67±2．34）％;血浆总蛋白、血浆凝血因子（Ⅷ因子和纤维蛋白原）回收率分别达到（88．69±3．32）％,（86．84±2．16）％和（84．62±1．86）％,与处理前相比,差异无统计学意义（P〉0．05）;血浆经病毒灭活后亚甲蓝的残余量为（1．17±0．05）μmol／L,而过滤后残余量减少至（0．16±0．03）μmol／L,去除率达到86．32％;对15756人份血浆进行HBV、HCV、HIV核酸检测,发现HBV阳性23例,HIV阳性1例,阳性率为1．52‰,进行病毒灭活后,HBV、HCV、HIV核酸检测均为阴性。病毒灭活血浆输注人体后无不良反应发生。结论采用亚甲蓝／光照法进行病毒灭活的血浆,临床使用较安全;病毒灭活血浆能够有效降低经输血传播疾病的危险性,且不良反应较小。     

The effect of methylene blue photoinactivation and methylene blue removal on the quality of fresh-frozen plasma

BACKGROUND: T: he effects of using fresh or frozen-thawed plasma, WBC reduction of plasma before freezing, and the use of two different methylene blue (MB) removal filters on the quality of MB-treated plasma were compared. STUDY DESIGN AND METHODS: In a paired study (n = 11/arm) plasma was frozen within 8 hours of collection, thawed, MB photoinactivated, and then filtered using one of two MB removal filters. Fresh plasma (n = 16) and plasma WBC reduced before freezing (n = 19) were MB inactivated. RESULTS: Freeze-thawing resulted in loss of activity of FXII and VWF of 0.06 and 0.04 units per mL, respectively, but no significant loss of activity of factors II through XI or fibrinogen. Further loss of activity occurred after MB treatment: FII (0.07 IU/mL), FV (0.11 U/mL), FVII (0.08 IU/mL), FVIII (0.28 IU/mL), F IX (0.12 IU/mL), FX (0.16 IU/mL), FXI (0.28 U/mL), FXII (0.15 U/mL), VWF antigen (0.05 IU/mL), VWF activity (0.06 U/mL), and fibrinogen (0.79 g/L). Losses due to this step were significantly (5-10%) lower in fresh plasma compared to frozen-thawed plasma. Neither MB removal filter resulted in significant loss of activity of any factor studied. CONCLUSION: MB removal, by either of the available filters, has little impact on the coagulation factor content of plasma, but freezing of plasma before MB treatment results in a small additional loss.     

去白细胞输血器对新鲜冰冻血浆中凝血因子的影响

目的　探讨经白细胞过滤器过滤后的新鲜冰冻血浆 ( fresh frozen plasma,FFP)中凝血因子的生物活性变化。方法　随机抽取 A型、B型、O型、AB型新鲜冰冻血浆各 1 0 0 ml× 5袋 ,3 7℃水浴融化 ,在净化台内留取滤过前后血浆样本各 1 ml,使用德国 BE全自动血凝仪测定活化部分凝血酶时间 ( APTT)、凝血酶原时间 ( PT)、凝血酶时间 ( TT)、纤维蛋白原( Fbg)、凝血因子 ( F ∶C)、凝血因子 ( F ∶C)、凝血因子 ( F C)∶水平。结果　过滤前后的新鲜冰冻血浆 APTT、PT、TT、F ∶ C、F ∶ C、Fbg水平的差异均无显著性 ( P>0 .0 5 )。 F ∶ C过滤前后的差异有显著性 ( P<0 .0 5 ) ,但仍在参考值范围内。结论　过滤前后新鲜冰冻血浆中凝血因子的活性差异变化在参考值范围内 ,适用于临床治疗